β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在树突状细胞中的表达及作用

目的：观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ（β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ）在人外周血来源的树突状细胞（Dendritic cells,DCs）中的表达与定位,研究其对DCs免疫功能的影响。方法：人外周血单核细胞经GM-CSF＋IL-4＋TNF-α诱导培养分化为DCs,采用RT-PCR、流式细胞术和激光共聚焦技术观察DCs中β-1,4-GalT-Ⅰ的表达与定位;通过细胞粘附试验分析β-1,4-GalT-Ⅰ表达与细胞粘附能力的关系。用α-乳清蛋白（α-lactalbumin,LA）作为细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ抑制剂,研究β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs细胞粘附以及与CD4＋Th细胞形成免疫突触过程中的作用。结果：在人外周血来源DCs细胞表面和细胞浆内可表达长型和短型β-1,4-GalT-Ⅰ;长型β-1,4-GalT-Ⅰ或细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ的表达水平与细胞粘附能力呈正相关;α-LA既可抑制DCs对层粘连蛋白的粘附,又可抑制DCs与CD4＋Th形成免疫突触。结论：β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs中表达,他们作为粘附分子参与细胞粘附和免疫突触形成。     

β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达质粒在许旺细胞中的转染与鉴定

目的构建β1,4-半乳糖基转移酶-I(β1,4-galactosyltransferase I, β-1,4-GalT-I)表达质粒,并将其转染到许旺细胞中,为探讨周围神经许旺细胞表达β-1,4-GalT-I的生物学意义提供研究基础.方法构建β-1,4-GalT-I表达质粒,并将其转染到分离培养的许旺细胞中;用特异识别β1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素-I(Ricinus Communis Agglutinin-I, RCA-I)免疫组织化学方法和Northern Blot鉴定转染情况.结果通过酶切鉴定和测序分析,实验成功构建β-1,4-GalT-I表达质粒.将构建的表达质粒转染到许旺细胞中,经鉴定表明,转染的表达质粒在许旺细胞中能表达β-1,4-GalT-I,并随转染浓度增高而表达增加.结论β-1,4-GalT-I在许旺细胞中的转染和表达,对分析许旺细胞表达β-1,4-GalT-I的意义如对其自身增殖的影响和对神经元生长作用,提供了研究基础.     

Schwann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1,4半乳糖基转移酶-1(β-1,4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响,本实验首先构建了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒,然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞,最后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养;根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积,分析Schwann细胞中不同β-1,4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现:转染正义β-1,4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强,而转染反义β-1,4-GalT-I却有相反的作用。提示周围神经Schwann细胞中表达β-1,4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化

为了观察β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase-I,β-1,4-GalT-I)在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化,本研究采用RT-PCR方法,从小鼠坐骨神经中特异性地扩增β-1,4-GalT-I cDNA片段并将其克隆到pGEM-T载体。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针。通过原位杂交和图像分析的方法,观察β-1,4-GalT-I mRNA在正常和夹伤大鼠坐骨神经中的表达及其变化。结果表明:β-1,4-GalT-I mRNA在大鼠坐骨神经的髓鞘中表达,在夹伤坐骨神经后1~2d,β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经的表达最高,于夹伤后1周开始下降,在夹伤后1个月恢复至正常水平。上述结果提示坐骨神经夹伤后β-1,4-GalT-I mRNA的表达发生变化,并且主要表达在坐骨神经的Schwann细胞。本研究结果为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定了基础。     

地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ RNA 探针的制备和应用

为了制备小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶I(β-1,4-galactosyltransferase 1,β-1,4-GalT-1)地高辛标记的RNA探针以探讨β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经组织的表达定位,本研究用提取的小鼠脑总RNA,采用RT-PCR方法,得到β-1,4-GalT-I的DNA片断,将其克隆到pGEM-T载体;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度;最后应用该探针,通过原位杂交的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在小鼠坐骨神经的表达.结果:构建了β-1,4-GalT-I/pGEM-T质粒,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针,应用该探针发现β-1,4-GalT-J在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达.以上结果表明,制备的地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-GalT-1 mRNA在组织中的表达.本研究为进一步分析β-1,4-GalT-I在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础.     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ在CD4+TH细胞中的表达及对其黏附能力的影响

目的研究β-1，4-半乳糖基转移酶I（β-1，4-galactosyltransferase I，β-1，4-GalT I）在CD4^＋TH中的表达与定位以及β-1，4-GalT I对CD4^＋ TH细胞黏附能力的影响。方法采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化CD4^＋ TH细胞，通过RT-PCR、荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定CD4^＋ TH细胞中β-1，4-GaIT I的表达与定位；分别用rhIL-2、rhIL-12、rhIL-4等细胞因子组合诱导CD4^＋ TH细胞活化分化，通过半定量RT-PCR、FCM检测CD4^＋ TH细胞中β-1，4-GaIT I的表达变化，运用层黏连蛋白结合实验比较CD4^＋ TH细胞黏附能力的改变；用α-乳清蛋白干扰CD4^＋ TH细胞表面β-1，4-GaIT I的活性及底物特异性，用层黏连蛋白结合实验分析其对CD4^＋ TH细胞黏附能力的影响。结果CD4^＋ TH细胞表面和细胞浆内表达长型和短型β-1，4-GalT I；rhIL-2活化的CD4^＋ TH细胞长型β-1，4-GaIT I mRNA水平及细胞膜表面β-1，4-GaIT I表达水平、细胞黏附能力均高于未经活化的CD4^＋ TH细胞，rhIL-2＋rhIL-12诱导培养的CD4^＋ TH细胞增强更明显；CD4^＋ TH细胞长型β-1，4-GaIT I mRNA水平及细胞膜表面β-1，4-GaIT I表达水平均与CD4^＋ TH细胞黏附能力呈正相关；α-乳清蛋白干扰后CD4^＋ TH细胞黏附能力降低。结论β-1，4-GalT I在CD4^＋ TH细胞中表达，且与细胞黏附能力密切相关，提示β-1，4-GalT I可能在CD4^＋ TH细胞的黏附过程中发挥重要作用。     

LAT介导GPI锚固蛋白CD59对Jurkat细胞的生物学效应研究

目的探讨在T系急性白血病的Jurkat细胞中,GPI类锚固蛋白CD59通过LAT介导的细胞增殖、活化、凋亡等相关的生物学效应,研究GPI锚固类膜蛋白分子对细胞调控的作用方式。方法分别构建LAT-EGFP、neg-EGFP融合蛋白慢病毒载体,转染Jurkat细胞,建立稳定表达株(LAT-EGFP作为实验组,neg-EGFP转染空病毒组作为对照组)。利用CD59单克隆抗体刺激实验组及对照组细胞后,通过CCK-8检测细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测细胞凋亡状况,并通过激光共聚焦显微镜观察LAT与CD59分子在细胞中的定位表达。最后利用免疫印迹技术检测细胞内相关信号转导蛋白的表达情况。结果 CD59单抗交联刺激后,细胞增殖活性增加。实验组细胞出现明显晚期凋亡甚至坏死现象。而免疫荧光显示LAT-EGFP组细胞中LAT分子高亮聚集于脂筏区,相较于对照组细胞呈现明显的戒指环状。Western blot显示,CD59抗体交联后,ZAP70、Fyn、LCK的表达均下降且LATEGFP组蛋白表达量低于对照组。结论 GPI锚固蛋白CD59通过T细胞活化连接蛋白LAT对T细胞信号转导发挥正向调控作用,转染LAT-EGFP的Jurkat细胞处于活化状态,LAT呈戒指环状定位于脂筏。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肺成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路活化的调节作用.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞.激光扫描共聚焦显微镜观察phospho-JNK在细胞内定位与分布.免疫印迹法检测JNK/phospho-JNK蛋白的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜显示,与对照组比较,TGF-β1刺激后,胞质中phospho-JNK荧光强度变弱,而核浆比值明显增加.经AcSDKP干预作用后,胞质中phospho-JNK的荧光强度较TGF-β1刺激组增强,核浆比值明显减小.免疫印迹法显示,与对照组比较,TGF-β1刺激组phospho-JNK表达明显增加;而AcSDKP干预作用后,phospho-JNK蛋白表达较TGF-β1刺激组明显减少.结论: AcSDKP能阻断TGF-β1介导的肺成纤维细胞JNK通路的活化作用.     

集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白（agrin）是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达，并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系；用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响；应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达，且经过实时定量PCR分析发现，集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关；当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制；经共聚焦显微镜观察发现，集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在，且和CD3分子共定位，抗集聚蛋白抗体町以明显减少这种帽化结构的形成。结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞，呵能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。     

脂筏微域内CD59趋引CBP蛋白介导T细胞下游信号的转导研究

目的探讨Cbp(Csk-binding protein)在Jurkat细胞中的过表达对其生物学功能的作用以及GPI锚定蛋白CD59通过Cbp对细胞的效应机制。方法构建Cbp-EGFP慢病毒载体,转染建立稳定的过表达Cbp-EGFP的Jurkat细胞株。采用免疫荧光技术,通过共聚焦显微镜观察CD59、Cbp的表达及定位关系;检测CD59抗体刺激前后细胞的增殖效率及细胞凋亡情况;Western blot检测Jurkat细胞中信号转导通路相关蛋白分子的变化。结果共聚焦显微镜下可见CD59、Cbp定位于胞膜上,在抗体刺激后,Cbp组与对照组均出现明显的荧光高亮聚集现象。转染Cbp-EGFP后细胞增殖速率明显降低(P0.05),而中晚期凋亡现象显著高于阴性对照组(P0.05)。CD59单抗作用前后相比,酪氨酸激酶蛋白(Fyn、Lck、ZAP-70)的表达量均有所下降,而Csk的表达量增加。结论 Cbp过表达能有效抑制Jurkat细胞的增殖,GPI锚固蛋白CD59可通过Cbp分子调控细胞信号转导通路中重要蛋白酪氨酸激酶的表达,进而影响Jurkat细胞的生物学活性。     

嵌合γδ TCR结构域的αβ TCR分子的同源建模及真核表达

目的设计并构建嵌合γδTCR类免疫球蛋白(Ig)结构域的αβTCR分子,并在Jurkat T细胞中观察其表达。方法通过生物信息学分析确定TCR△Ig分子的融合位点;应用同源建模模拟嵌合TCRα和TCRβ蛋白的三维结构,并应用组合扩展方法(CE)对TCR△Ig分子与野生型TCR分子的蛋白骨架以及抗原识别活性部位进行空间结构比对和分析。采用重叠PCR法分别在TCRα△Ig和TCRβ△Ig的末端融合增强型青色荧光蛋白(ECFP)和增强型黄色荧光蛋白(EYFP),并分别克隆入质粒p IRES2-EGFP内部核糖体进入位点(IRES)的上下游。最后将重组表达质粒p IRES-TCRβ△Ig-EYFP/TCRα△Ig-ECFP转染Jurkat T细胞,共聚焦显微镜扫描分析该嵌合TCR分子的表达。结果 TCRα△Ig和TCRβ△Ig的同源建模及三维结构比对结果显示,相比于野生型TCR,该嵌合TCR的可变区(V)结构无改变并且抗原识别活性中心结构保持稳定。重组表达质粒经PCR鉴定及测序分析证明载体构建成功;并且共聚焦显微镜扫描结果显示嵌合TCR分子能定位于T细胞膜表面并正常表达。结论该嵌合TCR分子设计合理,能在Jurkat T细胞表面正常表达。     

人CD4~+T淋巴细胞活化相关miRNA的筛选及其靶分子鉴定

目的:筛选与CD4~+ T淋巴细胞活化相关的miRNA,确定其靶分子.方法:用抗CD3的单免隆抗体(mAb)和抗CD28的mAb诱导Jurkat细胞活化,利用miRNA芯片检测并筛选出活化前后表达丰度有显著变化的microRNA,用定量RT-PCR证实筛选出的miRNA在Jurkat细胞活化的差异表达.设计引物构建miRNA的表达载体.利用牛物信息学软件预测miRNA的靶分子,将靶分子mRNA的3'UTR克隆入pGL3Luciferase报告基因载体中.观察转染的miRNA对报告基因表达的影响.结果:流式细胞术(FCM)证实了抗CD3的mAb和抗CD28的mAb可以诱导Jurkat细胞的活化.经miRNA芯片检测表明,Jurkat细胞活化前后有5种miRNA表达水平明显下降,定量RT-PCR证实了miRNA芯片的结果.成功构建了部分预测靶分子的荧光素酶报告基因载体.双荧光素酶报告系统检测了miR-181c对靶分子的干扰作用.结论:miR181c与人CD4~+ T淋巴细胞的活化有着密切的关系,CD69可能足miR-181c的一个靶分子.     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究

为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1,4-Gal T- 和 在其中表达的亚细胞结构定位。发现 ,β-1,4-Gal T- 和 主要表达在这两种细胞的细胞核旁的 Golgi复合体 ,说明它们主要分布在 Golgi复合体上。提示它们可能是在 Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰     

β-1,4-半乳糖苷键在周围神经损伤后的表达变化

为了探讨正常和损伤的周围神经中β-1,4-半乳糖苷键的表达定位和表达变化 ,本研究用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素 -I免疫组织化学方法结合 S-10 0和 neurofilam ent免疫双标记 ,研究了大鼠坐骨神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的合成影响。结果表明 ,β-1,4-半乳糖苷键主要分布在正常和损伤坐骨神经的 Schwann细胞中 ,图像分析表明β-1,4-半乳糖苷键的表达在周围神经损伤后 1～ 2 d内有所增高 ,以后随时间延长表达量逐步下降。本研究结果提示 ,周围神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的表达有影响 ,Schwann细胞表达的β-1,4-半乳糖苷键可能参与周围神经损伤修复相关因子的修饰调控     

超抗原对NK细胞亚群凋亡诱导配体表达与功能的调节

目的 研究凋亡诱导配体分子在超抗原活化NK细胞CD56^bright出亚群和CD56^dim亚群上的表达规律和功能。方法以超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A/B（SEA/B）活化PBMC为模型,应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察不同活化模型中凋亡诱导配体分子在NK细胞CD56^bright和CD56^dim亚群表达的变化;采用^51Cr释放实验及抗体阻断实验,观察NK细胞亚群的功能与凋亡诱导配体分子表达的关系;利用激光共聚焦显微镜,观察凋亡诱导配体分子在NK细胞杀伤相的分布。结果当超抗原浓度为0．1μg／mL时,TRAIL和TNF在NK细胞上的表达率及NK细胞杀伤活性于培养第2天时达到高峰,FasL在NK细胞上表达未见明显变化。TRAIL和TNF分子聚集于NK细胞与靶细胞的接触部位,FasL分布未见明显变化。结论超抗原SEA和SEB促进TRAIL和TNF在CD56^dim亚群表达,TRAIL和TNF可能参与NK细胞免疫突触的形成。     

脂氧素对Jurkat T细胞增殖和白细胞介素-2/白细胞介素-2受体表达的影响

目的：研究脂氧素对Jurkat T细胞增殖和白细胞介素-2表达的影响。方法:体外培养Jurkat T细胞，anti-CD3（2 mg/L）和anti-CD28（2 mg/L）单抗刺激Jurkat细胞活化，加入不同浓度脂氧素（0.1 nmol/L-100 nmol/L）共同孵育24h后，加入［3H］-TdR继续孵育6 h，液闪仪测放射性活度；或收集培养上清，ELISA测IL-2水平，收集细胞，流式细胞仪检测细胞表面IL-2受体α亚单位CD25表达，PI染色后经流式细胞仪进行细胞周期分析。结果:脂氧素剂量依赖性抑制anti-CD3和anti-CD28活化的Jurkat T细胞增殖（P<0.05）；细胞周期分析发现脂氧素处理组S期细胞比例减少；脂氧素显著降低培养上清中IL-2 含量（P<0.05）但对CD25表达无明显影响（P>0.05）。结论:脂氧素能抑制活化Jurkat T细胞增殖和白细胞介素-2表达；脂氧素可通过影响T淋巴细胞的活化增殖进而发挥免疫负性调节作用。     

CD59-CD2对T细胞信号转导的作用

目的将构建的CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体在Jurkat细胞中稳定表达,研究CD59与CD2分子在T细胞信号转导中的相互作用,探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。方法酶切鉴定构建的pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体,脂质体法转染Jurkat细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,免疫酶法检测转染细胞表面CD59的表达,Western blot检测转染细胞中CD59蛋白的表达;用CD59单克隆抗体作用于各组Jurkat细胞,使用激光共聚焦显微镜检测细胞浆内的Ca2+,ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化,比较各组差异。结果经酶切鉴定证实携带CD59-linker-CD2融合基因的重组质粒扩增成功;免疫酶法和Western blot证实CD59在转染细胞中稳定表达,且转染组L-Jurkat细胞比正常组Ju-rkat细胞CD59表达量增加,二者比较其差别有统计学意义(P<0.05);与正常细胞相比,胞浆内Ca2+和IL-2在转染细胞中均高表达,两组细胞比较其差别有统计学意义(P<0.05)。结论 pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体可在Jurkat细胞中稳定表达,CD59mAb交联刺激后,CD59可通过CD2向细胞内传递信号,引起细胞内信号分子的一系列变化,为研究CD59与CD2在T细胞信号转导中的协同作用及进一步探讨CD59向T细胞内传递信号的机制奠定基础。     

4-1BBL介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用

目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖；PI／Annexin V双染法分析T细胞的凋亡；ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平；流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡，同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和INN-7及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中，活化T细胞表达的4-1BBL分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子，进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。     

共刺激信号分子表达异常与自身免疫性疾病的关系

目的 分析类风湿性关节炎（RA）和系统性红斑狼疮（SLE）细胞免疫异常中共刺激活化信号途径的异同点,探讨细胞活化的共刺激信号途径对于RA和SLE发病的意义。方法 采用流式细胞术分析SLE和RA患者T细胞表面共刺激分子CD28、CD152／CTLA-4、CD154／CD40L和ICOS表达情况。结果 ①RA患者CD4^＋T细胞比例明显增加,SLE患者以CD8^＋T细胞增加显著。②SLE患者CD4^＋和CD8^＋T细胞上CD28和CD152的表达增加;RA患者T细胞亚群上CD28分子的表达减少,CD152分子的表达增加。③RA患者CD4^＋T细胞上CD154分子表达增加,CD8^＋T细胞上CD154分子表达减少,T细胞亚群上可诱导共刺激分子（ICOS）的表达无明显变化;SLE患者CD4^＋和CD8^＋T细胞上CD1254或ICOS分子的表达均减少。结论 RA和SLE患者机体的免疫异常中存在着明显的分子信号途径差异。     

CD59锚定蛋白对CD3介导Jurkat细胞活化信号转导中的增强效应

目的用前期构建好的CD59pSUPER-RNAi质粒转染Jurkat细胞,探讨CD59特异性沉默前后CD59对CD3介导Jurkat细胞活化信号转导的相关作用。方法采用Lipofectamine2000转染Jurkat细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞系,利用RT-PCR检测转染后CD59在基因水平的表达抑制效果。实验分为未转染的Jurkat细胞组(A组),转染空质粒pSUPER组(B组)和转染CD59pSUPER-RNAi质粒的Jurkat细胞组(C组),用噻唑蓝(MTT)比色法,Western blot技术和激光共聚焦扫描显微镜分别检测交联CD59单抗与固相化CD3单抗联合作用对3组Jurkat细胞的增殖效应,ZAP-70酪氨酸磷酸化的水平及细胞浆内钙离子的变化。结果重组载体转染后,经G418筛选得到稳定转染细胞系,RT-PCR结果表明转染CD59pSUPER-RNAi质粒的Jurkat细胞组CD59分子的表达受到抑制。转染干扰质粒Jurkat细胞组CD59与CD3联合作用后细胞增殖能力,ZAP-70酪氨酸磷酸化水平及钙离子浓度均明显低于未转染组和转染空质粒组(P<0.05);但未转染组和转染空质粒组之间无差异。结论 CD59对CD3介导T细胞活化信号转导有增强效应。