小卫星DNA多态性用于脐血中母体细胞的检测

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增具有高度多态性３３．６位点，联合地高辛标记位点特异性核苷酸探针杂交，制作出ＰＣＲ－小卫星ＤＮＡ片段长度多态性图谱，对我院常规法收集的脐带血３０份（１例用于脐带血移植）进行了母体细胞的检测，结果显示，小卫星ＤＮＡ多态性特异的遗传标志物，３０例被检脐血均未测得母体细胞标志物，地特异、灵敏、简便、快速、无同位素污染，可作为脐血质量监控的可靠方法。     

密度梯度法与羟乙基淀粉法培养脐血间充质干细胞比较

目的 比较密度梯度离心法与羟乙基淀粉法体外分离培养脐血间充质细胞（hUCB-MSCs）的成功率,为今后细胞移植和基因治疗提供重要的细胞来源.方法 取44份足月儿顺产或剖宫产脐带血,分为两组,每组22份,分别用密度梯度离心法结合贴壁法与羟乙基淀粉法分离脐血中单个核细胞,专用培养基培养,观察两种方法培养所得细胞的形态变化并绘制生长曲线,用流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD14,CD29,CD44,CD45,CD105的表达.结果 羟乙基淀粉法培养hUCB-MSCs的成功率（36.36％）高于密度梯度离心法结合贴壁法的培养成功率（9.1％）（P＜0.05）.两种方法所得细胞在形态、生长曲线和表面标志物CD14,CD29,CD44,CD45,CD105的表达无明显差异（P＞0.05）.结论 羟乙基淀粉法可以提高hUCB-MSCs培养成功率,为hUCB-MSCs在临床中应用奠定基础.     

脐血和成人外周血细胞免疫活性的区别

脐血中富含多种造血细胞，可移植治疗实体瘤等疾病。本文采用间接免疫荧光法与淋巴细胞转化试验，比较脐血与成人外周血Ｔ细胞亚群和淋巴细胞转化率。结果显示脐带血ＣＤ_３~＋、ＣＤ_８~＋细胞百分率较成人外周血低（Ｐ＜０．００１），脐血淋巴细胞转化率低。提示进行脐血移植导致移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的发生率和反应程度均较成人低。     

采集脐带血的手术配合

目的：探讨脐带血采集的手术配合,以指导临床实践,提高脐血的质量和数量,提高合格率。方法：采用密闭式采集法,胎儿娩出后,在无菌操作下5分钟内完成采集。结果：2009～2010年分别成功采集脐带血样56份（2009）和70份（2010）,各个血样脐血无凝集,脐血量足够,脐血无污染。结论：高效的采集技术和无菌观念、合适的供应者,是保证脐带血质量和数量的有效方法,是治疗疾病成功的保证。     

脐带血临床输注

将符合采集要求的脐带血（脐血）１５４份，分别给５３例需要常规输血的患者输注。结果显示：脐血有较好的输血效果，与对照组比较，有效少的输血反应倾向（Ｐ＞０．０５）。     

脐带血抗－HCV感染的检测及其临床意义

报告３２８份脐带血抗－ＨＣＶ检测结果，阳性率为０．９１％；３份抗－ＨＣＶ（＋）脐血测定谷丙转氨酶（ＡＬＴ）及ＨＢＶ－Ｍ，其中１份３项阳性者对应患儿于生后６８天死亡，３份抗－ＨＣＶ（＋）脐血的母亲抗ＨＣＶ均阳性。提示抗－ＨＣＶ测定可筛选脐血，预防由脐血输注后引起的丙型肝炎；同步检测脐血肝功能、ＨＢＶ－Ｍ，对新生儿疾病预后有非常重要意义；丙肝可垂直传播，产妇分娩前作抗－ＨＣＶ检测有一定临床价值。     

脱落细胞DNA倍体分析联合肿瘤标志物对良、恶性胸腹水的诊断价值

目的探讨脱落细胞DNA倍体分析联合肿瘤标志物对良、恶性胸腹水的诊断价值。方法收集永康市第一人民医院2020年1月至2022年1月收治的93例胸腹水患者。收取患者腹水进行细胞学病理诊断和脱落细胞Feulgen染色DNA定量分析。采集患者静脉血血清,采用化学发光免疫分析技术测定糖类抗原（CA）125、CA153和癌胚抗原（CEA）。观察脱落细胞DNA倍体分析准确率,计算血清肿瘤标志物阳性率,分析脱落细胞DNA倍体分析联合肿瘤标志物诊断恶性胸腹水的灵敏度和特异度。结果脱落细胞DNA倍体分析发现,恶性胸腹水38例,良性胸腹水55例,检测恶性胸腹水准确率为95.00%（38/40）。恶性胸腹水组CA125、CA153和CEA阳性率高于良性胸腹水组（P＜0.05）。脱落细胞DNA倍体分析联合肿瘤标志物诊断恶性胸腹水灵敏度和特异度高于脱落细胞DNA倍体分析或肿瘤标志物单项检测（P＜0.05）。结论脱落细胞DNA倍体分析联合肿瘤标志物诊断恶性胸腹水灵敏度和特异度均良好,可提高诊断价值。     

胎盘—脐带血的采集

胎盘脐带血的采集哈尔滨市穆斯林医院妇产科汪宁尔郭晓娓二院妇产科王娇玲唐俐梅多年来，胎盘脐带血（下称脐血）曾被当作废物而丢弃，或仅被视为一般血流而用于临床。１９７４年Ｋｎｕｄｔｚｏｎ报告，人类脐血含有丰富的优质的造血干细胞、造血基质细胞及多种造血调...     

PLA2G4C基因小卫星多态性与精神分裂症发病的关联性

目的：探讨精神分裂症与PLA2G4C基因第一外显子区域小卫星多态性的关系,揭示DNA序列多态性在精神分裂症发病机制中的重要作用。方法：以中国北方汉族无血
缘关系的91例精神分裂症患者及81名健康人作为研究对象,采用PCR产物直接测序法检测PLA2G4C基因第一外显子区域小卫星多态性。采用拟合优度χ2检验统计分
析PLA2G4C基因第一外显子区域小卫星多态性在不同分组中的分布情况,探讨PLA2G4C基因第一外显子区域小卫星多态性与精神分裂症的关系。结果：PLA2G4C基因第一外显子区域存在27bp的重复序列（小卫星）,经测序呈现1×27 bp、2×27 bp和3×27 bp 3种多态性;该小卫星多态性在病例组和对照组中等位基因分布比较差异无统计学意义（P>0.05）。在病例组与对照组中,纯合型（等位基因的拷贝数一致）基因型分布的比较差异无统计学意义（P>0.05）,杂合型（等位基因的拷贝数不一致）基因型分布的比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：PLA2G4C基因第一外显子区域存在小卫星多态性,该小卫星多态性可能与精神分裂症无
关联。     

人脐血间充质干细胞的体外分离、培养

目的:研究脐带血间充质干细胞体外分离、培养条件,探讨脐带血间充质千细胞作为细胞治疗种子细胞的可行性.方法:采用不同的实验方法对36例脐血间充质干细胞分离、培养,并与11份骨髓间充质进行对比,探索脐血间充质干细胞的最适培养条件.结果:采用甲基纤维素分离的间接法显著提高了脐血间充质干细胞分离培养的成功率;增加单个核细胞的接种最和适当的血清浓度促进了脐血间充质干细胞的成功培养.结论:脐血间充质干细胞能在体外分离纯化,但培养成功率明显低于骨髓,受多种因素影响.     

孕期人乳头状瘤病毒亚临床感染与母婴垂直

目的 :探讨不同孕期人乳头状瘤病毒 ( HPV)亚临床感染及母婴垂直传播情况。方法 :采用 PCR技术检测 3 0例孕早期、 4 2例孕中期、 3 2例孕晚期妇女的宫颈分泌物、母血、绒毛或胎盘、羊水、脐血及新生儿咽部抽吸物标本 HPV- 6、 11、 16、 18型 DNA。结果 :早孕期 :5例宫颈分泌物 HPV阳性 ( 5 /3 0 ) ,7例母血 HPV阳性 ( 7/3 0 ) ,3例绒毛 HPV阳性 ( 3 /3 0 ) ;中孕期 :12例宫颈分泌物 HPV阳性 ( 12 /4 2 ) ,11例母血 HPV阳性 ( 11/4 2 ) ,9例胎盘 HPV阳性 ( 9/4 2 ) ;另 2 2例羊水标本中 ,仅 1例 HPV阳性 ( 1/2 2 ) ;晚孕期 :2 3例宫颈分泌物 HPV阳性( 2 3 /3 2 )、 18例母血 HPV阳性 ( 18/3 2 ) ,12例胎盘 HPV阳性 ( 12 /3 2 ) ;另 3 1例羊水标本中 ,4例 HPV阳性 ( 4 /3 1) ,3 1例脐血标本中 ,12例 HPV阳性 ( 12 /3 1)。分析羊水、脐血与母血 HPV感染的相对危险度高于宫颈分泌物 ,而产时新生儿咽部抽吸物与宫颈分泌物 HPV感染的相对危险度高于母血。结论 :在整个孕期中 ,孕晚期的HPV亚临床感染明显。孕期 HPV亚临床感染的母婴传播不但可经产道直接接触传播 ,还可经羊水、胎盘发生宫内传播 ,其宫内传播率的高低主要与母血 HPV感染相关。新生儿脐血的 HPV感染主要与母血感染相关 ,而产时新生儿咽部的 HPV     

Rapid identification of the origin of hematopoietic cells after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation for leukemia with DNA-fingerprinting

Allogeneichematopoieticstemcelltransplan-tation(AHCT)isusedtotreatleukemia,severeaplasticanaemiaandsoon.OneoftheimportantindexesofsuccessfulAHCTisthedetectionofdonorcellsafterreconstitutionofhematopoieticfunctionintherecipient.AvarietyoftechniqueshavebeenusedtoconfirmthesurvivalofthegraftafterAHCT,whichincludeRBCphenotyping,RBCandWBCisoenzymeanalysis,immunoglobu-linallotyping,andsoon,However,thesemarkersmaybeeasilyaffectedbymanyadditionalfactorssuchasmultipletransfusions,samesex,samebl…     

孕期强化免疫对脊髓灰质炎IgG水平的影响

为了解孕期强化免疫对母血和脐血特异性抗体水平的影响，将门诊４８例孕２８～３４周的孕妇平均分为研究组和对照组。研究组含服脊髓灰质炎活疫苗。临产前分别对两组孕妇抽取肘静脉血和产时取脐血，用间接ＥＬＩＳＡ法检测其抗脊髓灰质炎ＩｇＧ抗体水平。结果：研究组母血和脐血抗脊髓灰质炎ＩｇＧ抗体水平明显高于对照组，两组脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗母血中产生的ＩｇＧ抗体效价１：２００，差异有显著性（Ｐ〈０．０１）；在     

从孕妇外周血中捕获胎儿遗传信息的方法学探讨

目的:探讨从孕妇外周血细胞中检测胎儿基因组和血浆中捕获胎儿游离核酸方法的实用性。DNA方法:在基SRY因高保守区设计两对性别特异性引物,利用巢式聚合酶链反应分别对例孕妇外周血胎儿基因组和血浆中游(nest-PCR)50DNA离核酸进行特异性扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,测序验证扩增产物的准确性。(PAGE)DNA结果:名孕妇中名分娩男5028婴,名分娩女婴。基因片段阳性检出率:基因组为();游离核酸组为()。名分娩女婴者除例22SRY75!/2832%9/28221基因组检测结果阳性外,其余均为阴性结果。本研究检测系统灵敏度为52.8pg/μ。l结论:孕妇外周血中胎儿基因组和游DNA核酸检测可作为产前基因诊断的途径,两者联合应用有助于提高胎儿遗传信息的检出率。     

HBV母婴垂直传播相关影响因素研究

目的探讨妊娠合并HBV感染的孕妇母婴垂直传播的相关影响因素。方法收集100例乙肝病毒携带孕妇及其100例新生儿作为研究对象,采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光法（IFMA法）检测孕妇HBs Ag和HBe Ag,实时荧光定量PCR法检测HBV DNA载量,并用流式细胞仪检测新生儿脐血中NK细胞CD69和IFN-γ,并对以上指标的相关性进行统计分析。结果母血中HBs Ag单阳性与HBs Ag/HBe Ag双阳性组间母婴垂直传播比率差异有统计学意义（P〈0.001）;孕妇外周血HBV DNA载量越高母婴垂直传播几率越高。妊娠合并乙型肝炎患者中HBV母婴垂直传播组、未发生HBV母婴垂直传播患者与正常对照组三组间脐血中T淋巴细胞中活化标志物CD69表达的细胞百分比分别为：（9.58±1.745）%、（15.6±2.117）%和（5.66±3.724）%,差异有统计学意义（P〈0.001）。HBV母婴垂直传播与IFN-γ无明显相关性（P〉0.05）。结论母血HBe Ag阳性与否、HBV DNA病毒载量高低直接决定着母婴HBV垂直传递的风险,同时T淋巴细胞中活化标志物CD69表达水平与母婴HBV垂直传播相关,该研究的结果为临床研究HBV母婴传播的机理及其预防措施,减少HBV携带者,提高新生儿出生质量有重要意义。     

PCR技术检测孕妇外周血中胎儿细胞的研究

根据Ｙ染色体序列特点，含有Ｙ染色体特异重复ＤＮＡ族（ＤＹＺ１）８００～５０００拷贝、新设计一对引物Ｙ３、Ｙ４经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增该序列的特定片段，来检测孕妇血中胎儿细胞。作者用此方法扩增各妊娠早、中、晚孕妇外周血标本粗提ＤＮＡ，检测男性胎儿细胞，与相应的绒毛、羊水及娩出胎儿性别相比较，符合率分别为９３％、１００％、８７．５％。本研究为无创伤性产前诊断提供了新的途径。     

利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿的ABO血型研究

目的：探讨一种胎儿ABO血型的无创性产前诊断方法。方法：从28例健康孕妇血浆中提取胎儿DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法检测胎儿ABO血型,通过出生后全血血清学检测证实。结果：28例样本中,产前检查能正确显示胎儿血型的有22例,总准确率为78．6％。结论：利用孕妇血浆中胎儿DNA诊断胎儿ABO血型,是一种简便可行的无创性方法,值得推广应用。     

胎儿宫内感染乙型肝炎病毒的实验研究

目的探讨胎儿宫内乙型肝炎病毒(HBV DNA)感染的实验诊断方法及其临床意义.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对156例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇的母血和产后婴儿脐血及婴儿外周血的乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)和HBV DNA进行检测.结果156例HDsag阳性孕妇所生婴儿脐血和婴儿外周血HBsAg的检出率为8 3%(13/156)、6.4(10/156),HBeAg检出率分别为7.1%(11/156)、5.1%(8/156),母血、脐血、婴儿外周血HBV DNA阳性检出率分别为36.5%(57/156)、28.2%(44/156)、23.7%(37/156);57例HBV DNA阳性孕妇血病毒含量(拷贝数/ml的对数值)为7.34±2.28,37例阳性婴儿外周血HBV DNA含量为6.08±0.96;与婴儿外周血检测结果相比较,脐血中HBsag、HBeAg的阳性率不仅存在23.1%和37.5%的假阳性,HBV DNA也存在16.7%(7/42)的假阳性;在HBeAg或HBV DNA阳性孕妇中,婴儿外周血HBV DNA的检出率分别为73.8%(31/42)、64.9%(37/57),显著高于HBeAg或HBV DNA阴性者5.3%(6/114),(P＜0.01):婴儿外周血中HBV DNA阳性率随孕妇HBVDNA含量增加而显著增加(P＜0.005),其HBV DNA的含量与母血呈正相关,(r=0.39).结论婴儿脐血HBV检测是诊断胎儿宫内HBV感染的筛选指标,而婴儿外周血的检测才具有确诊意义;HBV DNA定量检测是胎儿宫内HBV感染和感染程度最为直接、敏感的诊断方法;孕妇HBeAg、HBV DNA阳性是胎儿宫内感染HBV的高危因素.     

利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿血型的意义

目的:探讨利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿ABO血型的临床意义。方法:从33例13-40周可疑母儿血型不合的孕妇血浆中提取胎儿DNA,利用复合PCR-RFLP技术检测胎儿ABO血型。通过出生后脐带血血清学检测证实。结果:33例样本中,检出22例(22/33),出生后证实20例诊断正确(20/22);14例孕中期检出9例(9/14),8例正确(8/9);19例孕晚期检出13例(13/19)),12例正确(12/13)。结论:利用孕妇血浆中的胎儿DNA诊断胎儿ABO血型简便无损伤,对于诊断和预防新生儿溶血病的发生具有重要意义。     

脐血CD34＋细胞向内皮细胞诱导分化的体外研究

目的：探讨从脐血中分离CD34＋细胞,并诱导、鉴定其分化为内皮细胞的方法。方法：羟乙基淀粉沉降、密度梯度离心两步法制备脐血单个核细胞,免疫磁珠分选法（MACS）获得CD34＋细胞,在含有细胞因子的M199培养基中诱导。观察细胞形态变化,摄取Dit标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil—AcLDL）的情况,流式鉴定细胞表面标志。结果：分选CD34＋细胞纯度在91％以上,培养3d有明显集落形成及部分细胞贴壁,14d贴壁细胞呈条索状,逐渐增多后呈铺路石样改变。流式检测贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志物CD144、vWF、CD31、CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达,与成熟的脐静脉内皮细胞表达率相近。免疫荧光发现贴壁细胞呈现红色荧光,提示细胞摄取Dil—AcLDL,证明CD34＋细胞分化为有功能的内皮细胞。结论：脐血中存在CD34＋细胞且用两步法和MACS可获得高纯度CD34＋细胞,在特定条件下可分化为内皮细胞。