适用于中国HIV-1分型的gag基因引物及其应用

目的 对中国流行的主要HIV-1毒株进行遗传特征分析,确定适用于中国HIV分子流行病学调查的gag基因扩增引物.方法 从HIV序列数据库下载CRF07_BC、CRF08_BC、C亚型及M组参考毒株的gag全长序列,经序列比对后设计gag基因扩增引物;获得的基因片段采用邻接法构建系统进化树,评价不同片段用于分析和确定HIV-1亚型的可靠性,并检测部分样本以评定效果.结果 目前我国常用的gag基因306/c-gag引物扩增片段(HXB2 836～1507)构建的系统进化树中,CRF07_BC、C亚型进化簇的Bootstrap值分别为70%和59%,其可靠性较低,难以形成较为稳定的进化簇用于病毒亚型判断.而利用设计的gag基因GUX/GDX引物扩增片段(HXB2 781～1861)构建的系统进化树中,CRF07_Bc、CRF08_BC和C亚型序列能够独立成簇,其Bootstrap值分别为99%、99%和77%,具有较高的可靠性.在实际应用中,新设计的引物具有较高的扩增阳性率和测序成功率,获得序列形成B、C亚型和CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC等5个大的进化簇,其Bootstrap值均超过80%.即使仅用下游引物GDX测序获得的较短片段亦能获得较为可靠的系统进化树.结论 GUX/GDX引物扩增获得的gag基因片段可以构建较为可靠的系统进化树,用于区分和判断我国流行的主要HIV-1毒株亚型,尤其是BC重组毒株和C亚型毒株.该方法在我国HIV分子流行病学调查和研究中有广泛的应用价值.     

无偿献血人群中HIV-1感染者env基因序列特征研究

目的 分析我国无偿献血人群艾滋病病毒I型（HIV-1）感染者病毒亚型及env基因C2-V4区序列特征。方法 针对我国13个省市献血人群筛选的115例HIV-1阳性标本,扩增HIV-1的env基因C2-V4区片段并测序;构建最大似然树（Maximum Likelihood）分析不同亚型env基因序列的进化关系;分析该基因区序列变异以及2G12、PGT135、PGT128中和表位特征。结果 从115例HIV阳性标本中成功扩增C2-V4区76份,经测序分析发现HIV-1基因亚型7种,其中,亚型CRF01_AE和CRF07_BC所占比例最高,分别占46.0%（35/76）和39.5%（30/76）,其他亚型CRF08_BC、B、CRF65_CPX、CRF59_01B、CRF61_BC所占比例分别为5.3%（4/76）、5.3%（4/76）、1.3% （1/76）、1.3% （1/76）、1.3% （1/76）。V3环顶端四肽存在GPGQ、GPGR、GPGK、GQGR四种类型,辅助受体以CCR5（90.8%）为主。97.1%的CRF01_AE毒株分别缺失2G12和PGT135抗体识别的相关糖基化位点,而CRF07_BC毒株100%缺失2G12抗体识别相关的糖基化位点,80%毒株未缺失PGT135抗体识别相关的糖基化位点。结论 我国献血人群HIV-1感染者以CRF01_AE和CRF07_BC为主要流行毒株;各毒株亚型V3顶端四肽以GPGQ变异型为主,且主要使用CCR5为辅助受体;2G12、PGT135及PGT128中和抗体表位呈现不同程度的变异。该研究为进一步开展针对献血人群的艾滋病预防与控制提供了参考数据。     

安徽阜阳既往献血人群HIV-1感染者基因变异特征的研究

目的研究安徽省阜阳市既往献血人群中HIV-1感染者体内病毒流行株的亚型及序列变异特征。方法用巢式聚合酶链反应（nested-PCR）对HIV-1外膜蛋白（env）基因和核心蛋白（gag）基因进行扩增,获得244例患者的env基因V3-C3及其邻近区域序列和245例患者的gag基因区序列,应用MEGA软件进行分析,同时结合患者的疾病进展阶段进行相关性研究。结果系统进化树显示安徽省阜阳市患者体内HIV病毒的env和gag区序列属泰国B亚型;env和gag区的组内基因距离分别为9．11％和3．59％;按CD4细胞绝对计数分层,随CD4细胞绝对计数降低,env、Gag组内基因距离明显升高;随病毒载量水平增加,各组基因距离有增大的趋势,且差异均有统计学意义（P〈0．001）。env区V3环序列13份长期不进展者7份顶端四肽为GPGQ,53份缓慢进展者33份顶端四肽为GPGR,两者间差异有统计学意义（P=0．038）。结论安徽省阜阳市既往献血人群HIV-1感染者体内的病毒流行株是B′亚型。CD4和病毒载量作为疾病进程不同阶段的指标,与病毒变异有相关性,即随CD4降低、病毒载量升高病毒组内基因距离增大。HIV B′亚型V3环顶端四肽随疾病进展由GPGQ为主变为GPGR为主。     

广州市吸毒强戒人员HIV-1基因亚型分布的初步研究

目的分析吸毒人群HIV感染者中HIV-1的基因序列特征,初步确定其感染的基因亚型和各亚型的流行趋势。方法在Genbank中查找HIVgag基因的序列,设计巢式PCR引物。从全血中提取样本的基因组DNA,进行巢式PCR,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序,所获序列与国际参考株序列进行比对,确定基因型或亚型。结果对36例HIV-1感染者样本进行扩增,PCR共检测出29例阳性样本,27例测序成功,其中16例为CRF08-BC重组亚型、7例为CRF07-BC重组亚型、4例为CRF01-AE重组亚型,15例阴性对照均无目的条带。结论在广州吸毒强戒人员HIV-1型中以CRFBC亚型为主,其次为CRF01-AE亚型。应加强对HIV-1毒株亚型的监测,以制定更好的防治策略。     

人免疫缺陷病毒II型gag基因在毕赤酵母中表达条件的研究

目的 :提高人免疫缺陷病毒 II型 ( HIV- 2 ROD) gag基因在毕赤酵母中的表达量。方法 :研究了转化子生长的培养条件 ,包括不同的甲醇诱导浓度、诱导时间、溶解氧、摇瓶转速及不同 p H值对人 HIV- 2 gag表达的影响。表达产物进一步通过盐析和 Sephadex G- 1 0 0分子筛层析柱层析分离纯化。结果 :最佳表达条件是 1 .0 %甲醇诱导 ,诱导时间 3d,大于 85 %的溶解氧 ,摇瓶转速2 5 0 r·min-1,p H6.0～ 6.5 ,目的蛋白表达量达到 2 1 mg· L-1。同时 ,经纯化后得到了纯度大于95 %的目的蛋白。结论 :获得了 HIV- 2 RODgag重组蛋白在巴斯德毕赤酵母系统中分泌表达的最佳表达条件。     

广州地区无偿献血人群HCV的基因分型研究

目的 探讨广州地区无偿献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)基因型(亚型)的分布.方法 从无偿献血人群中收集HCV RNA阳性标本,通过RT-PCR扩增NS5B基因,阳性结果进行核苷酸序列测定,然后与GenBank中已知序列进行比较和分子进化分析,以确定HCV基因型(亚型).结果 对广州地区69例HCVRNA阳性血液标本进行NS5B基因扩增,扩增阳性67例,其中lb占37.31%(25/67),2a占 4.48%(3/67),3a占7.46%(5/67),3b占4.48%(3/67),6a占44.78%(30/67),6n占1.49%(1/67).结论 HCVlb和6a为广州地区无偿献血人群中流行的主要基因型(亚型).     

既往有偿供血HIV感染者合并HCV感染的研究

随机抽取河南、吉林、辽宁174例有偿供血人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者,标准化问卷收集社会人口学、行为学、有偿供血史资料,采集静脉血进行HIV和丙型肝炎病毒(HCV)检测。结果显示HCV感染率95.40%。既往有偿供血(浆)是感染HCV的主要原因,有偿供血HIV感染者HCV感染集中于1992年后。     

人免疫缺陷病毒gag p20蛋白表达产物的纯化和鉴定

将人免疫缺陷病毒(HIV)gag p20基因插入表达质粒pBV220,得到重组表达质粒pCY7.在大肠杆菌中高效表达了p20蛋白.Western blot结果显示,大肠杆菌表达的p20蛋白能被抗p17单克隆抗体识别.用脱氧胆酸裂解重组表达菌,得到上清和沉淀两部分,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,p20蛋白主要存在于沉淀中.经用盐溶液洗涤2次后,沉淀中p20蛋白的纯度达到27.4％.再用1mol/L脲溶液洗2次沉淀,p20蛋白纯度提高到58.1％.用6 mol/L脲溶液溶解沉淀,上肝素亲和层析柱,用6 mol/L脲洗脱,得到4个蛋白峰.p20蛋白主要存在于第3峰,凝胶电泳和扫描分析表明,p20蛋白纯度为84.2％。     

Purification and identification of HIV-1 gag p20 protein expressed in E.coli

The human immunodeficiency virus type 1 gag p20 gene fragment was clonedinto plasmid pBV220 to construct a recombinant expression plasmid pCY7.By induction,the p20 protein was expressed in E.coli,and it was confirmed by Western blotting thatthe expressed p20 protein could be specifically recognized by anti-p17 monoclonalantibodies.The recombinant bacteria was lysed and fractionated into snpernatant andprecipitate by centrifugation.It was found that the p20 protein was present chiefly inthe precipitate.After p20 protein being washed twice,its purity reached 27.4%.Then theprecipitate was washed with 1 mol/L urea solution and the purity of p20 protein wasraised to 58.1%.Finally,the precipitate was dissolved in 6mol/L of urea and appliedonto a heparin affinity column.Four peaks were obtained and the p20 protein wasfound mainly in peak 3.The purity of p20 protein at this step reached 84.2% as meas-ured by gel scanning.     

广州地区无偿献血者抗-Mur筛查及Mur抗原基因型检测

目的了解广州地区无偿献血者中抗-Mur及Mur抗原基因型的频率,为指导临床输血及产前抗体监测提供依据。方法
用微柱凝胶卡方法筛查2725名献血者血清中37℃有活性的抗-Mur;采用多重连接依赖的探针扩增技术（MLPA）对91名献血者
的Mur抗原基因型进行检测,然后用人源抗-Mur血清检测Mur抗原基因型阳性样本的红细胞表型。结果无偿献血者血清中
抗-Mur频率为0.04%（1/2725）,Mur抗原基因型阳性频率为6.59%（6/91）,经血型血清学方法验证基因型与表型符合率为100%
（6/6）。结论广州地区无偿献血者中抗-Mur频率较低,而Mur抗原阳性则相对较常见;通过MLPA方法检测Mur抗原基因型可
以准确推断其表型,解决了因缺乏商品化抗-Mur试剂导致Mur抗原鉴定难以开展的难题。
     

Detection of two amino acid deletions in HIV-1 Nef protein from Chinese former paid blood donors

HIV-1 Nef protein plays an important role in HIV-1 pathogenesis, including downregulation of the cell surface CD4 and class I major histocompatibility complex （MHC）, enhancement of virion infectivity and alteration of a variety of cellular signal transduction pathways.1.2 A recent report demonstrated that Nef down-regulates dendritic cell surface expression of MHC class I and up-regulates molecules known to be critical for apoptosis induction, such as TNF-α and FasL^3 It is also very interesting that Nef expression alone may be sufficient to cause an AIDS-like disease in transgenic mice.2 In many human cohort studies it has been reported that long-term nonprogressors （LTNPs）, who remain asymptomatic for more than one decade without antiretroviral therapy, harbored nef-deleted viruses.4-7 Intense studies on nef genes from LTNPs have been done in Europe and United States but none of such studies have been done in China.[第一段]     

献血者中TTV感染情况调查及部分序列分析

目的调查了解淮阴地区献血者中一种新的肝炎相关病毒——TTV的感染情况.方法用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)技术对淮阴地区220名专业献血者进行血清中输血传播病毒(TTV)的检测,并在PUC18中对其开放读码框2(ORF2)基因进行了克隆.结果序列分析表明,该序列与国内外发现的TT病毒AB008394(日本株)、AF079173(中国河北株)对应位置核苷酸同源性为98%和97%,献血者中TT病毒阳性率为18%.结论病毒ORF2基因高度保守,献血者中有较高的TTV感染率.     

固定献血者血小板功能的检测

目的分析捐献血小板人群的献血间隔和频采后的血小板功能状态,确保血小板的采集质量和献血者的自身健康。方法分别检测固定频采血小板捐献者（2次/月）和正常固定献血者（1次/月）的红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、白细胞计数（WBC）、平均红细胞体积（MCV）、平均血红蛋白含量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞宽度标准差（RDW-SD）、血小板计数（Plt）、平均血小板体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、体外血小板聚集率等指标并进行比较。结果RBC、Hb、WBC、MCV、MCHC、RDW-SD两组之间比较无显著性差异,Plt[（339.36±30.24）×109/Lvs.（248.25±20.61）×109/L,P〈0.0001]、MPV[（8.44±0.52）flvs.（8.65±0.32）fl,P〈0.001]、PDW[（15.52±1.13）%vs.（13.96±0.45）%,P〈0.0001]及血小板体外聚集功能有显著性差异。结论频采者虽然有较高的Plt计数,但血小板的功能低于正常间隔血小板捐献者。因此,为保障血小板采集质量,应尽可能避免频繁采集血小板。     

河北省HIV-1 RNA基因gag区和env区亚型分析

目的分析河北省新确认艾滋病感染者HIV-1 RNA基因gag区和env区亚型分布情况。方法采用巢式PCR的方法扩增gag和env基因,测定其序列,并与国际标准亚型毒株进行对比。结果河北省内HIV-1主要流行毒株为CRF01-AE,占41.5%(56/135);其次是B亚型毒株和BC重组亚型毒株,各占40.7%(55/135)和16.3%(22/135);C亚型占1.5%(2/135)。结论河北省HIV-1流行亚型日益多样化,应加强防控,特别是性传播的防控成为当务之急。     

Rh(-)献血者128例基因分型

目的：探讨Rh(-)献血者RhD基因分型的临床意义。方法：采用PCR－－SSP技术检测郑州市128例Rh（－）献血者的RhD基因结构，用氯仿／三氯甲烷法放散检测D^u检测，结果：RhD基因多态性存在3种基本形式，其中外显子完整存在32例（25．00％），全部为D^u型，完全缺失85例（66．41％），部分缺失11例（8．59％），其中2例为D^u型。结论：RhD基因的丰富多态性对于确保输血安全具有指导意义。     

共表达HIV—1CN与IL—2基因产物免疫鼠T淋巴细胞亚群的研究

目的：研究细胞因子在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应。方法：以表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇａｇ－ｇｐ１２０基因的核酸疫苗质粒ｐｃＤＮＡＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ－ｌｇａｇ－ｇｐ１２０基因与ＩＩ－２基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＨ－２银川市Ｂａｌｂ／ｃ鼠,用流式细胞仪测定１００００个免疫鼠脾淋巴细胞中ＣＤ４＾＋,ＣＤ８Ｔ细胞数及ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值。结果：ｐＧＩＬ－２与ｐｃＤＮＡＧＰ比较,ｐＧＩＬ－２免疫鼠ＣＤ＾４和ＣＤ＾８Ｔ细胞数明显提高。结论：在机体的免疫应答过程中,细胞因子ＩＬ－２能很好地发挥免疫佐剂的作用。     

无偿献血者血液检测分析

目的 探讨无偿献血者血液标本检测结果,为临床进一步提高血液检测合格率提供参考。方法 收集我中心血站于2015年1月～2019年5月接收的无偿献血者血液标本共计105 365人次(份),分析献血者的血液质量情况,并统计不同年龄、不同性别献血者的血液检查质量情况。结果 无偿献血者血液检查不合格率达1.14%。不同年龄、不同性别的无偿献血者的血液检查结果不合格率对比具有明显差异(P0.05)。结论 无偿献血者的血液检查不合格率虽然偏低,但是依然需要高度重视无偿献血者的不同性别、不同年龄对血液标本检测结果的影响。这就需要临床加强无偿献血前宣传教育、普及无偿献血知识,提高广大市民对无偿献血事业的认可与支持,并严格按照《献血法》所提出的要求,检测输血学传播疾病,进一步提高血液检测合格率,使更多的无偿献血者的血液应用于临床。