褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

Role of connective growth factor in plasminogen activator inhibitor-1 and fibronectin expression induced by transforming growth factor β1 in renal tubular cells

Background Connective tissue growth factor (CTGF) contributes greatly to renal tubulointerstitial fibrosis, which is the final event leading to end-stage renal failure. This study was designed to investigate the effects of CTGF antisense oligodeoxynucleotides (ODNs) on the expressions of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) and fibronectin in renal tubular cells induced by transforming growth factor β1 (TGF-β) in addition to the role of CTGF in the accumulation and degradation of renal extracellular matrix (ECM). Methods A human proximal tubular epithelial cell line (HKC) was cultured in vitro. Cationic lipidmediated CTGF antisense ODNs were transfected into HKC cells. After HKC cells were stimulated with TGF-β1 (5 μg/L), the mRNA levels of PAI-1 and fibronectin were measured by RT-PCR. Intracellular PAI-1 protein synthesis was assessed by flow cytometry. The secreted PAI-1 and fibronectin in the medium were determined by Western blot and ELISA, respectively. Results TGF-β was found to induce tubular CTGF, PAI-1, and fibronectin mRNA expression. PAI-1 and fibronectin mRNA expression induced by TGF-β was significantly inhibited by CTGF antisenes. ODNs CTGF antisense ODNs also inhibited intracellular PAI-1 protein synthesis and lowered the levels of PAI-1 and fibronectin protein secreted into the medium. Conclusions CTGF may play a crucial role in the accumulation and degradation of excessive ECM during tubulointerstitial fibrosis, and transfecting CTGF antisense ODNs may be an effective way to prevent renal fibrosis.     

Soluble expression of active human β-defensin-3 in Escherichia coli and its effects on the growth of host cells

Background Human β-defensin-3 （HBD3） is an epithelial peptide that has been demonstrated to have a salt-insensitive broad spectrum of potent antimicrobial activity. Expressing antimicrobial peptides in Escherichia coil （E. colt） is very difficult for it can result in death of the bacterial host cells. Our aim was to establish a prokaryotic system expressing soluble HBD3 protein and demonstrate the antimicrobial activity of the expressed protein. We then studied whether the host cells would activate the suicide pathways. Methods We first cloned the complementary DNA coding for the mature chain of HBD3, inserted it into the vector PGEX-KG then transformed E. coil BL21 （DE3） with the appropriate recombinant plasmid. After induction with 0.5 mmol/L isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside （IPTG） the transformed E. cofiproduced a recombinant glutathione S-transferase and HBD3 （GST-HBD3） fusion protein. The fusion protein was treated with thrombin to produce pure HBD3 protein then the antimicrobial activity of HBD3 was evaluated in a liquid microdilution assay. Results The fusion protein GST-HBD3 was efficiently cleaved by thrombin and yielded HBD3 that had anti-staphylococcus aureus activity with a minimal inhibitory concentration level of 12.5 μg/ml. The E. coil strain expressing the recombinant protein did not grow slower than the empty vector strain. Conclusion Active HBD3 in E. coil by expressing the recombinant protein GST-HBD3 could be produced, and suicide did not occur in the E. coli strain expressing the recombinant protein.     

Oncol2012: 甲状腺癌和血液中MMP-2，MMP-9，TIMP-1和TIMP-2水平之间的相关性

目的：探讨外周血基质金属蛋白酶-2（MMP-2）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）,基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）抑制剂,基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）抑制剂的表达水平和甲状腺癌的相关性。方法：使用RT-PCR与ELISA法检测30例甲状腺癌患者,27例甲状腺良性疾病患者,25例健康志愿者外周血中的MMP-2,MMP-9,TIMP-2,TIMP-1 的表达水平。结果：MMP-2,MMP-9,TIMP-2,TIMP-1在甲状腺癌患者外周血中的表达水平均显着高于良性甲状腺疾病患者和健康志愿者（P <0.05）。然而,良性甲状腺疾病患者和健康志愿者之间无显着差异（P> 0.05）。两种检测方法对于甲状腺癌的准确率为83.33%。结论：测定外周血中的MMP-2,MMP-9,TIMP-2和TIMP-1表达水平对甲状腺癌的确诊是有帮助的,尤其对于术前的评估更加重要。     

The role of connective tissue growth factor, transforming growth factor β1 and Smad signaling pathway in cornea wound healing

The cornea is a highly specialized and unique organ in the human body. Its main function is to project light from the external environment onto the retina, and it has a specific transparency to perform its function properly. The transparency and integrity of the cornea is of vital importance. The corneal wound, especially laceration deep to Bowman＇s membrane and stroma, which will inevitably cause scar formation, may cause the degeneration or even loss of sight.     

溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜MMP-1、TIMP-1的表达

目的建立大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型,检测UC大鼠结肠黏膜基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的表达。方法采用硫酸葡聚糖（DSS）诱导大鼠UC模型,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）测定大鼠结肠黏膜MMP-1、TIMP-1在转录水平的表达;免疫组织化学染色法测定MMP-1、TIMP-1蛋白水平的表达。结果在转录水平上,UC大鼠病变结肠黏膜的MMP-1、TIMP-1的表达明显高于正常对照组（P〈0．05）,两者具有显著差异,而以MMP-1的增高程度更为明显;蛋白水平的表达与此一致。结论DSS诱导的大鼠溃疡性结肠炎与MMP-1的过度表达及TIMP—1的相对不足有关,MMP-1／TIMP-1的比例失调在UC的损伤过程中有重要作用。     

MMP-9、TIMP-1与肾小球硬化关系的中西医结合研究进展

肾小球硬化(glomerular sclerosis,GS)是大多数肾脏疾病的共同病理特征,是多种慢性肾脏疾病进行性发展的最后转归,是不同肾脏疾病终末期共同的形态学表现,能引起肾单位结构和功能破坏,最终发展为慢性肾功能衰竭.其主要特点是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的过度积聚[1].ECM在肾小球内的沉积过程及发生机制十分复杂,长期以来,人们对ECM积聚的研究主要集中于合成增加,近年来发现ECM降解酶系异常发挥着同样重要的作用.其中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)的功能紊乱在其发生发展过程中起着尤为重要的作用.     

高糖下系膜细胞细胞外基质主要成分及MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TGF-β1的动态变化

目的：观察高糖下系膜细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2，MMP-9)，金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP—1)及转化生长因子β1(TGF-β1)，层粘连蛋白(LN)，胶原蛋白IV(colⅣ)的动态改变，探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法：采用Western印迹杂交、酶谱分析法及ABC-EHSA法检测。结果：随着高糖作用时间的延长，体外培养大鼠系膜细胞分泌TIMP-1，TGF-β1，LN、colⅣ逐渐增加，分泌MMP-2、MMP-9逐渐减少。结论：高糖引起系膜细胞套泄TGF-β1异常增加，同时有MMPs/TIMPs、细胞外基质合成降解的失衡，是DN的病理基础。     

Influences of Chinese medicinal on TGF-β1 and CTGF secreted by mesangial cells in rats fostered by high glucose combining Ang Ⅱ

目的 探讨益气养阴消癥通络中药对高糖联合血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)培养的大鼠肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响,为进一步研究其防治糖尿病肾病(DN)的作用机理提供依据.方法 原代培养肾小球系膜细胞(MCs),实验共分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+ AngⅡ组、中药血清组、厄贝沙坦血清组.于第5代时,予高糖、高糖联合AngⅡ刺激,并同时进行益气养阴消癥通络中药及厄贝沙坦西药血清干预,48 h后ELISA法检测细胞上清TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的蛋白含量,Western blot检测CTGF蛋白表达水平.结果 与低糖对照组比较,其他组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显升高;与高糖+ AngⅡ组比较,厄贝沙坦血清、中药血清组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显下降(P＜0.01).结论 益气养阴消癥通络中药可能通过抑制CTGF表达而有效降低TGF-β1的水平,从而抑制细胞外基质的合成,发挥其保护肾脏的作用.     

TGF-β和TIMP-1在宫腔粘连患者血清中的表达

目的检测宫腔粘连患者血清中转化生长因子-β(TGF-β)和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的表达水平,探讨其在宫腔粘连发病中的作用。方法选择2012年1月至2012年11月期间在我院因宫腔粘连行宫腔粘连分离术的91例患者作为研究对象,根据宫腔粘连程度将患者分为轻度、中度和重度宫腔粘连组;同期因继发不孕行宫腔镜检查且子宫内膜正常的35例患者为对照组,检测两组患者血清中TGF-β和TIMP-1的水平。结果轻度、中度和重度宫腔粘连患者血清TGF-β和TIMP-1水平均明显高于对照组(P<0.05);重度粘连患者血清中TGF-β和TIMP-1水平明显高于轻度和中度宫腔粘连患者(P<0.05)。结论患者血清TGF-β和TIMP-1水平与宫腔粘连的发生和发展有关。     

血清TGF-β1、MMP-9/TIMP-1在不同分期慢性肾衰竭患者的表达

目的 探讨慢性肾衰竭(CRF)患者不同分期血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达状况及其与肾脏纤维化的关系.方法 60例CRF患者按估计肾小球滤过率(eGFR)的不同被分为:第3期10例(eGFR 30-59 ml/min),第4期21例(eGFR 15-29 ml/min),第5期29例(eGFR＜15 ml/min),采用ELISA法检测不同分期的CRF患者和20例正常对照组血清TGF-β1、MMP-9及TIMP-1水平,分析这些指标与肾功能之间的相关性.结果 TGF-β1在CRF组与对照组并没有统计学差异.MMP-9、TIMP-1在CRF组明显升高,MMP-9/TIMP-1比值则明显降低.随着eGFR的下降,MMP-9、TIMP-1呈同向性降低,而MMP-9/TIMP-1比值却逐渐升高.相关性分析显示,TIMP-1与血清肌酐(SCr)、eGFR分别呈负相关和正相关(r=-0.625,0.638,均P<0.001);MMP-9/TIMP-1比值与SCr、eGFR分别呈正相关和负相关(r=0.505,-0.516,均P<0.001).结论 血清MMP-9、TIMP-1参与了CRF的进展,血清TIMP-1水平或MMP-9/TIMP-1比值能较好地反映肾脏纤维化的程度.     

人视网膜色素上皮细胞中MMP-2和TIMP-1表达的调节

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织型抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的调节作用。方法体外培养的第3~5代人眼RPE细胞经0.00(对照组)、0.01、0.10、1.00及10.00 ng/ml TGF-β1处理24 h后,采用免疫组织化学方法和计算机图像分析系统检测TGF-β1对体外培养的人RPE细胞MMP-2和TIMP-1表达的影响。结果0.10、1.00及10.00 ng/ml TGF-β1处理组MMP-2阳性细胞的平均吸光度(A)值分别为(0.13±0.02)、(0.14±0.01)和(0.18±0.02),与对照组(0.09±0.02)相比差异均有显著性意义(P<0.05或0.01);TIMP-1阳性细胞的平均吸光度(A)值,除了0.10 ng/ml TGF-β1作用组外,其它浓度TGF-β1作用组与对照组相比差异无显著性意义(均P>0.05)。结论人RPE细胞中TGF-β1对上调MMP-2的表达起重要作用,这也是MMP-2/TIMP-1之间平衡改变的原因。     

复元胶囊对肝纤维化大鼠肝脏中的TIMP-1和TGF-β1表达的影响

目的:研究复元胶囊对猪血清所致大鼠肝纤维化的保护作用及其机制.方法:将大鼠随机分为正常组,模型组,复元胶囊低、中、高剂量组,阳性对照组(复方鳖甲软肝片水溶液组)6组,每组8只.除正常组外,其余各组用猪血清,0.5 ml/只,腹腔注射,每周两次(星期一,星期四)共10周,复制大鼠免疫性肝纤维化模型,以此同时给予复元胶囊低、中、高剂量组,阳性对照组相应药物干预.造模、给药结束后观察各组动物的肝组织病理学变化,并检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,检测血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(IV-C)及层粘连蛋白(LN)的含量.免疫组化显示基质金属蛋白酶组织抑制因子1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)及转化生长因子β1(Transforming growth factor β-1,TGF-β1).结果:复元胶囊组血清中ALT、AST、HA、LN、IV-C、PCⅢ比模型组低,特别是复元胶囊高剂量组,差异有统计学意义(P相似文献   

Inhibiting effect of short hairpin RNA on expression of transforming growth factor-β1 in human peritoneal mesothelial cells induced by peritoneal dialysis solution

The peritoneum response to peritoneal dialysis can lead to fibrosis. The transforming growth factor-β1 （TGF-β1） plays an important role in regulating tissue repair and remodeling after injury. Excessive synthesis and deposition of matrix proteins by peritoneal mesothelial cells can lead to structural and functional changes in the peritoneal membrane, jeopardizing the long-term efficacy of peritoneal dialysis （PD）. Prolonged exposure to high glucose concentrations in PD fluid has been implicated as a major stimulus to matrix accumulation, through the induction of transforming growth factor-β1 （TGF-β1）.     

转染Smad2基因的大鼠肾系膜细胞MMP-2及TIMP-2 表达的改变

目的 通过对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MsC)转染Smad2基因,观察转染阳性细胞克隆MMP-2和TIMP-2表达的改变,以进一步阐明TGF-β介导肾小球硬化发生的作用机制。方法 经磷酸钙介导将含Smad2重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及Western blot鉴定;又分别采用Western blot、酶谱分析法和RT-PCR法,检测转染阳性细胞克隆MMP-2和TIMP-2表达改变。结果 成功建立高表达Smad2的阳性MsC克隆(T-12、T-31、T-35与T-40),并证实其MMP-蛋白分泌和酶活性明显升高,同时TIMP-2 mRNA及其蛋白的表达也明显上调。结论 TGF-β可能通过上调Smad2而增强肾组织内MMP-2/TIMP-2的表达,从而促进肾小球损伤和硬化的发生发展过程。     

黄芪注射液对大鼠胰腺纤维化及TG F-β1、 M M P-1、TIMP-1蛋白表达的影响

目的：探讨黄芪注射液对慢性胰腺炎大鼠胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1蛋白表达的影响。方法：通过胰管内注射2%三硝基苯磺酸建立大鼠慢性胰腺炎纤维化模型。30只雄性SD大鼠随机分成三组：正常组、模型组、黄芪干预组,每组10只。4周末应用免疫组化法和图像分析技术定量检测大鼠慢性胰腺炎胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1的表达情况,同时胰腺组织行HE染色,观察病理形态学改变。结果：与对照组比较,模型组发生明显的胰腺纤维化,TGF-β1及TIMP-1的表达明显升高（P〈0.01）。干预组纤维化程度及TGF-β1、TIMP-1的表达低于模型组（P〈0.05）,而MMP-1在正常胰腺组织与模型组及干预组中的表达无显著性差异（P〉0.05）。结论：黄芪注射液抑制大鼠胰腺纤维化组织的形成可能与其降低TGF-β1及TIMP-1蛋白表达有关。     

恩替卡韦联合舒肝解郁胶囊对肝硬化患者血清TGF-β1 TIMP-1的影响

目的：观察恩替卡韦联合疏肝解郁胶囊对乙肝肝硬化患者血清转化生长因子β1（TGF-β1）、金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）的影响。方法选取住院乙肝早期肝硬化患者60例随机分为2组,每组30例,对照组在常规保肝、降酶等治疗基础上给予恩替卡韦治疗;治疗组在常规治疗基础上给予恩替卡韦及舒肝解郁胶囊治疗。治疗24周后,观察患者血清中丙氨酸转氨酶、透明质酸、Ⅳ型胶原、TGF-β1及TIMP-1的变化。结果经过24周的治疗,治疗组患者的丙氨酸转氨酶、透明质酸、Ⅳ型胶原、TGF-β1及TIMP-1的水平明显低于对照组。结论恩替卡韦联合疏肝解郁胶囊能够降低肝纤维化患者血清TGF-β1、TIMP-1的水平,具有抗纤维化的作用。     

血清TGF-β1、MMP-9和TIMP-1对子宫内膜息肉切除术后发生宫腔粘连的预测价值

目的:筛选子宫内膜息肉切除术后发生宫腔粘连的影响因素,并探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)水平在预测术后2年内发生宫腔粘连的诊断价值。方法:选择2016年1月至2019年6月在我院实施宫腔镜子宫内膜息肉切除术的患者341例,术后对所有患者均进行2年的随访,期间失访23例。术后2年出现宫腔粘连53例,为宫腔粘连组;未发生宫腔粘连患者265例,为非宫腔粘连组。采用酶联免疫吸附试验测定患者术前的血清TGF-β1、MMP-9和TIMP-1表达水平。通过单因素分析和多因素二元Logistics回归分析筛选出与宫腔镜子宫内膜息肉切除术后发生宫腔粘连相关的危险因素,采用受试者工作曲线(ROC曲线)分析血清TGF-β1、MMP-9和TIMP-1水平在预测子宫内膜息肉切除术后2年内发生宫腔粘连的诊断效能。结果:子宫内膜息肉切除术后2年内发生宫腔粘连与孕次、剖宫产史、刮宫史、内膜增生、盆腔炎史、多发息肉、血清TGF-β1、MMP-9和TIMP-1水平具有相关性(P<0.01),而与年龄、产次、引产史、宫内节育器史、绝经和...