CDCA在C57BL/6小鼠中上调肝脏成纤维细胞生长因子21表达及其效应

目的 研究法尼酯X受体(farnesoidXreceptor,FXR)的激活对C57 BL/6小鼠肝脏中纤维细胞生长因子2( fibroblast growth factor 21,FGF21)基因表达的影响.方法 将18只3～4周龄C57BL/6小鼠随机分为3组,分别使用不同浓度鹅脱氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA,0、10 mg/kg和50 mg/kg)给小鼠灌胃7d,处死后分别提取小鼠肝脏总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法和Western blot法检测各组小鼠FGF21 RNA和蛋白表达水平的变化;同时用酶法测定检测小鼠血甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)及血糖( GLU)变化.结果 C57BL/6小鼠肝脏中FGF21 RNA和蛋白的表达水平呈CDCA剂量依赖型增高;小鼠血脂及血糖测定结果显示:TG,TC和血糖随CDCA浓度的升高而下降.结论 CDCA可上调C57BL/6小鼠肝脏中FGF21的表达并导致血TG、TC及GLU下降.     

法尼酯X受体上调载脂蛋白F在肝细胞中的表达

目的研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的激活在肝细胞中对载脂蛋白F(apolipoprotein F,ApoF)基因表达的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测不同浓度鹅脱氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA,0、25、50、100μmol/L)和人工合成FXR配体GW4064(0、0.02、0.2、2μmol/L)处理后HepG2和L02细胞中的小分子异二聚体伴侣(small heterodimer partner,SHP)及ApoF的mRNA和蛋白水平变化。结果结果①经FXR天然配体CDCA处理24 h后,不同浓度处理组细胞SHP mRNA水平、ApoF mRNA和蛋白水平均显著高于未处理组(P<0.05)。②经FXR人工合成配体GW4064处理24 h后,不同浓度处理组细胞SHP mRNA水平、ApoF mRNA和蛋白水平均显著高于未处理组(P<0.05)。结论肝细胞株HepG2和L02经FXR配体CDCA或GW4064处理后,FXR被激活,并上调ApoF的mRNA和蛋白水平。     

法尼酯X受体的研究进展

法尼酯X受体(farnesoidXreceptor,FXR)是核受体超家族的成员,可被内源性配体胆汁酸激活,在胆汁酸、胆固醇及脂蛋白代谢中起着十分重要的作用。随着新配体及靶基因的发现,FXR展示了更多的生理或病理作用。本研究将对FXR研究进展作一综述。1FXR概述FXR与其他典型的核受体成员具有     

法尼酯衍生物X受体在糖代谢中的研究进展

法尼酯衍生物 X 受体(farnesyl X receptor , FXR)最早是于1995 年发现,主要分布于肝脏、小肠等组织,胆汁酸是其天然配体.近年来研究显示FXR被激活后参与多种基因调控、葡萄糖耐量、胰岛素抵抗和能量代谢[1 ].本文将通过综述FXR在不同靶器官的表达从而对糖代谢的影响,探究FXR作为2 型糖尿...     

法尼酯X受体对脂肪酸合酶表达的影响

目的 探讨法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对脂肪酸合酶(fatty acid synthetase,FAS)表达的影响.方法 用FXR激动剂CDCA作用人肝癌细胞株(HepG2),应用RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白质水平检测FAS的表达情况.结果 用不同浓度的CDCA(25、50、75 μmol/L)分别作用于HepG2细胞,6、12、24、48 h后,FAS mRNA和蛋白质水平呈时间和剂量依赖性下调.结论 FXR激动剂可抑制脂肪酸合酶的表达.     

大鼠法尼酯X受体慢病毒构建及鉴定

目的：构建大鼠法尼酯X受体（rFXR）慢病毒,为研究FXR在原发性肝细胞癌中的分子机制奠定基础。方法：以pCMX-rFXR（NM_021745.1）为模板,将rFXR克隆到pWPXL表达载体中,酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293T细胞,包装重组慢病毒rFXR sh-RNA。Western blot鉴定后,感染Huh7细胞进行功能检测。结果：证实pWPXL-rFXR sh-RNA构建及病毒包装成功;感染Huh7后,rFXR表达明显提高：FXR靶基因SHP和BSEP的表达增加。结论：pWPXL-rFXR sh-RNA慢病毒构建及包装成功,为研究FXR的生物学功能奠定基础。     

法尼酯X受体对肝脂酶表达及活性的影响

目的 探讨法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对肝脂酶(hepatic lipase,HL)表达及活性的影响.方法 用FXR激动剂CDCA作用人肝癌细胞株(HepG2),用RT-PCR和Western blotting检测HL的表达情况.此外,用FXR激动剂CDCA处理C57BL/6小鼠,采用总脂酶测试盒检测HL的活性.结果 用不同浓度的CDCA(25、50、75μmol/L)分别作用HepG2细胞,6、12、24、48h后HL的Mrna和蛋白质水平呈时间和剂量依赖性下调.同时,用不同浓度的FXR激动剂CDCA(10、20、50、90、150mg/kg)处理C57BL/6小鼠7d后,测定小鼠HL的活性呈剂量依赖性下降.结论 FXR激动剂可抑制肝脂酶的表达及活性.     

阻塞性黄疸大鼠肝脏中法尼酯衍生物X受体的表达及CDCA对其影响

目的 探讨应用鹅脱氧胆酸(CDCA)治疗胆汁淤积性疾病的可行性.方法 取4周龄健康雄性SD大鼠72只,随机将其中48只大鼠的胆总管在十二指肠上方双重结扎后剪断然后缝合关腹,建立胆道阻塞大鼠动物模型.另外24只大鼠仅游离胆总管但并不结扎,然后缝合关腹作为对照组.观察大鼠胆管阻塞1d、3d、7d和14 d四个时段的肝脏组织形态学改变,并检测这四个不同时段的大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)等血液生化指标;通过免疫组化方法观察大鼠胆管阻塞不同时段的法尼酯衍生物X受体(FXR)表达变化,同时利用上述方法研究CDCA在大鼠胆管阻塞进程中的作用.结果 大鼠胆管阻塞后,肝内胆管扩张,纤维组织增生,但14d后症状有所缓解;随大鼠胆管阻塞时间延长,血清中ALT、TB和TBA明显升高.第7天达到峰值,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),第14天时均明显下降;CDCA可不同程度的降低大鼠血清中ALT、TB和TBA的水平.另外,随大鼠胆管阻塞时间的延长,FXR表达上调,第7天最为明显.CDCA治疗可明显减轻大鼠胆管阻塞后所致的肝脏损伤,CDCA可抑制FXR的表达上调.结论 胆管阻塞可导致肝损伤和肝纤维化,其程度和血清中的ALT水平呈密切相关.胆道阻塞时,胆汁酸浓度的上升刺激FXR表达上调,并随阻塞时间延长,FXR蛋白表达增高相对缓慢.FXR的激动剂——CDCA可减轻胆道阻塞后大鼠肝脏损害.     

碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌中的表达及其意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和成纤维细胞生长因子受体-4(fibroblast growth factor receptor-4,FGFR-4)在胃癌组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法,检测81例胃癌及其癌旁组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4的表达。结果：11例癌旁正常胃粘膜上皮有1例碱性成纤维细胞生长因子(9．1％),2例成纤维细胞生长因子受体-4(18．2％)染色阳性;5例癌旁不典型增生中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性各2例(40％);4例癌旁肠化碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别有2例(50．0％)和1例(25．0％);81例癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别为72例(88．89％)和74例(91．36％);癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性率明显高于癌旁肠化及不典型增生(P＜0．01);胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4表达的水平与患者肿瘤部位、组织学类型及分化程度无关(P＞0．05);碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色呈明显相关(P＜0．01)。结论：碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

Farnesoid X receptor expression is reduced in human hepatocellular carcinoma

Farnesoid X receptor (FXR, NR1H4) is a member of nuclear hormone receptor superfamily. Previously studies showed that FXR^?/? mice spontaneously developed liver tumors when they aged, however, the relevance of which to human hepatocellular carcinoma (HCC) is unclear. The aim of this study is to observe whether FXR expression is also downregulated in HCC and discuss the mechanism of the reduced FXR expression in HCC. Expression of FXR and small heterodimer partner (SHP) was measured by real-time PCR and immunohistochemical technique. Effect of pro-inflammatory cytokines on expression of FXR and its promoter activity were determined in primary hepatocytes or HepG2 and Huh7 cell lines. Our results showed that expression of FXR and its target gene SHP in human HCC was strongly downregulated compared to the normal liver tissues. In addition, pro-inflammatory cytokines were able to decrease FXR expression by inhibiting the FXR promoter activity. In conclusion this work demonstrates FXR expression is strongly downregulated in human HCC, which may be caused by decreased FXR promoter activity, suggesting a potential role of FXR in human HCC development.     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体-1表达与甲状腺癌侵袭转移的关系

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)，成纤维细胞生长因子受体－1（FGFR－I）在甲状腺癌组织中的表达，及与甲状腺癌发生发展的关系。方法：采用免疫组织化学（SP法），检测88例甲状腺癌bFGF和FGFR－I表达，并以15例甲状腺腺瘤，30例正常甲腺组织作对照，同时对33例甲状腺癌应用图像分析方法检测细胞核DNA含量。结果：bFGF与FGFR－I表达均呈癌＞腺瘤＞正常甲状腺组织（P＜0．05）,bFGF表达和FGFR－1表达正相关（P＜0．05），bFGF和FGFR－I表达与甲状腺癌细胞核DNA含量正相关（P＜0．01），两者表达甲状腺癌颈淋巴结转移阳性组＞阴性组（P＜0．05），结论：bFGF,FGFR-I表达反映甲状腺癌的生物学行为，与甲状腺癌侵袭转移相关。     

A cell-based high-throughput screening assay for Farnesoid X receptor agonists

Objective To develop a high-throughput screening assay for Farnesoid X receptor （FXR） agonists based on mammalian one-hybrid system （a chimera receptor gene system） for the purpose of identifying new lead compounds for dyslipidaemia drug from the chemical library. Methods cDNA encoding the human FXR ligand binding domain （LBD） was amplified by RT-PCR from a human liver total mRNA and fused to the DNA binding domain （DBD） of yeast GAL4 of pBIND to construct a GAL4-FXR （LBD） chimera expression plasmid. Five copies of the GAL4 DNA binding site were synthesized and inserted into upstream of the SV40 promoter of pGL3-promoter vector to construct a reporter plasmid pG5-SV40 Luc. The assay was developed by transient co-transfection with pG5-SV40 Luc reporter plasmid and pBIND-FXR-LBD （189-472） chimera expression plasmid. Results After optimization, CDCA, a FXR natural agonist, could induce expression of the luciferase gene in a dose-dependent manner, and had a signal/noise ratio of 10 and Z＇ factor value of 0.65, Conclusion A stable and sensitive cell-based high-throughput screening model can be used in high-throughput screening for FXR agonists from the synthetic and natural compound library.     

低氧诱导胎肝间质细胞表达碱性成纤维生长因子

目的:观察低氧培养条件下小鼠胎肝间质细胞中碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的表达情况,为其用于脑缺血治疗提供依据.方法:取孕14.5 d小鼠胚胎肝细胞进行贴壁培养及传代,生长至次融合状态的第5代细胞在95% N2和5% CO2混合气体条件下培养,在2、4、8、16、32 h时应用半定量RT-PCR和Western印迹法检测其bFGF基因表达.结果:在常氧条件下培养的胎肝间质细胞中,bFGF mRNA及其蛋白水平均较低;而低氧培养则可显著提高胎肝间质细胞bFGF基因的mRNA及其蛋白水平.bFGF mRNA在低氧培养2 h时即显著增高,16 h时达到高峰水平.PCR产物bFGF与β-actin信号比从常氧培养的(5.94±2.65)% 增加到(32.86±9.57)% (P＜0.01),升高5.52倍;bFGF蛋白在低氧培养4 h时显著增高,16 h时达到高峰水平,Western印迹法检测bFGF与β-actin信号从常氧培养的(4.73±2.23)%增加到(23.96±7.83)% (P＜0.01),升高5.07倍.结论:低氧可诱导bFGF在小鼠胎肝间质细胞中的表达,提示小鼠胎肝间质细胞在脑缺血中的治疗作用.     

法呢醇X受体及瘦素在胆管癌中的表达及意义

目的探讨法呢醇X受体（FXR）与瘦素（Lep）在胆管癌组织中的表达变化及意义,并分析二者之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测胆管癌组、癌旁胆管组和手术边缘正常胆管组中FXR和Lep的表达,比较各组中两者表达的差异性。结果 FXR和Lep在胆管癌组、癌旁胆管组和手术边缘正常胆管组中均有表达。FXR在癌旁无瘤切缘和正常胆管组织中的表达显著高于癌组织（P〈0.05）,Lep在癌旁无瘤切缘和正常胆管组织中的表达显著低于癌组织（P〈0.05）,而二者在癌旁无瘤切缘与正常胆管组织中表达均无显著差异（P〉0.05）。FXR和Lep具有相关性,相关系数为r=0.627 7（P〈0.05）。结论 FXR与Lep可能通过调节脂质代谢平衡及免疫应答等机制,共同参与胆管癌的发生和发展。     

Fibroblast growth factor 21 as a possible endogenous factor inhibits apoptosis in cardiac endothelial cells

Background Fibroblast growth factor 21 (FGF21) is a new member of FGF super family that is an important endogenous regulator for systemic glucose and lipid metabolism. This study aimed to explore whether FGF21 reduces atherosclerotic injury and prevents endothelial dysfunction as an independent protection factor.Methods The present study was designed to investigate the changes of FGF21 levels induced by oxidized-low density lipoprotein (ox-LDL), and the changes of apoptosis affected by regulating FGF21 expression. The FGF21 mRNA levels of cultured cardiac microvascular endothelial cells (CMECs) were determined by real time-PCR and the protein concentration in culture media was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. We analyzed the different expression levels of untreated controls and CMFCs incubated with ox-LDL, and the changes of CMECs apoptosis initiated by the enhancement or suppression of FGF21 levels.Results The secretion levels of FGF21 mRNA and protein were significantly upregulated in CMECs incubated with ox-LDL. Furthermore, FGF21 levels increased by 200 μmol/L bezafibrate could reduce CMECs apoptosis, and inhibit FGF21 expression by shRNA induced apoptosis (P ＜0.05).Conclusions FGF21 may be a signal of injured target tissue, and may play physiological roles in improving the endothelial function at an early stage of atherosclerosis and in stopping the development of coronary heart disease.     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外培养软骨细胞中的表达

目的 探讨软骨细胞在体外传代培养过程中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR)表达的变化趋势,以及它对软骨细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法 采用猪耳软骨细胞在体外进行扩增传代,收集第1～6代的细胞样品行RT-PCR和Western blotting检测,从mRNA和蛋白水平来反映bFGF和FGFRs的表达。另取第1～6代软骨细胞,以含10ng／mL bFGF的培养液进行培养,比较其与空白对照组细胞在增殖速率和ECM合成等方面的差异。结果 bFGF、FGFR1和FGFR2在第1～3代软骨细胞中表达减少的趋势较为平缓;第4、5代时,有大幅的向下跃迁;在第6代时仅微量表达或消失。这一现象与体外培养软骨细胞增殖速率的下降相平行,第4代及以后代次细胞对bFGF刺激无反应。结论 bFGF和FGFRs表达的减弱与软骨细胞在体外培养过程中的老化进展可能有密切的关系。     

成纤维细胞生长因子受体2在中毒性耳聋小鼠耳蜗的定位表达研究

目的观察成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）,在中毒性耳聋小鼠（C57）耳蜗中的定位和表达度其FGFR2表达,降低成年小鼠的听功能情况。方法原位杂交检测FGFR2的表达,听性脑干请发电位检测听功能。结果FGFR2在成年小鼠耳蜗的螺旋神经节中表达;无干预措施下,FGFR2功能降低小鼠的听功能度表达与野生型小鼠相比较无明显差异;注射庆大霉素后,两组小鼠中FGFR2的表达增强。结论FGFR2与bFGF共同作用于耳蜗,二者联合对庆大霉素有一定的对抗作用。