蛋白激酶C在七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型中的作用

目的观察七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型中蛋白激酶C(PKC)活性变化,并探讨其意义。方法原代培养HUVECs并鉴定;将HUVECs细胞生长至70%～80%融合时分为4组:正常糖浓度对照组,高糖组,甘露醇组(高渗对照),高糖+七氟醚组;各组细胞培养72 h时采用非放射性PKC活性试剂盒检测4组细胞PKC活性。结果各组的细胞增殖水平差异无统计学意义,高糖组的细胞凋亡增加,高糖+七氟醚组水平细胞存活数量增多,4组细胞PKC活性分别为0.143±0.047,0.231±0.037、0.151±0.043,0.189±0.037,高糖组和高糖+七氟醚组与正常血糖组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),高糖组与高糖+七氟醚相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚对高糖诱导的HUVECs细胞损伤有保护作用,PKC活性水平可能起到重要作用。     

异丙酚对重症脓毒症患者血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 观察异丙酚对重症脓毒症患者血管内皮细胞损伤的影响。方法 构建重症脓毒症患者血清攻击脐静脉模型,监测异丙酚对重症脓毒症患者培养上清血循环血管内皮细胞(CEC)的数量、血管性假血友病因子(von willebrand factor,vWF)和可溶性血栓调节素(soluble thrombomodulin,sTM)水平的影响。结果 重症脓毒症患者血清CEC数量、vWF和sTM水平明显高于健康对照组(P<0.05)。进一步体外实验发现重症脓毒症患者血清可损伤脐静脉内皮,造成培养上清CEC数量、vWF和sTM水平显著升高(P<0.05)。异丙酚可明显减少CEC数量(P<0.05),同时下调vWF和sTM水平(P<0.05)。体外实验也发现异丙酚对重症脓毒症患者血清引起的脐静脉内皮损伤具有保护作用,其培养上清的CEC数量明显减少,同时vWF和sTM水平显著下降(P<0.05)。结论 重症脓毒症患者存在严重内皮细胞损伤,异丙酚对重症脓毒症患者内皮细胞损伤具有保护作用。     

17-β雌二醇对缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

流行病学资料[1]提示雌激素对心血管系统有保护作用,其确切机制尚不十分清楚.缺氧能引起血管内皮细胞功能异常:一氧化氮(NO)下降和内皮素(ET-1)上升,同时能够加速血管内皮细胞的凋亡,并参与一系列的临床病理过程[2].本研究拟探讨缺氧对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能和凋亡的影响,17-β雌二醇(E2)对上述影响是否有保护作用.     

异丙酚对肝叶切除术患者血管内皮细胞功能及氧自由基的影响

目的观察异丙酚对肝叶切除术患者血管内皮细胞功能及氧自由基的影响。方法将50例肝叶切除的手术患者随机分成异丙酚组和对照组。异丙酚组于麻醉插管后全程用微泵持续静脉输注异丙酚5mg/(kg·h)。对照组应用等量生理盐水持续静脉输注,余同异丙酚组。结果肝门阻断末和术后第一天两组患者血浆NO水平均较术前明显下降,血浆ET-1水平均较术前明显增加,但异丙酚组下降或增加的幅度均低于对照组,术后第三天两组患者血浆NO和ET-1水平均恢复至术前水平。肝门阻断末和术后第一天两组患者血浆MDA水平均较术前明显增加,血浆SOD水平均较术前明显下降,且异丙酚组增加或下降的幅度明显低于对照组,且术后第三天两组患者血浆SOD和MDA水平均恢复至术前水平。结论肝叶切除术可引起血管内皮细胞功能紊乱和氧自由基生成增多,异丙酚能调节血浆NO/ET-1比例的失衡,保护血管内皮细胞;降低氧自由基水平,抑制脂质过氧化反应,对肝叶切除术引起肝缺血再灌注损伤具有保护作用。     

丁苯酞对缺氧人脐静脉血管内皮细胞Ang-2蛋白表达的影响

目的:探讨药物丁苯酞(NBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤的保护作用及其对血管生成素2(Ang-2)表达的影响。方法:体外培养HUVEC,建立稳定的内皮细胞缺氧损伤模型。试验分为正常对照组、缺氧损伤模型组、NBP组,按要求分别给予药物处理后,用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫细胞化学方法和图像定量分析技术检测平均吸光度,比较各组Ang-2蛋白表达的变化;Western Blot法检测各组Ang-2蛋白的表达情况。结果:NBP可提高HUVEC的存活率;与正常组比较,缺氧组Ang-2蛋白表达量明显升高(P<0.05);与缺氧组比较,NBP组Ang-2蛋白表达进一步增高(P<0.05)。结论:NBP可以上调Ang-2蛋白的表达,对HUVEC缺氧损伤有一定的保护作用。     

葛根素对缺氧性血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的 研究葛根素(puerarin)对缺氧性血管内皮细胞凋亡的影响。方法 用NaCN合并无糖培养基造成培养的牛主动脉内皮细胞(BAECs)缺氧;用台盼蓝染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)、流式细胞仪计数和Hoechst 33342荧光染色法观察细胞受损和凋亡情况;用免疫细胞化学染色法观察细胞内Caspase-3的表达情况。结果NaCN合并无糖培养基可引起血管内皮细胞凋亡。葛根素可显著减少缺氧性内皮细胞凋亡,并对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对缺氧条件下的血管内皮细胞有保护作用,此作用至少部分通过抑制Caspase-3的表达而实现。     

异丙酚对培养心肌细胞缺氧乏糖损伤的影响

目的　观察异丙酚对缺氧乏糖心肌细胞血清乳酸脱氢酶 (L DH)和血清肌酸激酶 (CK)漏出量的影响 ,以探讨异丙酚对缺血心肌细胞的作用。方法　取出生 2 4 h以内的 Wistar红皮乳鼠体外培养心肌细胞分成 5组 (n=5 ) :正常对照组、缺氧乏糖组、缺氧乏糖 异丙酚 4 0μmol/ L组、缺氧乏糖 异丙酚 80μmol/ L组、缺氧乏糖 异丙酚1 6 0 μmol/ L组 ,给予缺氧乏糖 6 h干预 ,观察 L DH和 CK的漏出量。结果　异丙酚 4 0 μmol/ L 对 L DH和 CK无明显影响 ,异丙酚 80μmol/ L、1 6 0μmol/ L明显降低 L DH和 CK的漏出量。结论　异丙酚在一定浓度下可降低缺氧乏糖心肌细胞 L DH和 CK的漏出量 ,对缺血心肌细胞有一定的保护作用     

哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响

目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。     

槲皮素对缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

大量资料表明 :不同源性的内皮细胞缺氧后均有活性氧的大量产生[1 ] ,而自由基、活性氧、脂质过氧化物等均可引起内皮细胞损伤。在缺血性脑血管疾病中血管内皮细胞因缺氧致功能受损直接参与疾病的发生发展[2 ] 。槲皮素(quercetin ,Que)属于黄酮类化合物 ,具有多种药理作用 ,对超氧阴离子、羟自由基和单线态氧均有良好的清除作用[3] 。实验研究发现 ,槲皮素对心肌和脑缺血再灌注损伤也有保护作用[3] 。本文利用体外细胞培养的方法 ,研究槲皮素对缺氧缺糖后内皮细胞变化、功能的影响及保护作用。1　材料与方法1 .1　材料　槲皮素和四氮唑蓝 …     

缺氧对人微血管内皮细胞HIF-VEGF-Notch信号通路的影响

目的：观察缺氧对人微血管内皮细胞(HMVEC)中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子表达的影响。方法常规方法培养HMVEC细胞,低氧培养箱制备HMVEC缺氧模型,正常细胞作为对照组。采用Western Blot法检测HMVEC中HIF-1α及Notch-1的蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白表达水平。结果缺氧组和对照组细胞中Notch1蛋白表达分别为2.07±0.16和0.91±0.04,两者差异有显著意义（P<0.05）;HIF-1α蛋白表达缺氧组为2.53±0.19,对照组为0.67±0.08,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组上清液中VEGF表达量为50.04±5.92 ng/L,缺氧组上清液中VEGF表达量为238.04±19.29 ng/L,两者差异有统计学意义（P<0.05）。结论缺氧可上调HMVEC细胞中HIF-VEGF-Notch信号通路相关分子的表达,此可能与重要脏器缺血缺氧性损伤后诱导的血管新生有关。     

西红花苷对氧化甾醇诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的:研究西红花苷对培养的牛血管内皮细胞凋亡的影响。方法:采用3β、5α、6β三羟胆固(烷)醇(Triol)诱导内皮细胞凋亡的模型,用比色法测定丙二醛含量,光学显微镜、电子显微镜检测形态和超微结构的变化,DNA电泳检测DNAladder及流式细胞仪分析法检测凋亡率,采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)法检测BaxmRNA表达的变化。结果:Triol处理后,培养液中MDA含量增加,为1.761nmol·L-1(P<0.01),细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,出现凋亡小体,出现凋亡典型的“DNAladder”,和亚二倍体峰,凋亡率为30.62%,BaxmRNA表达量增加;西红花苷(10-7,10-6mol·L-1) Triol组,MDA含量减少,内皮细胞形态结构的完整,凋亡率分别为24.4%,6.3%,BaxmRNA表达量降低。结论:西红花苷可能是抗脂质过氧化并通过调节BaxmRNA表达,减少细胞异常凋亡。     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血和蛋白激酶C γ亚单位的作用

目的观察异丙酚对大鼠局灶性脑缺血和脑内蛋白激酶Cγ亚单位(PKCγ)变化的作用。方法♂SD大鼠随机分为Ⅰ:假手术组,Ⅱ:损伤组,Ⅲ:异丙酚(25mg·kg-1)+损伤组,Ⅳ:异丙酚(50mg·kg-1)+损伤组,Ⅴ:脂肪乳剂+损伤组,每组8例。采用大脑中动脉线栓法缺血3h再灌注24h。异丙酚和脂肪乳剂于再灌注前30min腹腔注射。通过原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法观察局灶性脑缺血产生的神经细胞凋亡和异丙酚作用效果,免疫细胞化学法观察各组PKCγ蛋白在脑内表达变化的差异。结果再灌注24h后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组大鼠体重较缺血前降低(P<0.01),和Ⅰ组比较:Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组大鼠再灌注24h后出现明显的神经体征缺陷(P<0.01),Ⅱ组大鼠额叶皮层和纹状体区域大量神经细胞凋亡,纹状体PKCγ蛋白表达明显下降。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组大鼠纹状体区域凋亡细胞密度与PKCγ染色阳性面积均没有差异(P>0.05)。结论再灌注前30min腹腔注射异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所致的神经细胞凋亡和PKCγ表达降低无保护作用。     

非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的血管内皮细胞增生及凋亡的影响

目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的血管内皮细胞增生、凋亡的影响并探讨其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、LPC组、非诺贝特低浓度组(10μmol·L-1)、非诺贝特中浓度组(50μmol·L-1)及非诺贝特高浓度组(100μmol·L-1)。分别观测LPC对血管内皮细胞增生、凋亡及凋亡调控蛋白抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增生,促进内皮细胞凋亡,XIAP表达减弱。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,XIAP表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达干预LPC对HUVECs增生及凋亡的影响。     

川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的 观察川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞（HRCECs）增殖的影响。方法 将HRCECs细胞分为对照（生理盐水）组、模型（25 mmol/L葡萄糖）组和川芎嗪低、中、高浓度（50、100、200 μmol/L）组,培养48 h后,MTT细胞毒实验检测细胞增殖变化,流式细胞技术检测细胞周期,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果 与对照组比较,高糖对HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均具有显著促进作用（P<0.05、0.01）;与模型组比较,低、中、高浓度川芎嗪对高糖诱导的HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均发挥显著抑制作用（P<0.05、0.01）,且呈浓度相关性。结论 川芎嗪可能通过抑制高糖诱导的HRCECs细胞VEGF高表达,阻滞细胞周期,发挥抑制HRCECs细胞增殖的作用。     

马齿苋总黄酮对缺血缺氧刺激下血管平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观测马齿苋总黄酮(PTF)对缺血缺氧刺激下血管平滑肌细胞钙超载及蛋白激酶C(PKC)的影响。方法用Fura-2/AM作Ca2+指示剂,检测PTF对正常培养及缺血缺氧作用下家兔主动脉血管平滑肌细胞Ca2+浓度及PKC的活性的改变。结果 PTF对正常培养家兔主动脉血管平滑肌细胞[Ca2+]i浓度无明显影响;PTF(8,16,32,64 mg·L-1)剂量依赖性抑制缺血缺氧缺氧致血管平滑肌细胞[Ca2+]i升高;PTF对正常培养家兔主动脉血管平滑肌细胞胞浆、胞膜PKC活性均升高;PTF处理后胞浆PKC活性下降,胞膜PKC活性上升。结论PTF可能抑制缺氧致血管平滑肌细胞钙超载,调节缺氧条件下血管平滑肌细胞PKC活性。     

Caspases在缺氧性脑微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的研究caspases在缺氧性脑微血管内皮细胞凋亡中的作用。方法用氰化钠合并无糖培养基造成培养的牛脑微血管内皮细胞缺氧；用台盼蓝染色、TUNEL及流式细胞仪计数方法观察细胞受损和凋亡情况；用免疫细胞化学染色法观察受损细胞中caspase-3的表达。结果氰化钠合并无糖培养基可损伤牛脑微血管内皮细胞，使细胞发生凋亡，受损细胞中caspase-3大量表达。广谱caspases抑制剂、选择性caspase-1，-3和-6抑制剂均能显著减少细胞死亡数目、caspase-1和-6抑制剂可以抑制caspase-3的表达。结论Caspases在缺氧性脑微血管内皮细胞凋亡过程中起重要作用，在caspases的蛋白酶级联切割反应中caspase-3位于caspase-1和-6的下游。     

Mechanism of the toxicity induced by natural humic acid on human vascular endothelial cells

Humic acid (HA), a group of high‐molecular weight organic compounds characterized by an ability to bind heavy metals, is normally found in natural water. Although the impairment of vascular endothelial cells in the presence of humic substances has been reported to be involved in some diseases, the mechanisms responsible for this involvement remain unclear. In this study, we examined the cytotoxicity of HA obtained from peatland in Central Kalimantan, Indonesia, to human vascular endothelial cells, as well as the mechanisms behind these effects. It was found that 50 mg/L HA showed cytotoxicity, which we considered to be mediated by apoptosis through the mitochondrial pathway because of an increase in the expression of caspases 6 and 9 in response to HA administration. In addition, this cytotoxicity was enhanced when cells in this experimental system were exposed to oxidative stress, while it was decreased by the addition of vitamin C. Thus, we conclude that the apoptosis induced by HA depends upon oxidative stress. Furthermore, an iron chelator, DFO, showed a tendency to decrease HA‐induced cytotoxicity, suggesting that iron may potentially mediate HA‐induced oxidative stress. In conclusion, long‐term consumption of HA‐rich water obtained from our study area may cause damage to endothelial cells and subsequent chronic health problems. © 2012 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 29: 916–925, 2014.