苦参碱对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的观察苦参碱对大鼠角膜烧伤后新生血管生成的抑制作用。方法选取Wistar大鼠32只,建立碱烧伤角膜新生血管模型,随机分成对照组和3个不同剂量的苦参碱实验组,每组8只(16眼)。模型建立后,实验组大鼠在结膜下注射不同剂量的苦参碱(0.2mg、0.4mg、0.8mg),对照组注射生理盐水,在裂隙灯下动态观察大鼠角膜新生血管生长情况并计算角膜新生血管的面积,观察周期为21d。于造模后4d、7d、14d、21d取不同剂量的苦参碱实验组大鼠角膜进行组织病理学检测,采集各组大鼠的角膜标本,用免疫组化法检测角膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,计算其平均光密度值;采用RT-PCR方法检测各组大鼠角膜组织中VEGF mRNA的表达。结果碱烧伤后4d、7d、14d、21d,与对照组相比,各实验组大鼠新生血管面积明显减少,差异均有显著统计学意义(P<0.01);造模后14d时,不同剂量的苦参碱实验组新生血管密度计数(17.83±2.32、11.00±2.37、10.87±2.41)明显低于对照组(21.11±2.14)(P<0.05);各实验组角膜VEGF的平均光密度值均小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);各实验组VEGF mRNA水平与对照组相比也显著下降(P<0.05)。结论结膜下注射苦参碱对大鼠角膜碱烧伤后的新生血管生长有抑制作用。     

Bevacizumab对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的 观察bevacizumab对角膜新生血管的抑制作用.方法 选取鼠龄6～8周、体质量(180±10)g的雄性Wistar大鼠40只,建立碱烧伤角膜新生血管模型;将大鼠随杌分为3个不同剂量药物治疗组(实验组)和1个对照组,每组10只(20眼),大鼠角膜碱烧伤后分别给予结膜下注射不同剂量(0.5 mg、1.0 mg、2.0 mg)的bevacizumab,对照组注入生理盐水;然后进行角膜新生血管的各项数据观察,观察期为16 d,主要观察项目包括各组角膜新生血管的生长情况;计算角膜新生血管的生长面积;碱烧伤后第7天和第16天后采集角膜,标本行组织病理学检测和免疫组织化学检测,第16天,计算平均OD值;评价药物对角膜新生血管的抑制效果.结果 碱烧伤后第7天、第14天,实验组与对照组新生血管面积比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05);组织病理学检测发现各实验组炎性细胞浸润、新生血管形成均明显轻于对照组.对照组血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)染色明显增强,实验组的表达明显减弱.碱烧伤后第16天,实验组与对照组比较,VEGF染色阳性细胞数和VEGF平均OD值差异均有统计学意义(均为P＜0.05).碱烧伤后第7天、第16天大鼠角膜CD34的免疫组织化学检测结果及新生血管密度计数方面,实验组和对照组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 结膜下注射一定浓度的bevacizumab对大鼠角膜碱烧伤后的新生血管生长有抑制作用.     

克拉霉素抑制碱烧伤角膜新生血管的形成

目的 探讨克拉霉素对角膜新生血管形成及角膜内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 表达的影响.方法 将42只SD大鼠随机分成正常组6只(6眼) 、胃饲克拉霉素60 mg·kg-1的实验组18只(18眼)、胃饲等量生理盐水的对照组18只(18眼).除正常组外,余36只(36眼)制备大鼠角膜碱烧伤新生血管模型.分别于造模后4 d、7 d、14 d运用裂隙灯、免疫组织化学方法观察新生血管长度及面积、VEGF的表达.结果 实验组与对照组比较,新生血管生长度(t4=25.631,P＜0.05;t7=52.663,P＜0.05;t14=24.840,P＜0.05)短、血管面积(t4=27.668,P＜0.05;t7=51.823,P＜0.05;t14=33.854,P＜0.05)小、VEGF表达低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF的表达与角膜新生血管的形成过程密切相关,克拉霉素能减少VEGF的表达来抑制角膜新生血管的发生.     

基质金属蛋白酶抑制剂GM-6001对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用

目的:研究基质金属蛋白酶抑制剂GM-6001对大鼠角膜碱性烧伤后角膜新生血管的抑制作用。方法:取健康成年Wistar大鼠20只,随机分成实验组和对照组,每组10只。两组均建立大鼠角膜碱性烧伤模型。实验组滴用GM-6001滴眼液、氧氟沙星滴眼液和硫酸软骨素滴眼液;对照组滴用氧氟沙星滴眼液和硫酸软骨素滴眼液;各种滴眼液每日点眼4次,共7d。裂隙灯下观察角膜溃疡和角膜新生血管生长情况。结果:碱烧伤后实验组和对照组出现新生血管的时间无显著差异(P>0.05)。新生血管的生长长度与生长面积,在伤后1d和3d,实验组和对照组无显著差异(P>0.05);在伤后5d和7d,实验组和对照组有显著差异(P<0.05)。结论:基质金属蛋白酶抑制剂GM-6001点眼对角膜新生血管的生长有抑制作用。     

大鼠角膜碱烧伤后CD105在新生血管化角膜中的表达

目的:研究大鼠角膜碱烧伤后CD105在新生血管化角膜组织中的表达。方法:采用角膜碱烧伤法对60只Wistar大鼠制作角膜新生血管模型。裂隙灯显微镜下观察大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管生长情况,免疫组化法检测碱烧伤后不同时间角膜组织中CD105的表达。结果:大鼠角膜碱烧伤后2d角膜新生血管开始形成,3～7d生长旺盛,新生血管面积达到最大,10～14d角膜新生血管生长停滞。在新生血管化角膜组织中,CD105于3～7d表达最明显,14d后表达微弱。结论:大鼠角膜碱烧伤后CD105在新生血管化角膜组织中有明显表达。     

蛹虫草提取物联合地塞米松抑制大鼠角膜新生血管

目的:观察蛹虫草提取物(cordyceps militaris extract,CME)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)对大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法:对48只大鼠采用碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型,后随机分为3组:A组为模型对照组,B组为CME治疗组,C组为CME联合Dex治疗组。造模后每组均隔日注射给药,A组给予生理盐水结膜下注射,B组给予CME10mg球结膜下注射,C组给予CME10mg球结膜下注射,另外给予0.25g/L Dex滴眼液点眼,3次/d。于术后4,8,14d测量角膜新生血管的生长面积,并测量角膜组织中VEGF及其mRNA的表达情况。结果:造模后联合用药组的大鼠角膜新生血管生长面积较模型对照组及CME治疗组明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CME联合Dex更能明显抑制碱烧伤所致大鼠角膜新生血管的生长。     

大鼠角膜碱烧伤后CD105在新生血管化角膜中的表达

目的：研究大鼠角膜碱烧伤后CD105在新生血管化角膜组织中的表达。方法：采用角膜碱烧伤法对60只Wistar大鼠制作角膜新生血管模型。裂隙灯显微镜下观察大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管生长情况,免疫组化法检测碱烧伤后不同时间角膜组织中CD105的表达。结果：大鼠角膜碱烧伤后2d角膜新生血管开始形成,3～7d生长旺盛,新生血管面积达到最大,10～14d角膜新生血管生长停滞。在新生血管化角膜组织中,CD105于3～7d表达最明显,14d后表达微弱。结论：大鼠角膜碱烧伤后CD105在新生血管化角膜组织中有明显表达。     

瘦素和血管内皮生长因子在碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管模型中的表达

目的 观察碱烧伤后不同时期角膜的组织病理学变化,以及瘦素和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VFGF)的表达,探讨它们与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的关系.方法 使用碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管模型,采用浸润1 mol·L-1 NaOH溶液、直径为3 mm的单片滤纸,准确置于大鼠右眼角膜中央30 s,制作CNV模型.25只SD大鼠右眼为实验眼,随机分成5组,每组5眼,左眼为正常对照眼.每天用裂隙灯显微镜观察角膜新生血管,分别计算新生血管长度和面积.并行HE染色和免疫组织化学检测.结果 碱烧伤后4 d、7 d、14 d、21 d,实验组CNV面积分别为:(2.55±0.15)m2、(4.15±0.36)mm2、(10.21±0.45)mm2、(8.56±0.06)mm2.免疫组织化学检测显示角膜碱烧伤后1 d,实验组瘦素、VEGF的表达开始增高,碱烧伤后14 d达高峰,14 d后瘦素、VEGF的表达下降,21 d后显著下降;其表达部位主要分布在形成的新生血管区域和上皮层;正常对照组瘦素可微弱表达于角膜上皮层和基质层,VEGF没有表达或仅在上皮基底膜有微弱表达.实验组角膜瘦素、VEGF阳性表达率较对照组明显增加(χ2=29.07,P=0.001;χ2=35.51,P=0.001),瘦素与VEGF的表达具有正相关性(r=0.95,P=0.001).结论 瘦素和VEGF表达水平与角膜新生血管的生成具有相关性,瘦素可能成为治疗CNV的靶点.     

99Tc-MDP对碱烧伤性大鼠角膜新生血管生成的抑制作用

目的: 探讨99Tc-MDP对碱烧伤性大鼠角膜新生血管生成的抑制作用。方法: 采用碱烧伤法制备角膜新生血管模型,24只健康SD大鼠随机分成两组,实验组予以腹腔注射99Tc-MDP,每天1次,至模型建立后14d。对照组以等体积的生理盐水腹腔注射。观察新生血管形成时间、第21d时角膜新生血管长度和新生血管面积。结果: 实验组新生血管长入的时间为6.25±1.93d,对照组长入时间为5.83±1.86d,差异无统计学意义(P=0.30)。新生血管长度实验组为1.74±0.33mm,对照组为2.82±0.25mm;新生血管的面积实验组为17.3±3.26mm2,对照组为24.8±5.10mm2,两者之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论: 使用99Tc-MDP可以有效抑制碱烧伤引起的角膜新生血管的生成。     

反应停对大鼠碱烧伤诱导角膜新生血管的影响

目的:研究反应停(thalidomide)对碱烧伤诱导角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的影响。方法:建立大鼠角膜碱烧伤诱导CNV模型,SD大鼠36只随机分成角膜新生血管对照组(A组)、反应停灌胃组(B组)和反应停球结膜下注射组(C组)。采用裂隙灯照相、免疫组化和RT-PCR等方法,检测碱烧伤后各时间点不同处理方法大鼠CNV的生长情况及VEGF的表达情况。结果:B组和C组的角膜新生血管面积和VEGF的表达均显著少于A组(P均(0.05);C组的角膜新生血管面积和VEGF的表达少于B组(P均<0.05)。结论:反应停可有效抑制大鼠角膜碱烧伤诱发CNV的生长,降低角膜新生血管VEGF的表达。球结膜下注射较全身应用更有效。     

血管抑素对角膜新生血管和VEGF表达的作用

目的:探讨血管抑素(angiostatin,AS)对鼠碱烧伤角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的作用,探讨 AS对CNV的作用及机制。方法:SD大鼠105只随机分为正常对照组(5只)、生理盐水组、地塞米松组、AS1组、AS2组(各25只),除正常组外,实验各组制作左眼碱烧伤CNV模型,分别予生理盐水、1g/L地塞米松液、10μg/mLAS液、20μg/mLAS液点眼,4次/d,于碱烧伤后1,3,7,14,21d运用裂隙灯、免疫组织化学方法观察新生血管长度及面积、VEGF的表达。结果:AS治疗组碱烧伤后第3d起各时间点CNV面积均明显小于盐水组(P<0.05)。碱烧伤后各时间点AS治疗组VEGF表达量均明显少于盐水组(P<0.05)。结论:AS能显著抑制碱烧伤CNV,可能与其抑制VEGF的表达有关。     

Avastin两种用药方法抑制大鼠角膜碱烧伤后早期新生血管增生的比较

目的:探讨avastin滴眼液和结膜下注射方法对SD大鼠角膜碱烧伤后早期新生血管增生的影响。方法:制作SD大鼠角膜碱烧伤动物模型,随机分成3组,A组(对照组)、B组(avastin滴眼液组)、C组(avastin结膜下注射组),每组20只。各组分别在烧伤后3,5,7,14d应用裂隙灯显微镜观察角膜新生血管(cornealneovascu-larization,CNV)增生情况,拍照并计算CNV面积变化。同时每组各处死大鼠5只,摘取角膜组织,采用免疫组织化学方法检测VEGFR-2的表达,免疫荧光法检测CD31表达。结果:A组在伤后各时段CNV增生面积均大于B,C组;B,C组伤后各个时段VEGFR-2及CD31的表达均显著低于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而B,C两组之间CNV增生面积及伤后各时段VEGFR-2及CD31的表达差异无统计学意义(P>0.01)。结论:角膜碱烧伤后早期应用avastin滴眼液和结膜下注射均能有效地抑制CNV生成。     

新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠角膜缘干细胞增殖效应的影响

目的：观察新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠模型角膜缘干细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。

方法：SD大鼠40只40眼制作眼碱烧伤模型; 随机选取20只20眼行新鲜羊膜移植为实验组,对照组为不处理的烧伤模型眼。于术后1,2,3,4wk取角膜缘组织,采用免疫组化技术观察PCNA在角膜缘干细胞的表达情况。

结果：PCNA在实验组和对照组的角膜缘干细胞中均有表达,位于角膜缘上皮细胞基底层的细胞核内,但羊膜移植组显著高于对照组,两者比较有统计学意义(P<0.05); 羊膜移植术后1,2,3,4wk时PCNA蛋白在角膜缘干细胞的表达不一致,呈线性趋势,1wk达到高峰,以后逐渐降低。

结论：眼碱烧伤后行羊膜移植术可促进角膜缘干细胞的增殖表达,利于角膜上皮的修复。     

人羊膜匀浆提取液抑制大鼠角膜碱烧伤后新生血管生成

目的:研究人羊膜匀浆提取液对角膜碱烧伤后新生血管形成过程中色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived fac-tor,PEDF)和血管内皮生长因子(vascular-endothelial growthfactor,VEGF)的表达影响及对角膜新生血管的抑制作用。方法:SD大鼠54只建立双眼角膜碱烧伤模型,随机分为3组:A组为3g/L氧氟沙星滴眼液组,B组为10g/L泼尼松龙滴眼液组,C组为新鲜人羊膜匀浆提取液组,并分别于治疗后不同时间点进行角膜新生血管增生情况观察,HE染色病理学观察,免疫组化行VEGF和PEDF的表达检测。结果:B,C组比A组新生血管增生少,多形核白细胞(poly-morphonuclear leukocyte,PMN)浸润程度轻,VEDF表达水平显著降低,但B,C两组之间VEDF表达无显著性差异(P>0.05)。C组PEDF表达水平显著高于A,B组(P<0.01),但A,B之间PEDF表达无显著性差异(P>0.05)。结论:新鲜人羊膜匀浆提取液能减少碱烧伤后角膜组织中PMN浸润,增强角膜组织PEDF的表达水平。     

羊膜移植对大鼠角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶的影响

目的探讨羊膜移植对大鼠角膜中度碱烧伤后角膜上皮细胞和基质成纤维细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)变化的影响。方法将12只SD大鼠随机分成2组，每组6只，分别作为碱烧伤后1d组和14d组。在2组中，所有大鼠角膜建立中度碱烧伤模型，左眼行羊膜移植，右眼作为对照。应用免疫组化法，分别观察碱烧伤后1d和14d实验组与对照组中MMP-9和MMP-2表达的变化。结果碱烧伤后1d，实验组与对照组中，角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与正常角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达相比明显升高，但两组间的表达差异无显著性；而2组成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与正常成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达相比明显升高，两组间的表达差异无显著性。碱烧伤后14d，2组中角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与碱烧伤后1d情况相似，两组间的表达差异无显著性；2组成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与碱烧伤后1d组相比明显升高，并且实验组中的MMP-9和MMP-2的表达与对照组相比也有明显升高。结论碱烧伤后大鼠角膜上皮细胞和基质成纤维细胞中的MMP-9和MMP-2的表达都有升高。羊膜移植能增强MMP-9和MMP-2在成纤维细胞中的表达，提示羊膜在加快角膜碱烧伤后的重塑中起一定作用。     

氢气水对大鼠碱烧伤角膜新生血管抑制作用的研究

目的　研究氢气水（H₂水）滴眼对大鼠碱烧伤诱导角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）的抑制作用并探讨H₂水抑制CNV的机制。方法　SPF级SD大鼠48只48眼,成功建立碱烧伤诱导CNV模型,随机分为空白组、对照组和治疗组。治疗组给予1.6×10^-6 H₂水滴眼,对照组给予妥布霉素地塞米松眼液滴眼,空白组不做任何处理。分别在模型建立后第1天、第3天、第7天、第14天测量CNV长度,计算CNV面积。碱烧伤后第14天深麻醉下取大鼠角膜及房水,免疫组织化学染色法检测角膜组织中PEDF蛋白表达,RT-PCR法检测角膜组织中PEDF mRNA表达,ELISA检测房水内TNF-α蛋白表达。结果　角膜碱烧伤后第3天、第7天、第14天,治疗组新生血管面积分别为（3.26±1.82）mm²、（8.59±3.98）mm²和（3.24±2.34）mm²;对照组分别为（4.27±2.68）mm²、（6.44±4.67）mm²和（15.98±4.75）mm²;空白组分别为（9.49±2.79）mm²、（17.71±4.06）mm²和（25.35±1.40）mm²。碱烧伤后第3天、7天和14天,治疗组和对照组均小于空白组,差异均有显著统计学意义（均为P＜0.01）;碱烧伤后第3天和第7天,治疗组与对照组差异均无统计学意义（均为P>0.05）;碱烧伤后第14天治疗组明显小于对照组,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。碱烧伤后第14天,免疫组织化学染色结果显示,治疗组角膜上皮层PEDF蛋白表达较对照组和空白组明显增强,基质层新生血管极少;RT-PCR检测结果显示,治疗组PEDF mRNA表达明显高于对照组和空白组,差异均有显著统计学意义（均为P＜0.01）;ELISA检测结果显示,治疗组房水中TNF-α蛋白含量明显低于对照组与空白组,差异均有显著统计学意义（均为P＜0.01）。结论　1.6×10^-6 H₂水滴眼能有效抑制大鼠碱烧伤诱导的CNV。     

Correlation of ischemic ophthalmopathy with lacunar infarction

AIM: To investigate the effects of nintedanib thermo-sensitive hydrogel (NTH) on neovascularization and related markers in corneal alkali burns of Wistar rats. METHODS: NTH was prepared by grinding, and its phase-transition temperature was determined. Thirty specific-pathogen-free Wistar rats served as a model of corneal alkali burn in the right eye were randomly divided into 3 groups (n=10, each): model group treated with 0.9% saline once a day, NTH group with 0.2% nintedanib b.i.d, and dexamethasone (DEX) group with DEX ointment once a day. The left eye of rats served as the controls. The corneal transparency was observed under a slit-lamp microscope, and the area of neovascularization was calculated. On day 7, the rats were sacrificed, and the cornea was removed and embedded with paraffin, then stained with hematoxylin-eosin, and the expression of VEGFR-2 and CD31 in the corneal tissues of each group was detected by immunofluorescence. RESULTS: The phase-transition temperature of nintedanib obtained by grinding was 37°C after adding artificial tears. The results of the alkali burn model indicated that the growth rate of neovascularization in the NTH group was slower than that in the model group, and the neovascularization area was significantly smaller than that in the model group (P<0.05). Moreover. CD31 and VEGFR-2 expression levels in the NTH group were significantly lower than those in the model group. CONCLUSION: NTH becomes colloidal at body temperature, which is beneficial for releasing the drug slowly and can significantly inhibit the neovascularization of corneal induced by alkali burn in rats.