一株沃氏葡萄球菌耐药基因的研究

目的：研究沃氏葡萄球菌多重耐药情况和相关机制。方法：采用聚合酶链反应（PCR）法对一株多重耐药沃氏葡萄球菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素B类（MLSB）基因、四环素类基因、糖肽类基因、消毒剂基因检测。结果：PCR结果显示该株的mecA,TEM,ermA,ermC,msrA,msrB,aac（6′）/aph（2″）,qacA基因均为阳性,ant（4′,4″）,aph（3′）-,TetM,vanA,vanB基因均为阴性。结论：该株沃氏葡萄球菌存在多重耐药基因,而且对胺类、胍类消毒剂耐受。     

医院感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因分析

目的探讨医院感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因的存在情况。方法对2006年6至7月临床分离的20株医院感染MRSA进行mecA、tetM、aac（6′）/aph（2″）、aph（3′）Ⅲ、ant（4′4″）耐药基因检测。结果20株MRSA检出m ecA阳性率为100%,aac（6）′/aph（2″）阳性率75%,tetM阳性率70%,aph（3′）Ⅲ阳性率40%、ant（4′4″）阳性率为20%。结论多数MRSA菌株存在耐β-内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类等多种抗生素耐药基因,与表型一致,表型与遗传学均支持MRSA具有耐多药特征。     

表皮葡萄球菌携带甲氧西林等五类抗生素耐药基因分析

本研究就53株MRSE菌进行了β内酰胺类耐药基因（TEM、OXA、SHV、mecA）、大环内酯类耐药基因（ermA／B／C、ermF、mefA）、四环素类耐药基因（tetM）、氨基糖苷类耐药基因（aac6′／aph2″）和糖肽类耐药基因（vanA、vanB、vanC1、vanC2／C3）检测，其目的是了解本院MRSE临床分离株耐药基因携带状况，以指导临床合理用药。     

铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的了解铜绿假单胞菌（PA）对β－内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类药物耐药基因的分布情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对PA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素类基因、耐消毒剂和磺胺类基因进行检测。结果PCR结果显示40株PA对17种耐药相关基因检出率分别为TEM80％、OXA．112．5％、OXA-1077．5％、CTX-M117．5％、DHA22．5％、IMP5％、aac（3）．Ⅱ90％、aac（6’）-I90％、aac（6’）-Ib65％、ant（2”）-I70％、catB78％、cmlA2．5％、qacE△l-stil1 92．5％。VIM-2、VEB、GES基因均为阴性、Opr D2基因未见缺失。同一患者不同时间分离株耐药基因可不同。结论在40株PA中,B一内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因检出率较高,耐消毒剂基因检出率很高,应该引起高度重视。     

大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及耐药基因检测

目的：了解大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况与耐药基因携带情况。方法：使用K-B法检测大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类抗生素的耐药基因以明确其基因型。结果：40株大肠埃希菌中耐氨基糖苷类抗生素菌株32株,耐药率为80.0%（32/40）,其中aac（3）-Ⅰ 2株,占6.3%（2/32）,aac（3）-Ⅱ 28株,占87.5%（28/32）,aac（6′）-Ⅰ 12株,占37.5%（12/32）,aac（6′）-Ⅱ 8株,占25%（8/32）,ant（2″）-Ⅰ 4株,占18.8%（6/32）,ant（3″）-Ⅰ 9株,占28.1%（9/32）。结论：耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6′）-Ⅰ为主。     

某院多重耐药鲍曼不动杆菌菌株亲缘性分析

目的了解新疆地区鲍曼不动杆菌（A.baumannii,ABA）β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因、氯己定-磺胺耐药基因存在状况。方法对20株ABA菌进行了9种β-内酰胺酶基因、3种氨基糖苷类修饰酶基因和氯己定-磺胺耐药基因检测。以耐药基因为分子标记作检测结果的样本聚类分析,分析菌株亲缘性。结果 20株ABA菌中blaTEM阳性13株（65%）、blaADC阳性12株（60%）、blaSHV阳性1株（5%）,其余β-内酰胺酶基因均阴性;20株ABA菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅰ阳性12株（60%）、aac（6′）-Ⅰ阳性13株（65%）、ant（3″）-Ⅰ阳性14株（70%）;14株检出qacE△1-sul1基因（70%）。以耐药基因为分子标记作检测结果的样本聚类分析显示,其中9株为克隆传播。结论该20株菌β内酰胺类、氨基糖苷类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶密切相关,并存在克隆传播。     

一株多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的研究

目的：研究铜绿假单胞菌多重耐药情况和相关机制。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）法对一株多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素类基因、耐消毒剂和磺胺类基因检测。结果：PCR结果显示该株PA的TEM,MIR,CTX-M1群,OXA-1群,OXA-10群,aac（6′）-b,aac（6′）-,aac（3）-,ant（2″）-,catB,qacE△1-sul1基因均为阳性,GES,DHA,VEB,cmlA基因均阴性,Opr D2未缺失。结论：该株铜绿假单胞菌存在多重耐药基因,而且对胺类、胍类消毒剂耐受。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药基因检测

目的 了解金黄色葡萄球菌（金葡菌）β内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药基因的分布特点，评估耐药性基因型与表型测定法的相关性。方法 聚合酶链反应（PCR）测定本地分离100株金葡菌的β内酰胺类耐药基因mecA、氨基糖苷修饰酶基因aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、ant（4′，4″）、大环内酯类23s rRNA甲基化酶基因erm、四环素类核糖体保护蛋白基因tetM的发生率，纸片扩散法测定苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素的耐药性。结果 100株受试菌中mecA阳性66株（MRSA），最常见的耐药基因是erm＋tetM，存在于89．4％的MRSA中，最少见的是ant（4′，4″），存在于4．5％的MRSA中，MRSA的aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM检出率分别为97．.％、72．7％、100％、89．4％，明显高于MSSA的11．8％、2．9％、44．1％、8．8％；66株MRSA中，43株（65．2％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM4种基因，58株（87．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因，34株MSSA中，仅2株（5．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因；苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素与其相应的耐药基因mecA、age（6′）／aph（2″）、erm、tetM的符合率分别为96％、99％、96％、84％，81株红霉素表型耐药菌中79株（97．5％）为大环内酯．林可霉素．链霉菌素B（MLS8）结构型耐药。结论耐药基因在金葡菌中均可检出，金葡菌对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药与苯唑西林耐药紧密相关，大环内酯类主要是结构型耐药，基因型与表型测定有较高的符合率。     

云浮地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的研究云浮地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用K-B法进行药敏实验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因检测,并进行测序。结果 25株铜绿假单胞菌未发现对多黏菌素B耐药,其余抗生素耐药率均大于50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为20%、32%、24%、28%和24%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、SHV、DHA-1、PER和IMP-9基因阳性率分别为32%、12%、8%、12%、12%和12%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60%。结论本地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

铜绿假单胞菌ICU分离株耐药基因分析

为了解自我院ICU住院病人分离到的铜绿假单胞菌（Pseudornonas aoruginosa,Pa）对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素耐药的原因,我们用分子生物学技术检测了15种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因（TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、FOX、MOX和oprD2）,6种氨基糖苷类修饰基因[aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅱ,结果如下。     

铜绿假单胞菌耐药基因分子流行病学调查

目的了解云南省昆明某医院临床铜绿假单胞菌分离株耐药特征及耐药基因分子流行病学特征,为临床治疗与控制院内感染提供依据。方法 2013年6 9月共收集全院不同病区感染患者28株铜绿假单胞菌。微生物自动分析仪鉴定菌株及耐药分析。PCR扩增及序列分析β-内酰胺酶bla基因、氟喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因及IS插入元件及整合子。脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分析菌株间遗传变异关系。结果全部菌株呈现多重耐药且存在有广泛耐药性(extensively drug-resistant,XDR)及泛耐药性(pendrug-resistant,PDR)菌。100%(28/28)菌株对一代/二代及大部分三代/四代头孢霉素、磺胺类及叶酸代谢途径抑制剂耐药。85.7%(24/28)菌株对碳青霉烯类抗生素美罗培南(MEM)、亚胺培南(IMP)耐药,50.0%(14/28)菌株对厄他培南(ETP)耐药。92.9%(26/28)菌株同时携带β-内酰胺酶基因、氟喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因,且菌株间基因谱存在较大不同。blaFOX/qnr B/aac A4为主要耐药基因谱(21.4%,6/28)。57.1%(16/28)菌株携带int1整合酶基因,21.4%(6/28)菌株携带ISCR1插入元件,35.7%(10/28)菌株携带ISEcp1插入元件。PFGE显示14株菌株分为8个克隆群。结论本研究铜绿假单胞菌分离株存在较高耐药率,多种耐药基因存在不同克隆菌株中,提示耐药基因在菌株间及不同菌种间存在快速传播风险。     

溶血葡萄球菌vga（A）LC基因与克林霉素耐药分析

目的调查溶血葡萄球菌vga（A）LC基因与克林霉素耐药特点。方法用琼脂稀释法测定红霉素和克林霉素对63株溶血葡萄球菌的MIC，PCR技术检测vga（A）LC及其他克林霉素耐药相关基因。结果23株受试菌对克林霉素耐药，其中2株对红霉素敏感（MIC均为0．25mg／L），对克林霉素耐药（MIC均为8mg／L），vga（A）LC基因检测均阳性；6株结构型大环内酯类-林可酰胺类-链阳菌素B类（MLSB）耐药，15株诱导型MLSB耐药，均未检出vga（A）LC基因；1株结构型MLSB耐药菌携带ermB基因，5株结构型MLSB和15株诱导型MLSB耐药菌均携带ermC基因；10株克林霉素耐药菌携带linA／linA’基因。结论我院发现携带vga（A）LC基因的溶血葡萄球菌。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物获得性耐药基因研究

目的了解重症监护病房（ICU）患者分离的广泛耐药（XDR）-鲍曼小动杆菌（AB）对氨基糖苷类药物获得性耐药基因情况。方法用phoenix-100全自动细菌鉴定药物敏感性分析仪对AB进行细菌鉴定和药物敏感性试验,gyrA和parC基因扩增测序确定AB。聚合酶链反应（PCR）测定20株XDR—AB的10种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因和外排泵adeB基因,并用DNA测序比对。结果20株XDR—AB中,氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（6’）-Ib、ant（3”）-I、aph（3’）-I检出率分别为90．0％、30．0％、95．0％、95．0％,而aac（3）-lI、aac（6’）-Iad、aac（6’）-lI、ant（2”）-I、ant（4’）-I及aph（3’）-VIa基因均未检出。armA型16SrRNA甲基化酶基因和外排泵adeB基因检出率均为100％。结论20株XDR—AB均携带rarmA和adeB基因,同时aac（3）-I、ant（3”）-I和aph（3）-I检出率较高,提示ICU分离的XDR—AB对氨基糖苷类药物高水平耐药可能与携带的耐药基因有关。     

多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药性及其耐药基因(ant)的研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物修饰酶的耐药性及其耐药基因。方法用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、链霉素、卡那霉素、妥布霉素、奈替米星、新霉素7种药物对20株多重耐药性鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）;用PCR法检测两种氨基糖苷类药物核苷转移酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果庆大霉素、阿米卡星、链霉素、卡那霉素对20株鲍曼不动杆菌的MIC50和MIC90均大于1024mg／L,耐药率分别为95％、95％、100％和90％;而妥布霉素、奈替米星和新霉素的耐药率分别为85％、90％、40％。从20株菌中检出ant（2”）-I、ant（3”）-I两种修饰酶基因,阳性率分别为55％、80％,10株细菌两种基因同时阳性,占50％。结论鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药与ant（2”）-I、ant（3”）-I基因有非常密切的关系。     

产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类药物耐药基因研究

目的了解本院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖苷类的耐药情况及耐药基因的表达状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法检测aac(3)-Ⅱ、aac(6′-)I、ant(2′′-)I、ant(3′′-)I、aac(3-)I等5种氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因。结果在临床分离的75株大肠埃希菌中共检出产ESBLs菌47株(62.67%);产ESBLs菌携带A-MEs基因检出情况,阳性率从高到低为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′-)I、ant(2′′-)I、ant(3′′-)I、aac(3-)I。产ESBLs菌耐药情况从高到低依次为:链霉素、庆大霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星。结论大肠埃希菌产ESBLs率显著升高,耐药性增加;有些菌株同时携带两种或两种以上AMEs基因;ESBLs的产生可使大肠埃希菌对氨基糖苷类抗菌药物(AGs)的耐药情况加重。     

烟台地区嗜麦芽窄食单胞菌整合子分布及其可变区所携带耐药基因盒的研究

目的：分析嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药性,探讨明确嗜麦芽窄食单胞菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子的存在情况以及所携带的耐药基因盒,为本地区更好地预防和控制嗜麦芽窄食单胞菌感染性疾病提供帮助。方法收集临床分离的51株嗜麦芽窄食单胞菌采用微量肉汤稀释法测定嗜麦芽窄食单胞菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。根据 GenBank 注册的基因序列设计引物,PCR 扩增Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子。对整合子阳性菌株扩增其可变区产物进行测序分析,所得结果在 GenBank数据库中进行同源性比对,了解可变区中含有基因盒的信息。结果（1）51株嗜麦芽窄食单胞菌标本来源分布以痰液最多,为41株,占80．39％,感染人群主要以60岁以上年龄段为主,为38株,占74．5％。病房分布：重症监护室（ICU）20株,占39．22％;呼吸内科13株,占25．49％;干部病房6株,占11．76％,所占比例较大。（2）药敏结果显示嗜麦芽窄食单胞菌对多数常用抗菌药物耐药性较高,部分菌株表现出对9种以上抗菌药物的多重耐药。（3）51株嗜麦芽窄食单胞菌 PCR 基因扩增结果7株菌Ⅰ类整合子阳性（13．7％）,没有检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子,Ⅰ类整合子可变区携带的耐药基因包括 aacA4、aadA1、catB8、dfrA17和 aphA15五种。结论嗜麦芽窄食单胞菌对多数常用抗菌药物耐药性较高,部分菌株表现出多重耐药性。Ⅰ类整合子是嗜麦芽窄食单胞菌多重耐药的重要因素之一。