人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞凋亡的影响

目的检验氧化损伤的牛ＲＰＥ细胞是否存在着凋亡以及人参皂甙Ｒｇ１、Ｒｂ１和维生素Ｅ对其的影响,以期进一步研究ＲＰＥ细胞氧化损害的机理,并试图为预防和治疗与ＲＰＥ细胞相关的视网膜疾病提供有效的手段。方法建立牛ＲＰＥ细胞氧化损伤模型,利用原位末端标记技术测定ＲＰＥ细胞凋亡。结果发生凋亡的ＲＰＥ细胞细胞核染成紫蓝色,形态不一,往往成颗粒状着色,与次黄嘌呤（ＨＸ）／黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）（ＨＸ＝０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１,ＸＯ＝５Ｕ·Ｌ－１）组阳性细胞数相比较,正常对照组Ｒｇ１（０．１ｍｇ·Ｌ－１）组及维生素Ｅ（１０ｍｇ·Ｌ－１）组存在显著性差异（Ｐ＜０．０５）,而与Ｒｂ１（１０ｍｇ·Ｌ－１）组无显著性差异。结论氧化损伤可使培养的牛ＲＰＥ细胞发生凋亡。人参皂甙Ｒｇ１和维生素Ｅ对抗氧自由基对ＲＰＥ细胞损伤的机制可能是通过清除氧自由基、减少ＲＰＥ细胞脂类过氧化的发生,从而有效地抑制ＲＰＥ细胞凋亡,利于ＲＰＥ细胞的生存。     

人在皂甙Rg1,Rb1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞凋亡的影响

目的 检验氧化损伤的牛ＲＰＥ细胞是否存在着凋亡以及人参皂甙Ｒｇ１、Ｒｂ１和维生素Ｅ对其的影响，以期进一步研究ＲＰＥ细胞氧化损害的机理，并试图为预防和治疗与ＲＰＥ细胞相关的视网膜疾病提供有效手段。方法 建立牛ＲＰＥ细胞氧化损伤模型，利用原位末端标记技术测定ＲＰＥ细胞凋亡。结果 发生凋亡的ＲＰＥ细胞细胞核染成蓝色，形态不一，往往成颗粒状着色，与次黄嘌呤（ＨＸ）／黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）（ＨＸ＝０．１ｍｍｏ     

信号转导/转录激活因子3抗ARPE-19细胞氧化应激研究

目的　本研究旨在观察信号转导／转录激活因子３（ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ／ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ３,ＳＴＡＴ３）对视网膜色素上皮细胞（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｃｅｌｌｓ,ＲＰＥ）氧化应激损伤的保护作用,并探讨ＳＴＡＴ３在年龄相关性黄斑变性（ａｇｅ-ｒｅ-ｌａｔｅｄｍａｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ,ＡＭＤ）发病机制中的意义。方法　体外培养ＡＲＰＥ-１９细胞系,氧化低密度脂蛋白及Ｈ２Ｏ２干预培养细胞诱导氧化应激损伤,通过对细胞增殖、凋亡、活性氧族（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ,ＲＯＳ）水平及细胞衰老分析研究,评估氧化应激损伤对ＲＰＥ的影响;实时荧光定量技术分析氧化应激过程中ＳＴＡＴ３-ｍＲＮＡ表达状况;ＳＴＡＴ３过表达载体转染ＡＲＰＥ-１９细胞,烟酰胺预处理细胞再经Ｈ２Ｏ２及氧化低密度脂蛋白干预后通过对增殖、凋亡、ＲＯＳ及细胞衰老状态的分析,了解ＳＴＡＴ３抗ＲＰＥ氧化应激效果。结果　与对照组相比,Ｈ２Ｏ２和氧化低密度脂蛋白能显著增加ＲＯＳ水平,促使细胞衰老增加,细胞的增殖显著下降而细胞凋亡显著上升（均为Ｐ＜０．０５）。氧化应激状况下ＳＴＡＴ３上游产物表达上升,氧化低密度脂蛋白及Ｈ２Ｏ２组荧光表达强度分别是３．３±１．２及３．５±１．１,与对照组相比差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;ＳＴＡＴ３能保护ＡＲＰＥ-１９细胞抗氧化应激损伤,使细胞增殖增加、凋亡减少及ＲＯＳ累积,但不造成细胞衰老状况加剧,说明ＡＲＰＥ-１９细胞衰老不受ＳＴＡＴ３调节。结论ＳＴＡＴ３在细胞氧化损伤中能独立地发挥抗氧化应激作用,提示了ＳＴＡＴ３在ＡＭＤ治疗过程中的应用前景。     

Cyclophilin D在氧化应激下人视网膜色素上皮细胞中的表达

目的　检测氧化应激下人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞内ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ的表达,初步探索ＲＰＥ细胞氧化损伤保护新靶点。方法　培养细胞系ＡＲＰＥ１９及人原代ＲＰＥ细胞,相差显微镜下观察细胞形态,应用激光共聚焦显微镜免疫荧光法鉴定细胞。不同浓度Ｈ２Ｏ２（０μｍｏｌ·Ｌ－１、１００μｍｏｌ·Ｌ－１、５００μｍｏｌ·Ｌ－１、１ｍｍｏｌ·Ｌ－１）处理细胞２４ｈ后,应用ＲＴ-ＰＣＲ检测ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ在细胞内的表达。随后预先在部分细胞中加入３μｍｏｌ·Ｌ－１环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ,ＣｓＡ）处理３０ｍｉｎ后再加入不同浓度Ｈ２Ｏ２（８０μｍｏｌ·Ｌ－１、１６０μｍｏｌ·Ｌ－１、３２０μｍｏ·Ｌ－１）２ｈ,即ＣｓＡ＋Ｈ２Ｏ２组,应用乳酸脱氢酶（ｌａｃｔｉｃｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＬＤＨ）法检测细胞致死率,并与Ｈ２Ｏ２组的ＬＤＨ释放量相比较。结果　培养的ＡＲＰＥ１９和人原代ＲＰＥ细胞均表达ＲＰＥ细胞特异性抗体ＲＰＥ６５。１００μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ２Ｏ２处理细胞２４ｈ后ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ表达量明显升高,当Ｈ２Ｏ２浓度增加到５００μｍｏｌ·Ｌ－１时,ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ表达量降低,１ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ２Ｏ２处理时,ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ表达水平未见增加。在各Ｈ２Ｏ２ 组组间,ＬＤＨ的释放量随着Ｈ２Ｏ２ 浓度的升高而增加;与Ｈ２Ｏ２ 组相比,ＣｓＡ＋Ｈ２Ｏ２组ＬＤＨ的释放水平明显降低（Ｐ＜０．０５）。结论　氧化应激下ＲＰＥ细胞内ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ的表达升高,该蛋白表达的增加可能进一步导致氧化应激下细胞的死亡,ＣｓＡ可能成为ＲＰＥ细胞保护的新策略。     

视网膜色素变性与血管内皮──血小板功能变化

对６５例视网膜色素变性（ＲＰ）患者和３３例正常人进行血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６－酮前列腺素Ｆ（１α）（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α））、血浆丙二醛（ＭＤＡ）、红细胞超氧化物歧化酶（ＳｏＤ），全血谷脱甘肽过氧化物酶活性（ＧＳＨ－ｐＸ）等指标的测定，发现ＲＰ患者血浆ＴＸＢ２以及ＴＸＢ＿２和６－Ｋ－ＰＧＦ１α比值Ｔ／Ｋ均较正常人升高（Ｐ＜０．０５）．６－Ｋ－ＰＧＦ１α和ＳＯＤ较正常人降低（Ｐ＜０．０１）。而ＭＤＡ、ＧＳＨ－ＰＸ无明显改变，表明ＲＰ患者病理过程中存在血管内皮──血小板功能改变以及自由基的损伤。但对ＳＯＤ与ＴＸＢ２、Ｔ／Ｋ比值、６－Ｋ－ＰＧＦ１α的相关分析表明，它们之间无相关性（Ｐ＞０．０５），表明ＲＰ患者虽有血管内皮──血小板功能紊乱，但非自由基损伤所致。     

视网膜光损伤中TIMP-1、ERK-1的表达及促红细胞生成素对其影响

目的　研究实验性光损伤小鼠视网膜色素上皮细胞（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）中金属蛋白酶组织抑制物-１（ｔｉｓ-ｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-１,ＴＩＭＰ-１）及细胞外信号调节蛋白激酶１（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ-１,ＥＲＫ-１）表达的变化,以及促红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ,ＥＰＯ）对其的影响,探讨ＥＰＯ对视网膜光损伤发挥保护作用的机制。方法　建立大鼠视网膜光损伤动物模型,于小鼠光照前腹腔注射重组人促红细胞生成素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｈｕｍａｎｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ,ｒｈＥＰＯ）,采用ＨＥ染色观察ＲＰＥ细胞形态学变化,免疫组织化学法检测其ＴＩＭＰ-１、ＥＲＫ-１蛋白的表达。结果　光损伤可以造成小鼠视网膜ＲＰＥ细胞渐进性的破坏。外源性的ＥＰＯ可以促进光损伤后视网膜ＲＰＥ细胞ＴＩＭＰ-１及ＥＲＫ-１表达的增加。随光照时间延长,单纯光照组ＲＰＥ细胞密度逐渐减少,光照后７ｄＲＰＥ细胞密度与正常对照组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。光照后相同时间点,ＥＰＯ处理组的ＲＰＥ细胞密度较单纯光照组稍有增加,光照后７ｄ二者差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。光照后各时间点,ＥＰＯ处理组均较单纯光照组中ＥＲＫ-１的表达明显增强（均为Ｐ＜０．０５）。光照后６ｈ、７ｄ,单纯光照组和ＥＰＯ处理组中ＴＩＭＰ-１的表达差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;自光照后１２ｈ起至光照后９６ｈ,各时间点ＥＰＯ处理组较单纯光照组中ＴＩＭＰ-１的表达增强（均为Ｐ＜０．０５）。ＥＰＯ处理组ＲＰＥ中ＴＩＭＰ-１的表达与ＥＲＫ-１的表达正相关（ｒ＝０．７９,Ｐ＝０．０３）。结论　外源性ＥＰＯ通过增加光损伤后视网膜ＲＰＥ细胞ＴＩＭＰ-１的表达,有利于ＭＭＰｓ／ＴＩＭＰ平衡的恢复,进一步证实ＥＰＯ对视网膜光损伤的保护作用。ＥＰＯ对ＲＰＥ细胞ＴＩＭＰ-１分泌和表达的调节可能经由ＭＡＰＫ途径。     

汉防己甲素对视网膜母细胞瘤细胞系HXO－Rb_（44）放射敏感性的影响

研究汉防己甲素（Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，ＴＤＲ）对人视网膜母细胞瘤细胞系ＨＸＯ－Ｒｂ４４放射敏感性的影响，发现ＴＤＲ在低剂量（０．１μｇ／ｍｌ）时，虽对Ｒｂ细胞无直接抑制作用，但可明显增加放射线对Ｒｂ细胞的杀伤作用。随着药物浓度的增加，细胞杀伤率增高。放射前后给药无明显差别。ＴＤＲ主要通过抑制细胞的潜在致死性损伤的修复增加放疗效果。     

汉防己甲素对视网膜母细胞瘤细胞系HXO—Rb44放射敏感性…

研究汉防己甲素（Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，ＴＤＲ）对人视网膜细胞瘤细胞系ＨＸＯ－Ｒｂ４４放射敏感性的影响，发现ＴＤＲ在低剂量（０．１μｇ／ｍｌ）时，虽对Ｒｂ细胞无直接抑制作用，但可明显增加放射线对Ｒｂ细胞的杀伤作用，随着药物浓度的增加，细胞无伤率增高，放射前后给药无明显差别，ＴＤＲ主要通过抑制细胞的潜在致死性损伤的修复增加疗效效果。     

人参皂甙Rb1,Rg1和维生素E保护氧化损伤的牛视网膜色素上皮细胞生长的研究

目的检验人参皂甙Rb1,Rg1和维生素E是否能抑制次黄嘌呤(HX)/黄嘌呤氧化酶(XO)对培养的牛视网膜色素上皮(RPE)细胞的氧化损伤作用.方法建立牛眼RPE细胞培养体系以及RPE细胞氧化损伤模型.利用MTT法观察人参皂甙Rb1、Rg1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞增殖的影响.结果加入不同浓度的Rb1后测得的细胞OD值普遍较HX/XO组的OD值高,但无显著性差异;当Rg1＝0.1和1 μg/ml,维生素E＝1和10 μg/ml时测得的OD值与HX/XO组的OD值相比有显著性差异(P＜0.05).结论Rg1和维生素E能对抗氧自由基对体外培养的牛RPE细胞生长的抑制作用,而Rb1的作用不明显.     

一氧化氮在8-Br-cAMP对视网膜母细胞瘤细胞株影响中的作用

目的研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞作用后产生一氧化氮（ＮＯ）的效应,以探讨ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞分化和凋亡的机制。方法应用原位杂交和 ＲＮＡ斑点印迹技术检测 ＮＯＳ ｍＲＮＡ及 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ;应用硝酸还原酶法检测ＮＯ的含量;应用蛋白斑点印迹技术检测一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的酶活性;应用免疫细胞化学及蛋白质斑点印迹技术检测 ＮＳＥ的免疫反应性（ＩＲ）。结果 ＮＯＳ ｍＲＮＡ,ＮＯＳ酶活性,ＮＯ含量和 ＮＳＥ－ＩＲ均为实验组（ＥＧ）强于对照组（ＣＧ）（Ｐ＜０．０１）,而Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ为ＥＧ弱于ＣＧ（Ｐ＜０．０５）,并在ＥＧ标本上可见ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞呈现神经样的突起。结论 ８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞生成 ＮＯ增加,促进 ＮＯＳ的酶活性和 ＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达,提高ＮＳＥ－ＩＲ,并降低 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果表明,８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ具有促使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞向神经细胞分化并诱导该细胞凋亡的效应,提示ＮＯ可能参与此效应。     

银杏内酯B对H2O2诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨银杏内酯Ｂ对体外培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ,ＲＰＥ）细胞氧化损伤的保护作用及可能机制。方法　ＲＰＥ细胞传代培养２４ｈ后,随机分为阴性对照组、氧化损伤组、银杏内酯Ｂ低浓度组（１ｍｏｌ?Ｌ－１）和银杏内酯Ｂ高浓度组（１０ｍｏｌ?Ｌ－１）,银杏内酯Ｂ预处理２４ｈ后,加入１００μｍｏｌ?Ｌ－１Ｈ２Ｏ２继续孵育１２ｈ,ＭＴＴ比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Ｈｏｃｈｅｓｔ３３２５８染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达。结果　银杏内酯Ｂ能明显抑制Ｈ２Ｏ２诱导的ＲＰＥ细胞活力的下降,ＭＴＴ结果显示银杏内酯Ｂ低浓度组和银杏内酯Ｂ高浓度组细胞活性分别为（５３．３７±２．５３）％和（６９．５７±３．１７）％,与氧化损伤组的（３１．３３±２．４１）％比较,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;流式细胞计数结果显示银杏内酯Ｂ低浓度组和银杏内酯Ｂ高浓度组细胞凋亡率分别下降至（２７．５３±３．３４）％和（１３．３０±２．２５）％,与氧化损伤组的（４８．１３±２．６８）％比较,差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。此外,银杏内酯Ｂ还可以减少Ｈ２Ｏ２所致ＲＰＥ细胞内Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达。结论　银杏内酯Ｂ通过抑制Ｃａｓｐａｓｅ-３及Ｃａｓｐａｓｅ-９的表达有效抑制了Ｈ２Ｏ２对ＲＰＥ细胞的损伤,从而为其用于治疗ＲＰＥ细胞损伤提供可靠的实验依据。     

视网膜母细胞瘤基因生物学功能的研究

用电穿孔转染技术将构建的视网膜母细胞瘤（Ｒｂ）基因正义表达载体ＤＯＬＲＢ和反义表达载体ＤＯＬＲＢＡＳ分别导入Ｒｂ基因完全失活的乳腺癌细胞ＭＤＡＭＨＢ４６８、肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和Ｒｂ基因正常的人胚肺纤维母细胞ＨＥＬ内。Ｒｂ基因使ＭＤＡＭＢ４６８细胞生长速度下降约５０％，软琼脂克隆形成能力完全受抑，裸鼠体内致瘤性部分受抑；同时该细胞在Ｇ１期的比例明显增加。Ｒｂ基因导致了大部分肝癌细胞的死亡。ＨＥＬ细胞在Ｒｂ蛋白表达受到明显抑制的同时其生长速度明显加快，但不能在软琼脂上形成克隆。     

培养大鼠视网膜色素上皮细胞5－HT_2受体分析

利用培养大鼠视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞，我们观察了多种受体激动剂／拮抗剂对ＲＰＥ细胞内第二信使磷酸肌醇（ＩｎｓＰｓ）水平的影响。结果表明，５－羟色胺（５－ＨＴ）及５－ＨＴ２受体激动剂如α－甲基－５－羟色胺、Ｑｕｉｐａｚｉｎｅ、和ＤＯＩ（１－［２．５ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ－４－ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ］－２－ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｃ）均刺激大鼠ＲＰＥ细胞［３Ｈ］－ＩｎｓＰｓ形成，５－ＨＴ刺激［３Ｈ］－Ｉｎｓｐｓ形成的效应可被５－ＨＴ２受体拮抗剂Ｋｅｔａｎｓｅｒｉｎ完全阻断，而５－ＨＴ３，拮抗剂ＭＤＬ７２２２２对之无阻断作用。５－ＨＴ的效应还可被蛋白激酶Ｃ激活剂ＰＭＡ（４β－ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｃ１３－ａｃｅｔａｔｅ）部分抑制。结果清晰表明，在大鼠ＲＰＥ细胞存在着与Ｉｎｓｐｓ信使通路相偶联的５－ＨＴ２受体。     

氧自由基诱导培养的牛视网膜色素上皮细胞凋亡的研究

为进一步从细胞和分子水平研究视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞氧化损害的机制，为临床防治与ＲＰＥ细胞相关眼病提供理论依据，我们对氧化损伤的牛ＲＰＥ细胞是否存在着凋亡以及ｐ５３基因表达水平的变化等进行了研究。...     

视网膜母细胞瘤细胞系HXO—Rb44抑癌基因的表达

目的检测视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞系ＨＸＯＲｂ４４中抑癌基因Ｒｂ的表达状况,为进一步研究ＲＢ的发病机制,利用抑癌基因Ｒｂ进行ＲＢ的基因治疗提供实验依据。方法用ＳＰ免疫组织化学（ＩＨＣ）及流式细胞术（ＦＣＭ）间接免疫荧光法对Ｒｂ基因的表达进行定性、形态学定位及定量检测。结果ＩＨＣ法检测显示：正常视网膜组织中Ｒｂ蛋白呈阳性反应,位于细胞核呈棕黄色;ＨＸＯＲｂ４４中Ｒｂ蛋白表达阴性。ＦＣＭ检测显示：正常人淋巴细胞Ｒｂ蛋白表达量是ＨＸＯＲｂ４４细胞的３．７１倍,ＨＸＯＲｂ４４中Ｒｂ蛋白表达量极低。结论ＲＢ细胞系ＨＸＯＲｂ４４中存在野生型Ｒｂ基因的功能失活,Ｒｂ基因的突变失活与ＲＢ的发生密切相关。     

氢醌诱导小鼠年龄相关性黄斑变性模型的建立

目的　观察氢醌诱导小鼠年龄相关性黄斑变性（ａｇｅ-ｒｅｌａｔｅｄｍａｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ,ＡＭＤ）动物模型的病理特征及超微结构改变,为ＡＭＤ发病机制及防治研究提供模型选择和依据。方法　６～７个月龄Ｃ５７ＢＬ／６小鼠１６只随机分为模型组和正常组,每组８只。模型组小鼠被喂以基于基础纯净合成的含８ｇ·Ｌ－１氢醌的饮食,正常组小鼠被喂以不含氢醌的同配方饮食,饲养５个月。采用组织病理学、ＴＵＮＥＬ方法和８-ＯＨｄＧ免疫荧光法观察两组小鼠视网膜的结构改变、视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的凋亡和ＤＮＡ损伤情况,透射电镜观察超微结构的改变。结果　正常组ＲＰＥ细胞数目为（７．０５±１．５４）个,模型组ＲＰＥ细胞数目为（３．９０±１．２１）个,模型组ＲＰＥ细胞数量较正常组显著减少（Ｐ＜０．０１）。透射电子显微镜显示,正常组ＲＰＥ细胞质中含有丰富的线粒体,较多的色素颗粒,细胞顶部微绒毛数目多且较长;Ｂｒｕｃｈ膜结构规整,厚度均匀。模型组ＲＰＥ细胞微绒毛变短,Ｂｒｕｃｈ膜不规则增厚,外胶原层见层状沉积物,呈纤丝状及无定形状。ＴＵＮＥＬ结果显示,模型组可见较多ＲＰＥ细胞凋亡,凋亡率为（７．７５±３．７６）％,内、外核层散在细胞凋亡,正常组未见细胞凋亡,两组差异有显著统计学意义（Ｐ＜０．０１）。８-ＯＨｄＧ结果显示,模型组ＲＰＥ细胞可见较多的８-ＯＨｄＧ阳性染色,ＲＰＥ细胞ＤＮＡ损伤率为（３３．３５±１１．１６）％,内、外核层散在阳性染色,正常组ＲＰＥ细胞散在微弱的８-ＯＨｄＧ表达,ＤＮＡ损伤率为（０．８４±１．７８）％,内、外核层未见阳性染色,２组比较差异有显著统计学意义（Ｐ＜０．０１）。结论　含氢醌饲料喂养的小鼠具有早、中期ＡＭＤ的病变特征,可为进一步防治早、中期ＡＭＤ研究提供可靠的动物模型。     

8—氯腺苷对生长因子诱导的视网膜色素上皮细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨８氯腺苷（８ｃｈｌｏｒｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ,８ＣＬＡ）对生长因子诱导的视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞增殖的抑制作用。方法通过ＲＰＥ细胞培养,采用３ＨＴｄＲ掺入测定８ＣＬＡ对肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦα）、白细胞介素１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ,ＩＬ１β）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）诱导的ＲＰＥ细胞ＤＮＡ合成的抑制作用。结果三种因子单独使用均可使ＲＰＥ细胞３ＨＴｄＲ掺入每分钟计数（ｃｏｕｎｔｐｅｒｍｉｎｕｔｅ,ＣＰＭ）值明显增高（Ｐ＜０．０５）,８ＣＬＡ在其终浓度为２～１６μｍｏｌ／Ｌ时可使三种因子刺激的ＲＰＥ细胞３ＨＴｄＲＣＰＭ值明显降低（Ｐ＜０．０５）。在ＴＮＦα、ＩＬ１β、ｂＦＧＦ和８ＣＬＡ组,分别于１６、８、２μｍｏｌ／Ｌ时,ＣＰＭ值与基础值相近（Ｐ＞０．０５）。结论８ＣＬＡ可抑制生长因子诱导的ＲＰＥ细胞增殖,为抗增殖药物提供了新的途径     

老年性白内障的氧化损伤与酶组织化学观察

目的 研究老年性白内障晶状体上皮酶活性变化和氧化损伤对培养的牛晶状体上皮细胞酶活性的影响。方法 １．取老年性白内障晶状体和正常透明晶状体进行酶组织化学染色,观察ＳＤＨ,ＬＤＨ,Ｇ６ＰＤ,ＡＴＰａｓｅ活性的变化。２．观察培养牛晶状体上皮细胞氧化损伤后及维生素Ｃ治疗后ＳＤＨ,ＬＤＨ,Ｇ６ＰＤ活性的改变。结果 １．老年性白内障ＳＤＨ,ＬＤＨ,Ｇ６ＰＤ,ＡＴＰａｓｅ活性降低。２．培养的牛晶状体上皮细胞经过氧化损伤后ＳＤＨ,ＬＤＨ,Ｇ６ＰＤ活性显著降低,维生素Ｃ可使酶活性显著提高。结论 氧化损伤使能量产生减少,可能是白内障发生的原因之一,维生素Ｃ对氧化损伤具有部分保护作用。     

缺氧、氧化应激对视网膜色素上皮细胞增殖及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的　观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞增殖的影响及ＧＲＰ７８表达的变化。方法　体外培养人ＲＰＥ细胞,采用ＣｏＣｌ２诱发细胞缺氧模型、Ｈ２Ｏ２诱发氧化应激模型。实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为１００μｍｏｌ?Ｌ－１、２００μｍｏｌ?Ｌ－１、４００μｍｏｌ?Ｌ－１、８００μｍｏｌ?Ｌ－１的ＣｏＣｌ２、Ｈ２Ｏ２作用１２ｈ,用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在ＣｏＣｌ２浓度为２００μｍｏｌ?Ｌ－１、Ｈ２Ｏ２浓度为４００μｍｏｌ?Ｌ－１的基础上,分别选取药物作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈ３个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测ＧＲＰ７８蛋白的表达情况。结果　量-效关系组:不同浓度ＣｏＣｌ２组ＲＰＥ细胞活性与空白对照组相比均明显下降（均为Ｐ＜０．０５）;４００μｍｏｌ?Ｌ－１及８００μｍｏｌ?Ｌ－１Ｈ２Ｏ２组细胞存活率较空白对照组均明显下降（均为Ｐ＜０．０５）。时-效关系组:空白对照组ＧＲＰ７８表达阳性细胞率为（５．４±３０）％;ＣｏＣｌ２作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈＧＲＰ７８阳性细胞率分别为（３４２±７１）％、（５４．４±９．１）％、（３４．７±６．８）％;Ｈ２Ｏ２作用８ｈ、１２ｈ、１６ｈＧＲＰ７８阳性细胞率分别为（３７．８±７１）％、（５７．４±５．１）％、（４２．５±３．９）％。经统计学分析,ＣｏＣｌ２、Ｈ２Ｏ２处理８ｈ后,ＲＰＥ细胞中ＧＲＰ７８表达均较空白对照组明显升高（均为Ｐ＜００１）,作用１２ｈ时ＧＲＰ７８的表达量最高,作用１６ｈ时ＧＲＰ７８的表达量又有下降。结论　ＧＲＰ７８可以作为ＲＰＥ细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,ＧＲＰ７８的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系。     

WERI-Rb1肿瘤干细胞的分离扩增及鉴定

目的　分离培养人视网膜母细胞瘤细胞系ＷＥＲＩ-Ｒｂ１中的肿瘤干细胞,建立肿瘤干细胞的鉴定方法。方法　将ＷＥＲＩ-Ｒｂ１细胞系接种至无血清培养基,对其中的肿瘤干细胞行分离、培养扩增及传代,观察细胞形态,采用旁群细胞检测、克隆形成实验、ＣＤ１３３流式细胞仪检测、荧光定量ＰＣＲ等方法对肿瘤干细胞特性进行鉴定。结果　体外扩增培养的ＷＥＲＩ-Ｒｂ１细胞系呈疏松葡萄状团块,ＷＥＲＩ-Ｒｂ１细胞系中存在比例稳定的旁群细胞（０．０７５±０．０１７）％,无血清培养基可分离扩增培养出ＷＥＲＩ-Ｒｂ１中的肿瘤干细胞,形成类似胚胎干细胞的克隆团块,后者具备较高的克隆形成能力,克隆形成率为（３１．７０±１．８９）％,且干细胞标记物ＣＤ１３３的基因及蛋白均高表达,ＣＤ１３３基因表达量为ＷＥＲＩ-Ｒｂ１的（２．２５±０．１９）倍。结论　本研究阐明了视网膜母细胞瘤细胞系ＷＥＲＩ-Ｒｂ１肿瘤干细胞的分离、培养、扩增及鉴定方法,证明了ＷＥＲＩ-Ｒｂ１中肿瘤干细胞的存在,为后续对视网膜母细胞瘤的治疗提供线索,为进一步研究视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞及胚胎干细胞等的特性对比提供细胞来源。