U937细胞染色体动粒变异的研究

目的使用特殊银染方法分析U937细胞染色体动粒变异情况。方法采用动粒-核仁组织区(Cd-NOR)银染法分析15 728条U937白血病细胞(观察组)和13 800条健康人(对照组)分裂中期姐妹染色体动粒,并进行比较。结果与对照组外周血淋巴细胞染色体动粒比较,观察组染色体动粒缺失(0.80%)、动粒迟滞复制(0.38%)和不对称动粒(0.24%)概率显著升高(P<0.01),而Cd-NOR融合(0.71%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论 U937肿瘤细胞普遍伴随着动粒变异,以此为基础可以建立一种诊断或治疗该肿瘤的新方法。     

非整倍体患者及其双亲染色体动粒结构的相关性研究

目的 :研究染色体动粒结构变异与非整倍体形成的关系 ,探索非整倍体形成的细胞遗传学机制。方法 :应用改良的染色体动粒 -核仁组织区 (Cd -NOR)同步银染技术 ,对 31例非整倍体患者及其 35例双亲动粒结构进行了分析。结果 :非整倍体患者C、G染色体组的小Cd、Cd消失、Cd迟滞、Cd -NOR融合频率均显著高于对照组 ,差异显著 (P <0 0 5 )。患者双亲组的G组小Cd、Cd消失频率显著高于对照组 (P<0 0 1)。患者组的G组小Cd频率与其双亲比较有显著差异 (P<0 0 5 )。结论 :非整倍体患者染色体动粒结构变异频率增高与遗传有关 ,动粒结构改变可能是引起染色体不分离 ,导致非整倍体形成的遗传因素之一。     

无精症及严重少精症患者Y染色体微缺失及细胞遗传学研究

目的通过多重PCR及细胞遗传学技术,探讨导致男性无精症及严重少精症的遗传原因,调查无精症及严重少精症患者Y染色体微缺失及染色体异常的类型及分布频率。方法利用Y染色体上15个特异性序列标签(STS)设计引物,采用多重PCR的方法对无精症及严重少精症组73例对象、精液正常对照组138例对象的外周血DNA进行Y染色体微缺失的分子遗传学检测,同时采用外周血淋巴细胞培养G显带方法进行细胞遗传学分析。结果无精症及严重少精症患者Y染色体微缺失发生的频率为9.6%,缺失的位点涉及到AZF(无精子因子)的3个区域,其中AZFb缺失率为1.4%,AZFc缺失率为8.2%,AZFd缺失率为9.6%,缺失率极显著的高于精液正常对照组(P<0.01);细胞遗传学研究检测到7例染色体核型异常,异常核型频率为9.6%,正常精液对照组未检测到染色体核型异常,两者染色体核型异常率差异极显著(P<0.01)。结论不育男性特别是无精症及严重少精症患者染色体核型异常及Y染色体微缺失的发生率较高,Y染色体微缺失及细胞遗传学检测可为不育患者提供治疗前的遗传咨询,避免遗传缺陷垂直传递给后代。     

染色体核型和bcr/abl融合基因表达与慢性髓细胞白血病急变的关系

目的 探讨慢性髓细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的细胞遗传学特性及其与病程发展的关系.方法 短期培养法直接法G显带检测CML的骨髓染色体核型,双色荧光原位杂交检测CML的bcr/abl融合基因,统计学方法采用t 检验.结果 264例CML患者的骨髓染色体检测,检测出Ph染色体阴性14例,阴性率5.3 %,其余为Ph染色体阳性,阳性率为94.7%.在观察到CML急变的43例患者中,标准Ph染色体22例,Ph染色体阴性9例,双Ph染色体2例,变异Ph染色体3例,标准Ph染色体伴其它染色体易位3例,Ph染色体阴性伴其它染色体易位1例,Ph染色体阴性伴倒位2例,Ph染色体阳性伴倒位1例.43例患者中24例患者急变时发生了染色体核型及融合基因改变,19例患者染色体核型及融合基因没有发生变化;[t(9;22)(q11;34)]的CML患者与[Ph-,变异Ph,复杂染色体]的CML患者急变时间(月)差异有统计学意义(P＜0.05).结论(1)慢性髓细胞性白血病加速/急变期发生克隆演化;(2)[Ph-,变异Ph,复杂染色体]的CML患者急变时间(月)明显短于[t(9;22)(q11;34)]的CML患者;(3) 染色体核型和bcr/abl融合基因表达可为诊断提供可靠、可循的依据,对预后判断有重要意义.     

头颈部鳞状细胞癌细胞系染色体核型的检测和分析

[目的] 检测和分析头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)染色体核型,探讨染色体变异与头颈部鳞状细胞癌基因组变异的关系,及其在肿瘤发生、发展过程中的作用.[方法] 18例来源于头颈部不同位置的鳞状细胞癌细胞系进行细胞培养,收集分裂中期细胞,进行染色体"G"带染色,分析核型.并以4例来源于头颈部正常上皮组织细胞作为阴性对照.[结果] 4例对照组上皮细胞均表现为人正常染色体核型.头颈部鳞状细胞癌细胞系核型主要表现为大量复杂的染色体结构重排和数目改变.(1)头颈部鳞状细胞癌染色体核型主要表现为染色体成分/数目的丢失;(2)染色体/臂成分的失衡主要表现为:2q,3p,4,8p,9p,13,14,15,17,18,21,22染色体成分的缺失;及3q,7,8q,11q13,20染色体成分的增加;(3)大部分的染色体断裂点位于着丝粒区域. [结论] 头颈部鳞状细胞癌的染色体畸变是非任意性的,是有规律可循的.染色体数目、结构的不断变异可能造成癌基因活化、扩增,抑癌基因的抑制和缺失;这种多基因改变的不断积累促进了头颈部鳞状细胞癌的发生及发展.     

Klinefelter综合征X染色体着丝粒区α-卫星DNA变异

目的从DNA分子水平建立研究X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA变异的方法,发现Klinefelt综合征患者的X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA串联重复序列结构变化与染色体不分离的关系.方法采用(representative sampling of multiple repetitive units,rep)PCR方法,通过设计适当的引物,对α-卫星DNA多个单拷贝串联重复序列同时进行扩增,检测重复序列中结构变化的种类、频率及重组位点.结果首次发现由缺失产生的562 bp和220 bp变异片段和重组位点,异常组的570、562、220 bp构成显著高于正常组(P＜0.05).Logistic回归分析显示:570、562bp和220 bp 3个短片段同时出现和任两个短片段同时出现均是疾病相关的危险因素.结论Klinefelt综合征的X染色体着丝粒区α-卫星DNA过多的重组可能是造成X染色体不分离的重要原因之一.     

非整倍体患者及其双亲染色体着丝粒点(Cd)结构和核仁组织区(NOR)rRNA基因活性研究

目的　研究非整倍体患者及部分患者双亲染色体着丝粒点 (Cd)结构变异、核仁组织区 (NOR)rRNA基因活性变化和银染近端着丝粒染色体联合 (Ag -AA )频率 ,探讨非整倍体畸变的细胞遗传学机理。方法　应用外周血淋巴细胞染色体常规及C、G显带技术和改良的着丝粒点 -核仁组织区 (Cd -NOR)同步银染方法。结果患者组与对照组相比 ,C组Cd各项变异频率、G组多数Cd变异频率、Ag -NOR及G组Ag -AA频率、D组Cd -NOR融合频率均明显升高 ,差异极显著 (P <0 .0 1) ;患者组分别与其双亲组及父、母亲组相比 ,多数染色体组Cd变异频率均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;患者组与对照组及其它各组相比 ,Cd变异频率在A、B、E、F各染色体组均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　非整倍体的形成与染色体着丝粒点Cd变异和NORrRNA基因活性变化密切相关 ;各染色体组Cd变异频率及NORrRNA基因活性变化具有一定差异 ,且C、D、G组染色体Cd变异在患者与其双亲间存在相似性。这在一定程度上表明人类染色体着丝粒点变异具有某种遗传倾向     

儿童传染性单核细胞增多症患者GST基因遗传多态性的研究

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶T1(GSTT1)和M1(GSTM1)基因多态性与儿童传染性单核细胞增多症(IM)发病风险的关系.方法 采用病例-对照研究方法对52例IM患儿和60名健康儿童进行多重PCR技术检测GSTT1和GSTM1基因多态性.分析不同基因型与儿童IM发病的关系.结果 IM组和对照组GSTT1纯合缺失基因型[GSTT1(-/-)]的分布频率分别为59.62%和43.33%,组间比较差异有显著性(X2=-7.231,P<0.05);携带GSTT1(-/-)基因型儿童发生IM的风险是携带GSTT1非纯合缺失基因型[GSTT1(+/+)或(+/-)]儿童的1.931倍[比值比(OR)=1.931,95%可信区间(CI):1.038～2.894].GSTM1纯合缺失基因型[GSTM1(-/-)]的分布频率在IM组和对照组间差异无显著性(P>0.05).基因型联合分析显示:携带GSTT1(-/-)与GSTM1(-/-)联合基因型的儿童,其IM的发病风险显著增加(OR=2.691,95%CI:0.902～6.127).结论 GSTT1纯合缺失基因型可能是儿童IM发生的重要危险内因之一.     

胸、腹水细胞染色体检查的临床应用

37例恶性肿瘤病人的胸、腹水细胞染色体检查结果,22例(59.5%)的染色体数目明显增多,7例为二倍体,8例未见分裂相。脱落细胞检查阳性17例(46.0%)。二法同用阳性结果增加至25例(67.6%)。40例非肿瘤病人的胸、腹水细胞染色体检查,1例出现染色体数目明显增多(78),此例为结核性胸膜炎。胸、腹水细胞染色体检查诊断恶性肿瘤,确有出现假阳性结果的可能。     

原发性无精、少弱精症患者Y染色体AZF微缺失检测

目的:研究男性不育与Y染色体位点缺失的相关性,建立可靠的原发性无精子症和少弱精子症患者Y染色体微缺失的基因诊断方法.方法:采用多重PCR技术,对100例染色体核型正常的、无精子症和少弱精子症患者Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域的6个序列标签位点进行检测.结果:100例患者中,4例(4%)Y染色体上存在不同位点等位基因片段的缺失,其中3例患者为无精子症;1例为严重少弱精子症.结论:以多重PCR为基础的AZF微缺失筛查是一种简单有效的诊断原发性无精子症和少弱精子症的方法.Y染色体微缺失是严重生精障碍的重要原因之一.     

抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及对人卵巢癌细胞系SW626增殖的影响

目的 构建抑癌基因PTEN的真核表达载体,研究外源性PTEN基因稳定表达对人卵巢癌细胞系SW626体外增殖的影响.方法 构建PTEN基因的真核表达载体pcDNA3.1/PTEN,转染重组质粒pcDNA3.1/PTEN于体外培养的人卵巢癌细胞系SW626,筛选并获得稳定表达PTEN基因的细胞克隆,应用RT-PCR和western blot分析PTEN基因的mRNA及蛋白质表达,MTT实验分析细胞增殖能力.结果 稳定转染PTEN基因的细胞系有外源目的 基因的mRNA及其蛋白表达.MTT实验表明,pcDNA3.1/PTEN 转染组细胞增殖能力低于pcDNA3.1(-)转染组和对照组 (P＜0.05).结论 外源性抑癌基因PTEN的稳定表达可抑制人卵巢癌细胞系SW626的增殖.     

STAT3-siRNA对人结直肠癌细胞SW480的干涉作用

【目的】应用经小干扰RNA（shortinterfereRNA，smNA）表达盒介导的RNAj对结直肠癌细胞中的STAT3基因进行干涉作用以研究STAT3-siRNA对STAT3基因表达阳性的结直肠癌细胞凋亡的影响。【方法】用脂质体转染试剂将STAT3-siRNA表达盒（STAT3-siRNA expression cassettes，STAT3-SECs）体外转染至人结直肠癌SW480细胞及人成纤维细胞中。于48h后收集细胞，先经荧光染色方法观察细胞表象变化，再通过流式细胞仪检测人结直肠癌SW480细胞凋亡情况，最后分别提取细胞总RNA，用RT—PCR测定STAT3基因在mRNA水平的表达。【结果】SW480STAT3-SECs组的细胞可见凋亡小体，出现明显的凋亡现象，而其它实验组均未出现明显的凋亡现象。流式细胞术结果显示SW480STAT3-SECs组中凋亡细胞百分比由0．2％增加至26．0％；S期细胞比率由32．3％下降至9．2％。在mRNA水平上，SW480STAT3-SECs组细胞的STAT3基因表达减少了（62．16±12．50）％，显著低于SW480对照组（P〈0.01）。【结论】应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人结直肠癌SW480细胞中STAT3的表达，诱导细胞的凋亡。     

Epidemiological investigation of Histoplasma capsulatum infection in China

Objectives To provide reliable information concerning the presence or the absence of Hist oplasma capsulatum (H. capsulatum) infection in China, and data concerning th is respect. Methods Three hundred normal people and 435 hospitalized patients, who lived in Hunan an d Jiangsu provinces, and the Xinjiang Autonomous Region, were tested with yeast -phase histoplasmin (ALK/Berkerley Biologicals Laboratories, USA) and human pur e protein derivative of tuberculin (PPD) on the volar surface of the forearm. A ny reaction to the antigens over 5.0 mm in diameter of induration at 48-72 ho urs was considered positive. Results A total of 138 subjects (18.8%) in 735 patients reacted to histoplasmi n with 5.0-45.0 (9.1±4.3) mm indurations. Significant differences of positive skin reaction rates in norm al subjects were found in Hunan, Jiangsu and Xinjiang (8.9% vs 15.1 % vs 2.1%). The overall positive rate of patients was 25.5%. Patients with t uberculosis ［31.7% (78/246)］ had a significantly higher positive skin reactio n rate in comparison with those suffering from pneumonia ［17.7% (11/62)］, lun g cancer ［20.9% (9/43)］, chronic obstructive pulmonary disease ［17.3% (9/52 )］ and other diseases ［12.5% (4/32)］ (P&lt;0.01). Of 562 cases, 292 case s (52.0%) reacted to PPD with indurations of 5-50 (13.7±4.9)mm in diameter, 63 cases (11.2%) reacted to both histoplasmin and PPD, while 38 cases (6.9%) reacted to histoplasmin but not to PPD. Conclusions The data suggest that there is H. capsulatum herd infection in China. The infection rate in Southeast China is higher than that in the Northwest, and the infection rate of patients with pulmonary tuberculosis is higher than that of no rmal persons and other pneumonopathy patients.     

RNA干扰靶向沉默Gankyrin对结肠癌增殖及侵袭的影响

目的：观察靶向沉默Gankyrin 基因对结肠癌细胞SW620在增殖和侵袭方面的影响。方法：通过体外合成针对Gankyrin基因的siRNA,通过脂质体转染SW620细胞,设立对照组检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭能力。结果：细胞转染后,实验组的倍增时间为25．6±0．8小时,对照组倍增时间为21．7±0．6小时（P＜0．01）;细胞周期检测实验组的G1期细胞为68．3±0．7脖、S期细胞为29．6±0．9脖,对照组的G1期细胞为44．1±0．3脖、S期细胞为4．8±0．4脖（P＜0．01）;细胞凋亡检测实验组AnnexinV ＋PI-细胞比例为8．93±0．21脖,明显高于对照组1．31±0．06脖（P＜0．01）;细胞侵袭实验实验组细胞侵袭能率为34．2±0．3脖,明显低于对照组的53．9±0．6脖（P＜0．01）。结论：siRNA干扰Gankyrin基因表达能够明显降低SW620的增殖和侵袭能力,提示Gankyrin可作为结肠癌基因治疗的潜在靶点。     

PS-341对人大肠癌细胞LoVo,SW480中NF-κB、uPA表达的影响及其与侵袭力的关系

目的 观察人大肠癌细胞LoVo、SW480中真核细胞转录因子-κB(NF-κB)、尿激酶型血浆纤溶酶原激活因子(uPA)的表达差异及硼替佐米(bortezomib,PS-341)对其表达的影响及其与侵袭力的关系.方法 实验分为4组:对照组(无血清)、血清组(10%FCS)、PS-341组[10%FCS +PS-341(...     

三磷酸肌醇、钙离子在胃泌素促人结肠癌SW480细胞株增殖中的作用

目的：探讨胃泌素对人结肠癌细胞株ＳＷ４８０内三磷酸肌醇（ＩＰ３）、钙离子（Ｃａ２＋）的影响及其在细胞增殖中的作用,为结肠癌抗信息传导治疗提供实验依据。方法：①３Ｈ－肌醇标记细胞进行ＩＰ３分析。②应用Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２检测细胞内Ｃａ２＋的浓度。③ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（吸光度Ａ值）。结果：５肽胃泌素（Ｐｅｎｔａｇａｓｔｒｉｎ,ＰＧ）可使ＳＷ４８０细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平升高,同时活细胞数Ａ值增加;５肽胃泌素与其受体拮抗剂丙谷胺（Ｐｒｏｇｌｕｍｉｄｅ,ＰＧＬ）合用时,癌细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平和活细胞数Ａ值均无明显变化。结论：提示胃泌素可能通过肌醇脂质信号传导途径促进人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖     

FHIT基因转染对人结肠癌细胞系SW480增殖和侵袭力的影响

目的 探讨真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT对结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭活性的影响。方法 将携有FHIT基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-FHIT体外转染SW480细胞（SW480-FHIT）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞（SW480-pRc/CMV2）和正常SW480细胞为对照,用RT-PCR检测FHIT的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）和细胞侵袭实验分别检测FHIT基因转染前、后SW480细胞增殖和侵袭活性的变化。结果 pRc/CMV2-FHIT的酶切鉴定证实含有目的基因FHIT;SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT实验结果显示重组质粒转染组SW480细胞的增殖明显受到抑制;Transwell体外侵袭实验显示转染pRc/CMV2-FHIT能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力(P<0.01)。结论 应用基因转染技术重表达FHIT基因能有效抑制细胞的生长、增殖及侵袭活性,为以FHIT为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

基于日间过度嗜睡的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征临床表型分析

目的：探讨伴有日间过度嗜睡（EDS）的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者的临床特征及EDS的危险因素。方法：入选413例经整夜多导睡眠（PSG）监测确诊的OSAHS患者,根据Epworth嗜睡评分（ESS）将患者分为有EDS组（ESS≥11）和无EDS组（ESS≤10）,比较2 组的临床特征和PSG结果,用多因素分析探讨EDS的独立危险因素。结果：与无EDS组比,有EDS组患者同时主诉夜间憋醒（51.8% vs.36%）、晨起头痛（25.5% vs. 11%）、记忆力下降（72.3% vs. 54.8%）、生活受影响（50.4% vs. 35.3%）、工作受影响（47.5% vs. 19.5%）和交通受影响（24.8% vs. 9.6%）的比例较高;微觉醒指数（MAI）（50.72±21.20 vs.39.43±19.50）和呼吸暂停低通气指数（AHI）（56.18±22.74 vs. 35.21±23.04）更高,最长呼吸暂停时间[（66.60±29.24）s vs.（ 55.05±25.01）s]更长,夜间最低SpO2[（63.96±16.85）% vs.（ 74.04±12.27）%]和平均SpO2[（91.25±4.55）% vs. （93.92±2.62）%]更低,氧减饱和指数（ODI）（57.89±24.10 vs.36.34±24.12）更高,夜间氧饱和度小于90%的时间（SIT90）（14.5% vs. 4.3%）更长。多因素分析提示,晨起头痛[OR（95%CI）=3.809（1.704～8.514）]、记忆力下降[OR（95%CI）=1.914（1.002～3.654）]、日常工作[OR（95%CI）=3.445（1.772～6.698）]和交通[OR（95%CI）=2.468（1.061～5.738）]受影响与EDS独立相关,MAI[OR（95%CI）=1.030（1.015～1.045）]、AHI[OR（95%CI）=1.043（1.006～1.081）]和SIT90[OR（95%CI ）=1.038（1.018～1.058）]均为EDS的独立危险因素。结论：有EDS的OSAHS患者与无EDS的患者比有更多的合并症状。睡眠片段化、AHI和夜间低氧均为EDS的独立危险因素。     

蒸馏水与稀释碘伏对结肠癌细胞SW480体外增殖的比较研究

目的研究蒸馏水与稀释碘伏对人结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用。方法体外培养人结肠癌细胞株SW480,分别用蒸馏水与不同浓度稀释碘伏（0.05%,0.025%,0.01%）处理,MTT（噻唑蓝）法检测蒸馏水与稀释碘伏对SW480细胞的生长影响作用,并进行分析评价。结果 0.01%碘伏处理细胞1 min即可表现出明显的细胞毒性作用,效果远远高于单纯使用蒸馏水的杀伤作用。结论稀释碘伏在体外对人结肠癌细胞SW480的杀伤作用明显高于单纯使用蒸馏水,可望为临床手术中控制腹腔结肠癌细胞种植转移提供临床依据。