反义寡核苷酸作为治疗药物(编译)

反义寡核苷酸与RNA内靶序列互补核酸片段杂交形成DNA—RNA双链,从而阻断信使RNA翻译成蛋白质。化学和分子生物学进展为反义寡核苷酸的发展及改善其选择、稳定和特异的作用提供了基础。反义技术已广泛用于体内、体外实验,成为研究生物过程的调节机制和治疗癌症、病毒感染和遗传紊乱等疾病潜在的药物工具。     

核酸类药物的修饰和递送研究进展

核酸类药物是在基因水平上发挥作用的RNA或DNA。目前应用较多的有核酸适配体、反义寡核苷酸、信使RNA、微RNA、小干扰RNA、小激活RNA等。核酸类药物临床应用面临稳定性差、靶向性弱、难以跨越体内屏障等难题。通过核酸化学结构修饰可以提高部分核酸药物在体内的稳定性、靶向性，提高递送效率，同时降低药物的免疫原性；应用核酸类药物载体可以帮助药物到达病灶，有助于核酸类药物实现更高效的内体逃逸，促进药物在体内发挥作用。目前应用较多的递送载体有病毒载体、脂质纳米粒、聚合物纳米载体、无机纳米载体、蛋白载体、外泌体等。目前，单独的修饰或递送载体尚不足以克服众多障碍，将核酸化学结构修饰与药物递送系统相结合有望实现更好的治疗效果，但后者技术难度和临床转化成本也随之增加。针对更加简单实用、低毒高效、精准递送核酸药物载体和核酸化学结构修饰的研发将成为核酸药物研发的热点方向。本文综述了核酸类药物的修饰和递送研究进展，讨论了提高核酸类药物递送效率的对策，以期为核酸类药物的转化应用提供参考。     

反义技术在心血管病方面的应用

反义（antisense）核酸是指与体内某些RNA或DNA序列具有互补顺序，并能通过碱基配对与互补链杂交，从而影响其转录或翻译过程的RNA或DNA片段。通过反斗核酸特异性抑制某些基因的表达，可能抑制由于癌基因的表达引起的血管平滑肌细胞增殖，抑制某些心血管病的发生与发展。近年来该领域的研究结果显示：应用反义核酸技术抑制血管平滑肌细胞的增殖将可能成为治疗心血管疾病的新途径之一。     

反义寡核苷酸技术研究进展

反义寡核酸技术，是应用反义寡核苷酸类药物通过Waston-Crick碱基配对与细胞内核酸（DNA或RNA）特异结合形成杂交分子，从而在转录和翻译水平抑制特定基因表达的基因治疗技术，是一种新的药物开发方法。其机制是：①反义寡核苷酸与靶mRNA结合形成DNA-RNA杂合分子，可以激活RNase H。该酶可以切割杂合分子中的RNA链，导致靶mRNA降解。②不能激活RNase H活性的反义寡核苷酸可以通过空间位阻效应阻止核糖体结合来抑制靶mRNA的翻译：另外还可以通过封闭剪接位点有选择的促进蛋白某个可变剪接体的表达，从而纠正错误的剪接。     

CD147反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：研究经CD147反义RNA表达质粒载体转染建株的卵巢癌细胞系8910的生物学行为变化。方法：用CD147反义RNA表达质粒PCDNAasCD147转染人卵巢癌细胞系8910，克隆经筛选、鉴定后进行凝胶酶谱实验、肿瘤细胞侵袭力实验及动物实验。结果：CD147反义核酸转染的8910与空载体转染组相比，刺激成纤维细胞产生基质金属蛋白酶的能力下降，细胞侵袭力下降，荷瘤裸鼠成瘤力下降（P＜0．01）。结论：CD147反义核酸能抑制卵巢癌的转移和成瘤，因而有可能成为卵巢癌的治疗的药物靶点。     

人类端粒酶基因反义核酸对Hep-2细胞端粒酶活性的影响

目的 :研究人类端粒酶RNA(hTR)的反义核酸对Hep 2细胞端粒酶活性的影响。方法 :采用TRAP法检测Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果 :hTR反义核酸能有效抑制Hep 2细胞的端粒酶的活性。结论 :hTR反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径     

反义寡核苷酸技术的进展及应用

随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗应运而生,得到广泛的肯定,其中包括反义核酸技术,简称反义技术.那些能与特定的DNA或RNA以碱基互补配对的方式结合,并阻止其转录和翻译的短核酸片段,称为反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide).研究反义寡核苷酸作用机理和应用的技术叫反义技术.     

RON基因反义核酸真核表达载体的构建策略

目的 构建RON基因跨膜区段(RONm)的反义核酸真核表达载体。方法 用RT-PCR技术，从人肺癌细胞提取的总RNA克隆RONm eDNA序列。然后酶切鉴定与测序分析得到RONm的T载体，再将RONm反向插入peDNA3．1 中，酶切鉴定得到RONm反义真核表达载体。结果 用RT-PCR亚克隆RONm，测序结果与GenBank的RONm相应序列(X70040)一致，阅读框无改变。构建出正确的RONm反义真核表达载体。结论 成功构建RONm反义核酸真核表达载体，为进一步将RON基因反义核酸作为一种肺癌基因治疗方法的研究打下了分子生物学基础。     

反义技术治疗肿瘤的临床进展

反义技术是根据核酸间的碱基互补原理 ,用生物合成或人工合成的互补反义核酸或其化学修饰物与细胞内的特定核酸结合以抑制或封闭其表达。在肿瘤治疗方面 ,人们以癌变过程中的不同突变基因为靶位 ,设计了许多反义抗肿瘤药物 ,其中部分已进入临床试验阶段。作者对已进入临床试验阶段的反义抗肿瘤药物进行综述     

反义技术在造血系统疾病研究中的应用

<正> 反义技术是根据碱基互补的原理,用人工合成或生物体生成的与目标靶的DNA或RNA序列特定互补的短核苷酸片段,抑制或封闭基因表达的技术方法。反义技术能够较好地抑制和封闭目的基因的表达,干扰复制、转录和翻译,为肿瘤的基因治疗和基因功能的研究提供了强有力的工具。1978年,Zamecnik和Stephenson首次发现反义RNA能抑制Rous肉瘤病毒在培养细胞中的增殖,展示了反义核酸作为基因水平治疗药物的潜力。1990年美国的基因工程新闻将反义技术列为9O年代十大热点生物技术之一。反义技术在临床应用方面取得了重大进展,目前已有4种反义     

治疗遗传病的RNA药物研究进展

RNA药物能够通过识别互补序列靶向对应基因以抑制特定蛋白或RNA的表达，或通过翻译合成目的基因编码的蛋白来发挥遗传性疾病治疗作用。RNA药物主要分为寡核苷酸药物（包括反义寡核苷酸、小干扰RNA和RNA适配体）和信使RNA药物等。其中，反义寡核苷酸和小干扰RNA已用于临床治疗遗传病，而RNA适配体和信使RNA药物目前还处于临床试验阶段。当前主要通过对RNA药物进行化学修饰（如对信使RNA进行假尿嘧啶修饰）来降低免疫原性和提升药物疗效，以及开发纳米粒载体、细胞外囊泡和类病毒载体等递送载体来解决RNA药物的稳定性、特异靶向性和安全性等问题。本文概述了目前用于治疗遗传病的11种RNA药物的具体作用分子机制，并简单讨论了RNA药物的化学修饰及递送载体的研究现状。     

基因沉默技术在筛选药物靶点治疗肿瘤方面的作用

基因功能的研究已成为生命科学领域中的重大课题。在细胞和整体水平的转基因技术、基因沉默技术都是目前进行基因功能研究的有效手段。基因沉默技术包括两种:一种是反义技术,是根据核酸杂交原理设计针对特定靶序列的反义核酸,从而抑制特定基因的表达,可以更多的被用来作为基因药物进行研究和开发。另一种是近几年才引起大家重视的RNA干涉技术,用配对的小RNA植入细胞,从而阻止相同序列的特定基因的表达,作为快速评价基因功能和基因无效表型的方法,用于筛选药物靶点,治疗肿瘤、病毒感染等人类疾病。     

微RNA对心脏发育影响的研究进展

近来研究表明，一类名为小RNA的非编码RNA分子掌握真核细胞许多功能，影响基因表达、细胞周期调控和个体发育等多种行为^[1-4]。小RNA是指21-28nt的调控RNA分子，主要包括①微RNA（miRNA），②小干扰RNA（siRNA），③其他小RNA：包括核糖体开关，反义核酸等非编码RNA。     

反义核酸类药物的药理学研究进展

反义核酸技术是 2 0世纪 80年代出现的一种以应用反义核酸类药物来抑制特定基因表达为目的的基因治疗技术。反义核酸类药物包括反义寡核苷酸和核酶。前者是人工设计合成的与特定基因互补的寡核苷酸 ,它能通过Ｗ Ｃ配对与特定基因结合来抑制其表达。核酶是具有ＲＮＡ裂解活性的ＲＮＡ。它能与与其互补的靶基因的ｍＲＮＡ进行反式结合并能对其进行定点切割。应用反义核酸类药物可以特异 ,高效的抑制某种基因的表达 ,有望成为较理想的基因治疗手段。然而反义核酸要想真正成为一种药物用于临床尚存在一些问题 ,如 :他们必须先找到靶细胞 ,然后通…     

反义寡核苷酸治疗白血病的研究现状

反义核酸技术是近十年来肿瘤治疗研究的热点,它包括反义寡核苷酸(又称反义DNA,Antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)、反义RNA、核酶及RNA干扰等技术.其中反义寡核苷酸技术的主要作用原理是根据碱基互补配对原则,利用合成的寡核苷酸选择性地与靶基因mRNA互补结合,干扰或阻止其基因产物的形成,从而达到治疗肿瘤的目的.     

mPLG—PGEM重组表达质粒构建及反义RNA探针的制备和标记

纤溶系统参与体内众多的与细胞外基质降解有关的生理及病理过程，如血栓形成／溶解，动脉粥样硬化、血管新内膜形成，排卵，组织重建，肿瘤转移等[1,2].PLG是纤溶系统的核心成分及功能分子[3]，因此研究PLG基因转录表达在某些生理及病理过程中的变化具有十分重要的意义。目前，用于基因转录表达的核酸探针主要分3种：DNA，反义RNA以及人工合成寡聚核苷酸[4,5]。反义RNA探针的特点是DNA－RNA、RNA－RNA杂交体的稳定性好，特异性强，灵敏度高，杂交信号强[6]，因而，在国外已得到广泛应用，国内则多采用人工合成的寡聚反义RNA探针…     

反义技术及其抗病毒作用

反义技术(antisensetechnique)是指根据碱基互补的原理,用人工合成或生物体合成的特定互补的DNA或RNA片段(或其化学修饰产物)抑制或封闭基因表达的技术[1]。包括反义RNA(asRNA)、反义寡聚核苷酸(asON)和具有核酸特异性切割活性的核酶(ribozyme)等。近年来的研究表明,反义?..     

肽核酸与基因治疗

肽核酸（PNA）是一类以酰胺键连接骨架替代核酸中核糖磷酸二酯键骨架构成的核酸类似物，其中N－乙基甘氨酸骨架PNA与核酸链能稳定互补结合，文章对肽核酸的结构和功能特性作了简单的论述，并就其具体在基因治疗方面作了反义药物，反基因药物、特定基因的传递体以及在内源基因表达的诱导等方面应用进行了综述。指出了其可能的发展方向及前景。     

肿瘤细胞多药耐药化学逆转剂研究进展

用MDR的逆转是肿瘤治疗过程中的关键.用化学药物阻断耐药机制,如针对各种耐药蛋白和PKC的逆转剂;反义核酸技术阻断耐药途径,如反叉核酸、核酶及小RNA等;细胞因子拮抗耐药过程;物理逆转措施如微波、超声波等等.利用化学逆转剂对肿瘤细胞的耐药的分析.     

Survivin反义核酸与顺铂联合作用诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨特异性封闭Survivin的表达与顺铂联合作用对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,以期为卵巢癌的治疗提供实验依据.方法将已成功构建的Survivin反义核酸真核表达载体的重组体导入人卵巢癌细胞株中,用G418筛选得到表达反义Survivin的细胞,RT-PCR技术检测转染细胞Survivin表达的变化;采用Hoechest核染色分析与顺铂联合作用时人卵巢癌细胞的凋亡情况.结果构建的Survivin反义RNA真核表达载体能有效的抑制卵巢癌细胞中Survivin基因的表达;顺铂诱导转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞的凋亡作用显著强于未转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞株.结论Survivin反义核酸可明显增强顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,为其联合应用卵巢癌治疗研究提供了实验依据.