除湿胃苓汤对小鼠特异性皮炎的治疗作用及组织ERK1/2、Claudin 1表达的影响

[目的] 探究除湿胃苓汤(Chushi Weiling Decoction,CSWLD)对特异性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠的皮损改善效果,以及对组织细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、紧密连接蛋白1(Claudin 1)表达的影响。[方法]采用二硝基氟苯(dinitro fluoro benzene,DNFB)诱导建立小鼠AD模型,随机分为模型组(0.9%氯化钠溶液)和低、中、高CSWLD组(5、10、20 mL·kg-1),另设置空白组(0.9%氯化钠溶液),各组均以相应药物灌胃1周。给药结束后,评价皮损改善情况,并行炎症评分。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)、IL-6、IL-4、CC类趋化因子配体-5(C-C motif chemokine ligand-5,CCL-5)和CCL-2含量。取皮损部位组织,以免疫组化染色测定IL-33、肿瘤抑制素2(suppression of tumorigenicity 2,ST2)、Claudin 1含量;以定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)和免疫印迹检测ERK1/2、Claudin 1的mRNA和蛋白表达。[结果] 与空白组比较,模型组小鼠皮肤红肿、干燥、结痂明显,炎症评分增加,血清IL-33、IL-6、IL-4、CCL-5、CCL-2含量升高,组织IL-33、ST2含量增加,Claudin 1 mRNA表达降低,ERK1/2 mRNA表达升高,Claudin 1蛋白表达降低,ERK1/2磷酸化产物(phosphorylated-ERK1/2,p-ERK1/2)与ERK1/2蛋白比值增加(均P<0.01)。在给予不同剂量CSWLD后,小鼠皮损部位红肿消退,结痂脱落,症状减轻。与模型组比较,中、高CSWLD组小鼠炎症评分降低,血清IL-33、IL-6、IL-4、CCL-5、CCL-2 含量下降,组织IL-33、ST2 含量降低,Claudin 1 mRNA 表达升高,ERK1/2 mRNA 表达降低,Claudin 1蛋白表达升高,p-ERK1/2与ERK1/2蛋白比值降低(P<0.05,P<0.01);而低CSWLD组小鼠的各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。[结论] CSWLD可下调炎性介质,并能抑制组织ERK1/2表达、促进组织Claudin 1表达,缓解AD小鼠皮损症状。     

IL-33在脑梗死中的研究进展

脑梗死(IS)是由于血栓梗阻脑部血流所导致的一类疾病。白细胞介素-33(IL-33)是当前发现的IL-1家族中的新成员,被认为是变应性疾病、自身免疫性疾病以及多种炎症疾病中的细胞调控因子,它表达于多种组织及细胞,参与许多疾病的发病机制。当前认为IL-33引起炎症调控的作用,其机制是通过与ST2受体以及IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAc P)相结合,增强了Th2细胞的免疫应答作用,改变了Th1/Th2的免疫平衡作用,其中涉及的相关人类疾病包括哮喘、变应性鼻炎、炎性肠病、糖尿病、自身免疫性疾病、脑炎以及心脑血管疾病等。目前,多项研究不仅证实了IL-33影响IS的发病及预后,确定了IL-33对IS的早期诊断以及预后评估有了新的意义。同时也有更多研究聚焦到了IL-33/ST2信号传导通路单基因多态性与IS相关性。本文对IL-33、IL-33/ST2信号通路的生物学功能以及在IS中的研究进展进行综述。     

IL-1β对精氨酸升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的　探讨白介素 - 1β(IL- 1β)对基础状态下和精氨酸升压素 (AVP)介导的新生 SD大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响 .方法　以培养的新生 SD大鼠 CFs为实验模型 ,采用 3 H- Td R掺入法、MTT比色法和流式细胞仪细胞周期分析技术 ,分别观察 IL- 1β对基础状态下及 AVP介导 CFs的DNA合成、CFs数目和细胞周期的影响 .结果　 1在基础状态下 ,10 5U· L- 1 IL - 1β组每 5 0 0 0个细胞的 3 H- Td R掺入值为 (70± 14)· min- 1 ,显著低于空白对照组 (117± 32 )·min- 1 ,(P<0 .0 5 ) ;10 5U· L- 1 IL- 1β组 MTT比色法测定的吸光度 (A490 nm)值为 0 .14± 0 .0 1,显著低于空白对照组 (0 .16± 0 .0 1,P<0 .0 5 ) ;10 5U· L- 1 IL - 1β组 CFs增殖指数 (PI)为 (18.82± 0 .19) % ,较空白对照组 (4 0 .98± 0 .5 4) %显著降低 (P<0 .0 1) . 2 10 - 7m ol· L- 1 AVP组每 5 0 0 0个细胞的 3 H-Td R掺入值为 (2 43± 6 1.30 )· min- 1 ,MTT比色法 A490 nm值为 0 .2 4± 0 .0 1,PI为 (4 6 .5 6± 1.44 ) % ,均显著高于空白对照组 (分别 P<0 .0 5 ,P<0 .0 1,P<0 .0 1) . 3IL- 1β以浓度依赖方式使 10 - 7mol· L- 1 AVP介导的 CFs3 H- Td R掺入值降低 ,其中 1.0× 10 5U· L- 1 IL - 1β,2 .0× 10 5U· L-     

IL-33/ST2信号通路与炎症性肠病的研究进展

ST2在1989年对小鼠成纤维细胞的研究中被发现,它属于Toll样/IL-1受体超家族成员之一。IL-33,又名IL-1F11,它可以作为ST2的特异性配体并激活ST2,从而为研究ST2信号转导通路提供了新的方向。IL-33/ST2信号通路是一个促炎系统,其促炎作用可以被sST2负向调节。IL-33具有双重调节作用,在某些条件下作为细胞因子,另一方面作为转录因子。sST2水平与疾病严重程度和炎性因子相关,可能成为一种生物学标记用以区分活动期与非活动期溃疡性结肠炎,并且评估疾病的严重程度。     

IL-33/ST2在冠心病中的研究进展

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease, CHD)的病死率居城乡居民总死亡率的首位。临床防治与早期筛查成为研究热点。传统的风险因素，如年龄、性别、高血压、糖尿病、血脂异常和吸烟，仍然是风险分层的基石。有研究发现，新型炎症标志物ST2水平及IL-33/ST2轴与心肌梗死和心力衰竭预后有关，测量该生物标志物可能有助于识别心血管事件风险的高危患者，并将从强化管理中获益。此外，sST2值与传统危险因素结合可提高危险预测能力，是未来发展的方向。     

损伤上皮细胞ERK1/2通路活化并诱导上皮下成纤维细胞增殖

目的:探讨气道上皮损伤过程中ERK1/2信号通路的活化及其病理意义。方法:将原代培养的人支气管上皮细胞给予机械性损伤和(或)加入ERK1/2信号通路特异性抑制剂PD98059,采纳免疫组化、Western blotting或Zymog-raphy方法检测气道上皮细胞经机械损伤后ERK1/2的激活及MMP-2活性的变化;将损伤或加入MMP-2抑制剂的损伤上皮细胞上清刺激上皮下成纤维细胞,应用BrdU免疫组化检测成纤维细胞增殖的变化。结果:损伤诱导了上皮细胞ERK1/2信号通路的活化并促进活性MMP-2的释放,阻断ERK1/2信号通路减弱了损伤诱导的活性MMP-2水平;损伤上皮上清促进了成纤维细胞增殖,MMP-2抑制剂可阻断损伤上皮细胞上清的促增殖效应。结论:ERK1/2信号是损伤气道上皮高表达MMP-2进而诱导上皮下纤维化的一条重要信号通路。     

TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化

目的:探讨TGFβ1-Smad信号通路在IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化中的作用。方法:体外培养人肺泡上皮细胞来源的A549细胞株,将传代培养的细胞分为对照组、TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组、IL-33组、IL-33+TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组。给予相应处理,24h后收集各处理组细胞。RT-PCR和Western blot检测转化生长因子β1(TGFβ1)、上皮细胞标志物E钙黏素(E-cad)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。Western-blot检测Smad信号通路Smad3、p-Smad3的表达水平。结果:与对照组比较,TGFβ受体抑制剂组Smad3蛋白,p-Smad3蛋白,TGFβ1、E-cad、α-SMA的mRNA及蛋白表达表达水平均未见明显变化(P>0.05);与对照组比较,IL-33组Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),TGFβ1mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),E-cad mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);IL-33+TGFβ受体抑制剂组与IL-33组比较,Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),TGFβ1的mRNA及蛋白表达未见明显改变(P>0.05),E-cad的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),α-SMA的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化。     

IL-33及其受体ST2的研究进展

IL-33是的IL-1家族的新成员,通过受体ST2活化Th2辅助性T细胞。近来在自身免疫性疾病、变态反应性疾病和心脏疾病的研究表明IL-33是炎症性因子。本文总结了IL-33和其受体ST2信号通路的研究进展。     

IL-33参与促进A549细胞上皮-间质转化及作用机制

目的 探讨在上皮来源的A549细胞上皮-间质转化进程中,IL-33/ST2L信号传导系统的作用及其机制.方法 培养A549细胞,RT-PCR检测受体ST2L mRNA;不同浓度白细胞介素-33(IL-33)刺激细胞,在不同时间点以MTT方法检测IL-33对A549细胞增殖的影响;以Real-time PCR法检测不同时间点A549细胞标志性基因E-cad mRNA、α-SMA mRNA以及Vimentin mRNA等的变化和IL-33/ST2L信号通路中关键因子TRAF-6 mRNA的表达改变;Westem blot法检测细胞标志性蛋白E-cad、collagenI、Vimentin 以及TRAF-6的改变.结果 IL-33对A549细胞的增殖没有影响;不同浓度(5、10及50 ng/mL)IL-33刺激A549细胞24 h,E-cad的表达随浓度的升高逐渐下降、α-SMA的表达随浓度的升高逐渐上调,选择10 ng/mLIL-33作为A549细胞的刺激浓度;随着IL-33刺激时间的逐渐延长,E-cad的表达先降低后升高,α-SMA、Vimentin、collagenI以及TRAF-6的表达呈现先升高后降低的趋势.结论 IL-33/ST2L信号通路的激活能促进A549细胞间质变,尤其是在早期炎症反应阶段作用最为明显.     

miR-487b/IL-33/ST2在脓毒症中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨miR 487b/IL 33/ST2在脓毒症中的表达及意义。方法 选取2015年1月～2017年12月在西安交通大学第二附属医院ICU收治的80例脓毒症患者（脓毒症组）及同期行健康检查的80例志愿者（对照组）。ELISA检测血清白介素 33（IL 33）及生长抑素2（ST2）水平;qRT PCR检测血清miR 487b表达进行对比。选取成年雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为空白组、假手术组、脓毒症模型组、脓毒症+IL 33组、浓毒症+miR 487mimics组、脓毒症+miR 487mimics+IL 33组,每组10只。RT PCR检测小鼠血清中IL 33、ST2、miR 487b、肿瘤坏死因子 α（TNF α）及IL 6水平变化。荧光素酶报告实验验证miR 487b及IL 33相关性。结果 脓毒症患者血清IL 33、ST2明显升高,miR 487b下调（P＜005）;脓毒症小鼠血清IL 33、TNF α、IL 6上调,miR 487b下调（P＜005）,miR 487b表达恢复可部分逆转IL 33、TNF α及IL 6的上调。荧光素酶报告实验证实miR 487b可直接负向调控IL 33表达（P＜005）。结论 miR 487b可以负向调控IL 33/ST2信号通路,诱导TNF-α和IL-6表达降低,减轻脓毒症炎症反应,有望成为脓毒症治疗的新分子靶点。     

结直肠癌细胞通过IL-33/ST2轴招募肥大细胞的研究

目的 探讨结直肠癌细胞通过IL-33/ST2轴招募肥大细胞的作用机制。方法 收集结直肠癌组织及癌旁组织石蜡切片各15例,免疫组织荧光检测结肠癌及癌旁组织肥大细胞的浸润情况以及IL-33的表达量。利用细胞免疫荧光检测肥大细胞表面ST2受体的表达,Transwell细胞迁移实验观察IL-33、结直肠癌细胞条件培养液、IL-33+sST2（IL-33受体抑制剂）、结直肠癌细胞条件培养基+sST2条件下肥大细胞体外迁移能力的变化。将肥大细胞与结肠癌细胞共培养,RT-PCR检测肥大细胞细胞因子的表达。结果 相比于癌旁组织,结直肠癌组织的肥大细胞数量明显增多,IL-33的表达量也增加（P<0.001）。IL-33和结肠癌细胞条件培养基可以增强肥大细胞的迁移能力,而加入IL-33的抑制剂sST2后,迁移能力减弱（P<0.01）。共培养后的肥大细胞相比对照组,肥大细胞表达细胞因子IL-4、IL-6、IL-10和GM-CSF表达水平显著增加（P<0.05）。结论 结直肠癌细胞能够通过IL-33/ST2轴招募肥大细胞。     

IL-33、ST2在慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中的表达及意义

目的 探讨IL-33、ST2在慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重患者中的表达及其意义。方法 选取2010年12月至2012年12月COPD急性加重患者30例为病例组,匹配同期健康体检者30例为对照组。使用ELISA法测定治疗前后血清、痰液中IL-33和ST2的表达,并收集患者住院期间肺功能、血气分析、血常规、C反应蛋白（CRP）等临床相关资料进行分析。结果病例组治疗前血清ST2水平显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而痰液ST2、痰液IL-33以及血清IL-33在两组比较中均无统计学差异（均P＞0.05）。治疗后病例组血清ST2水平显著低于治疗前（P＜0.05）,与对照组比较无统计学差异（P＞0.05）。病例组治疗后IC%显著性升高（P＜0.05）,同时CRP显著降低P＜0.05）。相关性分析发现血清ST2与IC%、FEV1%呈显著负相关（均P＜0.05）,与CRP、二氧化碳分压（PCO2）、氧分压（PO2）、乳酸（LA）及血白细胞（WBC）未发现有明显相关性（均P＞0.05）。结论血清ST2水平在COPD急性加重期明显增高,治疗缓解后显著降低,并可恢复正常。血清ST2可作为判断COPD病情变化的一项血清生物标志物。     

IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移

目的 研究白介素(IL)-17通过IL-6/1L-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移.方法 以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Westem blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化.迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响.结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(p＜0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、1L-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化.侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移.结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移.     

Up-regulation of Ras/Raf/ERK1/2 signaling in the spinal cord impairs neural cell migration, neurogenesis, synapse formation and dendritic spine development

Background The Ras/Raf/ERK1/2 signaling pathway controls many cellular responses such as cell proliferation, migration, differentiation, and death. In the nervous system, emerging evidence also points to a death-promoting role for ERK1/2 in both in vitro and in vivo models of neuronal death. To further investigate how Ras/Raf/ERK1/2 up-regulation may lead to the development of spinal cord injury, we developed a cellular model of Raf/ERK up-regulation by over- expressing c-Raf in cultured spinal cord neurons （SCNs） and dorsal root ganglions （DRGs）.     

莪术醇通过蛋白激酶信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的 研究莪术醇（curcumol）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法 用不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）处理瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）作为不同浓度莪术醇组;用20 μmol/L 蛋白激酶（ERK）信号通路激活剂异丙肾上腺素盐酸盐（ISO）和160 mg/L莪术醇处理KF细胞,记为curcumol 160 mg/L+ISO组,Western blot检测KF细胞中增殖蛋白（Cyclin D1、PCNA）、纤维化标记蛋白（Col1A1、Col3A1、α-SMA）、凋亡蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3）、ERK信号通路蛋白（p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf）表达水平,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡率。结果 不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）均可降低细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白含量,抑制纤维化标记蛋白Col1A1、Col3A1、α-SMA蛋白表达,抑制细胞外调节ERK信号通路蛋白p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf表达,提高Bax、cleaved caspase-3表达量,抑制KF细胞增殖、胶原合成,促进细胞凋亡,抑制ERK信号通路（P<0.05）。ERK信号通路激活剂ISO（20 μmol/L）可逆转莪术醇（160 mg/L）对KF细胞增殖、凋亡、胶原合成和ERK信号通路的作用。结论 莪术醇通过ERK信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成。