中西医结合法逆转人结肠癌多药耐药的实验研究

目的探讨中西医结合方法逆转人结肠癌耐药株多药耐药的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-氟尿嘧啶(5-Fu)对实验组及对照组细胞的细胞毒作用,测定其半数抑制浓度,计算其逆转倍数(RI),并用流式细胞仪测定细胞内罗丹明的滞留浓度,分析P-糖蛋白的滞留浓度。结果中西医结合法可以明显增加化学治疗药物对结肠癌耐药细胞的杀伤作用(P<0.05),逆转了其多药耐药作用,逆转指数为2.92,并减少了P-糖蛋白对化学治疗药物的外排。结论中西医结合法对结肠癌多药耐药逆转效果明显,其机制可能与其中药成分抑制P-糖蛋白的外排作用有关,值得进一步研究开发。     

人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1/TAX的耐药机制初探

目的 初步探讨人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1／TAX的耐药机制。方法 免疫组织化学S-P染色法检测多药耐药基因mdr1的表达产物P-糖蛋白(P-go)。结果 在人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A1／TAX与其亲本细胞系SPC-A1中P-gp的表达均为阴性。结论 该多药耐药细胞系的多药耐药性(MDR)表型可能是非P-gp机制的。     

多药耐药的研究进展

目的：探讨肿瘤多药耐药的研究新进展。方法：阅读国内外有关文献并进行综述。结果与结论：恶性肿瘤的综合治疗中化学疗法是重要手段之一,然而肿瘤的原发或继发对化疗药物的多药耐药(MDR)是目前肿瘤病人化疗失败的主要原因。     

甲状腺癌多药耐药基因MRP、P-gp的表达及临床意义

目的　探讨多药耐药相关蛋白 (MRP)和P 糖蛋白 (P gp)在甲状腺癌中的表达及临床意义。方法　采用免疫组化SP法回顾性检测分析 80例甲状腺癌组织MRP和P gp表达状况。结果　MRP和P gp表达阳性率分别为 86 .3%、76 .3% ,二者有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,两者在甲状腺癌各类型中表达较一致 ,乳头状癌和髓样癌表达阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,滤泡癌中表达阳率明显低于乳头状癌和髓样癌 (P <0 .0 5 )。MRP与P gp共表达率为 76 .3% (6 1/ 80 ) ,具有相关性(P <0 .0 1)。结论　MRP和P gp在甲状腺癌中阳性率较高 ,提示甲状腺癌对化疗有一定多药耐药性。     

抑制P-糖蛋白表达逆转视网膜母细胞瘤多药耐药研究

目的:探讨应用RNA干扰(RNAi)技术逆转视网膜母细胞瘤多药耐药的可行性。方法:将设计合成的针对多药耐药基因MDR1的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体转染具有MDR1基因高表达的视网膜母细胞瘤耐药细胞株SO-Rb50/VCR。用实时定量RT-PCR技术和Westernblot分别测定转染前后细胞MDR1mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达的变化;用CCK-8法和TUNEL法检测转染前细胞株(VCR组),转染后细胞(VCR+siRNA组)对不同浓度长春新碱、依托泊苷和卡铂药物敏感性。结果:VCR+siRNA组较VCR组比较,MDR1基因在mRNA水平和蛋白水平表达显著下降,差异具有统计学意义。随着长春新碱、依托泊苷浓度的升高VCR+siRNA组较VCR组比较,细胞存活率显著降低,差异具有统计学意义。不同浓度的卡铂作用于VCR组、CT组和VCR+siRNA组细胞存活率、细胞凋亡率各组见未见显著性差异。随着长春新碱、依托泊苷浓度的升高,VCR+siRNA组较VCR组比较,细胞凋亡率显著性升高,差异具有统计学意义。结论:在SO-Rb50/VCR细胞中,针对MDR1合成的siRNA能够有效地抑制MDR1mRNA和P-gp的表达,并能恢复肿瘤细胞对长春新碱和依托泊苷的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转Pgp引起的视网膜母细胞瘤多药耐药性。     

中药拮抗P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药机制的研究进展

综述了近年来中药提取物拮抗P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药机制的研究进展。中药通过多种途径抑制P-糖蛋白的表达和其功能而拮抗多药耐药。许多中药成分既可以从转录和翻译水平抑制P-糖蛋白的表达，还可以通过与抗癌药物竞争P-糖蛋白的药物或ATP结合位点、或通过对肿瘤细胞膜或Ca^2 浓度的影响等而抑制P-糖蛋白的功能。另外，有的中药可以通过增强细胞免疫功能而拮抗P-糖蛋白介导的多药耐药。     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立

目的：体外建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法：以泰素为诱导药，人肺腺癌细胞系SPC—Al为诱导对象，逐步增加泰素浓度冲击，以一定浓度的泰素维持培养共计24周后，光镜观察细胞形态，用MTS方法进行细胞耐药检测。结果：SPC—Al／TAX形态不规则，对阿霉素、长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5—氟脲嘧啶、泰素(紫杉酵)六种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论：建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC—Al／TAX，用于研究其多药耐药性的机制及逆转等下游实验。     

肿瘤多药耐药逆转剂的研究进展

本文主要从近年国内外研究较热门的化学及中药多药耐药(MDR)逆转剂,以及逆转方法等方面,概括目前MDR逆转剂的研究现状,旨在探讨该领域的研究重点和发展方向,为新型MDR逆转剂的发现寻找思路.     

恶性肿瘤多药耐药研究进展

多药耐药是肿瘤化疗的主要障碍，然而其形成机制非常复杂，单个耐药细胞可以同时具有多种抗药机制，而每个机制又可使肿瘤细胞对不同类型的抗肿瘤药产生多种耐药表型。现将肿瘤细胞多药耐药的研究进展简述如下。     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的 建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法 以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系SPC-A-1为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP;MTT法测定药物敏感性,透射和扫描电镜观察形态变化,常规染色体检测分析染色体变化。结果 用192d建成人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP,它对顺铂的耐药指数为11.2,对顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱和足叶乙甙等药物有不同程度的耐药性,但对羧基喜树碱无耐药性,电镜观察可见SPC0-A-1/CDDP细胞胞核不规则,较大,有丰富的微绒毛。结论 本研究建立了稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系（SPC-A-1/CDDP）,可应用于下游实验。     

多药耐药细胞系HL-60/Mx的建立

目的 探讨建立多药耐药（MDR）白血病细胞系的简便方法。方法 HL－60细胞反复暴露于浓度递增的米托蒽醌（Mx）培养液中，暴露间期维持低浓度培养；MTT法检测耐药性改变，并对其P糖蛋白（P－170）、多药耐药相关蛋白（MRP）表达进行免疫组化检测。结果 ①HL－60／Mx细胞系对多种化疗药物产生耐药。②MRP阳性表达率增高。结论 本方法为建立耐药HL－60细胞系的有效方法。     

Chemoprotection of transfer of multidrug resistance gene into human hematopoietic progenitor cell

Ｍｏｓｔｏｆｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｅｓａｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔｈｅｍａｉｎｄｏｓｅ ｒｅｌａｔｅｄｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍａｎｙｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｄｒｕｇｓ Ｓｔａｎｄａｒｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｔｈｉｓｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｖｏｌｖｅｓｔｈｅｕｓｅｏｆｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎａｌｓｕｐｐｏｒｔ,ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ,ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｃｕｅ ,ａ…     

转基因法建立膀胱癌多药耐药细胞株

目的:建立高效、稳定的人膀胱癌多药耐药性细胞模型。方法:采用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1( )/bcl-2,通过脂质体将人bcl-2基因转染膀胱癌细胞BIU-87,RT-PCR检测基因转录水平,应用MTT比色法进行耐药性检验。结果:酶切鉴定和基因测序证明真核表达载体pcDNA3.1( )/bcl-2构建成功;RT-PCR分析表明,转染bcl-2基因的BIU-87/bcl-2细胞的bcl-2基因表达水平较BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞显著提高;与BIU-87细胞和BIU-87/neo细胞相比,BIU-87/bcl-2细胞具有较高的耐药性。结论:基因转染法是建立人膀胱癌多药耐药细胞模型的理想方法。     

索拉非尼逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨索拉非尼体外对人肝癌细胞(BEL-7402/FU)多药耐药性的逆转作用及可能机制.方法 以MTT比色法测定索拉非尼对肝癌细胞的剂量效应曲线,并以流式细胞仪检测索拉非尼对肝癌细胞内罗丹明123 (Rho123)浓度的影响,根据上述实验结果选取合适的索拉非尼实验剂量.以MTT法测定索拉非尼对抗癌药物细胞毒性的影响,用流式细胞仪检测细胞膜转运蛋白(P-gp)的表达,RT-PCR法检测mdr1基因的表达.结果 索拉非尼浓度在4μmol/L时逆转效率较高且毒副作用较小,4 μmol/L的索拉非尼能部分逆转BEL-7402/FU细胞的耐药性,对ADM、5-FU、GEM、DDP的逆转倍数分别为2.98、7.16、1.99、10.08倍,并可部分下调BEL-7402/FU细胞P-gp的表达,使mdrl基因表达与对照组相比下降了27.3%.结论 索拉非尼具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1基因表达、增加细胞内化疗药物的蓄积有关.     

人结肠癌耐药细胞系HT29/L-OHP的建立及其生物学特性

目的建立人结肠癌奥沙利铂耐药细胞系HT29／L-OHP,探讨结肠癌对奥沙利铂（Oxaliplatin,L-OHP）产生耐药的特征规律和耐药的机制。方法采用逐步递增L-OHP浓度,间歇作用体外诱导法培养建立了人结肠癌L-OHP耐药细胞模型HT29／L-OHP。MTT法测定生长曲线、交叉耐药性和耐药指数;并用光镜、电镜、流式细胞仪（FCM）等方法观察其一般生物学特性的改变。结果历时3个月建成了L-OHP耐药细胞模型HT29／L-OHP,其耐药性能稳定,耐药指数为10．64;并且与5-氟尿嘧啶、长春新碱、阿霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性。HT29／L-OHP的细胞形态及染色体数目发生了改变;体外细胞群体倍增时间较亲代细胞延长29．71h;细胞周期分析结果显示其S期与G0／G1期细胞减少、G2／M期细胞增多。结论HT29／L-OHP细胞是模拟临床用药特点建立的耐药性较稳定的多药耐药细胞,具有耐药细胞的基本生物学特性,是研究L-OHP耐药机制及筛选逆转剂的理想细胞模型。     

应用抑制消减杂交（SSH）克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因

目的 克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异性表达基因。方法 将肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）作为实验组。肺腺癌细胞（SPC-A-1）作为对照组,应用抑制消减杂交技术,构建实验组特异表达cDNA消减文件;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序序和同源性分析（Genebank）。结果 建立了一个肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDPP）特异表达cDNA消减文库,斑点杂交初步筛选显示23个克隆中有SPC-A-1/CDPP特异表达cDNA片断,测序和同源性分析表明2个cDNA片断为新序列,其余cDNA片断与已知基因有96%～100%的同源性。结论 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。     

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1d（HIF-1α）、多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP1）在脊索瘤细胞系CM－319中的表达及临床意义。[方法]用RT—PCR检测HIF－1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF－1α、MRPl蛋白在CM－319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF～1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达（P〈0．01）,间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF－1α和MRP1相关。     

食管、贲门癌组织中P-糖蛋白与多药耐药相关蛋白的表达

目的:检测食管癌、贲门癌组织中P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达.方法:应用免疫组化方法检测50例食管癌、50例贲门癌及各自相应癌旁正常组织中P-gp和MRP的表达.结果:食管癌与相应癌旁正常组织中P-gp的阳性表达率分别为2%,2%,而MRP为76%和42%;贲门癌与相应癌旁正常组织中P-gp的阳性表达率为54%,30%,而MRP为42%与20%.食管癌组织中MRP的表达、贲门癌组织中P-gp和MRP的表达均高于相应癌旁组织(P＜0.05).MRP与食管癌的分化程度有关,P-gp与MRP与贲门癌的分化程度有关(P均＜0.05).2者与食管癌或贲门癌的浸润深度、淋巴结转移均无关(P＞0.05).食管贲门癌组织中MRP与P-gp的表达无相关性(rs=0.173,P＞0.05).结论:食管癌的多药耐药与MRP有关;而贲门癌的多药耐药则为P-gp和MRP共同参与.P-gp和MRP可反映食管贲门癌的分化程度,但不能反映其浸润和转移等生物学特征.     

Effects of arsenic trioxide on drug transporting molecules in multidrug resistance malignant neoplasma MR2 cell line

INTRODUCTIONIn recent ye ars, some studies have introducedAs2O3 into the treatment of acute promyelocyticleukemia (APL) with the complete clinical remission(CR) rate of 52.3￣93.7%[1,2]. Studies in vitro haveconfirmed that As2O3 can induce apoptosis of retinoicacid-resistant APL cell line[3]. As2O3 has been also ap-plied in the treatment for refractory primary hepaticcancer [4] with satisfactory result [5]. The drug resis-tance of tumor is correlated with the drug transport-ing molec…