反应停对大鼠碱烧伤诱导角膜新生血管的影响

目的:研究反应停(thalidomide)对碱烧伤诱导角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的影响。方法:建立大鼠角膜碱烧伤诱导CNV模型,SD大鼠36只随机分成角膜新生血管对照组(A组)、反应停灌胃组(B组)和反应停球结膜下注射组(C组)。采用裂隙灯照相、免疫组化和RT-PCR等方法,检测碱烧伤后各时间点不同处理方法大鼠CNV的生长情况及VEGF的表达情况。结果:B组和C组的角膜新生血管面积和VEGF的表达均显著少于A组(P均(0.05);C组的角膜新生血管面积和VEGF的表达少于B组(P均<0.05)。结论:反应停可有效抑制大鼠角膜碱烧伤诱发CNV的生长,降低角膜新生血管VEGF的表达。球结膜下注射较全身应用更有效。     

阿柏西普对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的探讨阿柏西普对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法制备SD大鼠角膜碱烧伤动物模型,随机分成4组,每组各9只,A组、B组与C组分别给予20 g·L^-1、25 g·L^-1、30 g·L^-1的阿柏西普滴眼液,D组为生理盐水组(给予生理盐水),每组每天2次滴眼治疗,共14 d。分别于碱烧伤后第3天、7天、14天,观察角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)情况并计算CNV面积。碱烧伤后第14天,处死全部小鼠,进行组织学和免疫组织化学检测各组CD34、VEGF蛋白表达情况。结果碱烧伤后第3天、7天和14天,A组、B组与C组的CNV面积均小于D组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);B组与C组在各时间点上CNV面积差异均无统计学意义(均为P>0.05);但B组和C组与A组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。HE染色及免疫组织化学染色结果显示:角膜碱烧伤后第14天,各组角膜CD34和VEGF蛋白表达增强,与A组、B组、C组比较,D组CNV旺盛致密,CD34和V...     

结膜下注射贝伐单抗对兔角膜新生血管的抑制作用

目的 观察碱烧伤后不同时间结膜下注射贝伐单抗（Bevacizumab）角膜新生血管（CNV）的形成与转归.方法 新西兰白兔54只,制成单眼碱烧伤模型,随机分为3组,每组18只眼,A组碱烧伤后结膜下立即注射贝伐单抗2.5 mg（0.1 ml）,B组碱烧伤后3d结膜下注射贝伐单抗2.5 mg（0.1 ml）,C组结膜下注射生理盐水0.1ml,为对照组.共观察28 d.裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管生长情况,行眼前段照相并计算其面积,伤后7、14、28 d各组随机取6例角膜行共焦显微镜检查,观察角膜组织炎性细胞浸润情况及角膜新生血管形态学变化.结果 A、B及C组角膜新生血管开始出现的时间分别为（5.9＋0.8）d、（3.5＋0.6）d及（3.4＋1.1）d,其中A组明显较C组延长（P＜0.05）,B组与C组差异无统计学意义（P =0.068）.伤后各时间点A、B组角膜新生血管的生长面积均明显较C组减少（P＜0.05）,A组与B组角膜新生血管面积比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.共焦显微镜检查可见C组烧伤区大量炎性细胞浸润及新生血管形成,而A组角膜炎性细胞较少,烧伤区无新生血管形成,B组见少量新生血管侵入烧伤区.3组基质层均可见纤维及瘢痕组织增生,其中治疗组纤维增生程度与瘢痕组织均较对照组轻.结论 结膜下注射贝伐单抗可抑制角膜炎性细胞形成,改善损伤角膜基质,促进角膜愈合,从而减少碱烧伤引起的角膜新生血管的生长,在早期注射能取得更好的疗效.     

PEDF和Avastin对大鼠角膜碱烧伤新生血管作用的比较

目的:比较局部应用PEDF与Avastin对大鼠碱烧伤角膜新生血管(CNV)的作用。方法:建立碱烧伤诱导大鼠CNV模型,将30只SD大鼠随机分为5组:A组于烧伤当日开始给予10μg/mL PEDF点眼;B组于烧伤后第3d开始给予10μg/mL PEDF点眼;C组于烧伤当日开始给予5mg/mL Avastin点眼;D组于烧伤后第3d开始给予5mg/mL Avastin点眼;E组于烧伤当日开始使用生理盐水点眼,均每日4次,每次10μL。裂隙灯显微镜观察CNV情况并计算各组CNV的面积,采用免疫组织化学染色观察VEGF和CD31的表达。结果:第12d时,A组CNV面积小于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01);B,C组与D组相比,差异无统计学意义(P=0.215,0.058)。免疫组织化学检测VEGF及CD31示A组VEGF及CD31表达较弱,B,C,D组表达增多,E组表达显著增强。结论:局部应用Avastin及PEDF均能抑制大鼠角膜化学伤后的CNV。烧伤后早期使用PEDF效果优于Avastin。     

人羊膜匀浆提取液抑制大鼠角膜碱烧伤后新生血管生成

目的:研究人羊膜匀浆提取液对角膜碱烧伤后新生血管形成过程中色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived fac-tor,PEDF)和血管内皮生长因子(vascular-endothelial growthfactor,VEGF)的表达影响及对角膜新生血管的抑制作用。方法:SD大鼠54只建立双眼角膜碱烧伤模型,随机分为3组:A组为3g/L氧氟沙星滴眼液组,B组为10g/L泼尼松龙滴眼液组,C组为新鲜人羊膜匀浆提取液组,并分别于治疗后不同时间点进行角膜新生血管增生情况观察,HE染色病理学观察,免疫组化行VEGF和PEDF的表达检测。结果:B,C组比A组新生血管增生少,多形核白细胞(poly-morphonuclear leukocyte,PMN)浸润程度轻,VEDF表达水平显著降低,但B,C两组之间VEDF表达无显著性差异(P>0.05)。C组PEDF表达水平显著高于A,B组(P<0.01),但A,B之间PEDF表达无显著性差异(P>0.05)。结论:新鲜人羊膜匀浆提取液能减少碱烧伤后角膜组织中PMN浸润,增强角膜组织PEDF的表达水平。     

姜黄素对大鼠角膜碱烧伤新生血管和 NADPH氧化酶4表达的影响

目的研究姜黄素对大鼠角膜碱烧伤新生血管的抑制作用和对角膜NADPH氧化酶4（NADPH oxi-dase 4）表达的影响。方法选用标准化清洁级雄性SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只,右眼为实验眼。A组为空白对照组,不做任何处理,B组为碱烧伤模型组,C组为姜黄素治疗组,D组为二甲基亚砜（DMSO）对照组。B、C和D组分别以直径3 mm的圆形滤纸片浸入1 mol／ L NaOH溶液中20 s,均匀的贴于大鼠右眼角膜中央40 s,制造大鼠角膜碱烧伤模型,B组结膜下注射生理盐水0．1 ml,C组注射姜黄素溶液0．1 ml,D组注射姜黄素溶剂DMSO 0．1 ml,均隔天注射1次,注射7次。第3天、第7天、第10天、第14天裂隙灯下观察并照相记录角膜新生血管（ CNV）生长情况,计算CNV面积,数据做统计学分析。第14天处死所有大鼠,摘取右眼球进行石蜡包埋切片,H-E染色观察角膜形态学变化,免疫组化法（S-P）观察角膜NOX4表达,计算机彩色图像分析软件计算平均光密度值,数据做统计学分析。结果 C组新生血管第14天时明显减少退化,角膜透亮,CNV 面积和B 组比较有统计学差异;H-E染色C组角膜基质层新生血管减少退化;免疫组化A组NOX4仅在角膜上皮层和内皮层微量表达,B组较A组明显表达,C组和B组比较表达下降有统计学差异,D组和B组比较无统计学差异。结论姜黄素可以有效的抑制大鼠角膜碱烧伤新生血管,其效应与抗氧化抑制NOX4表达有关。     

姜黄素对兔角膜新生血管模型中多形核白细胞计数和VEGF表达的影响

目的研究姜黄素对兔角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)模型中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达和多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)计数的影响。方法40只健康新西兰大白兔,其中5只不做任何处理作为正常对照组(A组);其余35只建立碱烧伤角膜新生血管模型,右眼不应用姜黄素滴眼液为实验对照组(B组),左眼应用姜黄素滴眼液作为实验干预组(C组)。裂隙灯观察角膜新生血管生长情况,免疫组织化学方法检测应用姜黄素后不同时间点VEGF在兔CNV中的表达,显微镜下PMN计数,并作统计分析。结果A组未见PMN,而VEGF没有表达或仅在上皮基底膜有微弱表达。B组PMN增多和VEGF表达明显增强,其表达部位主要分布在新生血管形成区域和上皮全层。与B组相比,C组角膜新生血管密度明显减低,PMN明显减少,VEGF在相应角膜基质层新生血管形成区域表达减少。结论姜黄素可以有效地抑制兔角膜碱烧伤诱发的CNV生长,可能是通过显著降低角膜新生血管PMN增生和VEGF的表达来实现的。     

腺相关病毒转内皮抑素基因抑制大鼠角膜新生血管的研究

目的:探讨以重组腺相关病毒(rAAV)介导内皮抑素(ES)基因转移对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用。方法:选取SPF级SD大鼠60只,角膜缝线法制作CNV模型,随机分为A,B,C和D共4组。A组:缝线后立即于上方近角膜缘处结膜下注射50μL rAAV-ES转染液;B组:缝线后刮除角膜上皮,用rAAV-ES转染液浸泡角膜10min;C组:缝线后用rAAV-ES转染液浸泡去上皮角膜10min后,同样部位结膜下注射50μL rAAV-ES转染液;D组:对照组,同样部位结膜下注射50μL生理盐水。在裂隙灯显微镜下观察各组CNV的生长情况,并计算其面积;免疫组织化学法观察ES基因表达情况;病理切片检测CNV密度;观察ES基因转移对CNV的抑制作用。结果:裂隙灯显微镜下观察各组大鼠缝线后CNV逐渐生长,14d达高峰,其后逐渐减少;21d后变性。定量数据重复测量的方差分析显示:时间因素与治疗因素之间存在交互效应(F=175.810,P<0.01)。缝线诱导后不同转染组间CNV面积亦有显著性差异(F=2243.816,P<0.01);其中以D组CNV面积最大;C组CNV面积最小。不同时间段CNV生长面积之间差异显著(F=1060.854,P<0.01);对CNV增生的抑制率随着转染时间的延长而增加,C组在缝线后28d,对CNV增殖的抑制率高达到58.25%。免疫组织化学检测显示:A组于上方角膜缘结膜和角膜上皮中可见ES染色阳性;B组在浅基质CNV的内皮细胞中发现少量ES染色阳性;C组角膜上皮及浅基质CNV的内皮细胞中可见较为明显的ES染色阳性;D组角膜细胞均为ES染色阴性。角膜切片结果显示:CNV密度在各转染组均比对照组稀疏。结论:rAAV-ES转基因可明显抑制缝线诱导的大鼠CNV的增生。采用单独结膜下注射rAAV-ES转染液或转染液局部浸泡去上皮角膜的转染途径均能抑制缝线诱导的CNV增生,联合转染途径对缝线诱导CNV增生的抑制效果更好。     

蛹虫草提取物联合地塞米松抑制大鼠角膜新生血管

目的:观察蛹虫草提取物(cordyceps militaris extract,CME)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)对大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法:对48只大鼠采用碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型,后随机分为3组:A组为模型对照组,B组为CME治疗组,C组为CME联合Dex治疗组。造模后每组均隔日注射给药,A组给予生理盐水结膜下注射,B组给予CME10mg球结膜下注射,C组给予CME10mg球结膜下注射,另外给予0.25g/L Dex滴眼液点眼,3次/d。于术后4,8,14d测量角膜新生血管的生长面积,并测量角膜组织中VEGF及其mRNA的表达情况。结果:造模后联合用药组的大鼠角膜新生血管生长面积较模型对照组及CME治疗组明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CME联合Dex更能明显抑制碱烧伤所致大鼠角膜新生血管的生长。     

Effects of AMD3100 subconjunctival injection on alkali burn induced corneal neovascularization in mice

AIM: To investigate the therapeutic effects of local and systemic administration of AMD3100 for alkali burn induced corneal neovascularization (CNV) in mice. METHODS: CNV was induced in vivo by alkaline burn of cornea in C57BL/6 mice. AMD3100 was administrated topically by subconjunctival injection or systemically by intraperitoneal injection for 7 days; balanced salt solution was administrated topically or systemically as a control respectively. Inflammatory index was evaluated by slit-lamp biomicroscopy and inflammatory cells infiltrated to cornea tissue were detected by histologic analysis at multiple time points. CNV was compared between the local and systemic treated mice 2 weeks after alkali burn, as quantified by CD34 immunostaining. Fluorescence-Activated Cell Sorter Analysis was used to investigate the mobilizing effects of EPC in mice after subconjunctival injected or intraperitoneal injected AMD3100. Immunohistochemistry was used to detect the expression of endothelial progenitor cells (EPC) marker proteins VEGFR2 and CD34. RESULTS: Three days after alkali burn, infiltration of inflammatory cells was found in corneal tissue. At the first 7 days of local injection group, the number of inflammatory cells was significantly lower than that in systemic injection group. CNV could be seen at the 7th day, and at the 14th day reached the peak, then started to decrease. The number of CNV in the subconjunctival injection group was 7.57±1.26 per 0.034mm2, compared to a number of 14.87±2.21 per 0.034mm2 in the control group (P<0.05). On the contrary, the number of CNV in the intraperitoneal injection group was a little higher than that in the control group, 16.34±1.53 per 0.034mm2 vs 13.26±1.87 per 0.034mm2. The research also showed that intraperitoneally, but not subconjunctivally injected AMD3100 could mobilize EPC. On the other hand, subconjunctival, but not intraperitoneally injected AMD3100 could reduce the expression of EPC marker proteins. CONCLUSION: In mice locally administrated AMD3100 can reduce the number of alkali burn induced CNV. The number of inflammatory cells and inflammatory responses in corneal tissue.     

结膜下注射Avastin抑制角膜新生血管的实验研究

目的:观察结膜下注射Avastin对实验性兔眼角膜新生血管(neovascularization,NV)的抑制作用,初步探讨作用机制。方法:应用5mm直径的加样器(末端附有棉片)吸入1mol/LNaOH接触新西兰兔右眼(20眼)中央角膜区烧灼30s,制作碱烧伤兔眼角膜NV模型。将实验兔随机分成2组,10眼(A组)碱烧伤后立即结膜下注射Avastin 2.5mg;其余10眼为对照组(B组),结膜下注射等量生理盐水。烧灼后次日每天裂隙灯观察角膜NV、角膜水肿情况,分别于3,7,14,21,28d裂隙灯照相并计算NV面积及NV抑制率。伤后7,28d各组随即处死5只实验兔,取角膜组织做石蜡切片行组织病理学检查及VEGF免疫组织化学检测。结果:两组兔眼伤后第1d角膜缘血管网明显扩张充血,3d时血管开始侵入角膜,7～14d时NV达到高峰,14～21d后NV稳定并逐渐回退。两组角膜NV长度、NV面积及角膜水肿程度存在差异(P<0.05);A组各时间点角膜NV抑制率为44.2%～55%。A组角膜上皮及实质层水肿较轻,NV较少,后弹力层基本完整,VEGF表达明显弱于B组。结论:结膜下注射Avastin对碱烧伤诱导的兔眼角膜NV形成及生长具有明显的抑制作用,可能通过下调VEGF表达发挥作用。     

Bevacizumab对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的：评价Bevacizumab抑制大鼠角膜新生血管的效果。 方法：碱烧伤诱导角膜新生血管模型,对20只wistar大鼠40眼随机平均分4组。角膜碱烧伤后分别给予结膜下注射药物溶剂和不同剂量Bevacizumab。比较并计算角膜新生血管生长面积。16d后角膜标本行HE检验和免疫组织化学检测VEGF的表达。 结果：各用药组与对照组新生血管面积比较差异有统计学意义;治疗组间新生血管面积比较差异没有统计学意义。组织学发现各药物治疗组炎性细胞浸润、新生血管形成均明显轻于对照组。新生血管对照组VEGF染色明显增强,药物注射组表达明显减弱。 结论：结膜下注射一定浓度的Bevacizumab对大鼠角膜碱烧伤形成的新生血管有抑制作用。     

羊膜移植对于减少碱烧伤后角膜新生血管的临床研究

目的:观察羊膜移植手术对于减少碱烧伤后角膜新生血管的疗效.方法:回顾性病例对照研究.2006-2010年期间该院收治的Ⅲ度角膜碱烧伤的患者19例23眼,其中行羊膜移植术(治疗组)11例13眼,未行羊膜移植术(对照组)8例10眼.该两组的年龄和手术外的处理基本匹配.伤后3 d治疗组行羊膜移植术.分别在伤后14、60 d测量各组角膜新生血管面积.应用SPSS12.0统计学软件将此两组的面积进行配对t检验.以P<0.05作为差异有统计学意义.结果:在烧伤后14 d治疗组新生血管面积(62.133±8.571)mm2,明显低于对照组(89.561.4±9.741)mm2,治疗组较对照组减低30.6%,两组差异具有统计学意义(P<0.05).烧伤后60 d治疗组新生血管面积(112.019±17.362)mm2,明显低于对照组为(129.481±13.534)mm2,治疗组较对照组减低13.5%,两组差异具有统计学意义(P<0.05).结论:羊膜移植术能明显抑制碱烧伤所致角膜新生血管的生长.     

Avastin对大鼠角膜新生血管的抑制及超微结构的影响

目的:探讨Avastin对角膜新生血管形成及角膜内血管内皮生长因子(VEGF)的影响及其超微结构的影响。方法:Wistar大鼠96只随机分3组,采用碱烧伤的方法制备大鼠角膜新生血管模型;正常不烧伤组4只。烧伤后隔日球结膜下注射0.1mL生理盐水组32只,烧伤后隔日球结膜下注射Avastin0.1mL组32只,烧伤后隔日球结膜下注射地塞米松0.1mL组32只。碱烧伤术后在裂隙灯显微镜下观察大鼠角膜混浊度;宏观测量新生血管长度;组织病理切片HE染色作微血管计数;透射电镜观察超微结构的改变;免疫组化检测角膜VEGF的蛋白表达情况;CD34标记新生血管,显微镜下微血管计数方法研究角膜新生血管形成及抑制情况。结果:治疗组在3,7,10,14d较对照组角膜混浊程度轻(P<0.05);14d形成的新生血管数量较对照组少(P<0.05)。实验组新生血管微血管数量减少,VEGF蛋白表达下降,具有统计学差异。VEGF主要表达在角膜受损区的感染细胞胞质内,其出现时间与位置与角膜新生血管一致。Avastin和地塞米松均可有效抑制角膜新生血管,减少角膜内VEGF表达,两者无统计学差异,结膜下注射Avastin和地塞米松后,大鼠角膜超微结构无除烧伤后其它显著改变。结论:Avastin和地塞米松可抑制角膜新生血管,减少角膜内VEGF表达,对角膜的超微结构均无显著毒性。     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用

目的 分析分泌粒蛋白III (Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法 选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^-1的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d, Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果 角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 ...     

乙酰半胱氨酸对角膜新生血管形成过程中瘦素和PEDF表达的调节

目的　观察大鼠碱烧伤后不同时期角膜组织病理学变化、瘦素和色素上皮衍生因子（ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ,ＰＥＤＦ）的表达以及乙酰半胱氨酸对瘦素和ＰＥＤＦ表达的影响,探讨他们与角膜新生血管（ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ,ＣＮＶ）的关系。方法　使用碱烧伤诱导大鼠ＣＮＶ模型,采用浸润１ｍｏｌ?Ｌ－１ＮａＯＨ溶液,直径为３．０ｍｍ的单片滤纸,准确置于大鼠右眼角膜中央２３ｓ制作ＣＮＶ模型。７５只大鼠随机分成３组,每组２５只,左眼为正常对照眼。Ａ组自烧伤之日起每天滴注ＰＢＳ液;Ｂ组每天滴注乙酰半胱氨酸;Ｃ组烧伤后７ｄ之内每天滴注ＰＢＳ液,７ｄ后每天加滴乙酰半胱氨酸。用裂隙灯显微镜观察ＣＮＶ,分别计算ＣＮＶ长度和面积,并行ＨＥ染色和免疫组织化学检测。结果　Ｂ组ＣＮＶ生长趋势与Ａ组、Ｃ组基本相似,但较Ａ组、Ｃ组生长迟缓,Ｃ组比Ａ组缓慢,但稍快于Ｂ组。Ｃ组角膜病理变化与Ａ组相似,较Ｂ组稍重。除４ｄ时Ａ组和Ｃ组间ＣＮＶ长度及面积差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）外,余时间点组间两两比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学检测显示角膜碱烧伤后,瘦素和ＰＥＤＦ的表达开始增高。伤后７ｄ,各组瘦素表达:Ａ组、Ｂ组、Ｃ组分别为０．２７６１±０１１４４、０２３２２±０．０７４９、０．２６９２±０．０６４６,ＰＥＤＦ表达分别为０．３５２１±０．１０７４、０．３８９９±０．０７２１、０．３５６１±０．１２３３,三组瘦素、ＰＥＤＦ表达总体比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;两两比较显示,Ａ组与Ｂ组、Ｂ组与Ｃ组瘦素、ＰＥＤＦ表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。伤后１４ｄ,各组瘦素与ＰＥＤＦ的表达总体比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;各组间两两比较显示,瘦素、ＰＥＤＦ表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　瘦素和ＰＥＤＦ表达水平与ＣＮＶ的生成具有相关性,乙酰半胱氨酸能有效降低瘦素的表达,提高ＰＥＤＦ的表达。