小卫星DNA多态性用于脐血中母体细胞的检测

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增具有高度多态性３３．６位点，联合地高辛标记位点特异性核苷酸探针杂交，制作出ＰＣＲ－小卫星ＤＮＡ片段长度多态性图谱，对我院常规法收集的脐带血３０份（１例用于脐带血移植）进行了母体细胞的检测，结果显示，小卫星ＤＮＡ多态性特异的遗传标志物，３０例被检脐血均未测得母体细胞标志物，地特异、灵敏、简便、快速、无同位素污染，可作为脐血质量监控的可靠方法。     

应用复合荧光标记STR-PCR排除绒毛取材中母体细胞污染

[目的]探讨复合荧光标记STR-PCR鉴别胎儿取材中母体细胞污染的价值。[方法]复合荧光标记STR-PCR检测16个基因座,针对常见STR基因座进行多态性分析,比较52例待鉴定绒毛样品的谱带。[结果] 52例标本中,有46例无母体细胞污染,5例为母体细胞污染,1例是全部为母体细胞。鉴定结果与随访结果一致。[结论]用复合扩增荧光标记STR-PCR方法可准确判断胎儿取材中有无母亲DNA的污染。     

DNA微小卫星序列分析在肺癌研究中的应用

ＤＮＡ微小卫星序列具有高度的长度多态性和很高的信息含量 ,其检测方法简便易行 ,是基因筛选、定位的有力工具。它在研究肿瘤发生机制、早期诊断以及判断预后方面具有重要意义 ,并有其应用前景。1　ＤＮＡ微小卫星序列的定义及特性80年代初 ,人们发现细胞内含有大量碱基重复序列 ,其中 1 4ｂｐ (碱基对 )串联重复称为ＤＮＡ微小卫星序列(ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ,ＭＳ) ,最常见的是双核苷酸重复 ,即 (ＡＣ)ｎ和 (ＴＧ)ｎ[1] 。ＭＳ散在分布于细胞整个基因组中 ,约占基因组的 5 % ,以 (ＡＣ/ＧＴ)ｎ重复序列最为多…     

中国5个人群小卫星位点DYS440的多态性研究

目的 研究Y染色体小卫星位点DYS440在中国不同人群中的分布特征。方法 用PCR方法对5个中国人群的290名男性个体的DYS440等位基因进行检测。结果 在所检测样本中DYS440的常见等位基因型为DYS440*4(频率是94．83％)，而DYS440*3等位基因在人群中的分布差异很大。在所检的5个人群中，DYS440*3等位基因主要存在于福建汉族(5．66％)和四川汉族(13．92％)这两个南方人群，在哈萨克族中的频率很低(1．39％)，而在朝鲜和布依族中未检出。结论 DYS440是研究中国人群结构的一个比较重要的遗传标记。     

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性

目的：建立DNA芯片检测乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus，HBV）基因多态性的研究方法井对实验条件进行优化。方法：设计多条寡核苷酸探针，在硅烷化芯片的特定位置上，用点样仪将探针固定，并与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交，杂交结果影印至硝酸纤维素膜，经BCIP／NBT避光显色，用放大镜观察杂交信号呈暗紫色圆点，根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型。结果：通过1次杂交反应可检测HBV前C／C区（nt1896／1814）、BCP区（nt1762／1764）和P区（nt528／552）等多个位点的变异，与测序分析结果完全一致，具有较好的检测灵敏度和重复性。结论：DNA芯片检测HBV基因常见突变位点多态性，操作简便易行，技术要求不高，具有临床推广应用价值，而且可以方便地通过向寡核苷酸探针阵列中添加相应探针，扩大基因芯片的检测应用范围，为临床检测提供了新的方法。     

检测脐血单个核细胞中ＨＢＶ—ＤＮＡ的意义

目的：探讨新生儿脐血单个核细胞中HBV－DNA和血清中HBV－DNA对早期诊断宫内感染的意义。方法;采用ELISA和PCR方法测定40例HBsAg阳性的孕妇外周血,新生儿脐血血清及脐血单个核细胞中的HBV－DNA。结果：脐血单个核细胞中HBV－DNA阳性率明显高于脐血清,二者具有显著性差异（P＜0．001）。结论 外周血单个核细胞感染可能是HBV母婴传播的另一条重要途径;检测脐血单个核细胞中HBV－DNA对早期诊断BV宫内感染将更有价值。     

中国海南岛黎族3个支系小卫星MSY2多态位点的遗传学研究

目的:研究中国不同民族Y染色体DNA多态性,追溯人类进化史上的父系祖先,为人类基因组和法医学鉴定积累数据。方法:应用特异引物PCR法扩增Y染色体小卫星DNA片段,再经琼脂糖凝胶电泳检测方法,对海南岛本地黎、杞黎和黎3个支系的293例男性个体的MSY2位点的遗传多样性进行了多态性分析。结果:MSY2各等位基因在黎族3个支系中显示了不同的频率,其中本地黎与杞黎之间无显著性差异,但在本地黎与黎(P﹤0.01)、杞黎与黎(P﹤0.05)之间都存在显著性差异。结论:MSY2位点可以作为一个有用的遗传标记为中国不同群体的遗传多样性研究提供可靠的数据。黎群体可能有复杂的父系起源。     

随机扩增多态性DNA检测技术分析

目的:探讨随机扩增多态性DNA(RAPD)检测技术的特点.方法:分析影响RAPD标记的各种因素,总结该技术的优点和不足.结果:RAPD标记方法已经广泛用于遗传育种、基因诊断、生物系统学的研究,并显出独特的优点.DNA模板质量与浓度、Taq DNA 聚合酶、引物设计及浓度、缓冲体系、MgCl2、dNTP浓度、PCR反应体积等均为该技术的影响因素.结论:对于每一种物种都应先进行体系优化,确保RAPD实验结果稳定准确.     

非小细胞肺癌NP方案化疗敏感性与DNA修复基因XRCC1多态性的关系研究

目的:观察为非小细胞肺癌患者采用NP方案进行治疗时其对化疗的敏感性与受体DNA修复基因XRCC1多态性之间的对应关系。方法:为2012年1月至2014年1月我院收治的82例非小细胞肺癌患者使用基于聚合酶链反应-限制性片段长度的多态性技术进行检测,检测对象包括受体外周血DNA修复基因XRCC1 194位点、XRCC1 399位点多态性的水平,根据患者的病情选择合适的NP方案进行化疗,对其化疗效果进行观察,分析在使用该方案的情况下其对化疗的敏感性与受体基因多态性之间的对应关系。结果:本组中含T等位基因(CT+T/T)患者治疗的有效率明显高于XRCC1基因194位点C/C患者,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。本组中XRCC1基因399位点G/G患者治疗的有效率为35.14%,XRCC1基因399位点G/A患者治疗的有效率为37.84%,XRCC1基因399位点A/A患者治疗的有效率为25.00%,三者相比无显著差异(P>0.05)。结论:分析XRCCl基因codonl94和codon399位点的多态性在预测非小细胞肺癌患者采用NP方案进行化疗的敏感性方面有较高的临床价值。     

分娩孕妇全血头发及新生儿脐血羊水中锌铜铁硒含量的研究

目的探讨分娩孕妇血液、头发、脐血、羊水中微量元素锌、铜、铁、硒的含量及其间的关系与新生几营养状况生长发育关系。方法对４０例分娩孕妇血液、头发、脐血、羊水进行了微量元素的含量分析。采用原子吸收光谱和荧光分光光度法，并对所测定的微量元素锌、铜、铁、硒在各样中含量进行了相关分析。结果母全血锌、铜含量明显高于脐血（Ｐ＜０．０１），而铁、硒含量则反之，母血明显低于脐血（Ｐ＜０．０１）。母血中铁与锌、硒含量呈正相关（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；脐血中铜与锌、铁，铁与硒含量呈正相关（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０５）；羊水中锋与铜铁、硒含量呈正相关（Ｐ＜０．０１）。样品间锌含量母血与脐血、母发是正相关（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５）；铁、硒含量母血与脐上呈正相关（Ｐ＜０．０１）。母血铜与新生儿体重、身长呈正相关（Ｐ＜０．０５）。结论显示各样中微量元素含量及微量元素间平衡协同的相互作用。胎儿生长发育有依赖于母体微量元素作用。     

脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究

目的 探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞(NSCs)标志物mRNA的表达.方法 使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs),观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达,使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后NSCs标志物巢蛋白(nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达.结果 脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞.流式细胞仪检测该细胞不表达CD34、CD11a、CD11b和强表达CD29,符合MSCs特征.诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强,48h达高峰,然后逐渐减弱.结论 脐血中存在间质干细胞,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志.脐血能够成为NSCs的新来源.     

脐血单个核细胞体外定向分化为神经干细胞及其致瘤性的实验研究

目的:探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞标志物mRNA的表达,并观察其致瘤性。方法:使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs)。观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达。使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后神经干细胞(NSCs)标志物巢蛋白(Nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达;收集培养后7d的MSCs,接种于裸鼠皮下,观察是否有增生物的出现,并观察细胞组织形态学变化。结果:脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞。流式细胞仪检测该细胞不表达CD34,CD11a和CD11b,强表达CD29,符合MSCs特征。诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强(P<0.05),48h达高峰,然后逐渐减弱;细胞接种后12周,在裸鼠皮下不能形成肿瘤,与对照组相比,细胞形态学未出现恶性变化。结论:脐血中存在MSCs,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志。在裸鼠体内不具有成瘤性。脐血能够成为NSCs的新来源。     

脐血单个核细胞体外定向分化为神经干细胞及其致瘤性的实验研究

目的：探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞标志物mRNA的表达，并观察其致瘤性。方法：使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞，用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞（MSCs）。观察培养过程中脐血MSCs形态的变化，通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达。使用NGF和RA联合诱导后，用RT—PCR方法鉴定诱导前后神经干细胞（NSCs）标志物巢蛋白（Nestin）及Musashi-1蛋白mRNA的表达；收集培养后7d的MSCs，接种于裸鼠皮下，观察是否有增生物的出现，并观察细胞组织形态学变化。结果：脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形，诱导后可分化为神经元样细胞。流式细胞仪检测该细胞不表达CD34，CDlla和CDllb，强表达CD29，符合MSCs特征。诱导后，NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强（P〈0．05），48h达高峰，然后逐渐减弱；细胞接种后12周．在裸鼠皮下不能形成肿瘤，与对照组相比，细胞形态学未出现恶性变化。结论：脐血中存在MSCs，分离后可以体外扩增．诱导后分化为神经元样细胞，并表达NSCs表面标志。在裸鼠体内不具有成瘤性。脐血能够成为NSCs的新来源。     

Conversion of mononuclear cells from human umbilical cord blood into hepatocyte-like cells

Objective: To evaluate the differentiation of human umbilical cord blood cells into hepatocyte-like cells. Methods: Mononuclear cells (MNCs) derived from human umbilical cord blood were isolated using Ficoll. The experiment was derived into 3 categories:(1) MNCs co-cultured with 50 mg minced liver tissue separated by a trans-well membrane and then collected at 0 h,24 h,48 h and 72 h; (2) MNCs cultured along supplemented with 100 ml/L FBS. 100μ/ml penicillin, 100μg/ml streptomycin. 4. 7μg/ml linoleic acid, 1×ITS, 10-4 mol/L L-Ascorbic acid 2-P and a combination of FGF4 (100 ng/ml) and HGF (20 ng/mL). Cells were then collected at 0 d and 16 d to examine the expression profile of hepatocyte correlating markers;(3) 0. 2-0. 3 ml of MNCs with a cell density of 2×107/ml were transplanted into prepared recipient mice [n = 12, injected with 0. 4 ml/kg (20%) CCl4 and 150 ng/kg 5-fluorouracil (5-Fu) prior the transplant 24 h and 48 h, respectively] via injection through tail vein. Mice were sacrificed 4 weeks after transplantation. The hepatocyte correlating mRNAs and proteins were determined by RT-PCR, immunohistochemical analysis and immunoflurence technique. Results: (1) After 72 h. a number of glycogen positive stained cells were observed with MNCs co-cultured with damaged mouse liver tissues. The expression of hepatocyte markers, human albumin (ALB),α-fetal protein (AFP) and human GATA4 mRNA and proteins were detected by RT-PCR and immunohistochemistry as well. For the confirmation, the DNA sequencing of PCR products was performed. In control groups, MNCs co-cultured with normal mouse hepatocytes or MNCs cultured alone, all markers remained negative. (2) In growth factor supplemented culture system, MNCs developed into larger volume with richer cytoplasm and binucleation after 16 d. Positive expression of ALB, AFP, CK18 and CK19 mRNA were detected with RT-PCR, and ALB positive staining was observed by immunocytochemistry as well. In contrast. MNCs cultured without exogenous growth factors scarcely attached to the culture dish and ALB mRNA was not detected. (3) In transplantation experiment, both of ALB and AFP mRNA were detected by RT-PCR and HSA, PCNA and ALB positive staining were observed in the livers of recipient mice by immunocytochemistry. Conclusion: MNCs from human umbilical cord blood could convert into hepatocyte-like cells in 3 different ways, indicating their potential use in the clinic applications for the treatment of human liver diseases.     

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产前诊断中的应用

孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现,为无创性产前诊断开辟了一条新途径。检测孕妇血浆中特异的胎儿DNA序列已被用于胎儿性连锁疾病鉴定、RhD血型检查和多种单基因遗传病的产前诊断;游离DNA水平的变化还可被用作某些妊娠相关疾病如先兆子、早产和胎儿染色体疾病的临床诊断新指标。本文对母体外周血中胎儿游离DNA的生化特征及其临床应用研究,进行了总结和分析。     

脐血间充质干细胞对脐血单个核细胞体外扩增的支持作用

目的探讨脐血源间充质干细胞（mesenchymal stem cells derived fromumbilical cord blood,UCB—MSCs）联合外源性细胞因子对脐血单个核细胞（umbilical cord blood mononuclear cells,UCB—MNCs）体外扩增的支持作用。方法从脐血中培养出UCB—MSCs,检测其表面抗原,并以此作为滋养层细胞,将UCB—MNCs接种于无血清培养体系中培养10d,检测有核细胞总数（MNCs）、CD34^＋．CD133^＋细胞数、集落形成单位数（CFU）和（G—M＋S）期细胞含量的变化。结果从脐血分离、培养出UCB—MSCs,稳定表达CD29、CD105和CD44,不表达CD34和CD133。外源性细胞因子及UCB—MSCs均支持UCB—MNCs的扩增,但以细胞因子联合UCB—MSCs组效果最好（P〈0．05）。结论从脐血中能成功分离培养出间充质干细胞,并完成细胞表型的初步鉴定。外源性细胞因子联合UCB—MSCs可有效扩增UCB—MNCs。     

人脐血单个核细胞诱导分化为神经元样细胞

目的 探讨人脐血单个核细胞体外向神经元样细胞定向诱导分化的条件。方法 无菌条件下采集正常人脐血,分离单个核细胞。用DMEM/F12培养基进行纯化和扩增培养。取扩增5代的间充质干细胞(MSC),分别用β-巯基乙醇(β-ME)、二甲基亚砜(DMSO)、神经条件培养液诱导脐血MSC向神经元样细胞分化。免疫组化法检测脐血MSC的Nestin表达和神经元样细胞特异性标志。结果 脐血原代和2、5代MSC的Nestin表达阳性率分别为6.7%、12.4%和20.8%。神经条件培养液诱导神经元样细胞阳性率最高达36%,β-ME、DMSO分别为33%和25%。结论 脐血MSC具有神经干/祖细胞的特性,在一定条件下能向神经元样细胞分化。     

脐血、母血血清骨钙素和降钙素含量测定及分析

目的：探讨母亲分娩后和新生儿脐血中血清骨钙素（BGP）和降钙素（CT）含量的变化。方法：对分娩后早产儿母亲（20例）、分娩后足月儿母亲（30例）、早产儿（20例）、足月儿（30例）4组对象采用放射免疫方法分别测定其血清BGP、CT的含量。结果：分娩后早产儿的母亲血清骨钙素和降钙素水平与分娩后足月儿的母亲血清骨钙素和降钙素水平相比无明显差异。分娩后早产儿母亲和足月儿母亲血清骨钙素和降钙素水平低于足月儿和早产儿血清骨钙素和降钙素水平并具有明显差异。早产儿血清骨钙素明显低于足月儿，与孕龄呈线性正相关，而早产儿血清降钙素水平高于足月儿并有明显差异（P＜0．01）。结论：揭示了新生儿期钙代谢和骨代 谢的变化特点。对早期诊断和防治新生儿低钙血症有重要理论和临床价值。     

脐血干细胞向肝细胞分化诱导的研究进展

干细胞技术已经成为生命科学领域的热点。脐血干细胞具有来源丰富、采集方便且无涉及伦理学等优势,其研究逐渐引起研究者的广泛兴趣。在特定条件下,脐血干细胞可分化为肝细胞,为治疗肝脏疾病提供了新的细胞来源。