应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结 …

目的 提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性、以检测和鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌ＤＮＡ。方法 应用三对具有特异性的寡核苷酸引物，进行多重ＰＣＲ扩增。这三对引物分别对应于分支杆菌６５０００表面抗原、结核分支杆菌插入序列ＩＳ６１１０及人类β－珠蛋白基因的部分序列，其扩增产物分别为３８３ｂｐ、１２３ｂｐ和２６８ｂｐ。结果 此多重ＰＣＲ电泳检测的灵敏度为０．６ｐｇ。经多重ＰＣＲ     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分支杆菌DNA的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术配对检测９２例肺结核患者外周血单个核细胞内和痰标本中结核分支杆菌ＤＮＡ，同时检测３０例非结核患者外周血。结果显示：外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率分别为７１７％和５５４％，前者明显高于后者（Ｐ＜００５）；各型肺结核外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率不尽相同；３０例非结核患者外周血ＰＣＲ阳性３例（１０％）。认为ＰＣＲ检测肺结核患者外周血单个核细胞内结核分支杆菌ＤＮＡ是一种快速、敏感的方法，可用于肺结核早期诊断与鉴别诊断     

结核分支杆菌利用福平药物敏感性的直接快速检测

探讨利用分子生物 学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段）,运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法,检测４５株结核分支杆菌临床分离株,对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析,运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患痰标本进行直接快速检测,并与药敏试验结果做对照分     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

核酸体外扩增技术诊断骨结核的临床研究

目的探讨核酸体外扩增（ＰＣＲ）技术在骨结核诊断中的价值。方法对６０例骨结核标本与２０例非骨结核标本分别应用ＰＣＲ、抗酸染色镜检及分离培养法进行结核分支杆菌检测。同时，分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素与相应处理措施。结果６０例骨结核标本中三种方法的阳性检出率分别为：ＰＣＲ法８３％，镜检法３％，培养法７％。经统计学处理，Ｐ＜０．００５，ＰＣＲ法与镜检及培养法对结核分支杆菌的阳性检出率比较具有显著性差异，ＰＣＲ法明显优于镜检及培养法。２０例非骨结核标本镜检及培养法均阴性，ＰＣＲ法阳性率１０％。盲法结核分支杆菌和对照菌ＰＣＲ检测结果表明，ＰＣＲ的特异性为１００％。ＰＣＲ扩增整个过程自动化控制，可在数小时内完成。结论ＰＣＲ技术是一种快速、敏感、特异与简便的骨结核标本结核分支杆菌检测方法，对骨结核的诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分 …

探讨外周血单个核细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ检测在肺结核诊断中的价值。方法采用改良Ｔｒｉｔｏｎ－ｘ－１００法分离，制备单个核细胞中模板，ＤＮＡ，聚合酶链反应扩增结核分支杆菌２４０ｂｐ基因片段，同时分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素。结果８９例肺结核患者的血标本，８４例肺结核患者的痰标本中，结核分支杆菌ＤＮＡ阳性率分别为７３％和５７％；８４例肺结核患者外周血，痰标本配对检测总阳性率可达８７％。     

PCR—SSCP方法用于痰标本中结核分支杆菌rpoB基因突变检测

本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法直接检测痰标本中结核分支杆菌ｒｐｏ基在变，评价此方法用于结核分支杆菌利福平耐性试验的意义，以期建立一种直接检测分支杆菌耐利福平的快速方法。本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了３０例结核病人和２０例非结核性肺部疾病病人痰标本。３０份肺结核病人的痰用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测痰中结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变：２１份痰ＰＣＲ扩增阳性，其中１３份ＳＳＣＰ图谱与参考株Ｈ３７ＲｖＳＳＣＰ图谱有     

PCR结合索氏转移杂交在结核病诊断中的应用

利用Ｈｅｒｍａｎｓ引物扩增插入序列ＩＳ９８６所得之２４５ｂｐ片断是一结核分支杆菌复合体特异性片断，采用随机引物法将地戈辛标记该片断。将纯化结核分支杆菌ＤＮＡ经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，索氏转移后与该探针杂交，检测灵敏度可达１ｆｇＤＮＡ。通过对７９例痰标本、１４例结核性胸腔积液及２６例结核性关节腔积液的ＰＣＲ和ＤＮＡ索氏杂交试验比较，认为采用２４５ｂｐ探针，将ＤＮＡ索氏转移杂交与ＰＣＲ体外扩增相结合，不仅提高了结核病基因诊断的敏感性，同时也提高了诊断的特异性。     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疬分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。认为三种方法在使用中各自有其优点，不可偏废。     

PCR与DIBT检测脑脊液结核分支杆菌的价值

应用ＰＣＲ法扩增结核杆菌ＤＮＡ重复序列１２３ｂｐ片段；用酶斑免疫结合技术检测结核分支杆菌抗原成分。结果：结核性脑膜炎患者脑脊液的两项检测阳性率分别为８１％（４３／５３）和７３．５％（３９／５３）。疾病早期ＰＣＲ阳性检出率高于ＤＩＢＴ，中晚期二者有阳性交叉现象。     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系，这有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究     

PCR与DIBT检测脑脊液结核分支杆菌的价值

应用ＰＣＲ法扩增结核杆菌ＤＮＡ重复序列１２３ｂｐ片段；用酶斑免疫结合技术（ＤｏｔＩｍｍｕｎｏｂｉｎｄｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｕｅ，ＤＩＢＴ）检测结核分支杆菌抗原成分。结果：结核性脑膜炎患者脑脊液的两项检测阳性率分别为８１％（４３／５３）和７３．５％（３９／５３）。疾病早期ＰＣＲ阳性检出率高于ＤＩＢＴ，中晚期二者有阳性交叉现象。     

耐多药结核病耐药分子机制的研究

目的 研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因的分子药敏试验方法。方法 通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结构分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果 ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１－０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ基因引物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的的特异性。２０株耐多药分离株中，９０％有２种以上耐药遗传标志改变，     

16s～23s rDNA间隔区序列聚合酶链反应鉴定术后龟分支杆菌暴发感染

目的　从基因水平上确认深圳市某医院术后暴发感染的致病菌,并建立一套快速的ＰＣＲ方法鉴定龟分支杆菌脓肿亚种。方法　根据分支杆菌的１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列,设计合成一对引物和龟分支杆菌脓肿亚种ＤＮＡ探针,采用ＰＣＲ 和ＤＮＡ 斑点杂交技术,对５３ 株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株进行ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ杂交。在此基础上,采用１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增体系检测２５９份临床标本,对部分标本做ＤＮＡ探针斑点杂交反应。结果　５３ 株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株均被扩增出一条特异的３８０ ｂｐ ＤＮＡ 带和出现特异的杂交斑点。２５９ 份临床标本,ＰＣＲ 扩增阳性率为６０－６％ 。结论　在基因水平上确认此次引起院内术后暴发感染的致病菌为龟分支杆菌脓肿亚种。１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增检测体系灵敏、特异,能鉴定龟分支杆菌。     

PCR指印技术对新疆结核病病原Bacter460液体培养标本进行 …

以结核分枝杆菌特异插入序列ＩＳ６１１０两端序列为模板,设计一对外向ＰＣＲ引物进行ＰＣＲ扩增,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术,该试验的基础是利用ＩＳ６１１０在结核分支杆菌染色体ＤＮＡ中反复重复且ＩＳ６１１０序列之间相距较近,经ＰＣＲ扩增呈现多条带型构成ＤＮＡ指印。在对新疆结核病人的３１份液体培养标本的ＰＣＲ检测呈现６种指印。该ＰＣＲ分型技术对结核分枝杆菌的分型所需时间短,不需细菌再     

聚合酶链式反应与DNA探针检测临床标本中结核分支杆菌的评价

本文应用ＰＣＲ联合ＤＮＡ探针快速检测临床标本中结核杆菌ＤＮＡ。对临床３０７例标本同时进行ＰＣＲ和Ｓｏｕｅｈｅｒｎ杂交。其中临床确诊为结核病的１０９例，二者的阳性率分别为４９．６％、６０．６％。未确诊结核病的１９８例，二者均为阳性２例、单纯ＰＣＨ阳性３例。结果表明ＤＮＡ探针检测的灵敏性和特异性高于ＰＣＲ。二者联合使用，有助于对疑难电泳图谱的分析和判断，降低假阴性和假阳性率。     

肺结核患儿外周血白细胞中结核分支杆菌DNA的检测

肺结核患儿外周血白细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ的检测傅清流黄秋生李庶甘聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用使对结核病快速诊断成为可能。有关痰结核分支杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）检测报告较多，而对其外周血白细胞中ＴＢ－ＤＮＡ检测甚少。为解决临床上结核病患儿痰标本...     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法检测支气管肺泡灌洗液结核杆菌抗原

利用抗结核分支杆菌ＭｃＡｂ和抗结核分支杆菌ＨＲＰ－ＭｃＡｂ经双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对１２８份支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬ）标本进行了检测。结果：痰菌阴性肺结核病人ＢＡＬ标本中结核分支杆菌抗原水平明显高于非结核肺部疾病组。对菌阴肺结核检出的敏感性为８４．１％，特异性为８２．４％，此法降低了利用多克隆抗体检测ＢＡＬ标本易出现的假阳性率。认为此法可作为结核病的辅助诊断方法。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核人支杆菌的价值

目的：评价聚合酶链反应（PCR）荧光探针杂交技术（TaqMan技术）检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法：应用细菌学方法（涂片镜检和培养）及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本，53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果：细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36．1％，TaqMan法阳性率为61．7％，高于细菌学检测法，经统计学处理，两者有显著性差异（P＜0．05），用TaqMan法检测临床标本特异性为96．2％，结论：TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，在单一管内完成，具有简便，快速、防污染，敏感性及特异性较高等优点，是结核病辅助诊断的有效方法之一。