δ阿片受体激活诱导心肌细胞增殖的信号转导途径

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽(DADLE)诱导心肌细胞增殖的可能信号途径。方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用结晶紫法和[3H]TdR检测心肌细胞的增殖;Western印迹法测心肌细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平。结果DADLE1μmol.L-1增强心肌细胞ERK磷酸化,促进心肌细胞增殖,δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol.L-1,蛋白激酶C(PKC)特异性抑制剂星形孢菌素1μmol.L-1和ERK特异性抑制剂U012610nmo.lL-1明显降低ERK磷酸化水平,抑制DADLE的促心肌细胞增殖作用。结论DADLE可能通过δ阿片受体活化PKC,进而激活有丝分裂原激活蛋白激酶ERK通路诱导心肌细胞增殖。     

δ阿片受体激活对过氧化氢损伤的心肌细胞的保护作用

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮-(5)-脑啡肽(DADLE)对过氧化氢(H2O2)损伤的心肌细胞的保护作用及其机制。方法分离乳大鼠心肌细胞,培养48h后分为正常对照、H2O2(200μmol.L-1)、H2O2+DADLE(1μmol.L-1)、H2O2+DADLE+纳曲吲哚(10μmol.L-1)和H2O2+DADLE+U0126(10nmol.L-1)组,继续培养48h。用[3H]TdR掺入法检测心肌细胞增殖反应,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒测定培养上清LDH活性,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK)水平。结果①与正常对照组比较,H2O2组心肌细胞[3H]TdR掺入值明显降低,细胞凋亡率升高;培养上清LDH活性和MDA含量明显增加,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值降低。②与H2O2组比较,DADLE可使心肌细胞[3H]TdR掺入值升高,细胞凋亡率下降;培养上清LDH活性和MDA含量降低,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值升高。③分别加入δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚和ERK拮抗剂U0126,DADLE对上述指标的逆转作用被抑制。结论δ阿片受体激活对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其增强心肌细胞的抗氧化功能及促进ERK磷酸化有关。     

δ阿片受体激活对依赖于PKC路径的血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨δ阿片受体激活对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法新生大鼠心肌细胞分为对照、模型、D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽DADLE 0.1μmol.L-1;DADLE 0.1μmol.L-1+naltrindole(δ阿片受体拮抗剂)10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+GF109203X 10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+staurosporine 1μmol.L-1组;分组给药48 h后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪测心肌细胞的凋亡指数;流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测心肌细胞的胞质内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达及蛋白激酶C(PKC)的表达。结果δ阿片受体激动剂DADLE能明显抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡,表现为细胞存活率升高,凋亡率下降,G0/G1百分比降低,G2/M百分比增加;caspase-3蛋白表达明显下降;PKC蛋白表达明显升高;加入naltrindole可以阻断DA-DLE对心肌细胞凋亡的抑制作用,加入GF109203X和stau-rosporine可明显拮抗DADLE抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率升高;G0/G1百分比增加,G2/M百分比降低;caspase-3的蛋白表达明显升高;PKC表达明显降低。结论δ阿片受体激活后通过活化PKC通路抑制血清饥饿所致的心肌细胞凋亡。     

C—末端截短δ阿片受体的结合特征

目的：研究δ阿片受体Ｃ－末端在受体结合配体的亲和力及选择性中的作用。方法：在中国苍鼠卵巢细胞（ＣＨＯ细胞）中分别稳定表达Ｃ末端截短３１个氨基酸残基及野生型δ阿片受体，用受体结合分析法研究了表达产物与配体的结合特征，结果：表达得到典型突变受体克隆ＣＨＯ－Ｔ及野生型受体克隆ＣＨＯ－Ｗ，ＣＨＯ－Ｔ结合（＾３Ｈ）ｄｉｐｒｅｎｏｒｐｈｉｎｅ（Ｄｉｐ）及（＾３Ｈ）（Ｄ－Ａｌａ＾２，Ｄ－Ｌｅｕ＾５）ｅｎｋｅｐｈ     

白介素-2通过阿片κ受体抑制心肌细胞的收缩作用

本文采用酶解分离大鼠心室肌细胞 ,用视频跟踪系统测定单个心室肌细胞收缩 ,以研究白介素 2(IL 2 )对心肌细胞的作用及其机理 .结果发现 :①IL 2 (0 .5～ 2 0 0kU·L- 1)浓度依赖性地抑制成年鼠单个心室肌细胞的收缩 ;②纳洛酮 (10nmol·L- 1)和nor binaltorphimine(nor BNI,10nmol·L- 1)可阻断IL 2的收缩抑制作用 ;③百日咳毒素 (PTX ,5mg·L- 1)预处理后 ,取消了IL 2对心肌细胞收缩的抑制作用 ;④U7312 2预处理可阻断IL 2的收缩抑制作用 .结果表明 ,IL 2对酶解分离心室肌细胞收缩的抑制作用 ,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的 ,其下游途径包括PTX敏感的Gi蛋白和磷脂酶C     

阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：观察δ阿片受体激活剂D-丙（2）-D-亮（5）脑啡肽（DADLE）对培养心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的保护作用。方法：采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞，建立H／R损伤模型，检测指标包括：（1）心肌细胞形态；（2）心肌细胞存活率；（3）超氧化物歧化酶（SOD）活性；（4）丙二醛（MDA）含量；（5）乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果-模型组缺氧后心肌细胞存活率降低，复氧30min后进一步下降，各个时间点细胞内SOD活性下降，MDA含量升高，LDH活性升高，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01），复氧60min后各指标逐渐趋于正常状态；DADLE 1μmaol／L组细胞存活率升高，LDH活性降低，MDA含量逐渐趋于正常，SOD活性逐渐回升，表明经DADLE干预后，心肌细胞抗损伤能力加强，发生损伤的程度减轻；δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol／L抑制DADLE的保护作用。结论：DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H／R损伤具有保护作用。     

δ阿片受体转激活EGFR发挥神经保护作用的机制研究

目的研究δ阿片受体(δOR)激动剂DADLE对大脑中动脉栓塞/再灌注大鼠发挥神经保护作用的机制。方法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型模拟缺血性卒中,侧脑室埋管单侧注射给予δOR激动剂DADLE(5 nmol·L~(-1)10μL),检测运动功能行为学评分和脑缺血面积,并利用Western印迹、qPCR、ELISA、免疫组化等方法检测EGFR及其下游信号分子Akt和ERK的激活程度和蛋白转录、表达水平变化。结果DADLE能够明显减少缺血性卒中模型鼠的脑缺血面积(TTC染色:对照组缺血面积29.25%,DADLE组缺血面积减至14.22%,P<0.001),并明显改善缺血/再灌注引起的半侧肢体运动障碍(Garcia行为学评分:对照组得分5.67,DADLE组得分11.67,P<0.001);同时,缺血/再灌注后24-72 h,EGFR磷酸化程度显著性升高5.31倍,下游信号分子Akt、ERK的磷酸化程度分别显著性升高1.95和3.12倍,且EGFR的mRNA表达量在24 h时间点增加5.88倍(P<0.05),蛋白表达量增加3.27倍(P<0.05)。EGFR阻断剂AG1478和金属蛋白酶MMP抑制剂GM6001可剂量依赖性阻断该作用。结论 DADLE可以通过转激活EGFR的通路,激活下游信号,改善缺血性卒中所引起的大脑缺血及运动障碍,发挥神经保护作用。     

阿片δ受体拮抗剂Naltrindole对免疫排异反应的抑制作用

目的：观察选择性阿片δ受体拮抗剂纳曲酮(naltrexone)对移植排异反应的影响。方法：整体实验以小鼠异体异位心肌组织移植为模型, ip naltrindole或纳曲酮(5 mg.kg^-1, bid), 观察移植心肌组织的存活时间;离体实验中,将两种不同品系小鼠淋巴细胞混合培养,观察naltrindole、 纳曲酮或亮脑啡肽对淋巴细胞反应的影响。结果：Naltrindole可显著延长小鼠异体异位移植心肌组织的存活时间；并明显抑制混合淋巴细胞反应。 Naltrindole的上述作用均较纳曲酮强。阿片δ受体激动剂亮脑啡肽（D-Ser²-Lue-enkephalin）可以促进混合淋巴细胞反应。结论：阿片δ受体在移植免疫排异反应中起重要介导作用, naltrindole对此移植排异反应有明显抑制作用。     

δ阿片受体激动剂对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的观察δ阿片受体激动剂D-丙2,D-亮5脑啡肽（〔D-Ala2,D-Leu5〕-enkephali,DADLE）对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织Bcl-2、Caspase-3表达的影响,探讨DADLE对心肌组织保护的可能机理。方法采用盲肠结扎加穿孔（CLP）法制作大鼠脓毒症模型,SD大鼠54只（雌雄不拘）,利用随机数字表随机分为CLP组（n=18）、DADLE组（n=18）和假手术（SHAM）组（n=18）。在不同时间点（6h、12h、24h）处死大鼠,原位末端标记检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测心肌组织中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的动态变化并比较心肌组织的病理改变。结果 CLP组大鼠心肌组织病理损害较SHAM组明显严重,DADLE组心肌组织的病理变化明显改善;CLP组大鼠心肌组织细胞凋亡指数较SHAM组明显升高（P〈0.01）,以12h组最明显（P〈0.01）,各DADLE组心肌细胞凋亡指数明显降低（P〈0.01）;CLP组大鼠心肌组织Caspase-3的表达比SHAM组明显增加（P〈0.01）、Bcl-2的表达明显降低（P〈0.05）;DADLE组心肌组织Caspase-3的表达较CLP组明显降低（P〈0.01）、Bcl-2的表达明显增加（P〈0.05）。心肌组织Caspase-3的表达与心肌细胞凋亡指数正相关（r=0.92,P〈0.01）,Bcl-2的表达与心肌细胞凋亡指数负相关（r=-0.94,P〈0.01）。结论 DADLE明显改善脓毒症大鼠心肌组织的病理变化,其作用机理可能与DADLE下调Caspase-3表达、上调Bcl-2表达,从而抑制心肌细胞凋亡有关。     

κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚的抑制作用

目的通过观察选择性κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50488H抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导乳大鼠心肌细胞肥厚的作用及其对细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)瞬变及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响,研究κ-OR激动抑制Iso诱导的大鼠心肌细胞肥厚的信号传导机制。方法以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用β肾上腺素受体激动剂Iso10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并进一步探讨在CaMKⅡ特异性抑制剂KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及L-钙通道阻滞剂维拉帕米1μmol.L-1存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥厚的作用。用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白的合成;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化;用Western蛋白印迹法测定CaMKⅡδB表达。结果Iso10μmol.L-1使心肌细胞总蛋白含量、体积和蛋白合成明显增加,U50488H1μmol.L-1抑制Iso诱导的心肌肥大,且抑制程度与KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及维拉帕米1μmol.L-1相似,在KN93存在的情况下,U50488H抑制Iso诱导的心肌肥大作用增强;U50488H能降低Iso引起的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化升高;Iso能明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,U50488H能降低其表达。结论κ-OR激动剂U50488H可能通过降低心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚。     

二氢埃托啡对大鼠脑阿片受体的结合特性

本文在大鼠脑匀浆P_2膜上,观察了二氢埃托啡(DHE)对[~3H]纳洛酮,[~3H]DPDPE和[~3H]埃托啡(预先用30nmol/L吗啡和100nmol/L DADLE阻断μ和δ受体)与阿片受体结合的抑制强度。结果表明:DHE对[~3H]纳洛酮与阿片受体结合的抑制强度远远大于对[~3H]DPDPE和[~3H]埃托啡(预先阻断μ和δ受体后)。DHE对μ,δ和κ受体的相对亲和力之比为1951:2:1,提示DHE为μ受体相对选择性配体。     

μ和δ阿片样受体在自发高血压大鼠和正常血压WKY大鼠中枢神经系统中的分布(英文)

目的:比较自发高血压大鼠(SHR)和对照组WKY大鼠中枢神经系统中阿片受体亚型的分布。方法:用放射自显影法,选用~3H-OMF,~3H-U69593分别标记μ和κ受体,用遮盖法以~3H-etorphine标记δ受体。结果:δ受体密度在SHR下丘脑、中央灰质高于WKY,μ受体密度在SHR杏仁基底外侧核、僵核、孤束核低于WKY,κ受体密度没能检测出。结论:阿片受体亚型不同分布与SHR的血压有关,并且δ受体对高血压的维持作用大于μ受体。     

阿片κ-受体和ORL1受体二聚化的初步研究

为探讨κ-受体(κ-opioid receptor,KOR)和阿片受体样受体(opioid receptor like-1 receptor,ORL1 receptor)是否能够形成异源性受体二聚体,在原代培养的大鼠神经元细胞和用带有HA(hemagglutinin,血细胞凝集素)、Myc或Flag标签的KOR和ORL1质粒共同转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾上皮(HEK293)细胞上,采用免疫荧光和免疫共沉淀的方法,研究KOR和ORL1之间的共定位以及是否存在相互作用。结果表明:在原代培养的海马和皮质神经元上,KOR和ORL1的免疫荧光在细胞膜上有重叠。同样,在HA-KOR和Myc-ORL1共同瞬时转染的CHO和HEK293细胞上也有类似的发现。另外,在共同表达Flag-KOR和Myc-ORL1的CHO细胞裂解液中,KOR与ORL1的受体蛋白能够被相互免疫共沉淀。这些研究结果提示,作为阿片受体不同亚型的KOR和ORL1受体之间有可能存在着异源二聚体,这也为进一步解释阿片受体结构的多样性和功能的复杂性提供了新的实验依据。     

脑啡肽对培养新生大鼠海马胶质细胞白介素1α基因表达的影响

用逆转录-聚合酶链反应技术研究了脑啡肽对培养的新生大鼠海马胶质细胞IL-1α基因表达的影响. 结果发现, 脂多糖(10 mg·L^-1)能诱导海马胶质细胞IL-1α基因表达, 当预先用甲硫脑啡肽(0.1 nmol·L^-1)或亮脑啡肽(0.1 nmol·L^-1)处理海马胶质细胞, 则脂多糖诱导的海马胶质细胞IL-1α基因表达受到抑制, 且脑啡肽的作用可被阿片受体阻断剂纳洛酮所阻断. 结果提示脑啡肽对脂多糖诱导大鼠海马胶质细胞IL-1α基因表达的抑制性影响可能是通过海马胶质细胞或神经细胞上的阿片受体介导的.     

阿片受体对呼吸功能影响的研究进展

<正>阿片受体的研究已有40年历史。阿片受体及其内源性阿片肽分布于大脑和外周组织,在调节内分泌、心血管、疼痛、呼吸、应激反应、体温调节、胃肠和免疫功能等方面起着重要的作用。阿片类物质与阿片受体结合后,通过蛋白激酶、钙、钾通道、钙调蛋白激酶Ⅱ、G蛋白偶联受体激酶和丝裂原激酶等复杂而庞大的信号转导及调节控制系统进行转     

低pH处理对阿片受体激动剂调节cAMP第二信使系统的作用(英文)

研究不同的阿片类物质对ＣＡＭＰ第二信使系统不同作用的机制．方法：用低 ｐＨ方法失活 Ｇｓ蛋白,用蛋白竞争法测ＮＧ１０８－１５细胞膜腺苷酸环化酶（ＡＣ）活性．结果：与二氢埃托啡（ＤＨＥ）和埃托啡（Ｅｔｏ）不同,低ｐＨ处理明显增加吗啡（ Ｍｏｒ）和美沙酮（Ｍｅｔ）对正常和自身慢性处理细胞的膜ＡＣ活性的抑制作用．与Ｍｏｒ等不同,ＤＨＥ和Ｅｔｏ对自身慢性处理细胞的膜ＡＣ活性抑制作用降低不明显,纳洛酮催促, ＤＨＥ和Ｅｔｏ慢性处理细胞的膜ＡＣ活性也未见显著反跳性升高．低ｐＨ处理使纳洛酮催促的Ｍｏｒ慢性处理细胞的膜ＡＣ活性反跳性升高作用消失。结论：不同的阿片类ＣＡＭＰ信使系统的不同作用与它们对Ｇｓ功能调节差异有关,Ｇｓ与阿片类物质的耐受和依赖密切相关。     

甲硫氨酸脑啡肽对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞增殖反应的影响及阿片受体介导机制的研究

目的　研究甲硫氨酸脑啡肽 (Met Enk)对系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血淋巴细胞 (PBL)增殖反应的影响以及纳络酮 (Nal)对其影响的作用。方法　淋巴细胞增殖法。结果　Met Enk(1× 10 -8～ 1× 10 -6mol·L-1)能够促进正常人PBL增殖反应 ,Nal(1× 10 -6mol·L-1)对正常人PBL增殖反应无明显影响 ,但可拮抗Met Enk(1× 10 -6mol·L-1)对正常人PBL增殖反应的促进作用 ;Nal(1× 10 -6mol·L-1)不仅可拮抗Met Enk(1× 10 -6mol·L-1)对SLE患者PBL增殖反应的促进作用 ,而且可直接降低SLE患者PBL增殖反应。结论　内源性Met Enk通过阿片受体参与了SLE患者PBL功能的上调作用     

δ阿片受体激动剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤神经保护作用的研究

<正>如今心肺脑复苏(cardiopulmonary cerebral resuscitation,CPCR)一直是急诊医学研究的重要内容。心肺复苏的目的在于脑复苏,脑复苏成功与否决定整个抢救的成败。因此目前心肺脑复苏的研究比较集中在以脑复苏为重点的后期复苏和高级生命支持。由于脑细胞对缺氧十分敏感,循环停止4~6min脑组织即可出现不可逆性损害。脑损害是心肺脑复苏后患者致残的主要原因,因而,对这些患者的救治就显得异常重要,包括早期正确实施心肺复苏及后期综合性的脑保护治疗。