PCR-高效液相色谱法检测线粒体DNA A1555G突变

目的 探讨PCR-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)分析技术在检测线粒体(mt)12S rRNA 基因第1 555位A-G均质点突变中的应用.方法 4例临床诊断为氨基糖苷类抗生素耳聋的患者及40例听力正常体检者,分别运用PCR-DHPLC技术、酶切技术及DNA测序技术进行mtDNA1555位点检测.结果 PCR-D...     

线粒体脑肌病相关的线粒体DNA突变

<正>线粒体DNA(mtDNA)或核DNA突变可造成线粒体结构形态或(和)功能发生异常,由此导致的以神经肌肉系统(脑和肌肉组织)受累为主的多系统疾病,称为线粒体脑肌病。mtDNA突变是导致神经肌肉系统发生病变的重要原因之一。早在上世纪70年代,有研究者在患有脑肌病儿童的肌肉组织中首次发现了线粒体形态的畸变和呼吸链功能的缺陷,提示线粒体功能异常可能与该疾病有关[1]。1988年,Holt等[2]首先报     

变性高效液相色谱技术在线粒体基因突变检测中的应用

目的以变性高效液相色谱(DHPLC)技术分析检测线粒体肌病患者线粒体基因突变,以明确诊断。方法收集4例临床诊断为线粒体肌病的患者,以50例健康体检者作为对照,提取患者肌肉组织及对照组外周血细胞DNA,用聚合酶链反应(po lym erase cha in reaction,PCR)扩增线粒体22个tRNA基因,利用变性高效液相色谱分析技术(denaturing h igh-per-form ance liqu id chrom atography,DHPLC)对PCR产物进行突变筛选,出现异常峰型的tRNA基因进行核苷酸序列测定,明确突变位点。结果4例线粒体肌病患者均检测出线粒体基因突变,突变分别为:例1tRNA-V a l基因发生A 1625G纯合突变,例2 tRNA-V a l基因发生A 1625G/A杂合突变,例3 RNA-A rg基因发生A 10411C/A杂合突变,例4 RNA-T rp基因发生T 5553C纯合突变。结论DHPLC能有效地用于线粒体基因突变的检测,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。     

有氧运动延缓衰老线粒体DNA突变的机制

目的:线粒体DNA突变在衰老过程中起核心作用。总结有氧运动在延缓机体衰老过程中对线粒体DNA突变的影响,探讨有氧运动延缓衰老的机制。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1996-01/2006-01期间关于线粒体DNA突变与有氧运动延缓衰老的文章,检索词为"aerobics exercise,aging,mtDNA mutation",限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1994-01/2006-12期间的有氧运动、衰老和线粒体DNA突变相关的文章,检索词"衰老,线粒体DNA突变,有氧运动",并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①有氧运动延缓衰老关系的理论研究。②线粒体DNA突变与衰老关系的基础与临床研究。③有氧运动对线粒体DNA突变的影响研究。资料提炼:共收集到36篇线粒体DNA突变与有氧运动延缓衰老相关的文献,均为全文,32篇符合纳入标准,排除4篇重复性研究。资料综合:①有氧运动可以通过减少线粒体DNA突变,从而达到延缓机体的衰老。有氧运动可能通过影响自由基及抗氧化系统、细胞凋亡、线粒体的结构和功能,对衰老进程产生重要影响。②线粒体DNA突变随增龄而积累,达到一定阈值后,可导致细胞能量供应的严重障碍,从而造成组织器官生理功能的减退。③长期有氧运动可通过刺激心肌、骨骼肌线粒体的生成及蛋白质的合成而延缓线粒体形态结构的改变,有利于维持线粒体功能以满足机体对其能源的需求。结论:中、低强度有氧运动可以提高机体有氧工作能力,增进线粒体氧化磷酸化的功能,对延缓衰老具有一定的积极作用。有氧运动可以减少心肌、骨骼肌等线粒体DNA突变,提示有氧运动在延缓衰老机制中,减少线粒体DNA突变是可能机制之一。     

DHPLC在检测Miyoshi肌病家系致病基因突变中的应用

目的检测Miyoshi肌病家系成员的DYSF基因突变，探讨变性高效液相色谱分析法（DHPLc）在基因研究中的效能。方法用RT-PCR技术扩增DYSF基因的编码序列，利用变性高效液相色谱分析技术（DHPLC）对PCR产物进行突变筛选，出现异常峰型的片段进行核苷酸序列测定，明确突变位点。结果患者DYSF基因存在6429delG突变。结论DHPLC能有效地用于基因突变的检测，该方法快速高效，可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。     

线粒体DNA突变与阿尔茨海默病的相关性

阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)是一种以进行性痴呆为特征的脑变性疾病,很多研究显示它的病变与脑内的能量代谢衰减有密切关系。线粒体是动物细胞中除细胞核外惟一的含有DNA的细胞器,同时也是细胞活动的能源工厂。线粒体形态及功能的缺陷必将引发一系列的细胞功能失调。近年来研究发现阿尔茨海默病患者的脑细胞中的线粒体形态以及线粒体DNA发生了很大的改变,尤其是线粒体DNA缺失率和突变率都明显高于正常人。有关阿尔茨海默病患者的细胞中线粒体功能改变以及线粒体DNA突变的研究已有较大进展,现作初步阐述。     

线粒体DNA突变与骨髓增生异常综合征

骨髓增生异常综合征是以造血干细胞的异常克隆性增生、血细胞减少、骨髓出现病态造血为特征的一类疾病。最近的研究发现：环形铁粒幼细胞作为MDS的一个重要病态造血现象，可存在于各型MDS中，并且具有明显的异质性。这种克隆内的异质性现象与线粒体DNA突变有关，线粒体DNA突变主要引起呼吸链异常，继而导致多种病理生理改变，在MDS的发病机制中可能有重要的作用。     

线粒体脑肌病线粒体DNA突变的定量分析

目的:定量检测线粒体脑肌病突变型线粒体DNA(mtDNA)所占的比例。方法:提取线粒体脑肌病患者血液和骨骼肌总DNA,以2对寡核苷酸为引物进行PCR扩增,应用ApaI和BglⅠ酶酶切和琼脂糖电泳检测突变;在PCR反应最后一个循环加入α-32P-dCTP,产物同样酶切后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,放射自显影,光度扫描仪扫描分析。结果:病例1和2存在A3243G点突变,病例1的血液和骨骼肌突变型mtDNA分别为35.2%和65.9%,病例2的为37.0%和63.6%;病例3存在A8344G点突变,其血液和骨骼肌突变型mtDNA分别为51.0%和78.0%。结论:A3243G及A8344G位点突变分别与线粒体脑肌病伴高乳酸血症及卒中样发作(MELAS)和肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)的发病有关,不同组织突变型mtDNA所占比例不同。     

建立线粒体DNA中A3243G突变检测方法

目的建立正常人血线粒体DNA中A3243G突变的检测方法。方法采集正常人血液标本,抽提DNA,设计两对启动-关闭引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增mtDNA的高变区I(HVI)3221-3524bp片段。结果正常人血DNA中检出A3243G突变。结论该方法可在正常人血DNA中检出A3243G突变,可作为一种临床检测方法用于人群早期检查。     

线粒体DNA突变与阿尔茨海默病的相关性

阿尔茨海默病（Alxheimer disease,AD）是一种以进行性痴呆为特征的脑变性疾病，很多研究显示它的病变与脑内的能量代谢衰减有密切关系。线粒体是动物细胞中除细胞核外惟一的含有DNA的细胞器，同时也是细胞活动的能源工厂。线粒体形态及功能的缺陷必将引发一系列的细胞功能失调。近年来研究发现阿尔茨海默病患的脑细胞中的线粒体形态以及线粒体DNA发生了很大的改变。尤其是线粒体DNA缺失率和突变率都明显高于正常人。有关阿尔茨海默病患的细胞中线粒体功能改变以及线粒体DNA突变的研究已有较大进展，现作初步阐述。     

DHPLC在检测Miyoshi肌病家系致病基因突变中的应用

目的检测Miyoshi肌病家系成员的DYSF基因突变,探讨变性高效液相色谱分析法(DHPLC)在基因研究中的效能。方法用RT-PCR技术扩增DYSF基因的编码序列,利用变性高效液相色谱分析技术(DHPLC)对PCR产物进行突变筛选,出现异常峰型的片段进行核苷酸序列测定,明确突变位点。结果患者DYSF基因存在6429delG突变。结论DHPLC能有效地用于基因突变的检测,该方法快速高效,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段。     

高血压病线粒体DNA 8414位点C>T突变一例家系报告

目的探讨一例母系家族遗传性高血压家系发病特点,为探讨高血压病的遗传机制与防治对策提供一定的理论依据。方法以2015年6月在江苏省苏北人民医院心血管内科住院的1例高血压病患者为先证者,实地调查得到高血压病遗传家系,抽取家系成员外周静脉血,对序列3777~4679位置的线粒体DNA(mt DNA)进行直接基因测序,然后进行线粒体基因分析。结果该家系母系成员高血压病发病率高,发病年龄显著提前,所有母系成员的mt DNA发生了8414位C>T突变。结论高血压家族遗传与线粒体基因突变相关,具有家族聚集倾向。     

双重突变特异性引物PCR检测Leber遗传性视神经线粒体突变

目的：建立双重MSP-PCR检测Leber2遗传性视神经病变线粒体突变的方法。方法 收集视神经病变者109例，应用双重MSP-PCR分析其线粒体DNA11778和3460的突变情况，并用或序列测定比较分析。结果 用双重MSP-PCR分别检测出线粒体DNA11778和3460突变36例和1例，其正确率与SSCP及序列分析一致。结论双重MSP-PCR是检测线粒体DNA11778和3460突变的特异、简便的方法，适用于常规检测和研究。     

肿瘤细胞线粒体DNA的研究进展

线粒体是哺乳动物细胞中唯一含有自身遗传物质的细胞器 ,肿瘤细胞mtDNA的突变包括结构的改变和拷贝数的增加 ;另外 ,肿瘤细胞mtDNA的核内整合也可能是导致细胞癌变的重要因素。研究某些致癌剂对mtDNA的影响可间接了解其对肿瘤的作用机制 ;而肿瘤细胞mtDNA的状态可直接影响某些化疗药物的疗效。随着线粒体基因组结构及表达调控研究的深入 ,mtDNA与肿瘤发病关系的研究必将成为肿瘤病因学研究的又一热点。     

1例线粒体脑肌病患者的护理

线粒体脑肌病是一组由线粒体DNA或核DNA缺陷导致线粒体结构和功能障碍及三磷酸腺苷合成不足所致的多系统疾病,若病变以侵犯骨骼肌为主,则称为线粒体肌病;若病变同时累及到中枢神经系统,则称为线粒体脑肌病。我院2012年1月2日收治了1例线粒体脑肌病患者,经积极治疗及精心护理后好转出院。现将护理体会报道如下。     

线粒体病的分子诊断

线粒体病是指由线粒体DNA（mtDNA）改变引起的一组独立的疾病。已经发现与mtDNA突变有关的疾病达270多种。研究表明,线粒体DNA结构、线粒体病的遗传有其独特的特点。近年来,有关这方面的研究取得了很大进展。现就线粒体DNA结构、线粒体病的遗传特点及线粒体病的实验诊断进展,尤其是分子诊断进展作一介绍。     

中国人非综合征型耳聋患者线粒体DNA A1555G突变分析

目的分析线粒体DNA A1555G（mitoehondrial DNA A1555G，mtDNA A1555G）在中国人非综合征型耳聋（NSHI）患者中的突变率及突变性质。方法用PCR．限制性内切酶切分析（-RFLP）和PER产物直接测序法对325例中国人NSHI患者、50名健康体检者的血样进行mtDNA A1555G突变检测及测序分析。结果325例NSHI患者mtDNA A1555G突变率为14．5％（47／325），47例mtDNA A1555G突变中28例为均质性突变，19例为异质性突变；50名健康体检者均未发现同样突变。结论NSHI患者mtDNA A1555G突变率较高，并为均质性和异质性两种突变，这对进一步研究中国人耳聋相关基因突变与临床表型的关系奠定了基础。     

类风湿关节炎的生物治疗进展

类风湿关节炎(R A)是活性T细胞浸润引起滑膜血管增殖及血管翳形成,导致关节软骨和骨的的破坏,30%和70%分别在发病的1年和2年内出现关节的侵蚀犤1犦。40%以上在诊断R A4年内丧失劳动力犤2犦。近年来,以细胞因子如肿瘤坏死因子(TN Fα)、白介素-1(IL-1)及T、B淋巴细胞为靶向的生物...     

DNA含量和癌细胞核形态参数与鼻咽癌放射敏感性的关系

目的:探讨鼻咽癌细胞DNA含量和癌细胞核形态参数与放射敏感性的关系.方法:收集51例放疗前鼻咽癌组织标本,Feulgen染色和图像分析法检测鼻咽癌DNA含量和细胞核的形态定量参数.结果:51例鼻咽癌组织中,完全消退组DNA指数、DNA异倍体细胞所占百分率、细胞核形态参数面积、周长和直径均比残留组高.结论:DNA含量和癌细胞核形态参数是反映鼻咽癌放射敏感性和预测其近期疗效的重要指标.     

急性白血病骨髓细胞线粒体DNA D-loop区的突变检测

本研究旨在检测急性白血病（AL）患者骨髓细胞线粒体DNA（mtDNA）D-loop区突变和线粒体微卫星不稳（mtMSI）,并分析它们与AL发病的关系。选取19例初诊的AL患者,提取骨髓细胞mtDNA并对mtDNA D-loop区序列行PCR扩增,通过正反向直接测序对PCR扩增产物基因序列进行检测,并将测序结果与修订的剑桥标准序列（revised Cambridge reference sequence,rCRS）和有关数据库（MITOMAP数据库、GenBank数据库、mtDB数据库）进行比对。结果表明：AL的mtDNA D-loop区突变率达79％（15／19例）,在D-loop区发现215个变异位点（35个突变位点、180个SNP位点）和1个mtMSI;发现1个新的突变类型ntl50C-CT,同时发现不同年龄、不同AL分型（AML,B-ALL）的患者间突变个数无统计学差异（P〉0．05）。结论：AL的骨髓细胞mtDNA D-loop区存在高频率突变,且奠宴密可能与AL发痴有美。