miR-184靶向TNFAIP2调控肺癌血管新生的分子机制

目的 探讨微小RNA(miR)-184靶向肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导蛋白(TNFAIP)2对肺癌增殖、血管新生的调控作用及其分子机制。方法 聚合酶链式反应(PCR)检测正常人及非小细胞肺癌患者血清miR-184与TNFAIP2 mRNA的表达，qRT-PCR及Western印迹分别检测人支气管黏膜上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌A549细胞miR-184与TNFAIP2 mRNA及蛋白的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血管内皮生长因子(VEGF)蛋白，血管形成实验检查各组血管新生能力。过表达miR-184及干扰TNFAIP2后，观察各组细胞增殖及血管新生能力，双荧光色素酶试验验证miR-184与TNFAIP2的结合位点。结果 miR-184在肺癌组表达水平显著降低，VEGF蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。A549细胞miR-184表达水平显著低于BEAS-2B细胞，而TNFAIP、VEGF蛋白表达水平显著高于BESA-2B细胞(P<0.05)。与miR-NC组相比，miR-184组血管新生能力明显减弱，而干扰TNFAIP2表达后，si-TNFAIP2组...     

非小细胞肺癌中TFPI-2与Survivin表达关系的研究

目的 探讨非小细胞肺癌中组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)的表达与Survivin的关系,从而评价其在肺癌细胞凋亡中的作用.方法 采用免疫组化法检测TFPI-2、Survivin蛋白在75例非小细胞肺癌和20例正常肺组织中的表达水平.结果 TFPI-2在非小细胞肺癌中的表达指数为55％,低于正常的肺组织85％.Survivin在非小细胞肺癌中的阳性表达水平为71％,在正常肺组织中大表达水平为5％.TFPI-2和Survivin在非小细胞肺癌中的阳性表达水平呈现负相关(r=9.62,P＜0.05).结论 TFPI-2在正常肺组织中的表达水平明显高于非小细胞肺癌组织,其可能通过调控Survivin蛋白的表达来抑制肿瘤细胞的浸润转移.     

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果 与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0....     

姜黄素对人肺癌细胞凋亡相关蛋白Survivin表达的影响

目的研究姜黄素对人肺癌细胞诱导凋亡的作用机制。方法用10、20μM两种浓度姜黄素分别作用于SPC-A1细胞12h和24h,用末端标记法检测细胞凋亡率,原位杂交检测姜黄素作用24h后SPC-A1细胞凋亡相关蛋白Survivin表达。结果20μM姜黄素作用24h组凋亡率达43.7％,明显高于其他组;20μM姜黄素作用24h组凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达明显降低。结论姜黄素可诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达降低有关。     

miR-637靶向调控FOXM1表达影响肺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨肺癌细胞中miR-637对癌基因叉头框蛋白(FOX)M1的靶向调控作用及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,为肺癌的治疗提供新靶点.方法 qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、NCl-H460和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-637和FOXM1 mRNA表达,Western印迹检测FOXM1...     

小剂量顺铂诱导的胃癌AGS细胞凋亡及对Survivin表达的影响

目的探讨小剂量顺铂(DDP)诱导胃癌细胞株AGS(ATCC CRL-1739)凋亡及对凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响,为晚期胃癌DDP治疗策略提供理论依据。方法 AGS细胞经小剂量DDP处理后用MTS法检测癌细胞增生的抑制,流式细胞仪测定细胞凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRNA及Western blot法检测Survivin蛋白的表达。结果小剂量DDP可抑制AGS细胞的增生并诱导其凋亡,肿瘤细胞的凋亡与DDP浓度及作用时间有依赖关系,但至一定浓度后,凋亡达最高,再增加浓度后仅增加坏死率,5 mg/L以上DDP在作用24 h后凋亡率不再增加。10 mg/L的DDP对癌细胞有较强时效关系的细胞毒性。胃癌AGS细胞Survivin mRNA的表达随DDP浓度升高而增加,至DDP达2 mg/L时表达最高,再增高浓度时反而下降;Survivin蛋白表达与其mRNA表达一致。结论小剂量DDP对胃癌细胞株AGS有凋亡诱导作用;对Survivin mRNA及蛋白表达均有诱导作用。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予40、80、160μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物（实验组）,同时设对照组（0.04%DMSO＋肺癌A549细胞）。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测用药后DNA梯状条带、TUNEL检测用药后肺癌A549细胞凋亡率的变化、免疫组化SP法检测用药后肺癌A549细胞Survivin蛋白表达变化、RT-PCR法检测用药后A549细胞Survivin mRNA的表达。结果实验组细胞DNA凝胶电泳均出现凋亡细胞所特有的DNA梯状条带图谱,而对照组细胞未出现。各实验组细胞随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量—效依赖性;其Survivin蛋白和mRNA表达均低于对照组（P均〈0.05）,亦存在时相性和量—效依赖性。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Survivin蛋白和mRNA表达有关。     

肝素酶在人β-防御素-3抗甲型流感病毒的作用研究北大核心CSCD

目的探讨肝素酶在人β-防御素-3(Humanβ-defensin 3,HBD3)抗甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)中的作用。方法采用CCK8法检测肝素酶对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性情况;经肝素酶处理BEAS-2B细胞,并在4℃下与HBD3和IAV病毒液孵育2 h,分为未处理组(HBD3+IAV),肝素酶+HBD3+IAV组,提取细胞总RNA和总蛋白,采用qRT-PCR检测感染细胞中的NP mRNA表达水平,Western blot和免疫共沉淀检测HBD3和IAV HA蛋白表达水平以及HBD3和HA蛋白的相互作用。试验设未经肝素酶处理BEAS-2B细胞对照组。结果肝素酶作用48 h,其浓度在30 U/mL以下浓度时对细胞无毒性作用;HBD3干预IAV感染细胞后细胞中的NP mRNA表达水平显著降低(t=12.81、26.13、28.68,P<0.01),经肝素酶处理IAV感染的细胞其NP mRNA表达水平升高(t=-4.55,P<0.05),结果显示HBD3可抑制病毒复制,而经肝素酶处理IAV感染的细胞其病毒未减少,表明只使用肝素酶不能降低病毒感染;与未经肝素酶处理的细胞相比,经肝素酶处理的细胞中HBD3和HA蛋白表达水平降低,以及HBD3和HA蛋白的相互作用显著降低(P<0.01),表明HBD3和肝素酶共同作用可降低HA的表达来阻止IAV进入细胞。结论肝素酶和HBD3共同作用可以抑制病毒进入细胞,具有抗甲型流感病作用。     

Survivin蛋白在非小细胞肺癌中表达的研究

目的探讨Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其三者之间的关系。方法用链霉菌生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学法(SP法)检测71例手术切除的非小细胞肺癌(NSCLC)组织和30例正常肺组织中Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白的表达;用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡指数(AI)。结果在NSCLC组织中Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白的表达率分别为61.97%、52.52%、22.54%;30例正常肺组织中无Survivin、突变型P53蛋白表达(P<0.001),Bcl-2蛋白表达率为3.33%(P<0.005);肺癌Survivin阳性、阴性表达组织、正常肺组织的平均凋亡指数分别为11.86±4.67‰、18.67±7.93‰、23.32±6.98‰,肺癌Survivin阳性表达组织与正常肺组织的平均AI相比(P<0.001),肺癌Survivin阴性表达组织与正常肺组织的平均AI相比(P<0.05),差异有显著的统计学意义。结论Survivin蛋白在肺癌组织中的表达,提示该凋亡抑制蛋白在肺癌的发生发展中起抑制癌细胞凋亡的重要作用,AI显示出了Survivin蛋白的抗凋亡作用,Survivin基因有望成为基因治疗的新靶点。     

CEP55基因沉默对非小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的 探讨CEP55基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响及机制.方法 常规培养正常肺上皮细胞(BEAS-2B细胞)及NSCLC细胞(A549、H1299、H1975细胞),用Western blotting法检测细胞内CEP55蛋白,筛选CEP55蛋白表达最高的A549细胞为后续实验细胞.将A5...     

Survivin在柔红霉素诱导白血病细胞凋亡作用机制中的研究

目的：探讨Survivin在柔红霉素（DNR）作用机制中的作用,为进一步探讨白血病细胞对DNR耐药机制提供研究方向。方法：实验选用高表达Survivin的Molt-4细胞,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测DNR作用后Survivin mRNA的表达,免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）方法检测DNR作用后Survivin蛋白的表达,免疫印迹方法检测DNR作用后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白的表达。结果：Survivin mRNA和蛋白表达水平随DNR浓度加大和作用时间延长而降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;Caspase-3与Caspase-9蛋白活化片断随DNR浓度加大和作用时间延长而增多（P〈0.05）,Caspase-8未见明显活化片断。结论：①Survivin在DNR作用机制中发挥重要作用;②DNR可能通过线粒体途径诱导白血病细胞凋亡,Caspase-3和Caspase-9在凋亡通路中发挥重要作用。     

Soot-exposed mononuclear cells increase inflammatory cytokine mRNA expression and protein secretion in cocultured bronchial epithelial cells

BACKGROUND: Soot particles are air pollutants capable of inducing airway and lung parenchymal injury. Mononuclear and bronchial epithelial cells are central to the maintenance of homeostasis and inflammation in the airways. OBJECTIVES: The aim of this study was to evaluate the contribution of mononuclear cells to the release of inflammatory mediators by bronchial epithelial cells. Methods: To model the in vivo situation, an in vitro system of cocultured blood monocytes and BEAS-2B cells was established in a transwell system. Blood monocytes were exposed to soot particles (FR 101) at concentrations of up to 100 microg/10(6) cells. Inflammatory cytokine mRNA and protein concentrations were quantified in BEAS-2B mono- and BEAS-2B-BM cocultures by RT-PCR and ELISA following exposure to soot for 1 and 8 h. RESULTS: No inflammatory cytokine mRNA expression was observed in unstimulated BEAS-2B cells. IL-6 and IL-8 mRNA and protein levels showed a dose-dependent elevation in FR 101-exposed blood monocytes. In addition, both IL-6 and IL-8 mRNA expression was upregulated in cocultured BEAS-2B cells while cytokine concentrations in the blood monocyte-BEAS-2B coculture medium were significantly increased. This upregulation was likely due to a synergism of two cell populations. CONCLUSIONS: Exposure to soot particles induces an autocrine stimulation of inflammatory cytokine release by blood monocytes and BEAS-2B cells. Since IL-6 and IL-8 play a major role in the pathogenesis and persistence of bronchial inflammation, these findings may serve as a partial explanation for the aggravation of asthmatic and bronchitic symptoms after exposure to soot.     

消癌解毒方通过内质网应激诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究

[目的]探讨内质网应激在消癌解毒方在人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。[方法]CCK-8法检测不同浓度的消癌解毒方处理HepG2细胞12、24、48 h后细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测细胞消癌解毒方处理HepG2细胞24 h凋亡情况;应用qRT-PCR检测内质网应激上游分子标记GRP78、PERK、ATF-6、IRE-1的mRNA水平;采用Western blot方法分析消癌解毒方对PERK、ATF4、CHOP和TRB3蛋白的表达情况;并用CCK-8法检测内质网抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)对HepG2细胞凋亡率的影响。[结果]消癌解毒方抑制HepG2细胞的增殖,并且这种效应呈现时间和浓度依赖;ATF-6和IRE-1 mRNA水平无明显变化,GRP78和PERK mRNA水平较阴性对照组均显著增加;消癌解毒方可上调内质网应激通路的标志蛋白质PERK、ATF4、CHOP水平,增加下游TRB3蛋白的表达。4-PBA与消癌解毒方联合作用组的细胞凋亡率显著减少。[结论]消癌解毒方通过内质网应激诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,其可能是通过PERK通路上调内质网应激相关凋亡蛋白CHOP的表达。     

RNAi技术沉默Survivin基因抑制肺癌细胞株H1299增殖并诱导其凋亡

目的　研究RNAi技术沉默Survivin基因对人肺癌细胞株H1299增殖和凋亡的影响。方法 将 Survivin特异性siRNA 表达载体siRNA-Sur转染H1299细胞, 利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率,通过Western blot和Realtime-PCR方法检测RNAi沉默Survivin 表达的效果, MTT 法检测RNAi沉默Survivin对H1299细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡。结果　siRNA-Sur转染H1299细胞48h后,细胞的Survivin基因表达明显减少,空白对照组Survivin mRNA的相对表达量为1.0,siRNA-空白对照组为0.98,而siRNA-Sur组为0.32(P<0.01);导致H1299细胞G2期阻滞,空白对照组为23.7% ,而siRNA-Sur组为50.1%(P<0.01);细胞抑制率和凋亡率增加, 转染48h,白对照组凋亡率为5.8%,无关对照组为6.2%,而siRNA-Sur组达50.6%(P<0.01)。 结论　RNAi沉默H1299细胞Survivin基因表达抑制细胞增殖,并诱导H1299细胞凋亡。     

c-src/NADPH氧化酶1/活性氧对中性粒细胞弹力蛋白酶诱导气道黏蛋白5 AC表达的影响

目的 探讨中性粒细胞弹力蛋白酶(NE)诱导气道黏液高分泌的上游信号调节机制.方法 体外培养人气道BEAS-2B上皮细胞,将细胞分为空白对照组(不加任何刺激)、NE组(NE刺激)、NE+PP2组(NE刺激合并c-src抑制剂PP2)、NE+c-src siRNA组(NE刺激合并c-src siRNA)、NE+Noxl siRNA组[NE刺激合并NADPH氧化酶1(Nox1)siRNA]、阴件siRNA对照组(加入阴性对照siRNA)及NE+阴性siRNA组(NE刺激合并阴性对照siRNA)为干预条件.检测干预前后各组细胞巾活性氧含量、NoxI蛋白含量、黏蛋白5AC的蛋白及mRNA水平.用四甲基偶氮唑盐法测定各组细胞活性;活性氧试剂盒测定活性氧相对含量;逆转录PCR法检测各组黏蛋白5AC mRNA水平;ELISA法分析细胞黏蛋白5AC的蛋白相对含量;Western blot法检测Noxl蛋白及c-src蛋白的相对含量.结果 NE组细胞中Nox1蛋白相对含量为0.88±0.12,高于空白对照组的0.32±0.09(t=9.12.P=0.003);活性氧相对含量为0.76±0.09,高于空白对照组的0.18±0.02(t=9.44,P=0.003);黏蛋白5AC蛋白相对含量为0.82±0.09,基因转录水平为0.77±0.05,均高于空白对照组(分别为0.21±0.11和0.18±0.08,t值分别为7.75和6.13,P值分别为0.004和0.006).NE+c-src siRNA组细胞的Nox1蛋白相对含最(0.39±0.08)、活性氧相对含量(0.29±0.05)均低于NE组(t值分别为5.43和5.60,均P=0.007);黏蛋白5AC蛋白相对含量(0.38±0.09)及mRNA水平(0.41±0.04)低于NE组(t值分别为5.28和4.09,P值分别为0.008和0.034).NE+PP2组活性氧相对含量为0.41±0.11,Nox1蛋白相对含量为0.44±0.05,黏蛋白5AC蛋白及mRNA水平分别为0.48±0.08和0.46±0.07,均低于NE组(均P<0.05).NE+Noxl siRNA组中活性氧相对含量(0.19±0.06)、黏蛋白5AC蛋白相对含量(0.31±0.05)及mRNA水平(0.32±0.06)也低于NE组(均P<0.05).结论 c-src/Noxl参与了NE诱导的活性氧活化,是气道上皮细胞黏蛋白5AC合成及分泌的上游信号调节因子.     

昆参颗粒对诱导型胃癌模型大鼠血管内皮生成因子的影响

[目的]研究昆参颗粒对诱导型胃癌模型大鼠血管内皮生成因子（VEGF）的抑制作用。[方法]用N-甲基-N-硝基-亚硝基胍（MNNG）诱导建立胃癌大鼠模型，酶联免疫吸附法及免疫组织化学法检测诱导型胃癌大鼠血浆水平及胃癌组织VEGF蛋白、VEGF mRNA的表达。[结果]昆参颗粒组可明显降低MNNG诱导的胃癌大鼠血浆VEGF水平，并能下调诱导型胃癌组织VEGF蛋白及VEGFmRNA表达。[结论]昆参颗粒对诱导型胃癌模型大鼠VEGF有明显的抑制作用。     

丝裂霉素诱导肝癌细胞Survivin基因表达的研究

研究肝癌细胞HepG2内凋亡抑制基因Survivin在化疗药物丝裂霉素作用下的表达变化,探讨肝癌细胞可能的耐药机制。在体外培养的肝癌细胞株HepG2中加入低浓度丝裂霉素,于不同时间收集细胞后运用RT-PCR以及免疫印迹法检测Survivin的表达变化。发现加入丝裂霉素12小时未见Survivin明显表达改变,24、48小时后SurvivinmRNA表达较加药前分别增加1.33、1.93倍,蛋白质表达增加1.25、2、10倍。丝裂霉素诱导肝癌细胞Survivin表达升高具有时间效应,Survivin表达升高可能在肝癌细胞耐药过程中发挥了一定作用。