协同刺激分子B7-H3在重症肌无力患者外周血中的表达

目的:检测重症肌无力(MG)患者外周血中协同刺激分子B7-H3的表达,并探讨其临床意义。方法:收集35例MG患者和44例健康对照(HC)外周血标本,采用免疫荧光标记,流式细胞检测外周血单个核细胞模型B7-H3(mB7-H3)的表达,ELISA法检测MG和HC血浆中可溶性B7-H3(sB7-H3)的含量。结果:MG患者外周血T淋巴细胞、单核细胞和B淋巴细胞上mB7-H3低水平表达,与HC无差异;MG患者外周血sB7-H3浓度为(2.166±0.958)ng/mL,显著低于HC(3.379±0.768)ng/mL;全身型MG(GMG)sB7-H3的浓度为(1.664±0.699)ng/mL,低于眼肌型MG(OMG)(2.396±0.985)ng/mL;并发胸腺异常的MG sB7-H3浓度为(1.593±0.441)ng/mL,低于胸腺正常MG(2.364±1.014)ng/mL;MGsB7-H3含量与QMGS评分呈负相关(r=-0.4189,P=0.012);免疫细胞mB7-H3与血浆sB7-H3无相关性。结论:MG患者sB7-H3表达下调,与疾病严重程度相关;在不同病理类型MG患者体内存在差异性表达,提示该分子可能参与了MG的免疫病理进程。     

协同刺激分子B7-H3在脊椎动物中的分布及其演化

目的:探讨B7-H3分子2种异构体在不同物种中的分布及其演化模式以辅助研究B7-H3分子的生物学功能。方法:通过生物信息学方法从各类数据库中搜索脊椎动物各物种的B7-H3分子序列,分析其结构域的数量及剪切形式预测异构体的分布;获取代表性物种的组织抽提RNA,PCR验证预测结果;计算各物种B7-H3分子中V1C1和V2C2的dN和dS比。结果:获取了38个物种的B7-H3序列,其中豚鼠、家犬、非洲象、牛、熊猫、蝙蝠及高级灵长类动物如黑猩猩、大猩猩、猴等物种中存在2种剪切体;RT-PCR方法证实了2种剪切体的表达。各物种V1C1与V2C2序列的非同义突变(dN)大于同义突变(dS)值。结论:B7-H3分子最早以2IgB7-H3形式存在于硬骨鱼动物中,在高级哺乳动物中出现了2种异构体;且在自然界压力选择下发生了净化选择,并未产生新的生物学功能。     

CD40配基化调节小鼠树突状细胞上B7-H3分子表达的研究

目的 探讨CD40配基化对小鼠骨髓来源树突状细胞上B7-H3分子表达的调节作用及其生物学意义。方法 采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DC，并利用mCD40-CHO和TNF-α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载的Dc制备成熟DC；采用间接免疫荧光标记法检测成熟Dc上B7-H3分子的表达；RT-PCR检测B7-H3 mRNA转录水平；混合淋巴细胞反应（MLR）和B7-H3单抗阻断实验分析CD40配基化的DC表面B7-H3分子在T细胞活化中的作用；^3H-TdR掺入试验检测DC对T淋巴细胞的促增殖效应；ELISA测定各组MLR反应和DC培养上清中IFN-γ分泌水平。结果 B7-H3分子在DC不同分化发育阶段均有表达，CD40配基化能显著上调凋亡肿瘤细胞负载的DC中B7-H3表达，TNF-α激发的DC弱表达（P〈0．05）；阻断CD40配基化的DC上B7-H3分子能抑制T细胞增殖和IFN-γ分泌；CD40配基化促进凋亡肿瘤细胞负载的DC分泌IFN-γ量也明显高于TNF-α组（P〈0．05）。结论 体外CD0配基化DC的B7-H3分子上调性表达有助于其刺激T细胞增殖和IFN-γ的产生。     

协同刺激分子B7-H6在卵巢癌中的表达及其临床意义

探讨协同刺激分子B7-H6在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。采用免疫组织化学法检测112例卵巢癌组织芯点中B7-H6的表达情况,同时选取10例卵巢良性肿瘤组织作为对照,采用χ2检验分析B7-H6表达水平与患者临床病理参数的相关性,Log-rank检验比较B7-H6不同表达水平与患者预后的关系。结果显示:B7-H6主要表达于卵巢恶性肿瘤细胞的胞膜及胞质,染色呈弥漫性棕黄色颗粒状。B7-H6在卵巢癌组织中的阳性表达率为69.1%(76/110),远处转移的肿瘤患者B7-H6高表达率显著高于未转移的肿瘤患者(χ2=4.807,P=0.028),FIGO III-IV期患者B7-H6表达水平显著高于I-II期患者(χ2=4.671,P=0.031),且B7-H6高表达的患者术后总生存率显著低于B7-H6低表达的患者(χ2=3.995,P=0.0456),但B7-H6表达水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理分级以及淋巴结转移比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究结果表明协同刺激分子B7-H6在卵巢癌组织中高表达,其表达水平与患者肿瘤远处转移、FIGO分期及预后密切相关,提示B7-H6可能参与了卵巢恶性肿瘤的发生和发展,其对卵巢癌的临床诊断及预后判断具有潜在价值。     

协同刺激分子B7-H2对致敏小鼠气道炎症的作用

淋巴细胞的激活对过敏性哮喘气道炎症的形成至关重要。T淋巴细胞的激活除了依赖识别信号外,还依赖于抗原呈递细胞(APC)表面的协同刺激分子与T淋巴细胞表面的受体结合产生的协同刺激信号。1999年Hutloff等发现了诱导性协同刺激因子(induciblecostimulator,ICOS) ,不久B7同源蛋白2(B7homolog2 ,B7 H2 )被认定为ICOS的配体〔1,2〕。本文旨在探讨ICOS/B7 H2协同刺激信号对小鼠气道炎症的影响。材料和方法哮喘模型的建立:6～8周龄雌性BALB/c小鼠(中国医科大学实验动物中心)于第1天、第14天腹腔注射0 .1ml以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解的…     

实验性自身免疫性脑脊髓炎中B7-H1分子在脾脏和中枢神经系统淋巴细胞上的表达变化

[目的]观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病高峰期淋巴细胞表面B7-H1分子的表达变化,探讨B7-H1在EAE发病和病情进展中的作用.[方法]以MOG35-55诱导雌性C58BL/6小鼠制备EAE动物模型,并对其行为学变化进行记录与评分.分别于发病前和发病高峰期处死小鼠,分离脾脏与中枢神经系统中的淋巴细胞,用流式细胞术分析淋巴细胞表面B7-H1分子的表达差异.[结果]与发病前相比,EAE发病高峰期脾脏分离的淋巴细胞中B7-H1阳性细胞率由(35.1±2.46)％下降至(18.9±2.06)％(P＜0.01),其中CD4+T细胞中B7-H1阳性细胞由发病前的(6.4±1.25)％下降至发病后的(2.3±1.04)％(P＜0.05).中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有8.7％为B7-H1阳性细胞.[结论]在EAE发病过程中,B7-H1分子在外周淋巴细胞的阳性细胞数下降,而中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有一定比例的B7-H1阳性细胞,提示B7-H1可能在EAE发病过程中发挥重要作用.     

小胶质细胞表达B7-H1及LPS刺激对其表达影响的研究

目的 了解共刺激分子B7-H1在小鼠中枢神经系统小胶质细胞上的表达,及LPS刺激后的表达变化情况,探讨小胶质细胞在大脑炎症状态下的免疫功能变化。方法利用小鼠小胶质细胞株N9,以LPS刺激其活化,应用RT-PCR、定量PCR、流式细胞术、免疫组化检测B7-H1在刺激前后的表达变化规律;分离培养小鼠原代小胶质细胞并进行GSA-IB4染色鉴定。应用免疫组化检测原代小胶质细胞在LPS刺激前后的表达变化。结果①小鼠小胶质细胞株N9在未刺激状态下表达B7-H1的mRNA和蛋白分子;LPS刺激细胞活化后释放肿瘤坏死因子α,一氧化氮增加,同时B7-H1的mRNA和蛋白表达水平增加。②分离培养的小鼠原代小胶质细胞经GSA-IB4染色鉴定纯度在95％以上,免疫组化显示原代小胶质细胞组成性表达B7-H1,LPS刺激后表达明显上调。结论小鼠小胶质细胞株N9小胶质细胞组成性表达共刺激分子B7-H1,LPS刺激后表达上调,提示其参与了中枢神经系统免疫应答的调节。     

可溶性和膜型B7-H3在类风湿关节炎患者外周血中的表达及临床意义

本实验通过检测类风湿关节炎(RA)患者外周血中可溶性B7-H3(sB7-H3)和膜型B7-H3(mB7-H3)的表达及异构体的分布,探讨该分子的异常表达在RA发病中的临床意义。通过收集RA早期患者和健康对照外周血,ELISA方法检测血清中sB7-H3的表达,统计学分析sB7-H3的表达与临床的相关性;同时分离RA患者和健康对照外周血单个核细胞(periph-eral blood mononuclear cells,PBMC),通过流式细胞术检测CD14+的单核细胞膜型B7-H3的变化;通过PCR检测外周血mRNA水平B7-H3两种异构体的表达。结果显示RA患者血清中的sB7-H3分子明显低于健康对照组,RA活动期患者sB7-H3明显低于缓解期患者,并与RA患者肿胀关节数呈负相关;RA患者外周血单核细胞上mB7-H3的表达明显高于健康对照者,RA患者PBMC在mRNA水平B7-H3明显高于健康对照者,主要表达形式为4IgB7-H3。本研究发现膜型和可溶性B7-H3在类风湿性关节炎外周血中异常表达,其可能参与了RA自身免疫性病理的调节。     

原发性肝癌组织中B7-H3表达与浸润的CD8^+ T细胞数负相关北大核心CSCD

目的探讨原发性肝癌组织中B7-H3的表达与CD8+T细胞浸润之间的关系。方法采用免疫组织化学技术分析原发性肝癌组织和正常肝组织中B7-H3的表达、CD8+T细胞的浸润数量,对B7-H3的表达与CD8+T细胞浸润数量的相关性进行统计学分析。结果 63例肝癌患者中B7-H3高表达26例(41.3%),低表达37例(58.7%),总阳性率为90.5%,其中正常肝组织基本不表达B7-H3。B7-H3高表达组CD8+T细胞浸润数量明显低于B7-H3低表达组,CD8+T细胞浸润数量与肝癌组织中B7-H3的表达呈负相关。肝癌组织中B7-H3的表达和CD8+T细胞数量在肝癌患者的临床病理分期、是否有局部淋巴结转移以及远隔器官转移等方面具有显著性差异。结论原发性肝癌组织中高表达B7-H3,与肿瘤组织中CD8+T细胞浸润呈负相关。     

B7-H3：一种新的共刺激分子

B7-H3是B7家族的最新成员，B7-H3 mRNA广泛存在于非淋巴组织，其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达，且此受体不同于CTLA-4、ICOS和PD-1。在抗人CD3单克隆抗体存在的情况下，B7-H3可增加CD4^ 和CD8^ 细胞的生成，且是剂量依赖性的，并可选择性的增加IFN-γ的生成，参与T、B细胞的活化和机体免疫，在肿瘤治疗、器官移植和自身免疫病的治疗方面具有重要的作用。     

B7-H6 expression in non-small cell lung cancers

B7 family has been known to be a negative regulator of immunity response in patients with lung cancer. B7-H6 as a novel identified member of B7 family is found to trigger natural killer (NK) cell cytotoxicity and cytokine secretion by binding natural cytotoxicity receptor NKp30. Up until now, no investigations have been made about B7-H6 expression in lung cancer. We present the result of the B7-H6 prognostic value in 65 non-small cell lung cancer (NSCLC) tissues and 65 matched adjacent non-tumor tissues by Immunohistochemistry (IHC). Meanwhile, fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis was used to detect B7-H6 receptor NKp30 expression in 7 non-small cell lung cancer tissues and 7 adjacent non-tumor tissues. Here, the result showed B7-H6 immunoreactivity in 6/65 (9.23%) lung cancer patients and 4/65 (6.15%) in adjacent non-tumor tissues. No relationship was found between B7-H6 expression and clinic pathological features. Similarly, no relevance was found for NKp30 expression in lung cancer tissues and non-tumor tissues. However, B7-H6 positive carcinomas were significantly correlated with degree of differentiation (P = 0.044). Three year survival rate after operation did not show the prognostic value for B7-H6 expression. Our study suggests that B7-H6 has a limited value as a prognostic marker in the patients of lung cancer.     

B7-H3在类风湿关节炎患者滑膜组织内的表达及分布研究

探讨B7家族共刺激分子B7-H3在类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织内的表达及分布。方法:使用免疫组化法检测RA患者滑膜组织B7-H3的表达,并使用免疫荧光法检测B7-H3在细胞中的定位及分布。结果:免疫组化结果证实,RA患者滑膜组织中有大量的B7-H3阳性细胞,形态观察提示这些阳性的细胞主要为毛细血管细胞、滑膜细胞、局部淋巴结处的T细胞及巨噬细胞;免疫荧光分析进一步表明这些B7-H3+细胞主要为CD68+巨噬细胞,CD31+内皮细胞及CK-18+上皮细胞。此外,对比其他B7家族共刺激分子在滑膜组织中的分布,免疫荧光发现B7-H3共表达于B7-DC+及HVEM+血管,但不表达于B7-H1+及B7-H4+细胞。类风湿关节炎滑膜组织内有大量B7-H3阳性细胞,提示B7-H3有可能参与并调节关节炎的病理进程。     

B7-H3 in combination with regulatory T cell is associated with tumor progression in primary human non-small cell lung cancer

B7-H3 belongs to the co-inhibitory B7 family and plays an important role in the adaptive immune response in regulating T cells. In human malignancies, B7-H3 is reported to be involved in tumor immune evasion. However, the detailed molecular mechanism of B7-H3 in tumor evasion remains unclear, particularly in non-small cell lung cancer (NSCLC). Regulatory T cells (Tregs) are known as a key player in the inhibition of immune mechanisms. The study demonstrated the correlation between B7-H3 on tumor cells and the number of Tregs in the tumor microenvironment in NSCLC. B7-H3 was examined in tumor tissues from 110 patients with NSCLC by immunohistochemical analysis. Forkhead box P3+ (FOXP3+) Tregs in those spencimens were also detected and numbered. Survival curves were drawn using the Kaplan-Meier method and compared by the log-rank test. High B7-H3 expression in tumor cells significantly correlated with male gender, squamous NSCLC, advanced stage and shorter overall survival (OS) (P = 0.035, P = 0.004, P = 0.037, P = 0.014, respectively). Meanwhile, FOXP3 expression in tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) was associated with male gender, regional lymph node involvement, advanced stage and worse OS (P = 0.009, P = 0.015, P = 0.014, P = 0.034, respectively). Significant correlation was identified between the expression of B7-H3 and the number of FOXP3+ TILs (P = 0.013). Patients with B7-H3 high/FOXP3 high had poorer OS (P = 0.006), suggesting that B7-H3 and Tregs may play a cooperatively role in tumor immune evasion, leading to poor outcomes for NSCLC patients.     

卵巢上皮-间质肿瘤中B7-H3、B7-H4的表达及临床病理意义

目的探讨B7-H3、B7-H4在卵巢上皮-间质肿瘤中的表达及其临床病理意义。方法用RT-PCR技术及免疫组化PV9000两步法研究86例卵巢恶性上皮-间质肿瘤(恶性组),40例卵巢交界性上皮-间质肿瘤(交界组)和40例卵巢良性上皮-间质肿瘤(良性组)B7-H3与B7-H4mRNA及蛋白表达情况,并结合临床病理参数进行分析。结果 B7-H3、B7-H4mRNA在3组卵巢肿瘤组织中均有表达,且各自的3组卵巢肿瘤组织的mRNA光密度值差异均有统计学意义(P<0.05);B7-H3与B7-H4蛋白在恶性组中均呈细胞质和(或)细胞膜表达,其中B7-H3阳性率为81.4%(70/86),明显高于交界组22.5%(9/40)和良性组5.0%(2/40)的表达,差异有统计学意义(P<0.05);B7-H4阳性率为77.9%(67/86),明显高于交界组35.0%(14/40)和良性组5.0%(2/40)的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。恶性组的卵巢癌组织中B7-H3蛋白在非黏液性卵巢癌中较黏液性卵巢癌高表达,差异有显著性(P<0.01),与临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。B7-H4蛋白表达与组织病理学类型、临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 B7-H3与B7-H4在卵巢恶性上皮-间质肿瘤表达提示其可能与肿瘤的发生、发展有关,可为卵巢恶性肿瘤的诊断及治疗提供新的依据。     

新型共刺激分子B7-H4在肿瘤免疫中的研究进展

B7-H4是共刺激分子B7家族的最新成员,是B7家族相关的第3个T细胞抗原特异性反应的负性调控分子,在CD4^＋、CD8^＋T细胞的分化发育、细胞周期的进展以及细胞因子的产生方面发挥广泛的抑制效应。B7-H4途径在器官特异性自身免疫病、病毒感染、移植耐受和肿瘤免疫逃避等方面可能具有重要的作用,因而对B7-H4在肿瘤免疫逃避中发挥的作用的深人研究可以为肿瘤的生物学诊断及治疗策略提供一个新的方向。     

B7-H4在人胶质瘤组织中的表达及其临床意义

 目的： 探讨B7-H4在人胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法： HE染色分析了150例胶质瘤标本病理级别。免疫组化方法检测B7-H4在胶质瘤中的表达, 并分析其与临床病理参数及生存时间的关系。结果： HE染色检测150例胶质瘤标本病理级别,结果为I级12 例,II级50 例,III级39 例,IV级49 例。150例胶质瘤标本中97例B7-H4高表达,高表达率为64.7％,居于病理级别III～IV级;43例B7-H4低表达,低表达率为28.7%,居于病理级别I～II级。统计学分析提示组织标本中B7-H4的表达与年龄(P<0.01)和病理级别(P<0.01)存在明显相关,与肿瘤的部位没有显著相关性（P>0.05）。B7-H4阳性患者生存期更短（P<0.01）,多因素Cox 回归分析显示B7-H4、年龄、性别及病理级别均是胶质瘤患者的独立预后因素。结论： B7-H4在多数胶质瘤组织中表达较高,可作为脑胶质瘤患者的独立预后分子标志物和新的治疗靶点。     

Small round blue cell tumours: diagnostic and prognostic usefulness of the expression of B7-H3 surface molecule

Aims:  To assess whether the expression of B7-H3 surface molecule could improve differential diagnosis of small cell round tumours.
Methods and results:  One hundred and one well-characterized paraffin-embedded small round cell tumours, stored in the pathology archive of the Gaslini Institute, were immunohistochemically analysed with the 5B14 monoclonal antibody, which recognizes the surface molecule B7-H3. All lymphoblastic lymphomas and the blastematous component of Wilms' tumours were completely negative and a few Ewing's sarcoma and Burkitt's lymphoma specimens showed focal positivity, whereas 74% of neuroblastomas, 67% of rhabdomyosarcomas and 100% of medulloblastomas were positive. The pattern of immunoreactivity of 5B14 mAb observed in rhabdomyosarcoma, neuroblastoma and medulloblastoma specimens was limited to the cytoplasmic membrane, and in neuroblastomas areas of rosette formation or of ganglion differentiation were preferentially stained. Interestingly, in neuroblastoma patients high expression of the antigen recognized by the 5B14 mAb was associated with a worse event-free survival.
Conclusions:  The 5B14 mAb represents an additional tool for the differential diagnosis of small round cell tumours and might be useful in identifying neuroblastoma patients at risk of relapse who may take advantage of more careful follow-up.