阿托伐他汀抑制血管紧张素Ⅱ诱导心房肌细胞肥大及对缝隙连接蛋白40的影响

目的观察阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心房肌细胞肥大及缝隙连接蛋白40（Cx40）表达的影响。方法20只1周龄左右Wistar大鼠,用于体外心房肌细胞的分离培养与鉴定。设置正常对照组、AngⅡ（1μmol/L）组、AngⅡ＋二甲亚砜组和AngⅡ＋阿托伐他汀0.1、1.0、10μmol/L共6组。72h后利用氚标亮氨酸掺入法检测心房肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链反应分别检测脑钠肽的前体（Nppb）、转化生长因子（TGF）-β1Cx40 mRNA的表达。结果与正常对照组相比,AngⅡ组氚标亮氨酸掺入量和Nppb mRNA表达呈显著性增加（P〈0.05）,同时TGF-β1mRNA高表达而Cx40mRNA低表达,阿托伐他汀逆转上述变化,10μmol/L组作用最强（P〈0.05）,而作为溶剂的二甲亚砜无明显作用。结论阿托伐他汀可能通过抑制Nppb mRNA的高表达来逆转AngⅡ诱导的心房肌细胞肥大,抑制TGF-β1RNA的高表达减轻心房纤维化,同时可能通过增强Cx40 mRNA的表达来逆转缝隙连接蛋白的重构,最终减低房颤发生率。     

阿托伐他汀对心肌肥大的抑制作用及FoxO1表达的影响

目的探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞的抑制作用及对转录因子FoxO1表达的影响。方法将H9C2细胞分为3组,对照组:未给予任何干预;心肌肥大组:给予AngⅡ(10-7 mol/L)刺激细胞;阿托伐他汀组:预先给予atorvastatin(10-5 mol/L),30min后AngⅡ(10-7 mol/L)刺激细胞。western-blotand real time PCR检测H9C2细胞FoxO1蛋白及mRNA含量,脑钠肽(brain natriuretic pepide,BNP)作为判断心肌肥大的指标。结果 AngⅡ诱导心肌细胞肥大后FoxO1表达较正常心肌细胞明显降低(P<0.05),而给予阿托伐他汀干预的肥大心肌细胞其FoxO1表达较肥大心肌明显升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过上调FoxO1表达,从而抑制心肌肥大。     

阿托伐他汀对AngⅡ诱导内皮细胞VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达的影响

目的:观察阿托伐他汀对于血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养人脐静脉内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA的影响,探讨阿托伐他汀的非降脂作用和潜在的治疗作用.方法:培养人脐静脉内皮细胞,取生长良好的第2、3代细胞进行实验.将细胞分为三组:对照组、AngⅡ组、阿托伐他汀干预组.对照组加培养液,AngⅡ组以不同浓度的AngⅡ与细胞共孵育24 h,干预组首先用不同浓度的阿托伐他汀(0.05μmol/L,0.1 μmol/L,1.0 μmol/L,10 μmol/L)分别作用1 h,而后加1 μmol/L Ang Ⅱ与细胞共育24 h.半定量RT-PCR测定粘附分子ICAM-1和VCAM-1mRNA的表达.结果:Ang Ⅱ能上调ICAM-1和VCAM-1的表达,阿托伐他汀在一定程度上可抑制上述作用.结论:阿托伐他汀可抑制粘附分子ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达,可能具有增加粥样斑块稳定性和延缓动脉粥样硬化进程的作用.     

阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞Cyr61的表达

目的 探讨阿托伐他汀对增殖的血管平滑肌细胞Cyr61的作用.方法 贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,将培养的平滑肌细胞分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组和阿托伐他汀组.AngⅡ组将1μmol/L AngⅡ加入平滑肌细胞培养基,共培养180 min;阿托伐他汀组在AngⅡ刺激细胞前1h加入10 μmol/L阿托伐他汀到培养基中.采用RT-PCR及Western blot检测各组中各时点Cyr61 mRNA和蛋白表达.结果 AngⅡ组与正常对照组相比上调增殖的平滑肌细胞Cyr61mRNA和蛋白表达,阿托伐他汀组与AngⅡ组相比抑制AngⅡ刺激的Cyr61蛋白表达,尤其在30 min时点更加明显(P＜0.01).结论 阿托伐他汀抑制增殖的平滑肌细胞Cyr61的表达,为阿托伐他汀降脂外的抗动脉硬化作用增加新的理论依据.     

阿托伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-1表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)合成和分泌的影响.方法:将心脏成纤维细胞分6组培养:空白对照组,醛同酮组(培养液中加入醛固酮,终浓度为1×10-7 mol/L),阿托伐他汀预处理Ⅰ、Ⅱ及皿组(培养液中加入阿托伐他汀,终浓度分别为1×10-6、1×10-5及1×10-4 moL/L,24 h后加入醛同酮)及阿托伐他汀+甲羟戊酸组(培养液中加入阿托伐他汀,终浓度为1×10-4 moL/L,甲羟戊酸,终浓度为1×10-3mol/L,24 h后加入醛固酮).ELISA法测定培养液中 TGF-β1蛋白水平,RT-PCR和Western Blot法分别测定心脏成纤维细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达.结果:6组心脏成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达、蛋白合成和分泌水平差异均有统计学意义(F值分别为104.534,30.405和14.418,P均＜0.001).与空白对照组比较,醛固酮组和阿托伐他汀+甲羟戊酸组TGF-β1 mRNA表达量、TGF-β1蛋白表达和分泌水平增加(P均＜0.01);阿托伐他汀预处理组上述3个指标低于醛同酮组和阿托伐他汀+甲羟戊酸组(P均＜0.01).结论:阿托伐他汀可能通过甲羟戊酸代谢途径,抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达以及TGF-β1蛋白的合成和分泌.     

阿托伐他汀对新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体mRNA的影响

目的 探讨阿托伐他汀对醛固酮诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达的影响.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养乳鼠心脏成纤维细胞,应用RT-PCR检测心脏成纤维细胞TGF-βRⅠ mRNA的表达.结果 给予醛固酮(10-7mol/L)4 h后,TGF-βRⅠ mRNA表达开始增加,8 h达高峰;提前给予阿托伐他汀(10-6,10-5,10-4mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮诱导的TGF-βRⅠ mRNA表达,而甲羟戊酸可逆转阿托伐他汀的这种抑制作用.结论 阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-βRⅠ mRNA表达,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关.     

SHP-1在Ang-(1-7)拮抗AngⅡ致心房肌缝隙连接蛋白43重构中的作用

目的 探讨血管紧张素1-7[angiotensin 1-7,Ang-(1-7)]是否通过SHP-1来抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的c-Src激活,从而改善缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的表达以及功能.方法 以小鼠心房肌细胞系(HL-1细胞系)作为研究对象,分为Control组、AngⅡ组、AngⅡ+SU6656(c-Src抑制剂)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG(SHP-1抑制剂)组,Western blot分别检测p-c-Src、Cx43、SHP-1的表达,细胞免疫荧光、划痕标记染料示踪技术观察Cx43空间分布以及缝隙连接功能.结果 与Control组比较,高浓度AngⅡ(10-mol/L)干预后p-c-Src表达增加(P＜0.01),Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短;SU6656和Ang-(1-7)预处理可抑制AngⅡ诱导的c-Src激活,Cx43表达增加(P＜0.05),Cx43传导距离增加;同时Ang-(1-7)预处理明显地促进SHP-1的表达增加(P＜0.05).与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较,AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG组SHP-1表达降低(P＜0.05),p-c-Src表达增加(P＜0.01),细胞Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短.结论 Ang-(1-7)通过增加SHP-1表达从而抑制c-Src活性,进而发挥对AngⅡ的拮抗作用,使Cx43表达上升并改善缝隙连接功能.     

阿托伐他汀对人内皮细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的阿托伐他汀(atorvastatin)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮(HUVECs)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长到融合状态时加人ox-LDL(100μg/ml),作用24小时后分别加入不同浓度的阿托伐他汀(1～30μmol/L),采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术测定ICAM-1 mRNA的表达.结果:Ox-LDL可诱导ICAM-1 mRNA的表达,不同浓度的阿托伐他汀可抑制ox-LDL诱导的ICAM-1 mRNA的表达,并呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可抑制ox-LDL诱导的HUVECsICAM-1 mRNA的表达,并呈浓度依赖性.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠HSCs分泌ECM影响机制的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠肝脏星状细胞(HSCs)分泌细胞外基质(ECM)的可能机制。方法采用胶原酶原位循环灌流法分离大鼠肝星状细胞(HSCs)。①用不同浓度AngⅡ(10-9~10-5mol/L)处理HSCs,酶联免疫吸附法检测各组HSCs层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)水平。以未经AngⅡ处理的HSCs作为对照组。②选择使ECM分泌显著增加的AngⅡ处理组HSCs,抽提RNA后采用RT-PCR技术测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,并与新鲜分离的大鼠HSCs和对照组HSCs进行比较。结果与对照组比较,AngⅡ各浓度处理组HSCs的LN和HA分泌水平均明显增加(P<0.01),且呈剂量依赖关系;AngⅡ10-7~10-5mol/L处理组HSCs的PCⅢ和CⅣ分泌水平也显著增加(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,与新鲜分离大鼠和对照组HSCs比较,有较高ECM分泌水平的10-6mol/L AngⅡ处理组HSCs的TGF-β1和CTGF mRNA表达水平明显升高。结论AngⅡ能刺激大鼠HSCs分泌ECM,其通过促进TGF-β1表达经CTGF介导而参与肝脏纤维化的发生。     

1,25（OH）2D3对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞转化的抑制作用

目的探讨1,25(OH)2D3对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞转化起始过程的抑制作用,为临床肾间质纤维化的防治提供理论依据。方法分离SD大鼠肾小管上皮细胞,将其分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ终浓度10-8mol/L)以及AngⅡ(10-8mol/L)+1,25(OH)2D3干预组[1,25(OH)2D3终浓度分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L],培养48 h后收集各组细胞。利用酶联免疫吸附实验检测ColⅠ和FN;Real-time RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达;Western Blot检测肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白表达。结果实验48 h后,AngⅡ组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达及培养上清中ColⅠ和FN浓度均较对照组显著增高,AngⅡ+10-6mol/L1,25(OH)2D3组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达较对照组明显增高,但细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度仅略有增高,差异无显著性,随着1,25(OH)2D3浓度的降低(10-7mol/L,10-8mol/L),TGF-β1mRNA表达、蛋白表达,细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度也随之显著增高(P<0.05)。结论 1,25(OH)2VD3可以部分抑制AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞EMT,其机制可能是通过抑制肾小管上皮细胞TGF-β1基因与蛋白表达、减少肾小管上皮细胞ColⅠ和FN分泌实现的。     

Effect of Atorvastatin on Expression of Peroxisome Proliferator-activated Receptor Beta/delta in AngiotensinⅡ-induced Hypertrophic Myocardial CellsIn Vitro

Objective To explore the effect of atorvastatin on cardiac hypertrophy and to determine the potential mechanism involved. Methods Anin vitro cardiomyocyte hypertrophy from neonatal rats was induced with angiotensinⅡ (AngⅡ) stimulation. Before AngⅡ stimulation, the cultured rat cardiac myocytes were pretreated with atorvastatin at different concentrations (0.1, 1, and 10μmol/L). The following parameters were evaluated: the myocyte surface area,3H-leucine incorporation into myocytes, mRNA expressions of atrial natriuretic peptide, brain natriuretic peptide, matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 2, and interleukin-1β, mRNA and protein expressions of theδ/β peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) subtypes. Results It was shown that atorvastatin could ameliorate AngⅡ-induced neonatal cardiomyocyte hypertrophy in the area of cardiomyocytes,3H-leucine incorporation, and the expression of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide markedly. Meanwhile, atorvastatin also inhibited the augmented mRNA level of several cytokines in hypertrophic myocytes. Furthermore, the down-regulated expression of PPAR-δ/β at both the mRNA and protein levels in hypertrophic myocytes could be significantly reversed by atorvastatin treatment. Conclusions Atorvastatin could improve AngⅡ-induced cardiac hypertrophy and inhibit the expression of cytokines. Such effect might be partly achieved through activation of the PPAR-δ/β pathway.     

抑制ERK1/2通路激活改善大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40重构

目的 探讨ERK1/2通路抑制剂U0126对盐酸异丙基肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心房纤维化和缝隙连接蛋白40(Cx40)重构的影响。 方法 将32只雄性SD大鼠随机等分为空白对照组、DMSO组、ISO [5 mg/(kg·d) ]+DMSO组(模型组)和ISO [5 mg/(kg·d) ]+U0126 [0.5 mg/(kg·d) ]+DMSO组(干预组)。每组1次/d给予相关试剂,连续7 d后处死大鼠并取心肌组织。用放射免疫法测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量;H-E和Masson染色法观察心肌纤维化程度;免疫组化法测定磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)以及Cx40的表达。 结果 (1)空白对照组 [(242.133±4.870) ng/L ]与DMSO组 [(239.412±1.795) ng/L ]的AngⅡ含量差异无统计学意义,而模型组 [(500.250±8.869) ng/L ]和干预组 [(498.695±9.340) ng/L ]的AngⅡ含量较空白对照组与DMSO组均升高,差异有统计学意义(P均<0.01)。(2)空白对照组与DMSO组无心房纤维化,而干预组心房纤维化程度较模型组减弱(P<0.01)。(3)空白对照组与DMSO组中p-MEK1/2和p-ERK1/2的含量差异无统计学意义,模型组中两者含量较空白对照组与DMSO组均增加(P均<0.01),干预组中两者含量与空白对照组和DMSO组比较差异均无统计学意义,而与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(4)空白对照组与DMSO组中Cx40含量差异无统计学意义且呈线性分布于心肌细胞闰盘处,模型组中Cx40含量较空白对照组和DMSO组均减少(P均<0.01)且分布无规律性,而干预组中Cx40含量与空白对照组和DMSO组比较差异均无统计学意义且部分呈线性分布于心肌细胞闰盘处;干预组中Cx40含量减少程度较模型组减弱(P<0.01),且部分呈线性分布于心肌细胞闰盘处。 结论 心肌组织中AngⅡ含量长期升高可能参与了心房纤维化的形成和Cx40重构,U0126通过抑制ERK1/2通路激活可有效改善心房纤维化程度和Cx40重构。     

Effect of anaphylatoxin C3a, C5a on the tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation in vitro

Background  Tubulointerstitial renal fibrosis is the common end point of progressive kidney diseases, and tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation (TEMT) plays a key role in the progress of tubulointerstitial renal fibrosis. Anaphylatoxin C3a and C5a are identified as novel profibrotic factors in renal disease and as potential new therapeutic targets. The aim of this study was to investigate whether C3a, C5a can regulate TEMT by transforming growth factor-β1 (TGF-β1)/connective tissue growth factor (CTGF) signaling pathway and the effects of C3a and C5a receptor antagonists (C3aRA and C5aRA) on C3a- and C5a-induced TEMT.

Methods  HK-2 cells were divided into C3a and C5a groups which were subdivided into four subgroups: control group, 10 ng/ml TGF-β1 group, 50 nmol/L C3a group, 50 nmol/L C3a plus 1 μmol/L C3aRA group; control group, 10 ng/ml TGF-β1 group, 50 nmol/L C5a group, 50 nmol/L C5a plus 2.5 μmol/L C5aRA group. TGF-β1 receptor antagonist (TGF-β1RA) 10 μg/ml was used to investigate the mechanism of C3a- and C5a-induced TEMT. Electron microscopy was used to observe the morphological changes. Immunocytochemistry staining, real-time PCR and Western blotting were used to detect the expressions of α smooth muscle actin (α-SMA), E-cadherin, Col-I, C3a receptor (C3aR), C5aR, CTGF and TGF-β1.

Results  HK-2 cells cultured with C3a and C5a for 72 hours exhibited strong staining of α-SMA, lost the positive staining of E-cadherin, and showed a slightly spindle-like shape and loss of microvilli on the cell surface. The expressions of α-SMA, E-cadherin, Col-I, C3aR, C5aR, TGF-β1 and CTGF in C3a- and C5a-treated groups were higher than normal control group (P <0.05). C3aRA and C5aRA inhibited the expressions of α-SMA, Col-I, C3aR, C5aR, and up-regulated the expression of E-cadherin (P <0.05). TGF-β1 and CTGF mRNA expressions induced by C3a and C5a were partly blocked by TGF-β1RA (P <0.05).

Conclusion  C3a and C5a can induce TEMT via the up-regulations of C3aR and C5aR mRNA and the activation of TGF-β1/CTGF signaling pathway in vitro.

     

丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ上调培养的血管平滑肌细胞转化生长因子-β受体表达中的作用

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)转化生长因子-β受体(TGF-βR1)上调中的作用。方法:培养大鼠主动脉VSMC,以10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,AngⅡ刺激前分别应用10-5mol/L氯沙坦(Losartan)、PD98059预处理,以正常的VSMC为对照组,细胞免疫化学法测定培养12h时VSMC TGF-βR1的含量。结果:与对照组相比,AngⅡ刺激培养12h的VSMC TGF-βR1表达上调(P<0.01);AngⅡ受体AT1型拮抗剂Losartan使TGF-βR1表达显著降低(P<0.01),丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059能显著降低TGF-βR1表达(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1上调TGF-βR1的表达,丝裂原活化蛋白激酶参与AngⅡ的胞内信号转导。     

RhoA-ROCK通路在血管紧张素Ⅱ刺激人胚肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子中的作用

目的 探讨RhoA-ROCK通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人胚肺成纤维细胞(HFL-1)表达结缔组织生长因子(CTGF)中的作用.方法 培养HFL-1,设置无刺激对照组、AngⅡ组(10-7 mol/L的AngⅡ刺激)、Irbesartan+AngⅡ组(以10-6 mol/L的AT-1受体拮抗剂Irbesartan预处理1 h后再予10-7 mol/L的AngⅡ刺激)和ROCK抑制剂Y27632+AngⅡ组(10-6 mol/L的Y27632预处理1 h后再予10-7 mol/L的AngⅡ刺激).利用Western印迹和QuantiGene多基因定量方法检测RhoA-ROCK激活及下游因子CTGF表达情况.结果 观察Irbesartan对AngⅡ诱导CTGF蛋白表达的实验,结果:AngⅡ组CTGF蛋白表达较对照组增强(0.89±0.05比0.48±0.10,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(0.72±0.05)较AngⅡ组减弱(P＜0.05).AngⅡ组RhoA蛋白表达较对照组增强(3.40±0.46比1.77±0.37,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(2.27±0.45)较AngⅡ组减弱(P＜0.05).重新培养细胞留取标本观察Y27632对AngⅡ诱导CTGF蛋白表达的影响,结果:AngⅡ组CTGF蛋白表达较对照组增强(0.62±0.15比0.16±0.05,P＜0.01),Y27632+AngⅡ组(0.17±0.04)较AngⅡ组减弱(P＜0.01).从基因水平重复上述实验,结果:AngⅡ组CTGF mRNA表达较对照组增强(1.16±0.06比1.00±0.01,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(0.99±0.07)较AngⅡ组减弱(P＜0.01),Y27632+AngⅡ组(1.04±0.08)较AngⅡ组减弱(P＜0.05);AngⅡ组RhoA mRNA表达较对照组增强(1.21±0.07比1.00±0.06,P＜0.01),Irbesartan+AngⅡ组(1.00±0.12)较AngⅡ组减弱(P＜0.05),Y27632+AngⅡ组(1.10±0.05)与AngⅡ组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过AT-1受体诱导HFL-1细胞CTGF蛋白和mRNA表达,RhoA-Rock通路参与其中.

Abstract：

Objective To explore the production of connective tissue growth factor(CTGF)by Angiotensin Ⅱ(Ang Ⅱ)in human embryonic lung fibroblast via the RhoA-ROCK pathway. Methods Human embryonic lung fibroblast(HFL-1)was divided into 4 groups:(1)control group:no stimulation;(2)AngⅡgroup:stimulation of AngⅡ(10-7 mol/L);(3)Irbesartan plus Ang Ⅱ group:stimulation by Ang Ⅱ(10-7 mol/L)with AT-1 receptor antagonist irbesartan(10-6 mol/L)pre-treatment;(4)Irbesartan plus Ang Ⅱ group:stimulation by Ang Ⅱ(10-7 mol/L)with ROCK inhibitor Y27632(10-6 mol/L)pretreatment.Then the products of protein and RNA were collected.Western blot and QuantiGene were used to detect the activation of RhoA-Rock pathway and CTGF.Results Exploring the affect of irbesartan on Ang Ⅱ through the Western blot analysis of CTGF and RhoA protein expression:the CTGF level was up-regulated by AngⅡ(0.89±0.05 vs control 0.48 ±0.10,P ＜0.01).Such an effect was markedly blocked by a pretreatment of irbesartan(0.72 ± 0.05,P＜0.05).After the use of Ang Ⅱ,the expression of RhoA protein was significantly enhanced(3.40 ± 0.46 vs control 1.77 ± 0.37,P＜0.01)and blunted by a pretreatment of irbesartan(2.27 ± 0.45,P＜0.05).The Western blot analysis of CTGF protein expression showed that Ang Ⅱ caused a robust increase in CTGF(0.62 ± 0.15 vs control 0.16 ± 0.05,P＜0.01).Such an effect was markedly blocked by a pretreatment of Y27632(0.17 ± 0.04,P＜0.01).The result was similar at the gene level.Ang Ⅱ significantly increased the expression of CTGF mRNA(1.16 ± 0.06 vs control 1.00 ± 0.01,P＜0.01).And it was markedly blocked by a pretreatment of irbesartan(0.99 ±0.07,P＜0.01)or Y27632(1.04 ±0.08,P＜0.05).AngⅡ significantly increased the expression of RhoA mRNA(1.21 ± 0.07 vs control 1.00 ± 0.06,P＜0.01).And it was markedly blocked by a pretreatment of irbesartan(1.00 ± 0.12,P＜0.05)but not Y27632(1.10 ± 0.05,P＞0.05).Conclusion Ang Ⅱ activates HFL-1 to produce CTGF through the AT-1 receptor.And the RhoA-Rock pathway is involved.     

转化生长因子-β1及结缔组织生长因子在病毒性心肌炎中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)在病毒性心肌炎(VM)中的表达。方法:雄性Balb/c小鼠36只随机均分为对照组和模型组。模型组建立VM模型。分别于7、14、28 d每组随机抽取6只小鼠断颈处死。心脏称重后用4%多聚甲醛固定,苏木精-伊红染色,光镜下观察心肌组织形态学改变,半定量计算病理积分。免疫组织化学方法检测心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白表达,并应用病理图像分析仪进行图像分析,分别计算Ⅰ型和Ⅲ型胶原的面积。心肌组织CTGF、TGF-β1同样采用免疫组织化学测定,免疫组织化学图像分析经标准灰度校正后测定阳性细胞的吸光度及面积,以两者乘积表示组织中该抗原相对含量。结果:与对照组比较,模型组病理积分、心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达、心肌组织中CTGF、TGF-β1的表达均显著增加(P0.01)。心肌Ⅲ型胶原蛋白的表达与CTGF、TGF-β1呈正相关关系(r=0.612,0.533,P0.05)。TGF-β1与CTGF表达也呈正相关关系(r=0.939 P0.05)。结论:TGF-β1及CTGF协同参与了VM心肌纤维化的发生、发展过程。     

转化生长因子&bgr;1短发夹RNA对白蛋白致人肾小管上皮细胞细胞因子过表达的抑制作用

目的:研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子&bgr;(TGF-&bgr;1)短发夹RNA(pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2)对人血清白蛋白(HSA)致人肾小管上皮细胞(HK2细胞)增殖,TGF-&bgr;1、结缔组织生长因子(CTGF)和纤连蛋白(FN)表达的影响,并探讨HSA刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因过表达是否通过TGF-&bgr;1介导。方法:构建TGF-&bgr;1短发夹RNA的pcDU6载体质粒,体外培养HK2细胞株。采用脂质体转染将表达TGF-&bgr;1 shRNA的pcDU6质粒载体(pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2)分别导入试验组细胞。使用HSA(5 g/L)刺激HK2细胞12 h或24 h。用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖水平;逆转录多聚酶链反应半定量分析HK2细胞中TGF-&bgr;1,CTGF和FN mRNA的表达水平;双抗夹心酶联免疫吸附法检测HK2细胞培养液中TGF-&bgr;1及FN蛋白质水平。结果:HSA对HK2细胞增殖在5 g/L作用24 h最明显;HK2细胞在HSA刺激下可明显上调TGF-&bgr;1,CTGF及FN mRNA的表达,培养液中TGF-&bgr;1和FN的蛋白质含量亦明显升高 (P<0.05)。与pcDU6空载体组比较,pcDU6载体质粒介导的TGF-&bgr;1 shRNA干扰组TGF-&bgr;1, CTGF及FN mRNA的表达明显下调(P<0.05)。TGF-&bgr;1 shRNA转染HK2细胞后12 h或24 h,细胞培养液中TGF-&bgr;1和FN蛋白质含量明显下降,HK2细胞增殖被部分抑制(P<0.05)。TGF-&bgr;1shRNA干扰组组间比较以及pcDU6空载体转染组与HSA刺激组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:pcDU6载体质粒介导的TGF-&bgr;1shRNA能够明显抑制HSA刺激下HK2细胞增殖以及TGF-&bgr;1,CTGF和FN基因的表达,HSA刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因的过表达可能通过TGF-&bgr;1介导。     

阿托伐他汀对大鼠急性心肌梗死后心功能及TGF-β1信号通路的影响

目的观察阿托伐他汀对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心脏重构及心功能的影响,并探索其作用是否与转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路有关。方法结扎64只雄性SD大鼠左冠状动脉构建AMI模型,存活45只随机分为3组,即对照组(n=15),低剂量阿托伐他汀组[n=15,10mg/(kg·d)]及高剂量阿托伐他汀组[n=15,20mg/(kg·d)],另设假手术组(n=15),术后24 h开始灌胃给药。8周后比较各组大鼠心功能、左室质量指数、胶原容积分数、TGF-β1及Smad2的mRNA及蛋白表达差异。结果 (1)对照组心功能显著低于假手术组(P<0.05),左室质量指数、胶原容积分数、TGF-β1及Smad2的mRNA及蛋白表达均显著高于假手术组(P<0.05);(2)两个阿托伐他汀组的心功能均显著优于对照组(P<0.05),左室质量指数、胶原容积分数、TGF-β1及Smad2的mRNA及蛋白表达均显著低于对照组(P<0.05);(3)高剂量阿托伐他汀组的作用更显著(P<0.05)。结论阿托伐他汀可显著改善大鼠AMI后心脏重构及心功能,其作用具有剂量依赖性,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

血管紧张素系统阻断剂对慢性肾脏疾病患者血清Ang Ⅱ、TGF-β1水平的影响

目的观察苯那普利(ACEI)、缬沙坦(ARB)及两药联合应用对慢性肾小球疾病患者血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平的影响。方法89例伴有蛋白尿的慢性肾小球疾病患者随机分为3组,苯那普利组(ACEI)、缬沙坦组(ARB)和联合组(苯那普利+缬沙坦),疗程8～12周。分别检测各组的AngⅡ、TGF-β1、肾功能、24h尿蛋白定量及血压。结果苯那普利组及联合治疗组血清AngⅡ水平均较治疗前显著降低(P<0.05),缬沙坦组血清AngⅡ水平较治疗前上升(P<0.05),各组血清TGF-β1水平均较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05),其中治疗后各组间单因素方差分析表明,联合治疗组血清TGF-β1水平与单独用药组相比差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后各组蛋白尿均降低(P<0.05),苯那普利组及缬沙坦组之间差异无统计学意义(P>0.05),联合治疗组降低蛋白尿疗效优于苯那普利组及缬沙坦组(P<0.05)。结论苯那普利和缬沙坦联合治疗慢性肾小球疾病,可下调AngⅡ、TGF-β1的表达,进一步降低蛋白尿。