应用FACS检测CIK的抗肿瘤活性

目的 探讨体外CIK细胞(cytokine-induced killer)对肿瘤细胞的细胞毒作用.方法 从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFN γ、CD3McAb、IL-2诱导、培养,获得CIK细胞.FACS检测CIK细胞的表型;用CFSE标记靶细胞以区分效应细胞,再以PI染色,FACS检测靶细胞的死亡率.结果 CIK细胞高度表达CD3、CD8 、CD3 CD8 、CD3 CD56 ,依次为089.33%、46.26%、58.98%、30.83%.CIK对NK敏感的K562及不敏感HL60、Hela均表现出较强杀伤活性.结论 细胞因子IFN γ、CD3McAb、IL-2体外诱导的单核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性及非MHC限制性.     

树突状细胞瘤苗的制备及体外抗肿瘤实验研究

为探讨特异的树突状细胞(DC)肿瘤疫苗的制备方法及体外抗肿瘤作用，分离人周围血单核细胞，制备DC，体外应用Hela细胞提取物作为抗原(包括可溶性抗原和颗粒性抗原)，结合DC制备特异性的肿瘤疫苗；再与淋巴细胞混合培养，用激活的淋巴细胞按不同比例与Hela细胞混合培养，应用MTT法观察淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤率。结果：经特异的肿瘤抗原刺激后的DC疫苗可活化淋巴细胞，与对照组比较可明显提高其对肿瘤细胞的杀伤活性。结论：DC特异肿瘤疫苗具有高效、特异的刺激淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力。     

小檗碱对DC联合CIK杀伤HepG-2活性的影响

目的：探讨小檗碱对树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）杀伤HepG-2细胞活性的影响。方法：常规分离外周血单个核细胞并诱导生成DC和CIK;DC分成小檗碱组和阴性对照组,小檗碱组在培养48h时加入小檗碱;第8d观察形态并计数;收集培养上清液并测定IL-12水平：将Dc与cIK按不同比例共培养7d,计数各组CIK;MTT法检测CIK对HepG-2的杀伤率。结果：培养第8d小檗碱组DC较阴性对照组多（P〈0．01）;细胞培养上清液中IL-12水平无差别：小檗碱组DC诱导CIK数较阴性对照组多,两组CIK对HepG-2的杀伤率无明显区别。结论：小檗碱主要通过促进DC和CIK增殖发挥增强Dc—CIK群体杀伤肿瘤活性。     

细胞因子诱导的杀伤细胞体外扩增及生物学活性研究

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)是外周血淋巴细胞经多种细胞因子如γ-IFN、IL-2、CD3单克隆抗体等体外刺激、活化扩增出来的新型、广谱、杀瘤的免疫活性细胞，具有体外扩增能力强，杀伤活性高等优点而逐渐引起人们的研究兴趣。本实验通过对淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、CD3因子激活的杀伤细胞(CD3AK)、CIK细胞在体外培养。     

γδT细胞对肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨γδT细胞对肝癌细胞的杀伤作用.方法 异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和rhIL-2活化正常人外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪分析活化后的γδT细胞含量,用ELISA法检测培养上清液中IFN-γ含量,用乳酸脱氢酶释放法测定活化γδT细胞的杀伤活性.结果 体外活化的PBMC在10 d时γδT细胞比例从扩增前(4.34±1.79)%增加到(55.65±6.88)%,PBMC经IPP刺激培养后IFN-γ分泌量较不含IPP的对照组有显著增高,至第7天达峰值,活化后的淋巴细胞对肝癌细胞有较高杀伤活性.结论 IPP作为刺激剂可获得大量γδT细胞,刺激PBMC后可分泌大量IFN-γ,γδT细胞在体外对肝癌细胞有较高的杀伤活性.     

细胞因子诱导的杀伤细胞对肿瘤病人体内淋巴细胞活化的影响

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)临床应用的安全性和CIK细胞对肿瘤病人体内淋巴细胞活化的影响。方法:进行CIK细胞抗肿瘤Ⅰ期临床试验,21例恶性肿瘤病人采集外周血单个核细胞诱导CIK细胞,按CIK细胞静脉滴注(静滴)剂量分为4个治疗组观察不良反应,并测定静滴前后病人外周血淋巴细胞活化相关表面标志。结果:21例恶性肿瘤病人中未出现导致研究中断的严重不良反应,CIK细胞最大耐受剂量20.1×10~9个,观察到WHO 2级发热5例,一过性白细胞减少2例,均能迅速恢复正常;CIK细胞静滴后,病人外周血淋巴细胞表面CD25、CD38、CD69表达均有明显上调,P<0.01。结论:Ⅰ期临床试验表明CIK细胞临床应用不良反应轻微,除了直接杀伤作用外还可能活化体内T淋巴细胞从而增强抗肿瘤活性。     

CIK细胞对Lewis肺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的 观察CIK细胞对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,探讨其抑瘤机制.方法 常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,以不同效靶比共同培养,MTT法检测细胞增殖情况,同时电镜观察Lewis肺癌细胞形态特征改变;流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测并比较FasL在单个核细胞和CIK细胞表面的表达;用MTF法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞杀伤Lewis肺癌细胞的影响.结果 电镜观察:CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测:CIK细胞组凋亡率明显高于对照组;FasL在CIK细胞表达增加;抗Fas单抗可抑制CIK杀伤Lewis肺癌细胞的活性.结论 CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,Fas/FasL途径在其中发挥一定作用.     

CD3AK三种制备物对神经胶质瘤的作用

CD3AK细胞是由小剂量CD3单抗交联CD3分子活化的T型淋巴细胞,其细胞激活及产量显著提高,且在增殖速度、激活频率等方面优于 LAK细胞[1]。近期发现 CD3AK细胞不仅可直接杀伤靶细胞,还能分泌杀伤因子共同介导其杀瘤作用[2]。我们观察其对靶细胞的杀伤作用,结果报告如下。 材料与方法 1.细胞与试剂人脑胶质瘤细胞系TJ-905购自天津医科大学总医院神经外科研究所。CD3单抗购自北京邦定公司, rIL-2购自北京中化合通药业有限公司。 2.CD3AK细胞的制备采用正常供血者的柠檬酸钠抗凝静脉血,用淋巴细胞分离液(比重1.077)分离出外周血单个核…     

树突状细胞以两种不同方式负载大肠癌细胞株体外刺激淋巴细胞抗肿瘤活性的比较

目的 比较树突状细胞(DC)以两种不同方式负载大肠癌细胞株体外刺激淋巴细胞的抗瘤活性.方法 分离正常人外周血单核细胞体外诱导DC,分别负载热休克诱导凋亡的大肠癌细胞株和肿瘤细胞裂解物,以此刺激淋巴细胞作为效应细胞,大肠癌细胞株为靶细胞.MTT法测定效应细胞对靶细胞的杀伤作用.结果 负载热休克大肠癌细胞的DC 与负载肿瘤细胞裂解物的DC都显示对靶细胞的杀伤活性,但前者的杀伤率明显高于后者(P＜0.05).结论 负载热休克肿瘤细胞的DC是一更为有效的负载方式.     

IL-15对CIK细胞的NKG2D表达及杀伤活性的影响

目的探索IL-15对CIK细胞NKG2D表达及对肿瘤细胞体外杀伤活性的影响。方法以常规培养的CIK细胞(常规组)为对照,流式细胞术(FCM)检测常规培养体系中加入IL-15后CIK细胞(IL-15组)的NKG2D表达情况;MTT法检测IL-15组及封闭NKG2D受体的CIK细胞对MDA-MB-231、SKBr-3等癌细胞的杀伤活性。结果①培养后的各个时段,IL-15组CIK细胞中T淋巴细胞亚群、CD3+CD56+细胞及总CIK细胞群的NKG2D表达水平高于常规组,两组的差异有统计学意义(P<0.05)。②培养14、21d的IL-15组CIK细胞对MDA-MB-231和SKBr-3的杀伤活性明显高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。③NKG2D单抗可以下调CIK细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤效应,而对SKBr-3细胞的杀伤没有明显影响。结论 IL-15可以增加CIK细胞NKG2D的表达水平并提高对肿瘤细胞的杀伤活性,NKG2D途径是CIK细胞杀伤肿瘤细胞的重要机制之一。     

西兰花中异硫氰酸盐对HepG-2细胞中甲胎蛋白含量的影响

目的观察异硫氰酸盐(ITCs)对人肝癌细胞生长和细胞内甲胎蛋白变化的影响。方法以HepG-2为实验对象,分对照组、不同浓度的ITCs组,采用MTT法检测ITCs作用后细胞的生长抑制率,放射免疫法(ELISA)测定细胞中甲胎蛋白(AFP)的含量。结果异硫氰酸盐能明显抑制HepG-2细胞增殖,细胞形态呈明显的良性分化,甲胎蛋白(alpha-fe-toprotein,AFP)合成及分泌量明显下降。结论西兰花中异硫氰酸盐对HepG-2细胞的增长抑制作用可能与影响甲胎蛋白变化有关。     

Inhibition of human ovarian tumor growth by cytokine-induced killer cells

Despite the recent improvement in the treatment of ovarian cancer, this disease is still leading cause of cancer death in women. In this study, the anti-tumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human ovarian cancer was evaluated in vitro and in vivo. Although CD3+CD56+ cells were rare in fresh human peripheral blood mononuclear cells, they could expand more than 1,000-fold on day 14 in the presence of anti-CD3 antibody plus IL-2. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 45% of SK-OV-3 human ovarian cancer cells, which was determined by the 51Cr-release assay. In addition, CIK cells at a dose of 23 million cells per mouse inhibited 73% of SK-OV-3 tumor growth in nude mouse xenograft assay. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with ovarian cancer.     

Antitumor activity of cytokine-induced killer cells against human lung cancer

Lung cancer is the leading cause of cancer-related death among men and women in the world. Despite the aggressive treatment with surgery, radiation and chemotherapy, the long term survival for lung cancer patients remains low. In this study, the anti-tumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human lung cancer was evaluated in vitro and in vivo. Although CD3(+)CD56(+) CIK cells were rare in fresh human peripheral blood mononuclear cells, they could expand more than 1000-fold on day 14 in the presence of anti-CD3 antibody plus IL-2. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 98% of NCI-H460 human lung cancer cells, which was determined by the (51)Cr-release assay. In addition, CIK cells at doses of 3 and 30 million cells per mouse inhibited 57% and 77% of NCI-H460 tumor growth in nude mouse xenograft assay, respectively. This study suggests that CD3(+)CD56(+) CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with lung cancer.     

Anti-tumor activity of ex vivo expanded cytokine-induced killer cells against human hepatocellular carcinoma

Cytokine-induced killer (CIK) cells are ex vivo expanded T cells with natural killer cell phenotypes and functions. In this study, the anti-tumor activity of CIK cells against hepatocellular carcinoma was evaluated in vitro and in vivo. In the presence of anti-CD3 antibody and IL-2 for 14 days, human peripheral blood mononuclear cell population changed to heterogeneous CIK cell population, which comprised 96% CD3(+), 3% CD3( inverted exclamation mark(c))CD56(+), 32% CD3(+)CD56(+), 11% CD4(+), 75% CD8(+), and 30% CD8(+)CD56(+). CIK cells produced significant amounts of IFN-gamma and TNF-alpha; however, produced only slight amounts of IL-2, IL-4, and IL-5. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 33% of SNU-354 human hepatocellular carcinoma cells, which was determined by the (51)Cr-release assay. In addition, a dose of 1x10(6) CIK cells per mouse inhibited 60% of SNU-354 tumor growth in irradiated nude mice. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with hepatocellular carcinoma.     

核转染技术转染人外周血淋巴细胞效率的初步研究

目的探索核转染技术转染人外周血淋巴细胞的转染效率。方法利用核转染方法将携带增强型绿色荧光蛋白基因的质粒转染人外周血淋巴细胞,24小时后经流式细胞仪检测绿色荧光蛋白EGFP表达水平,确定转染效率。结果未经任何刺激的外周血淋巴细胞转染效率为8.7%,经抗CD3抗体OKT3和抗CD28抗体共同刺激后的外周血淋巴细胞转染效率为10.5%,经抗CD3抗体OKT3和IL-2共同刺激后的外周血淋巴细胞转染效率为9.9%。结论核转染方法是一种转染人外周血淋巴细胞的有效方法,转染前细胞是否受到刺激激活,对转染的效率影响不大。     

Cytotoxic triterpenoid saponins from Ardisia gigantifolia

Three new triterpenoid saponins, 1- 3, together with two known saponins, 4 and 5, were isolated from the rhizome of Ardisia gigantifolia. Their structures were elucidated by 1D and 2D NMR spectroscopic studies. Saponins 1, 2, 4, and 5 exhibited significant cytotoxicity against four human cancer cell lines, namely, Hela human cervical carcinoma cells, EJ human bladder tumor cells, HepG-2 human hepatoma cells, and BCG human gastric carcinoma cells with IC (50) values in the range of 1.9-4.8 μM.     

华蟾素增强细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞的杀伤活性

目的观察华蟾素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKC)的表型变化及其对肝癌的细胞毒作用。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC)培养,收集非贴壁细胞并加入白细胞介素2(IL-2)诱导培养CIKC,将华蟾素加入CIKC,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CIKC杀伤BEL7402肝癌细胞株的活性。结果CIKC经华蟾素加入培养后,CIKC细胞群的CD3+CD8+,CD3+CD56+细胞比例和杀伤活性较单纯的CIKC更高。结论华蟾素有助于CIKC的细胞毒活性。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体内外抗肺癌的实验效应研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外对肺癌的影响。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM-CSF,IL-4及TNF-a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN-g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物,作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。用流式细胞仪分析细胞表型,自体混合淋巴细胞反应和异体混合淋巴细胞反应检测其刺激T细胞的的增殖活性。Cytotoxicity TOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性,同时用A549细胞系建立荷瘤裸鼠模型研究其体内抗肺癌活性。结果在培养的第15d,与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23.4±2.3）倍vs（16.7±2.7）倍,P〈0.05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64.3±3.6）%vs（43.9±2.1）%,P〈0.05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强,体内实验显示,与单独培养的CIK细胞相比,与负载抗原的DC共同培养的CIK,可明显抑制接种瘤细胞的裸鼠成瘤率,DC＋CIK与负载抗原的DC＋CIK在抗六效应上没有明显差异。结论 DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK体内抗肺癌的活性。将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。