大鼠脊髓损伤前后外周血CD3+ CD8+ CD28-和CD3+ CD8+ CD28+细胞亚群的变化

目的：：探讨SD大鼠脊髓损伤( spinal cord injury,SCI)前后外周血抑制性T细胞( suppress T lymphocytes,Ts)和细胞毒性T细胞( cytotoxic T lymphocytes,Tc)亚群的变化规律。方法：取10只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学脊髓损伤撞击仪制作重物坠落SCI模型。于SCI前及后1、3、5、7、14、21、28和56 d收集外周血,流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD3+CD8+CD28-Ts 和CD3+CD8+CD28+Tc亚群的变化规律。结果：SCI前,正常大鼠外周血中Ts和Tc亚群占CD3+总T细胞的百分比分别为(30.27±12.09)%和(14.75±4.29)%。损伤后1 d,Ts的比例为(22.58±12.12)%。术后5 d时其百分比下降至最低,为(20.86±10.41)%。术后7~21 d,其比例恢复至术前水平,28 d时显著升高,其比例为(37.90±12.98)%。56 d时其比例为(33.79±11.44)%,恢复至损伤前水平(P>0.05)。 Tc和Ts亚群的变化趋势相反,在损伤后1、5、21和28 d时其比例分别为(17.29±7.10)%、(20.02±6.24)%、(23.89±6.78)%和(13.81±11.21)%。但56 d时其比例没有恢复至术前水平,而是进一步下降至(8.71±6.44)%(P<0.01)。结论：在SCI后的早期阶段,SD大鼠外周血Tc占明显优势,提示Ts功能抑制、Tc功能增强是SCI免疫损伤机制之一。 SCI后5~21 d是进行免疫调节治疗的关键时间窗。     

慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化

目的研究慢性肝炎外周血淋巴细胞亚群的变化。方法健康医护人员10例，乙肝病毒携带11例，慢性乙型肝炎21例通过流式细胞术进行外周血CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋检测。结果CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋比值、CD3^＋CD8^＋百分率在三组间有显著性差异（P〈0．01，P〈0．05）。CD3^＋CD4^＋百分率，CD3^＋百分率在慢性乙型肝炎组，乙肝病毒携带组与对照组无统计学意义。结论慢性乙型肝炎患者体内存在细胞免疫功能障碍，外周血CD3^＋CD8^＋百分率升高，CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋比值降低，无CD3^＋CD4^＋百分率变化，可能与其功能变化有关。     

原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析

目的研究原发性肝癌(HCC)病人外周血CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子的表达.方法用流式细胞仪对20例原发性肝癌病人的CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子(即CD8+CD28+和CD8+CD28)的表达进行检测.结果HCC病人CD8+细胞百分率升高,CD8+CD28+细胞百分率降低,CD8+CD28细胞百分率升高,与对照组相比具有显著性差异.CD8+CD28+、CD8+CD28-细胞百分率与CD8+T细胞百分率的相关性研究表明,CD8+CD28-细胞数与CD8+T细胞数之间呈正相关.结论HCC病人CD8+细胞升高,CD8+细胞上CD28分子的表达是异常的,即CD8+CD28-细胞数升高,CD8+CD28+细胞数降低;CD8+T细胞的升高是CD8+CD28-细胞亚群升高的结果.     

CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增

 【目的】 探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法。【方法】 收集健康志愿者外周血5例，免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg。将实验分为三组，第一组在CD4+CD25+Treg中加入100 nM rapamycin (1μg/ml)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周，第8 天开始加入1000U/mL的IL-2，第二组培养条件除不加rapamycin外其余与第一组相同，第三组培养细胞为CD4+CD25-T细胞，培养条件同第一组。培养第7、14、21天收集细胞计数，第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达。MTT法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。 【结果】 三组细胞均有明显的扩增，加rapamycin培养的CD4+CD25+Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低，但细胞的纯度明显增加。CD4+CD25-T细胞组在培养第一周扩增迅速，从第二周开始增殖减慢，CD4+CD25+ Treg 细胞的比例较培养前无明显的差别。三组至第三周时扩增倍数分别为 89.4+20.53、338.4+77.64 、215.6+54.58（F=484.655,p<0.0001），细胞的纯度分别为84.32+4.62%、34.04+5.78%、0.68+0.39% (F=24.660,p<0.0001)。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用，并且随着效靶比浓度的降低而降低。在CD4+T/Treg比例为8：1、4：1、2：1、1：1时对自体CD4+T细胞的抑制率分别为9.65%、16.43%、28.75%、55.34%，对异体CD4+T细胞的抑制率分别为6.43%、14.72%、26.47%、50.25%，而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之间均无明显的差异。结论 我们采用rapamycin+CD3/CD28单抗标记的磁珠+IL-2在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg，其扩增的倍数为89.4+20.53，具有免疫抑制功能，有望进一步应用于临床。     

双向电泳-质谱法分析人CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25-T细胞蛋白质组差异

目的 用双向凝胶电泳-质谱法(2．DE／MS)分析人CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达的蛋白质组，建立二者之问的差异表达谱。方法 提取人脾脏源CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞总蛋白质，双向电泳分离蛋白，比较两种细胞的蛋白质组表达差异，对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间问质谱(Matrix-assisted laser des-orpfion／ionization time of flying maass spectrometry，MAIDI-TOF-MS)进行鉴定。结果 胶图差异分析发现25个表达水平存在明显差异的蛋白质点，其中17个点在CD4^ CD25^-T细胞上调，8个点在CD4^ CD25^ T细胞上调。质谱初步鉴定出15个差异蛋白质点。结论 CD4^ CD25^ T细胞和CD4^ CD25^-T细胞表达蛋白质组存在差异，这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究调节性T细胞功能相关蛋白质。     

Expression of CD8+ CD28+ and CD8+ CD28- in the peripheral blood of pancreatic cancer patients

目的 探讨胰腺癌患者外周血CD8+T淋巴细胞亚群及CD8+T淋巴细胞上CD28分子和CD103分子的表达及其临床意义.方法 应用流式细胞术对52例胰腺癌患者(胰腺癌组)和40名健康体格检查者(对照组)的外周血淋巴细胞中CD8及CD28分子表达情况进行检测;再选取10例胰腺癌患者,分别检测其外周血、癌组织及癌旁组织中CD103分子的表达.结果 胰腺癌组CD8+ CD28+T淋巴细胞比例为(9.88±4.32)％,较对照组的(14.12±4.95)％显著降低(P＜0.01) ;CD8+ CD28-T淋巴细胞比例为(13.13±5.52)％,与对照组[(11.41±4.01)％]的差异无统计学意义(P＞0.05).淋巴结转移组CD8+ CD28+、CD8+CD28-T淋巴细胞比例分别为(10.92±4.54)％、(13.62±4.52)％,无淋巴结转移组分别为(10.54±3.83)％、(14.15±3.27)％,两组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).Ⅲ期胰腺癌患者CD8+ CD28+T淋巴细胞比例为(6.45±1.22)％,显著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ期的(13.01±2.31)％、(10.79±1.64)％、(10.5±1.45)％(P值分别＜0.01或0.05).胰腺癌患者癌组织中CD8+T淋巴细胞上CD103分子表达率为26％,显著高于外周血及癌旁组织中的2％及8％(P值均＜0.01).结论 胰腺癌患者外周血中CD8+ CD28+T淋巴细胞的比例下降和功能减退,E-cadherin/αEβ7信号通路异常,可能与胰腺癌患者机体免疫力下降有关.     

IL-15诱导CD4+CD25- T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8....     

分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD_4~+、CD_8~+表达及CD_4~+/CD_8~+值的变化

目的探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系。方法72例反复发作性分泌性中耳炎组患儿及30例单纯腺样体肥大组患儿腺样体组织,采用免疫组化方法检测T淋巴细胞CD+4、CD+8的表达并计算CD+4/CD8+值,分析2组间是否有差异。结果反复发作性分泌性中耳炎组患儿腺样体组织中CD4+、CD+8细胞数及CD+4/CD+8值分别为42±9,20±7,2.10±0.17,高于单纯腺样体肥大组16±8,11±6,1.39±0.15,差异有统计学意义(P<0.01);其中CD+4细胞数明显多于CD+8细胞数。结论反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关。     

CD4+CD56+ hematodermic neoplasm in a child

CD4~+CD56~+ hematodermic neoplasm (HN) is a rare, highly aggressive systemic neoplasm, which had been described under various names including lymphoblastic lymphoma of natural killer (NK) phenotype, blastic NK cell lymphoma (BNK), leukemic lymphoma of immature NK lineage and CD4~+CD56~+ HN. This malignancy is mainly involved in elderly people and usually a rapidly fatal disease, since consistently effective treatments have not yet been developed. It is relatively rare in children.~(1-6) Herein we report a boy with CD4~+CD56~+ HN.     

CD_4~+ CD_(25)~+调节性T细胞与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,而且炎性反应的起始与持续都有先天性和获得性免疫应答的参与。CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg)是一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群,能够抑制效应T细胞的活性。过去许多研究已证实,CD4+ CD25+ Treg在动脉粥样硬化中起着重要作用,本文综述了CD4+ CD25+ Treg与动脉粥样硬化的关系。     

三氯乙烯对大鼠外周血淋巴细胞CD3＋CD4＋CD8＋的影响

目的探讨三氯乙烯（TCE）对大鼠外周血淋巴细胞CD3＋CD4＋CD8＋的影响。方法采用豚鼠最大值法（GPMT）。将大鼠随机分为3组,分别为阴性对照组、阳性对照组、TCE实验组,用皮内注射的方式分别注射橄榄油、2,4-二硝基氯苯（DNCB）、三氯乙烯（TCE）,实验结束后收集大鼠外周血液,用流式细胞仪检测淋巴细胞CD3＋CD4＋CD8＋比例。结果TCE实验组和阳性对照组大鼠外周血淋巴细胞CD3＋比例高于阴性对照组;阳性对照组CD4＋、CD4＋／CD8＋高于阴性对照组,CD8＋低于对照组,存在显著性差异（P〈0．05）;TCE实验组CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋与阴性对照组比较无统计学差异。结论三氯乙烯经皮染毒对大鼠外周血淋巴细胞亚型比例有一定影响,可能与三氯乙烯的致敏作用存在一定关系。     

CD+4,CD+8及CD+4CD+8对于骨转移瘤治疗效果的监控作用

目的判断骨转移瘤患者经过放射性核素89SrCl2治疗后免疫学指标CD4 ,CD8 及CD4 /CD8 的变化及该指标对治疗效果的监控作用。方法选择经临床确诊的应用89SrCl2治疗的患者及正常对照组各24例。用流式细胞仪分别测定各患者治疗前、后及正常对照组CD4 ,CD8 及CD4 /CD8 值。每例患者均于治疗后第2,4和6个月行全身骨显像,记录骨转移病灶数及计算平均值。结果正常对照组CD4 ,CD4 /CD8 值高于骨转移瘤患者,而CD8 值低于骨转移瘤患者(P<0.05)。89SrCl2治疗后病灶数随CD4 增加、CD8 降低、CD4 /CD8 增加而相应减少。第4个月89SrCl2作用达峰值,各指标也达到极限值。结论CD4 ,CD8 ,CD4 /CD8 可以灵敏反映89SrCl2治疗效果,客观反映骨转移瘤病灶的变化。     

Higher proportions of peripheral CD19+CD5+ B cells predict

Background  The cause of late-onset hemorrhagic cystitis (LOHC) after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) remains obscure. In clinical practice, some LOHC patients respond to immunosuppression. The aim of this study was to determine the immune pathogenesis of LOHC post allo-HSCT.

Methods  With the diagnosis of LOHC, patients were given initial treatment consisting of fluid hydration, alkalization and forced diuresis, and empirical anti-viral therapy for 10–14 days or until a week after the virus became negative. The nonresponders were applied corticosteroid. Seven to ten days later, patients’ response was evaluated. Along with treatment, CD19⁺ B lymphocyte subsets were measured at various study points.

Results  From October 2009 to March 2010, we found 28 cases of LOHC occurred in 25 patients who underwent allo-HSCT in our hospital. Except that three cases were not treated according to the protocol, the other 25 cases were divided into three groups: anti-virus responders (Group A, n=6), corticosteroid responders (Group B1, n=16), corticosteroid and anti-virus nonresponders (Group C, n=3) according to their clinical response. Percentages of CD19⁺CD5⁺ B lymphocytes were not significantly different among three groups at onset of LOCH. However, in Group B1 after the first anti-virus phase, percentages of CD19⁺CD5⁺ lymphocytes significantly increased comparing with those at onset (P=0.022), and then significantly decreased at PR (P=0.003) and CR (P=0.002) with corticosteroid treatment. But significant change was not observed in Groups A and C.

Conclusion  The immune etiology seems to be involved in the development of LOHC and the proportion of CD19⁺CD5⁺ lymphocytes may serve as a cellular biomarker to predict the response to corticosteroid in LOHC.

     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在儿科临床的实用价值

CD4+CD25+Treg细胞可分为天然性Treg细胞和获得性/诱导性Treg细胞。在病毒感染过程中,CD4+CD2+5Treg细胞维持机体对病毒的免疫耐受状态,促进病毒感染并导致其慢性化。CD4+CD2+5Treg细胞在幼年特发性关节炎的发病过程中发挥重要作用。哮喘患儿血CD4+T淋巴细胞表面的烟碱样乙酰胆碱受体(nAChRα7)表达增加,CD4+CD2+5FoxP3+Treg细胞明显减少。特发性血小板减少性紫癜患儿体内存在自身反应性T细胞的活动及细胞因子的紊乱,CD4+CD25highFoxP3+Treg细胞数量减少。体内外有效诱导、扩增和控制CD4+CD2+5Treg细胞的技术将会为相关儿科疾病的治疗提供崭新思路和有效方法。     

大鼠肝移植自发免疫耐受模型CD4+CD25+和CD8+CD28-调节性T细胞的变化

目的:比较CD8 CD28-,CD4 CD25 调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)及其亚群表型在大鼠自发免疫耐受形成中的变化,并探讨其在肝移植免疫耐受形成中的作用.方法:(1)建立雄性Brown Norway近交系大鼠(简称BN)到Lewis近交系大鼠(简称LEW)原位肝移植免疫耐受模型(存活＞120 d),取同周龄LEW大鼠作为对照组,应用梯度离心法分离外周血及脾单个核细胞,应用流式细胞仪检测CD8 CD28-,CD4 CD25 T细胞亚群比例;(2)应用免疫磁珠分离方法,通过间接法阴性分选和直接法阳性分选两步分离纯化CD8 CD28-,CD4 CD25 T细胞,并对其亚型表型进行检测,比较它们在移植耐受前后的差别.结果:(1)耐受组大鼠外周血及脾单个核细胞中CD8 CD28-,CD4 CD25 调节性T细胞的比例同对照组比较:CD8 CD28-T细胞增高,外周血为(30.2±5.8)%比(16.4±6.1)%,脾为(23.7±7.2)%比(13.4±5.5)%,P＜0.01;CD4 CD25 T细胞无明显差别,外周血为(9.9±3.5)%比(10.4±4.2)%,脾为(15.1±3.7)%比(14.7±4.6)%,P＞0.05.(2)CD8 CD28-,CD4 CD25 T细胞的亚型表型检测,①CD8 CD28-T细胞:耐受组为CD152(CTL-4)-,CD11b ,CD25-,CD45RO ;对照组为CD152(CTL-4)-,CD11b ,CD25-,CD45RO部分表达(76%);②CD4 CD25 T细胞:耐受组为CD152(CTL-4) ,CD11b ,CD28 ,CD45 RO ;对照组为CD152(CTL-4) ,CD11b ,CD28 ,CD45 RO .结论:CD8 CD28-Treg细胞在耐受组大鼠外周血及脾单个核细胞中的比例明显增高,而CD4 CD25 Treg细胞则无明显改变,提示CD8 CD28-Treg细胞在大鼠肝移植自发耐受的形成中的作用可能更为重要;CD152(CTL-4)在两种Treg细胞表达差别可能是引起它们作用及表现不同的重要原因;黏附分子CD11b可能同两种Treg细胞的功能均密切相关;CD8 CD28-Treg细胞包含着不同亚群,而CD45RO表达的增加可能同CD8 CD28-Treg细胞发挥抑制功能密切相关.     

分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD4+、CD8+及CD4 +/CD8+值的表达

目的 探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系.方法 72例反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织及34例非反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织.采用免疫组化方法检测上述二组T淋巴细胞CD4 +、CD8+的表达及CD4+/CD8 +值,统计分析二组之间是否有差别.结果 反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD4+ 、CD8+细胞数及CD4+/CD8+ 分别为41.9±9.07,20.45±7.08,2.10±0.17;较非反复发作组17.4±6.85,13.02±5.88,1.33±0.11有显著性差异(P <0.05);其中CD4+细胞数明显多于CD8+细胞数.结论 反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关.     

CD69在慢性乙肝患者CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达

目的：观测慢性乙肝患者外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞早期激活标志CD69的表达.方法：静脉采集慢性乙肝患者普通肝素抗凝血2 ml,在植物血凝素（PHA）20μg/ml条件下进行全血培养,4 h后用双色免疫荧光标记流式细胞术检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达。结果：正常人外周血只有很少量CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,经PHA刺激后CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达率明显升高,较刺激前有统计学差异（P＜0.01）。同样,慢性乙肝患者在激活前后也有统计学差异（P＜0.01）;慢性乙肝患者在PHA刺激前有一部分CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,明显高于对照组（P＜0.01）。结论：本研究结果可能与乙肝患者体内病毒免疫紊乱有关系。     

小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定

目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点.文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定.方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4( CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR )、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05).②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%.FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03) %,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为( 23.97±2.00)%和(16.78±3.24%).CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67) %,明显高于在CD4+ 和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%].纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达.结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+ Treg细胞表型及功能特征的细胞.     

CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展

CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（CD4⁺CD25⁺Tr）是一类最近才被人们认识的免疫调节细胞,起源于胸腺,发挥抑制性免疫调节作用,持续性表达IL-2Rα链（CD25）,具有免疫抑制性和免疫无能性两大特征,在自身免疫性疾病的治疗、肿瘤的免疫治疗以及移植耐受的诱导等方面具有潜在的应用价值。本文作者拟对CD4⁺CD25⁺Tr细胞的生物学特性及应用前景作一综述。     

CD4+CD25+调节性T细胞和感染免疫

免疫抑制是减轻机体免疫损伤的重要机制，近来研究发现，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是免疫抑制系统的关键组分之一。这群细胞具有明显的免疫抑制效能，通过与细胞直接接触发挥作用。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的生物学特性及其在感染免疫中的作用进行简要综述。