人参-三七-川芎提取物对高糖高脂诱导血管内皮细胞衰老的影响

目的:观察益气活血中药人参、三七、川芎提取物延缓高糖高脂诱导的血管内皮细胞衰老的分子生物学机制。方法:采用40 mmol·L~(-1)葡萄糖和100μmol·L~(-1)棕榈酸钠造模,实验分为空白组、模型组和中药低、中、高剂量组(50,100,200 mg·L~(-1)),干预48 h。采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测细胞增殖能力;细胞衰老β-半乳糖苷酸(SA-gal)染色检测细胞衰老程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞p16,p21蛋白表达水平的变化;免疫荧光检测p-H2A.X(Ser139)表达,线粒体ROS(mtROS)产生和线粒体膜电位(MMP)改变。结果:与空白组比较,模型组细胞增殖能力及MMP水平降低(P 0. 01),SA-β-gal蓝染细胞数量,mtROS生成和p16,p21,p-H2A.X(Ser139)表达增加(P 0. 05,P 0. 01);而与模型组比较,人参-三七-川芎提取物可提高细胞增殖能力和MMP水平(P 0. 01),减少SA-β-gal蓝染细胞数量和mtROS生成(P 0. 01),并能够降低p16,p21和p-H2A.X(Ser139)的表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血中药人参-三七-川芎提取物能够延缓高糖高脂引起的血管内皮细胞衰老,其机制可能与升高线粒体膜电位,减少ROS生成引起的DNA损伤累积有关。     

人参三七川芎提取物对复制性衰老内皮细胞的影响和钙黏蛋白的作用

目的:观察人参三七川芎提取物对复制性衰老人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的影响和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的作用。方法:以HCMEC为研究对象,第8代HCMEC建立复制性衰老HCMEC模型,实验分为衰老模型组(衰老组)、白藜芦醇组(10μmol·L-1)、人参三七川芎低、中、高剂量组(50,100,200 mg·L-1),相应药物作用24 h后,采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)衰老染色鉴定,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,采用激光免疫共聚焦显微镜观察VEcadherin的形态学改变,Western blot检测VE-cadherin蛋白的表达情况。结果:与衰老组比较,人参三七川芎提取物各剂量组减少SA-β-gal衰老染色比例,促进细胞的增殖,减少G0/G1期细胞比例,增加G2/M期细胞比例,保持VE-cadherin形态的完整性,升高VE-cadherin蛋白的表达,均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:人参三七川芎提取物能够延缓衰老,促进增殖和有丝分裂,保持复制性衰老HCMEC VE-cadherin的完整性和蛋白的表达,这可能是益气活血中药延缓内皮衰老的重要机制所在。     

人参三七川芎提取物对复制性衰老内皮细胞微丝形态学的影响

目的探讨人参三七川芎提取物延缓内皮衰老的可能作用机制。方法通过细胞体外传代,将人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)培养至第8代方法建立内皮细胞复制性衰老模型,结合β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色、CCK-8检测细胞增殖能力、流式细胞仪分析细胞周期方法进行衰老细胞鉴定。96孔板按照6×103~8×103/孔接种细胞,分为青年组、衰老组、白藜芦醇组和中药低、中、高剂量组,每组3个复孔。青年组为5代青年细胞,其余各组为8代复制性衰老细胞,白藜芦醇组加浓度为10μmol/L白藜芦醇溶液100μl,中药低、中、高剂量组分别加浓度为50、100、200 mg/L的人参三七川芎提取物100μl。观察各组24 h、48 h、72 h后纤维状肌动蛋白(F-actin)、单体肌动蛋白(G-actin)的形态学改变。结果衰老组细胞SA-β-gal染色阳性明显高于青年组(P0.01);衰老组较青年组细胞表现为G0/G1期细胞比例上升,S期和G2/M期细胞比例下降,细胞增殖能力降低(P0.01)。衰老组F-actin出现断裂、应力纤维,G-actin表现为向细胞周边区域伸展移位,而细胞中央区域染色变弱;白藜芦醇组和中药低、中、高剂量组可以维持复制性衰老HCMEC微丝的结构,减少G-actin向F-actin的转变,减少应力纤维的形成,并且干预效果随着干预时间延长表现更加明显。结论人参三七川芎提取物能够保持复制性衰老HCMEC微丝的正常形态,这可能是其延缓内皮衰老的重要机制。     

瓜蒌皮提取物抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老的机制研究

目的探讨瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老的抑制作用及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)。采用MTS法观察瓜蒌皮提取物对高糖处理的HUVECs存活率的影响,β-半乳糖苷酶染色的方法分析衰老细胞,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧水平、RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达。结果与正常组比较,高糖组能显著抑制HUVECs增殖反应(P0.01),高糖孵育48 h后,SA-β-gal阳性细胞率、细胞内活性氧(ROS)水平、TNF-α和IL-6的mRNA表达均明显升高(P0.01);与高糖组相比,不同质量浓度瓜蒌皮提取物孵育48 h HUVECs增殖率显著上升(P0.01或P0.05),SA-β-gal阳性细胞率、细胞内活性氧(ROS)水平、TNF-α和IL-6的mRNA表达均明显降低(P0.01或P0.05)。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs衰老有抑制作用,其作用机制与抑制氧化应激和炎症有关。     

基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R_1对血管内皮细胞衰老的影响

该研究旨在探讨三七皂苷R_1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H_2O_2诱导的血管内皮细胞衰老的作用。以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H_2O_2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H_2O_2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组。药物组提前加入三七皂苷R1(30μmo L·L~(-1))或白藜芦醇(10μmo L·L~(-1))干预24 h,然后用H_2O_2(100μmo L·L~(-1))造模4 h,最后换成完全培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达。结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P0.05)。该研究表明,H_2O_2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程。     

人参三七川芎提取物抑制p53基因表达促进衰老内皮细胞增殖的研究

目的:探讨益气活血中药对血管内皮细胞衰老和p53基因表达的干预作用。方法:分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养至第4代,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,10-6mol/L,48h)诱导其衰老;分为空白对照组、AngⅡ组、中药提取物组和替米沙坦组;观察各组不同时间点β-半乳糖苷酶染色、CCK-8细胞计数、细胞周期分析、p53 m RNA及蛋白表达。结果:AngⅡ组较空白对照组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数增加(P<0.05);CCK-8检测活细胞数减少(P<0.05);细胞大量停滞于G0/G1期,而S期和G2/M期逐渐消失(P<0.05)。中药提取物组和替米沙坦组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数下降(P<0.05),CCK-8活细胞数增加(P<0.05),细胞周期阻滞改善(P<0.05)。中药早期作用更加明显(P<0.05)。AngⅡ呈时间依赖性上调p53 m RNA和蛋白表达;中药提取物和替米沙坦两组p53表达均明显下调(P<0.05);中药早期作用更加明显(P<0.05)。结论:益气活血中药能够有效地延缓血管内皮细胞衰老,其机制可能与抑制p53基因表达有关。     

人参三七川芎提取物对高糖高脂诱导的衰老血管内皮细胞自噬的影响

目的观察人参三七川芎提取物对血管内皮细胞自噬流的影响,探讨其延缓高糖高脂诱导血管内皮细胞衰老的作用机制。方法采用40 mmol/L葡萄糖和100μmol/L棕榈酸钠造模,实验分为空白对照组、衰老模型组和中药组(200 mg/L),干预48 h。采用CCK-8检测细胞增殖能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老程度;Western blot检测细胞p16、p21、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和p62蛋白表达;免疫荧光检测自噬流变化。结果与空白对照组比较,衰老模型组细胞增殖能力和LC3B-Ⅱ表达降低,β-半乳糖苷酶蓝染细胞数量和p16、p21、p62蛋白表达增加,并存在自噬流阻滞;与衰老模型组比较,中药组细胞增殖能力增强,LC3B-Ⅱ表达升高,β-半乳糖苷酶蓝染细胞数量减少,p16、p21和p62表达降低,自噬流畅通。结论人参三七川芎提取物可延缓高糖高脂引起的血管内皮细胞衰老,其机制可能与增强细胞自噬活性有关。     

二苯乙烯苷对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞衰老的保护作用

目的探讨二苯乙烯苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞衰老的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞后,AngⅡ诱导细胞衰老模型,MTS法检测细胞存活率,SA-β-gal染色分析细胞衰老程度,qPCR检测miR-34a mRNA表达,Western blot检测p53、PAI-1、SIRT1、E2F1蛋白表达。结果二苯乙烯苷干预后,细胞存活率、SIRT1蛋白表达显著升高(P0.05),β-gal阳性率及p53、PAI-1蛋白表达显著降低(P0.05)。同时,该成分对miR-34a、E2F1表达也有明显抑制作用(P0.05)。结论二苯乙烯苷对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞衰老具有明显保护作用,其作用机制可能与抑制miR-34a、E2F1表达及促进SIRT1蛋白表达有关。     

D159687减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究

目的研究D159687对过氧化氢(H_2O_2)所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法实验分为正常对照组、模型组、D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组。将HT22细胞株接种于96孔板,对照组采用10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养,其他组加入不同浓度的D159687进行干预培养,后经H_2O_2损伤。CCK-8法测定各组细胞存活率,Western blot法检测Caspase-3和NADPH氧化酶亚基gp91phox、p47phox表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并测定各组细活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果模型组细胞存活率、SOD活性均显著低于正常对照组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P均0.05);D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组细胞存活率、SOD活性显著高于模型组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著低于模型组(P均0.05)。结论在0.5～4μmol/L浓度范围内,D159687浓度依赖性地拮抗H_2O_2所致HT22细胞损伤,同时抑制HT22细胞凋亡,这种作用可能与其抑制NADPH氧化酶关键亚基gp91phox和p47phox蛋白表达有关。     

人参三七川芎提取物对自然衰老大鼠血管外膜重构的干预机制

目的观察自然衰老大鼠血管外膜的重构特点,并探讨人参三七川芎提取物的干预作用。方法将85只20月龄的自然衰老Wistar大鼠按体重水平分层后随机分为衰老组、人参三七川芎醇提物低、中、高剂量组(下称中药低、中、高剂量组)及氯沙坦对照组(Losartan组),每组17只,另选14只2月龄青年Wistar大鼠作为青年组。中药高、中、低剂量组分别给予不同剂量的人参三七川芎醇提物[1493.4、746.7、373.4mg/(kg·d)]灌胃给药,Losartan组给予氯沙坦钾混悬液[10 mg/(kg·d)]灌胃,衰老组及青年组给予同体积蒸馏水灌胃,均每日1次。干预15周后,采用HE染色法观察各组大鼠胸主动脉壁形态;采用苦味酸天狼猩红染色法观测血管壁胶原种类、分布和含量;放射免疫分析法检测血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)、血浆血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)浓度及外膜组织AngⅡ含量;生物化学分析法检测外膜组织羟脯氨酸水平;实时荧光定量多聚酶链式反应(real-time PCR,RT-PCR)检测外膜组织血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡreceptor 1,AT_1R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡreceptor 2,AT_2R)mRNA水平;Western blot法检测外膜组织AT_1R、AT_2R蛋白表达水平。结果与青年组比较,衰老组血管外膜增厚,外膜厚度/管径增高,胶原纤维堆积,Ⅰ型胶原面积增加,Ⅲ型胶原面积减少,Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原降低(P0.05),血浆PRA及AngⅡ降低(P0.01,P0.05),外膜组织AngⅡ及羟脯氨酸含量增高,AT_1R mRNA及蛋白表达下调,AT_2R mRNA及蛋白表达上调(P0.01,P0.05)。与衰老组比较,中药低、中、高剂量组均可改善衰老血管形态学改变;中药中、高剂量组及Losartan组外膜厚度/管径均减小,中药高剂量组及Losartan组Ⅰ型胶原面积减少,Ⅲ型胶原面积增加,Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原明显升高,血管外膜羟脯氨酸含量明显降低(P0.05,P0.01);中药中、高剂量及Losartan组外膜组织中AngⅡ水平降低(P0.01,P0.05);衰老组、中药各剂量组、Losartan组各组间PRA比较,差异无统计学意义(P0.05)。与衰老组比较,各治疗组AT_1R mRNA表达均增加(P0.01),中药中、高剂量组AT_2R mRNA表达亦增加(P0.05);中药高剂量组及Losartan组AT_1R蛋白表达升高(P0.01,P0.05);中药中、高剂量组AT_2R蛋白表达亦升高(P0.05)。结论衰老大鼠血管出现外膜重构,表现为外膜增厚,胶原堆积,Ⅰ型、Ⅲ型胶原比例紊乱等,其机制可能与局部肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)激活有关;人参三七川芎提取物可能通过对外膜局部AngⅡ、AT_1R等多靶位的干预,改善外膜重构,进而延缓血管衰老。     

人参和西洋参的化学物质指纹图谱初步研究

建立了人参和西洋参的化合物指纹图谱的研究方法。利用气相色谱质谱(GC-MS)、高效液相色谱联用质谱(HPLC-MS)、毛细管电泳(CE)方法对人参和西洋参的提取物中的弱极性、中等极性和强极性成分分别进行分析,并指认各模式指纹谱中的主要色谱峰。用这种方法可较全面地反映人参和西洋参的化合物,为人参药材的鉴别和质量控制提供有效的方法。     

藜芦与人参三七西洋参配伍后藜芦定的含量变化研究

目的:考察藜芦与人参三七西洋参配伍后藜芦定的含量变化。方法:采用反相高效液相色谱法测定藜芦定的含量,比较藜芦单煎液与藜芦-人参合煎液、藜芦-三七合煎液、藜芦-西洋参合煎液中藜芦定的含量变化;色谱条件:Agilent-TC C18色谱柱(250×4.6mm),流动相为乙腈-0.1mol/L醋酸铵(35∶65),检测波长220nm,流速1.0mL/min。结果:藜芦与人参三七西洋参配伍后藜芦定的含量升高。结论:本方法简便、准确、灵敏度高,为十八反中"诸参辛芍叛藜芦"提供的实验依据。     

三七总甙中的聚炔醇成分

三七为云南名药,从三七总甙中得到二个非皂甙类成分聚炔醇化合物falcarindiol(1)和panaxytriol(2)。     

高效液相色谱-电喷雾质谱法鉴别人参、西洋参和三七的皂苷提取物

 目的采用高效液相色谱-电喷雾质谱法(HPLC/ESI-MSn)研究人参、三七和西洋参中不同皂苷提取物的组成,以期建立快速高效的鉴别方法。方法通过与人参皂苷对照品比较和对碰撞诱导解离(CID)质谱图的解析鉴定各皂苷提取物的主要成分。结果共计鉴定32种皂苷成分。通过对比,发现了各皂苷提取物中的标识性成分。结论采用高效液相色谱-电喷雾质谱法能够快速高效地鉴别人参、三七和西洋参的不同皂苷提取物,具有很高的实用价值。     

红参、三七在参参康心滴丸中的提取工艺研究

目的：建立参参康心滴丸原料药中红参、三七的最佳提取方法。方法：采用L9（34）正交试验,以皂苷总含量和人参皂苷Re为评价指标。结果：最佳提取工艺以加水量8倍,煎煮时间1.5 h,煎煮次数2次为最佳提取条件,符合工厂生产条件,切实可行。结论：通过实验验证,此工艺符合工厂生产条件,方法简便,结果准确,制剂质量稳定,符合中国药典的要求。     

Bar-HRM技术在人参和西洋参药材鉴定中的应用研究

目的：采用高分辨率熔解曲线技术（HRM）,应用ITS2序列对人参和西洋参药材进行快速鉴别,为规范市场药材管理提供一个新的分子检测手段。方法：收集人参、西洋参以及购买人参商品粉末药材,提取DNA,选择ITS2作为鉴别序列。在HRM-PCR条件下,建立人参和西洋参的标准高分辨熔解曲线、熔解曲线模型并确定Tm值;应用该方法检测市场随机收集的10份人参商品。结果：通过比较分析,人参和西洋参能够很好的区分开,10份人参商品粉末的高分辨熔解曲线、熔解曲线的峰形和Tm值均与人参相吻合,初步说明这10份人参商品都含有人参。进而将其PCR 产物测序,以验证该结果。结论：Bar-HRM方法可简单、快速、高通量化和可视化的实现人参商品粉末药材的快速检测。     

外源DNA直接导入西洋参研究初报

采用外源ＤＮＡ直接导入西洋参，其导入方法和导入时间初步的研究结果表明：类似于西洋参花器官较小的药用植，采用花粉管通道的方法直接导入较好。在本试验的范围内，最佳导入时间应用选择在上午１０：００－１１：００较适宜，其结实率为１３．２１％。     

西洋参茎叶总皂甙毒理学研究

西洋参茎叶总皂甙(PNS) 小鼠iv LD50 为352-5 ±17-5 mg/kg ;一日内ig 的最大耐受量≥30g/kg 。以1-5 、0-75g/kg 剂量给大鼠ig 60 天,对动物生长、血常规、肝、肾功能及主要脏器无明显影响;以2-0 、1-0g/kg剂量给犬口服60 天,心电图、血液学、血液生化学及主要脏器无明显改变     

Chemopreventive effect of Panax ginseng

Asian ginseng (Panax ginseng C. A. Meyer) has been used in Chinese medicine for two thousand years. The root of ginseng contains several saponins (ginsenosides) which are biologically active compounds. Individual ginsenosides suppress tumor cell growth, induce cell differentiation, regulate apoptosis and inhibit metastasis formation. The aim of this study was to evaluate its chemo‐preventive effects in an animal test model, through its regulatory effects on apoptosis and the cell cycle. The expression of genes (Bcl‐2, Bcl‐x and Cyclin D1) which affect apoptosis were examined, in different organs of animals which had consumed a ginseng‐containing diet in the presence of a known carcinogen (DMBA). The pattern of gene expression was determined by Q‐RT‐PCR. The increase of antiapoptotic gene expression after carcinogenic exposure was suppressed by consumption of ginseng which promoted apoptosis. The population is exposed to numerous physical and chemical insults in the modern environment and these include compounds which are known carcinogens. Research has shown that it is possible to interfere with the multi‐step process of carcinogenesis through the use of compounds with chemo‐preventive effects, such as the inhibition of the activation of antiapoptotic genes. These results support the efficacy of ginseng‐containing diets and dietary supplements in the prevention of cancerous diseases. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

竹节参中皂苷含量测定方法的建立

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定竹节参中人参皂苷Rg 1、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa含量的方法。方法:色谱柱:Waters Symmetry C18柱(5μm,4.6×250 mm);流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液;流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm。结果人参皂苷Rg 1、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa的线性范围分别为0.01753ug-1.7531ug(r=1)、0.01754ug-1.7541ug(r=1)、0.04917ug-4.917ug(r=1)、0.0248751ug-0.99486ug(r=1),平均回收率分别为94.68%(RSD=2.45%)、94.71%(RSD=2.82%)、97.92%(RSD=2.08%)、94.80%(RSD=2.41%)。结论该方法简便可行,重复性好,可用于测定竹节参中人参皂苷Rg 1、人参皂苷Re、人参皂苷Ro;竹节参皂苷Ⅳa的含量,为进一步提高竹节参的质量控制提供依据。