复发性流产患者绒毛组织中白细胞介素-6和白细胞介素-18的表达

目的研究白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)在复发性流产(RSA)患者绒毛组织中的表达,探讨RSA的发病机制。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术,检测63例RSA妇女(RSA组)及50例正常早孕妇女(正常组)绒毛组织中IL-6 mRNA和IL-18 mRNA的表达水平,并将两者进行相关性分析。结果 RSA组绒毛组织中IL-6 mRNA的表达水平显著低于正常组,IL-18 mRNA水平显著高于正常组,相关分析显示,RSA组IL-6与IL-18 mRNA两者之间表达水平呈负相关(r=-0.49,P<0.01)。IL-6 mR-NA的表达水平与RSA患者流产次数无关,而IL-18 mRNA表达水平随着流产次数增多而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常妊娠较RSA患者绒毛组织IL-6水平高,当IL-6表达降低或IL-18升高时,可能导致RSA,其中IL-18水平与流产次数呈正相关。     

实时定量PCR检测自然流产患者HLA-G mRNA的表达

目的:检测HLA-G mRNA在自然流产患者绒毛组织中的表达,探讨HLA-G与自然流产的关系。方法:取8例正常妊娠早孕人工流产(对照组)与6例自然流产绒毛组织(实验组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测对照组和实验组绒毛组织HLA-G mRNA表达水平。结果:自然流产组HLA-G mRNA的相对表达量(0.026±0.012)明显低于正常妊娠早孕人工流产组的HLA-G mRNA的相对表达量(1.883±1.774),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HLA-G mRNA在绒毛组织的表达异常可能与自然流产的发病有关。     

原因不明复发性自然流产患者绒毛组织中STAT4和STAT6的表达

目的:探讨原因不明复发性自然流产(URSA)患者绒毛组织中STAT4和STAT6蛋白的表达.方法:采用免疫组化技术检测正常早期妊娠妇女(20例)和URSA患者(20例)绒毛组织中STAT4、STAT6蛋白的表达,并分析两者的相天性.结果:正常妊娠组和URSA组绒毛组织中STAT4和STAT6均呈阳性表达,主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色.URSA组绒毛组织中sTAT4阳性信号平均灰度值(148.00±24.38)高于正常妊娠组的(116.75±9.26)(t'=5.730,P＜0.001).URSA组绒毛组织中STAT6阳件信号平均灰度值(121.50±7.98)低于正常妊娠组的(161.60±17.78)(t'=10.392,P＜0.001).URSA组和正常妊娠组绒毛组织中STAT4与STAT6的表达水平均呈负相关(r=-0.589,-0.647,P均＜0.001).结论:URSA患者绒毛组织中STAT4的高表达和STAT6的低表达可能诱导T辅助淋巴细胞1/2失衡,进而导致URSA的发病.     

反复流产患者血清MMP-9和TIMP-1的表达

目的探讨反复自然流产患者血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）和其抑制剂（TIMP-1）的表达。方法收集反复自然流产（实验组）血清30份;采集正常早孕需终止妊娠者（对照组）血清30份,用肝素抗凝管空腹取静脉血,分离血浆,测MMP-9及TIMP-1,并对结果进行分析。结果在正常早孕的血清中MMP-9含量均明显高于反复自然流产者,在正常早孕的血清中TIMP-1的含量低于反复自然流产者,差异均有高度统计学意义（均P〈0．01）。结论TIMP-1含量较多可显著减少MMP-9活化及侵袭能力,阐明正常早孕者绒毛组织的侵袭力强于反复自然流产者。     

血浆外泌体源性miRNA在复发性流产患者中的表达初探

目的：通过提取复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）患者与正常妊娠女性血浆外泌体中miRNA,运用miRNA测序技术筛选出差异表达的miRNA,以探讨其在复发性流产患者中的表达情况。方法：复发性流产患者及年龄、停经天数相匹配的早期妊娠行人工流产女性各3例,收集其清宫术后的肘前静脉血,提取血浆,对血浆外泌体中的 miRNA进行提取、测序,分析miRNA表达谱,并对表达差异较大的miRNA进行靶基因预测及功能分析和信号通路分析。结果：复发性流产患者与正常妊娠女性相比,血浆外泌体中有24个miRNA存在差异表达,其中表达下调的miRNA有11个,表达上调的miRNA有13个。生物功能分析表明这些差异表达miRNA的靶基因可能参与某些妊娠过程从而发挥其功能。结论：复发性流产患者的血浆外泌体中表达的miRNA种类及数量与正常妊娠相比存在差异,此可作为RSA预防诊治中的分子标记物之一,得进一步研究。     

反复自然流产血清及绒毛组织NO含量绒毛组织p53及bcl-2蛋白的表达

目的 :观察反复自然流产患者 (RSA)与正常妊娠流产者血清及绒毛组织中NO含量和绒毛组织中p5 3蛋白及bcl- 2蛋白表达水平。方法 :33例RSA患者及 30例正常对照组血清和绒毛组织中NO含量采用比色法检测 ,利用硝酸还原酶特异性地将NO3 -还原为NO2 -,间接测定NO含量。应用流式细胞免疫荧光技术检测绒毛组织中p5 3蛋白及bcl - 2蛋白表达。结果 :①RSA组与对照组血清中NO含量分别为 77.2 1± 30 .78μmol /L和 5 1 .78± 2 7.0 4 μmol/L ,二者有显著差异 (p <0 .0 5 )。②绒毛组织中NO含量分别为 5 .86± 1 .84 μmol /L蛋白和 4 .38± 1 .1 2 μmol /L蛋白 ,二者有显著差异 (p <0 .0 1 )。③绒毛组织中p5 3蛋白表达水平 (以荧光指数表示 ) ,分别为 1 .33± 0 .0 6和 1 .1 9± 0 .0 6 ,两者有显著差异 (p <0 .0 0 1 )。④bcl- 2蛋白表达水平 (以荧光指数表示 ) ,分别为 1 .2 7± 0 .1 1和 1 .6 3± 0 .1 5 ,两者有显著差异 (p <0 .0 0 1 )。结论 :RSA组血清和绒毛组织中NO含量升高 ,绒毛组织中p5 3蛋白表达升高 ,bcl- 2蛋白表达降低 ,可能是RSA发病的原因之一。     

血清sHLA-G水平和绒毛中HO-1蛋白的表达与早期流产的相关性研究

目的：探讨血清可溶性人类白细胞抗原- G（sHLA- G）水平及绒毛中血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白的表达与早期流产的相关性。方法选择非自愿正常早期妊娠的患者60例作为对照组,自然流产患者80例,分为先兆流产组40例,稽留流产组40例,分别用ELISA法和免疫组化二步法分别检测血清sHLA- G水平和绒毛中HO-1蛋白的表达。结果相应的sHLA- G水平和HO-1蛋白表达由高到低依次排序为对照组、先兆流产组、稽留流产组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。结论血清sHLA- G水平和绒毛中HO-1蛋白的表达与早期流产的发生、发展密切相关。     

原因不明性反复自然流产患者38例的免疫治疗

目的：探讨反复自然流产患的免疫疗法,方法：从38例原因不明性反复自然流产患静脉血中提取淋巴细胞进行免疫治疗,结果：妊娠晚期成功率为84％,结论：反复自然流产患的免疫疗法操作有效,无副作用。     

复发性流产患者阴道微生物宏基因组分析

目的:研究和分析复发性流产患者阴道菌群微生物多样性差异、种类差异及功能分析,初步阐释阴道微生态在复发性流产发生发展过程中起到的作用。方法:选取2010年1月至2016年12月纳入中山大学第八附属医院妇产科的复发性流产患者21例,正常妊娠人工流产20例作为本课题的研究对象,2组在怀孕时间上不存在统计学差异(P>0.05);同时收集整理各种临床诊疗数据。术前常规进行病史采集并取阴道分泌物,利用宏基因组测序分析微生物类型及微生物基因组数据,明确差异性及功能性。结果:临床数据显示复发性流产患者阴道炎症发生率高于正常妊娠人群;复发性流产患者阴道微生物多样性明显高于正常妊娠人群,微生物基因丰度低于正常妊娠人群。通过差异性物种鉴定分析,挑选得到上百种差异性微生物,结合样本实际情况及统计学要求,选取16种差异性微生物,其中5种菌株在正常妊娠人群阴道中没有发现,而在复发性流产患者阴道中明显存在且丰度较高;8种菌株在正常妊娠人群中存在且丰度较高,但在复发性流产患者阴道中没有检测到;3种菌株丰度差异较大。这些差异性微生物的功能富集分析显示差异性菌群在分子功能、生物过程、细胞组成存在统计学差异,具体体现...     

白细胞介素18基因多态性与不明原因复发性流产的关系

目的：探讨人白细胞介素18（IL-18）基因位点多态性与不明原因复发性流产（URSA）的关系。方法：选取207例URSA患者和144例健康妊娠妇女进行研究。通过PCR联合DNA测序技术分析两组人群IL-18基因rs187238（-137G/C）、rs360718（-119A/C）、rs360717（-105G/A）位点多态性分布情况。 结果：URSA组rs187238（-137G/C）位点GG、GC+CC 基因型分布频率分别为77.3%、22.7%,与对照组GG、GC+CC 基因型分布频率（95.8%、4.2%） 比较, 差异有统计学意义（χ2=22.767, P<0.001） ;URSA组rs187238（-137G/C）位点C 等位基因频率为13.04%, 与对照组C 等位基因频率2.1%比较,差异亦有统计学意义（χ2=26.102,P <0.001） ;等位基因频率相对风险率分析发现,C等位基因携带者其自然流产的风险是G等位基因携带者的7.050倍（OR=7.050,95%CI: 2.990 ～16.622） 。rs360718、rs360717位点基因型分布与对照组差异均无统计学意义（χ2=1.497、0.858,P=0.221、0.354）;两组间rs360718、rs360717位点等位基因分布频率的差异亦均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：IL-18基因启动子rs187238（-137G/C）位点GC+CC基因型可能是复发性流产易感基因型, C等位基因可能是URSA发病的遗传易感基因之一;IL-18 基因rs360718、rs360717 位点多态性与URSA可能无相关性。     

ET-1及受体在不明原因复发性流产绒毛中的表达及其对滋养细胞迁移的调节

目的 通过检测内皮素-1(endothelin-1, ET-1)及受体(endothelin receptors, ETR)在不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)绒毛组织中的表达,探讨其与URSA的关系。方法不明原因复发性流产患者30例(RSA组)及正常早孕人流妇女30例(正常组,即CTL组),采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)及Western印迹法检测两组绒毛组织中ET-1、ETR-A、ETR-B mRNA及蛋白的表达。取体外培养的妊娠早期绒毛外滋养细胞Transwell迁移实验法检测ET-1、ETR-A阻断剂BQ-123及ETR-B阻断剂BQ-788受体对绒毛外滋养细胞迁移能力的影响。结果RSA组较正常组绒毛组织中ETR-B mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ET-1、ETR-A mRNA及蛋白在二组绒毛组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。ET-1促进HTR-8细胞迁移,ETR-B阻断剂阻断ET-1的促迁移作用。结论 ET-1可能通过ETR-B受体促进妊娠早期绒毛外滋养细胞迁移,URSA患者较正常组绒毛中ETR-B mRNA及蛋白表达降低可能与URSA相关。     

反复自然流产患者IL-17、T-bet、GATA-3和FoxP3mRNA表达水平的检测

目的探讨反复自然流产患者辅助性T细胞17（Th17）免疫应答情况及其与Th1、Th2和Treg细胞相互之间的关系。方法实时荧光定量PCR（RealtimePCR）检测反复自然流产患者30例（观察组）及健康早孕体检者38例（对照组）外周血中的IL-17、T-bet、GATA-3和FoxP3mRNA表达水平。结果观察组IL-17mRNA、T-betmRNA表达水平较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．0001）。而GATA-3mRNA、FoxP3mRNA表达水平显著低于对照组（P〈0．0001）：观察组Th1／Th2和Th17／Treg的比值均较对照组显著升高,差异有统计学意义（P〈0．0001）。结论Th17细胞参与了反复自然流产的免疫应答,Th1／Th2和Th17／Treg细胞之间的平衡在妊娠的维持中发挥重要作用。     

代谢综合征与血清IL-18、IL-6关系的研究

目的 探讨代谢综合征(MS)患者各组分与血清IL-18、IL-6水平的关系.方法 选择MS患者83例,正常健康对照85例,分别测量血压、腰围、臀围,测定空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数HOMA-β、HOMA-IR,分别检测IL-6、IL-18、血脂等指标,并对结果进行分析.结果代谢综合征组的HOMA-β较正常健康对照组明显下降(P<0.05),HOMA-IR、IL-6、IL-18等指标等明显升高(P<0.05).多元线性回归显示:代谢综合征患者组IL-18与FBG、FINS、TG水平及HOMA-IR呈正相关(r=0.31,0.44,0.48,0.35,P<0.05)与HOMA-β呈负相关(r=-0.474,P<0.05).结论 代谢综合征患者存在明显的胰岛素抵抗和IL-6、IL-18水平的异常;IL-18水平的异常与胰岛素抵抗密切相关;炎症反应可能在代谢综合征患者胰岛素抵抗的发生中起了重要的作用.     

同型半胱氨酸与复发自然流产的关系

目的了解孕妇血清同型半胱氨酸水平与不明原因复发性流产的关系。方法将检测对象分为3组:复发性流产组40例(A组),其中早孕流产组25例(A1组)),中孕流产组15例(A2组);正常妊娠组B组,其中正常早早孕组30例(B1组),正常中孕组30例(B2组);正常育龄妇女组30例(C组),采用循环酶法检测各组血清同型半胱氨酸水平。结果 A组与B组及C组血清同型半胱氨酸水平比较,差异有显著性(P0.01);A1组血清同型半胱氨酸水平与A2组比较,差异有显著性(P0.01);而B1与B2组血清同型半胱氨酸水平比较,差异无显著性(P0.05);A1组与B1组比较,差异有显著性(P0.01);A2组与B2组比较,差异有显著性(P0.01)。结论同型半胱氨酸与复发性流产发病存在密切相关,高同型半胱氨酸水平可以作为不明原因复发性流产的一个危险因素。     

人类白细胞抗原G表达与不明原因反复自然流产关系的探讨

目的 通过观察人类白细胞抗原G(HLA-G)在不同滋养细胞中的表达,探讨其与不明原因反复自然流产(RSA)的关系及免疫调节机制.方法用免疫酶细胞化学染色方法检测11例RSA患者滋养细胞的HLA-G表达情况,并以13例正常早孕的滋养细胞和JEG-3绒癌细胞作对照.结果 RSA患者滋养细胞的HLA-G表达水平(1.15±1.56)显著低于正常早孕滋养细胞(8.97 2.76)和JEG-3绒癌细胞(9.56±1.81)(P《0.001).后两种滋养细胞的HLA-G表达水平无显著性差异.RSA组5例表达为弱阳性,6例为阴性.正常早孕组8例表达为强阳性,5例为中等阳性.JEC-3绒癌细胞株表达为强阳性.结论滋养细胞的HLA-G表达与细胞浸润能力有关.RSA滋养细胞的低浸润能力可能与HLA-G的低表达有关.HLA-G表达可能不依赖母体环境,而在细胞内自身调节.     

监测反复自然流产者尿CMV-DNA的研究

犤目的犦探讨反复自然流产与巨细胞病毒感染的关系。犤方法犦采用PCR方法对212例反复流产(RAS)妇女及2602例无流产史早孕妇女的尿液进行CMV-DNA检测。犤结果犦RAS组CMV-DNA阳性率1.89%,对照组CMV-DNA阳性率0.46%,两者有显著性差异(x2=7.05,P<0.05)。犤结论犦RAS与巨细胞病毒感染有一定的相关性。     

监测反复自然流产者尿CMV-DNA的研究

[目的]探讨反复自然流产与巨细胞病毒感染的关系.[方法]采用PCR方法对212例反复流产(RAS)妇女及2 602例无流产史早孕妇女的尿液进行CMV-DNA检测.[结果]RAS组CMV-DNA阳性率1.89%,对照组CMV-DNA阳性率0.46%,两者有显著性差异(x2=7.05,P<0.05).[结论]RAS与巨细胞病毒感染有一定的相关性.     

非对称性二甲基精氨酸在不明原因复发性流产患者绒毛及外周血的表达及其意义

目的 探讨不明原因复发性流产（URSA）患者绒毛及外周血非对称性二甲基精氨酸（ADMA）表达及其临床价值。方法 选取URSA患者168例,采用计算机产生随机数法将就诊患者以3〖DK〗∶1的比例分为训练集126例(URSA组)和测试集42例,另选取同期于我院进行终止妊娠的126例孕妇作为对照,对比训练集及对照组临床资料及外周血和绒毛组织ADMA表达,通过拟合曲线和阈值效应分析患者血清URSA表达与URSA发生的关系,采用多因素Logistics回归模型分析发生URSA的独立危险因素,构建列线图模型。结果 与对照组比较,URSA组患者IL-6、IL-117、Th17、Th17/Treg及血浆、绒毛组织ADMA表达显著增加,孕酮、IL-10、TGF-β及Treg显著降低（P＜0.05）。IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg及血浆ADMA、绒毛组织ADMA是发生URSA的独立危险因素,而IL-10、TGF-β及Treg是发生URSA的保护因素（P＜0.05）。当血浆ADMA≥1.43 μmol/L时,血浆ADMA每增加0.6 μmol/L,孕妇发生VRSA的风险增加17%,差异具有统计学意义（OR=0.115,95%CI：0.102~0.133,P＜0.05）;当绒毛ADMA≥1.92 μmol/L时,绒毛ADMA每增加0.6 μmol/L,孕妇发生URSA的风险增加14%,差异具有统计学意义（OR=1.192,95%CI：1.085~1.302,P＜0.05）。依据独立影响因素构建的列线图预测模型具有较高的区分度、准确性和临床适用性。结论 ADMA在URSA患者血浆及绒毛组织中的表达增加,是URSA发生的独立危险因素,对URSA的发生具有一定的预测价值