腺病毒载体研究进展

腺病毒载体目前广泛地应用于基因治疗 ,随着对腺病毒分子结构与功能及感染机制的深入了解 ,人们在降低其免疫原性 ,增强基因导入特异性 ,增强感染和表达效率等方面进行了许多探索 ,本文就这方面的研究进展进行综述     

腺病毒载体,腺病毒相关病毒载体与基因治疗

近年来，腺病毒载体（ＡＶ），腺病毒相关病毒载体（ＡＡＶ）已经成为继反转录病毒载体（ＲＶ）以来最重要的病毒载体。与反转录病毒载体相比较，ＡＶ有其独特的优点，构建带有目的基因的腺病毒载体通过２９３辅助细胞产生重组腺病毒颗粒，用于活体基因转移及靶细胞感染。目前已利用ＡＶ研究了ｎｅｏ，ｌａｃＺ，ＨＢｓＡｇ及ＣＦＴＲ等基因在不用组织中的表达，其中人们已利用ＣＦＴＲ基因通过ＡＶ介导对囊性纤维化进行基因治疗临床     

人腺病毒载体的研究进展

目前腺病毒载体已成为基因治疗和重组疫苗研究的热点，随着分子生物学技术及基因治疗理论的进一步发展，腺病毒载体将发挥越来越重要的作用。本文综述了腺病毒载体构建及其应用的研究进展。     

腺病毒伴随病毒载体的研究进展

腺病毒伴随病毒载体的研究进展姚二梅冯泽华侯云德随着对人类基因愈加深入的了解，以及对真核基因改造和转移技术的发展，人类基因治疗已成为现实。基因治疗的关键问题就是要寻找有效的基因转移系统。在病毒介导和非病毒介导的两类基因转移系统中，感染性的重组病毒载体是...     

前凋亡因子bimS基因的重组腺病毒载体构建

为探讨前凋亡因子bimS用于肿瘤基因治疗奠定基础,拟构建bimS的重组腺病毒载体。采用RT-PCR方法从人HL-60细胞扩增目的基因bimS;克隆至T载体测序正确。亚克隆bimS基因到腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV上,形成含目的基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的穿梭载体。穿梭载体pAdtrack-CMV-bimS和病毒骨架载体pAdEasy-1经电穿孔法转入BJ5183大肠杆菌中行同源重组,获得重组pAdEasy-CMV-bimS,线性化后脂质体法转染人胚肾(HEK)293细胞进行病毒的包装、扩增、病毒滴度测定以及瞬时表达的观察;将病毒以MOI=100感染HEK293细胞,western blot检测bimS蛋白表达。结果显示病毒感染293细胞48~72h观察到GFP表达,7d出现典型细胞病变症状(CPE);提取培养上清中病毒DNA,以PCR法可检测到bimS的扩增产物;western blot检测病毒感染的293细胞总蛋白,与未感染的阴性对照细胞相比,bimS蛋白表达明显高于阴性对照细胞。表明重组bimS腺病毒构建成功;为进一步进行肿瘤基因治疗的体内外试验奠定基础。     

腺病毒载体构建原理与方法的研究进展

由于腺病毒 (Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ,Ａｄ)载体在哺乳动物及其多种细胞上进行基因转移和蛋白表达的高效性 ,使其在基因疫苗及基因治疗的研究中受到人们的青睐 ,成为当今使用最多的病毒载体之一。为了取得更满意的效果 ,人们在腺病毒载体构建与改进方面 ,做了大量工作。本文谨就近年来腺病毒载体构建原理与方法的研究进展扼要综述如下。1　腺病毒载体的构建原理腺病毒的基因组为线形双链ＤＮＡ ,长度约为 36ｋｂ ,被包装在一个二十面体的蛋白质外壳内 ,可分为编码区和非编码区。编码区又可分为早期转录区和晚期转录区两种 ,前者有Ｅ1、Ｅ2、…     

腺病毒及腺病毒相关病毒载体与基因治疗

腺病毒及腺病毒相关病毒能感染增殖与静止的细胞,宿主范围广。其稳定、安全滴度高、转染效率高。腺病毒载体能承载较大的外源基因,腺病毒相关病毒载体能定向整合入靶细胞基因组内等特点,使腺病毒及腺病毒相关病毒载体成为体内用于基因治疗的理想运载系统。     

腺病毒载体在皮肤科基因治疗中的应用

腺病毒载体是经去除腺病毒基因组的某些区而获得的，由于其诸多优点，正在成为皮肤科基因治疗中使用最多的载体之一，本文就腺病毒载体的特点及其在皮肤科基因治疗中的应用进展，作一综述。     

人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究

目的：通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体。研究其生物学活性，并用于基因治疗诱导心脏移植耐受。方法：通过基因重组技术，将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中，然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组，经过293细胞包装，构建CTLA4Ig腺病毒载体，用RT-PCR，SDS-PAGE及Western blot等技术，检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌，通过体外实验，观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应（MLR）的抑制作用，通过大鼠体内实验，检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后，CTLA4Ig在体内的表达及分泌，通过体外实验，观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应（MLR）的抑制作用，通过大鼠体内实验，检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后，CTLA4Ig在体内的表达。结果：CTLA4Ig腺病毒载体构建成功，体外实验证实，CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液，能够抑制异基因脾细胞的单向MLR，体内实验表明，经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体，能够诱导移植耐受，延长心脏移植物的存活。结论：构建的CTLA4Ig腺病毒载体，体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白，该蛋白可抑制T细胞的活化，CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受。     

动物腺病毒用作基因治疗载体的研究进展

动物腺病毒具有与人腺病毒类似的基因组结构。近年来,通过缺失部分病毒基因并建立相应的互补细胞系,已构建成功犬、绵羊及牛腺病毒载体。这些新型动物腺病毒载体即可将外源基因转移到人体细胞内表达,本身又不能在其中复制繁殖,具有较高的安全性,人体内也不存在针对它们的免疫应答,因此可望替代人腺病毒作为基因治疗及基因免疫的载体。     

腺病毒相关病毒载体的研究进展

腺病毒相关病毒(AAV)是一种缺陷型的单链DNA病毒,它能感染造血干细胞、脑细胞等非分裂细胞是其显著特征之一。现有资料显示AAV载体能以特异定向整合的方式存在。AAV重组体在细胞内能长期稳定表达,且在体内未引起明显的病理改变,表明AAV作为基因治疗的载体是安全、有效和可行的。     

辅助腺病毒载体及其介导的基因治疗研究进展

腺病毒是基因治疗的常用载体,但第一、二代腺病毒由于引起宿主的免疫应答和细胞毒性反应影响了治疗效果,限制了临床应用,辅助腺病毒载体避免了第一、二代腺病毒的缺点,而充分发挥了腺病毒载体的优点,在研究中所表现出来的特点使大多数研究者认为它是一个很有希望的理想的基因治疗转导载体,本文将其在基因治疗相关进展作一综述。     

小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建及制备

目的 构建小鼠T-bet基因重组腺病毒.方法 采用RT-PCR方法从小鼠脾脏活化的T淋巴细胞中扩增的cDNA序列,并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒,酶切线性化后,与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-l以电穿孔的方法共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组,经酶切鉴定筛选正确重组子,以线性化重组质粒转染293细胞,制备重组腺病毒小鼠T-bet重组腺病毒AdT-bet,最后以PCR及Western blot方法鉴定T-bet的表达.结果 感受态大肠杆菌BJ5183细菌内同源重组24 h后共获得35%阳性重组质粒克隆,经酶切获得一个30 kb的大片段和一个4.5 kb的小片断.该质粒转染293细胞后获得的重组腺病毒可高效表达T-bet,纯化后病毒滴度为2.0×1011 PFU/mL.结论 应用细菌内同源重组法成功快捷构建了含小鼠T-bet基因的重组腺病毒,所获得的AdT-bet可进一步应用支气管哮喘等疾病的基因治疗研究.     

辅助腺病毒载体及其介导的基因治疗研究进展

腺病毒是基因治疗的常用载体,但第一、二代腺病毒由于引起宿主的免疫应答和细胞毒性反应影响了治疗效果,限制了临床应用,辅助腺病毒载体避免了第一、二代腺病毒的缺点,而充分发挥了腺病毒载体的优点,在研究中所表现出来的特点使大多数研究者认为它是一个很有希望的理想的基因治疗转导载体,本文将其在基因治疗相关进展作一综述。     

腺病毒相关病毒载体的安全性评价

腺病毒相关病毒（AAV）作为基因治疗的病毒载体之一，已经受到广泛地关注。与其它载体相比，重组AAV具有宿主范围广、免疫原性小和安全性较好等优点，然而对重组AAV的靶向整合、毒性、在体内分布情况、产生免疫应答反应以及是否诱发肿瘤等问题仍还不十分清楚。本文就腺病毒相关病毒载体的安全性作一较全面而系统地评价。     

腺病毒相关病毒载体的研究进展

实现基因治疗的关键在于目的基因的高效转移并适度表达 ,这将直接影响其治疗的效率和安全性。因此 ,探寻理想的基因转移载体显得尤为重要。腺病毒相关病毒 (adeno- associated virus,AAV)是一种缺陷型的单链DNA病毒 ,既可以转染分裂细胞又可以转染非分裂细胞。 AAV在宿主体内以定向整合的方式存在。 AAV重组体在细胞内能长期稳定地表达 ,且在体内不引起明显的病理变化 ,表明 AAV作为基因治疗的载体是安全、有效和可行的     

人LIGHT基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

目的 克隆人LIGHT基因，构建其重组腺病毒载体，以研究LIGHT过表达与腺病毒感染对细胞生长的影响。方法 用RT-PCR法从人外周血单个核细胞（PBMC）中克隆人的LIGHT全长基因。将LIGHT cDNA克隆到穿棱载体pAdTrack-CMV-LIGHT重组质粒中，经酶切线性化后，将重组质粒pAdTrack-CMV-LIGHT和骨架质粒pAdEasy-1，以电穿孔法共转染大肠杆菌BJ5183，获得重组腺病毒质粒。最后，将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒，用荧光显微镜、PCR及Western blot分析LIGHT基因的表达。结果 用RT－PCR法从人的PBMC中，扩增出723bp的cDNA，测序证实为人LIGHT基因。荧光显微镜、PCR及Western blot证实，LIGHT重组腺病毒可感染293细胞，并在293细胞内进行有效的复制。结论 成功地克隆了人LIGHT基因，并构建了其重组腺病毒载体，为进一步研究LIGHT基因的功能提供了条件。     

鼠内皮抑素基因腺病毒载体的构建及对血管内皮细胞的生长抑制

构建含鼠内皮抑素基因的腺病毒载体（pAd／mEnd），并观察内皮抑素蛋白对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的生长抑制、细胞周期和凋亡的影响。结果发现pAd／mEnd感染BEL7402细胞后，能有效表达内皮抑素蛋白，显著抑制HUVEC增殖，阻滞HUVEC细胞S期，凋亡指数显著增加。     

人类腺病毒用作重组疫苗和基因治疗载体的优势与前景

人类腺病毒用作重组疫苗和基因治疗载体的优势与前景张德礼自从１９５３年分离到第一株人类腺病毒（Ａｄ）以来，目前发现Ａｄ已达４７个血清型。近年来已经从蛋白结构、遗传背景、致病作用及细胞转化机理等多方面对Ａｄ进行了十分详细的研究，并且利用Ａｄ强启动子构建了...