吗啡对体外培养正常女性成骨细胞的增殖及BGP mRNA表达的影响

目的:观察阿片类药物是否对体外培养正常女性成骨细胞增殖有影响。方法:用胰酶-胶原酶消化法从正常女性松质骨中分离培养成骨细胞,用茜素红染色法、改良Gomonri钙钴法鉴定成骨细胞;制备不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮,作用于体外培养的成人正常成骨细胞上,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测吗啡对其的影响;通过RT-PCR法半定量分析不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮对成骨细胞骨钙素(BGP mRNA)表达的影响。结果:用酶消化法分离的人成骨细胞,在体外培养时可合成碱性磷酸酶(ALP)、形成钙化结节。不同浓度的吗啡组与对照组OD490(optical density,OD)值相比差异有显著性(P<0.001);1×10-7mol·L-1、1×10-6mol·L-1、1×10-5mol·L-1和1×10-4mol·L-1吗啡组的细胞增殖速度依次降低(P<0.001);而吗啡(10-5mol·L-1)+纳洛酮(10-5mol·L-1)组与对照组OD490值相比差异不明显(P>0.05)。吗啡作用24 h呈剂量依赖性抑制BGPmRNA的表达。结论:用酶消化法进行人成骨细胞培养,简捷易行,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用;外源性阿片类药物吗啡可直接抑制人成骨细胞的增殖。阿片类物质可以抑制成骨细胞内BGP mRNA的表达。     

紫外分光光度法测定大豆异黄酮胶囊中大豆异黄酮含量

目的 建立以紫外分光光度法测定大豆异黄酮胶囊中大豆异黄酮含量的方法。方法 采用紫外分光光度法，检测波长为262nm。结果 大豆异黄酮浓度在9．73～19．46μg／mL范围内与吸光度线性关系良好（r=0．9998），平均回收率为99．76％（RSD=O.64％）。结论 该方法准确可靠，操作简便，稳定性好。     

大豆异黄酮的开发利用

介绍近年来大豆异黄酮的研究进展，包括大豆异黄酮的主要类型，及其抗肿瘤，防治心血管病，免疫系统作用，雌激素样作用等多种生物活性，其开发与利用具有广阔前景。     

大豆总异黄酮的提取及含量测定

目的建立大豆总异黄酮的提取方法及含量测定方法。方法以大豆为原料通过乙醇浸泡提取，聚酰胺柱层析提取大豆总异黄酮。并用HPLC法测定大豆总异黄酮含量。结果提取物物大豆总异黄酮含量为52．26％。HPLC的条件为：C18柱，流动相为甲醇：水：乙酸=42：57：1，检测波长为260nm。结论提取方法简单，测定方法简便、快捷，重现性好，可用于大豆总异黄酮的含量测定：     

大豆糖蜜中提取大豆异黄酮的研究

目的:研究一种从大豆糖蜜中简便提取大豆异黄酮的方法。方法:以大豆异黄酮含量和得率为考核指标,通过单因素试验研究最佳提取工艺。结果:固形物浓度20°,50℃下搅拌1h,3000rpm离心15min为最佳工艺条件,可制备含量20%以上的大豆异黄酮,应用于保健食品开发。     

大豆异黄酮胶囊中六种有效成分的含量测定

建立高效液相色谱法测定大豆异黄酮校囊6种有效成分的含量。采用VP-ODS色谱柱；检测波长：254nm；流速：1．2mL&#183;min^-1；柱温：45℃；进样量10μL；甲醇-3．86％醋酸钠溶液-4％醋酸溶液-纯化水为流动相进行梯度洗脱。大豆异黄酮胶囊6组分线性关系良好（r=0．9999）；平均回收率为95．5％（RSD=0．54%）。本法能够准确有效的测定大豆异黄酮校囊中6组分的含量。     

大豆异黄酮的药理作用

大豆所含的异黄酮主要是三羟异黄酮(genistein)和二羟异黄酮(daiclzein)以及其β-葡糖苷形式，是一类杂环多酚类化合物。近年来，对大豆异黄酮的研究已成为热点，并取得了很大的进展。笔者就大豆异黄酮药理作用的研究概况作一概述。     

大豆总异黄酮的提取及含量测定

目的建立大豆总异黄酮的提取方法及含量测定方法.方法以大豆为原料通过乙醇浸泡提取,聚酰胺柱层析提取大豆总异黄酮.并用HPLC法测定大豆总异黄酮含量.结果提取物物大豆总异黄酮含量为52.26%.HPLC的条件为:C18柱,流动相为甲醇∶水∶乙酸=42∶57∶1,检测波长为260 nm.结论提取方法简单,测定方法简便、快捷,重现性好,可用于大豆总异黄酮的含量测定.     

超高效液相色谱法测定大豆异黄酮胶囊中异黄酮的含量

目的建立同时测定大豆异黄酮胶囊中6种异黄酮含量的超高效液相色谱法(HPLC)。方法采用AcquityUPLCTMBEHC18柱(1.7μm,2.1mm×50mm),流动相为甲醇-0.05mol/L乙酸胺(pH4.6),梯度洗脱,检测波长为260nm,流速为0.4ml/min,柱温为40℃,外标法测定。结果大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素分别在0.02600～0.2600mg/ml、0.02625～0.2625mg/ml、0.02675～0.2675mg/ml、0.012650～0.12650mg/ml、0.012525～0.12525mg/ml、0.012750～0.12750mg/ml范围内线性关系良好(r≥0.9930),加样回收率(6例)分别为:98.5%、98.8%、98.2%、97.7%、98.0%、97.3%。结论本法快速、简便、准确、灵敏度高、成本低,适用于大豆异黄酮胶囊中异黄酮的含量测定及质量控制。     

大豆总异黄酮的提取及含量测定

目的建立大豆总异黄酮的提取方法及含量测定方法。方法以大豆为原料通过乙醇浸泡提取,聚酰胺柱层析提取大豆总异黄酮。并用HPLC法测定大豆总异黄酮含量。结果提取物物大豆总异黄酮含量为52.26%。HPLC的条件为:C18柱,流动相为甲醇∶水∶乙酸=42∶57∶1,检测波长为260 nm。结论提取方法简单,测定方法简便、快捷,重现性好,可用于大豆总异黄酮的含量测定。     

葛根对大鼠成骨细胞增殖分化影响的血清药理学实验

目的：观察葛根含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响。方法：将32只SD大鼠随机分为实验组与对照组，在同等条件下制备葛根处理大鼠含药血清和对照血清，观察不同采血时间及血清添加量对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）的影响。结果：葛根末次灌胃后1～2小时采血的含药血清对成骨细胞增殖和ALP的作用明显（P〈0．01），随着含药血清添加量的增加，对成骨细胞增殖和ALP的作用明显增强（P〈0．01）。结论：含葛根处理大鼠血清可促进成骨细胞增殖和分化。     

OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞BGP基因表达的影响

目的：探讨成骨生长肽羧基端5肽[OGP（10-14）]及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞（OB）骨钙素（BGP）基因表达水平的调节作用。方法：3代OB在含10％胎牛血清（FBS）的完全培养基中培养后，更换无血清培养基使细胞同步化在G0期，分为3组：G36G组，培养液中G36G浓度为10^-11mol／L；G48A组，培养液中G48A浓度为10^-13mol／L；对照组，培养液中含1％牛血清白蛋白（BSA）。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测OGP（10-14）及其类似物G48A对0BBGP mRNA表达的影响。结果：G36G组和G48A组大鼠OBBGP mRNA的表达水平高于对照组。结论：G36G和G48A对大鼠OBBGP mRNA的表达具有上调作用。     

骨形态发生蛋白对兔人工关节周围骨长入的影响

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)对兔人工肱骨头周围骨长入的影响。方法新西兰兔30只随机分成两组行模拟人工肱骨头置换手术。实验组假体周围放置骨形态发生蛋白30mg;对照组不作处理。分别于植入后4、8、12周每组处死5只兔子。取出肱骨标本,分别运用普通X线摄片及不脱钙骨组织切片等观察方法,比较假体周围的骨生长情况。结果假体植入后4周、8周,组织学观测实验组假体周围骨性结合率分别为(67.11±4.84)%和(70.79±6.56)%,显著高于对照组(34.61±5.74)%和(57.73±5.85)%(P<0.05)。12周时实验组骨性结合率为(74.71±6.10)%,对照组为(69.42±5.76)%(P>0.05)。结论BMP能促进骨假体界面的骨长入能力,这种作用在植入早期尤为明显。     

补骨防疏煎剂对骨质疏松症大鼠血清骨钙素的影响

目的:研究补骨防疏煎剂对骨质疏松症大鼠血清骨钙素(BGP)的影响。方法:采用维甲酸ig复制大鼠骨质疏松模型,酶联免疫法检测大鼠血清BGP,并观察骨组织形态学。结果:高、中、低浓度补骨防疏煎剂可显著增高模型大鼠血清BGP含量(P<0.01),明显改善模型大鼠骨病理形态变化。结论:补骨防疏煎剂可明显改善模型大鼠的骨质疏松症状,其机制可能与提高血清BGP水平、改善骨病理变化有关。     

经皮自体红骨髓移植治疗股骨骨不连的临床研究

目的探讨采用经皮自体红骨髓移植治疗股骨骨不连的效果。方法观察股骨骨不连患者82例,其中股骨粗隆下骨不连17例,股骨干骨不连52例,股骨髁上骨不连13例。用带锁髓内钉固定骨折端。取自体髂骨植骨。术后7d、15d骨折端注射复合骨形态发生蛋白的自体红骨髓。结果X线片显示2个月60例骨折端周围有大量新生骨痂,5个月75例有连续骨痂形成。平均愈合时间（7．2±1．8）个月。结论经皮自体骨髓干细胞复合骨形态发生蛋白移植,改善骨折区成骨能力,是治疗股骨骨不连的较好选择。     

中药“骨愈合剂”熏蒸对糖尿病模型兔骨折愈合的影响

目的探讨中药"骨愈合剂"熏蒸对糖尿病兔骨折愈合过程中骨形态发生蛋白(BMP)表达的影响。方法实验兔随机分为四组,每组12只:A、B组为正常兔胫骨骨折模型组;A1、B1组为糖尿病兔胫骨骨折模型组。A、A1组采用"骨愈合剂"熏蒸;B、B1组为非熏蒸对照。术后2、4、6、8周采血,检测BMP2、转化生长因子β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、类胰岛素生长因子(IGF)和血小板衍生因子(PDGF)含量。X射线片检查,比较骨痂出现的时间及骨痂量的差异、骨折线的变化、骨性愈合及髓腔再通的情况。于术后8周取兔胫骨标本,进行组织学检查。结果术后4、6、8周,A1组BMP2、TGF-β、IGF高于B1组(P<0.05)。术后8周,A、B组成熟骨小梁及骨髓形成,A组的髓腔再通优于B组。A1组成熟骨小梁、骨髓形成良好。结论 "骨愈合剂"能够有效促进糖尿病兔骨折BMP2和骨生长相关因子的表达,促进骨折愈合。     

转BMP-2基因MSCs细胞微囊制备的影响因素

以高压静电法制备转BMP-2基因骨髓间充质干细胞的海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微囊,考察了细胞浓度、海藻酸钠浓度、细胞悬液离心次数对圆囊率、粒径分布和成囊性的影响.结果表明,细胞浓度3×106个/ml,海藻酸钠浓度1.75%,细胞悬液离心洗涤2次的条件下,能制得球形好、粒径为200～300um的微囊.     

葛根对大鼠成骨细胞增殖分化影响的血清药理学实验

目的:观察葛根含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响.方法:将32只SD大鼠随机分为实验组与对照组,在同等条件下制备葛根处理大鼠含药血清和对照血清,观察不同采血时间及血清添加量对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)的影响.结果:葛根末次灌胃后1～2小时采血的含药血清对成骨细胞增殖和ALP的作用明显(P＜0.01),随着含药血清添加量的增加,对成骨细胞增殖和A"的作用明显增强(P＜0.01).结论:含葛根处理大鼠血清可促进成骨细胞增殖和分化.     

Carnosol induces the osteogenic differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells via activating BMP-signaling pathway

Carnosol is a phenolic diterpene phytochemical found in rosemary and sage with reported anti-microbial, anti-oxidant, anti-inflammatory, and anti-carcinogenic activities. This study aimed to investigate the effect of carnosol on the lineage commitment of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells (mBMSCs) into osteoblasts and adipocytes. Interestingly, carnosol stimulated the early commitment of mBMSCs into osteoblasts in dose-dependent manner as demonstrated by increased levels of alkaline phosphatase activity and Alizarin red staining for matrix mineralization. On the other hand, carnosol significantly suppressed adipogenesis of mBMSCs and downregulated both early and late markers of adipogenesis. Carnosol showed to induce osteogenesis in a mechanism mediated by activating BMP signaling pathway and subsequently upregulating the expression of BMPs downstream osteogenic target genes. In this context, treatment of mBMSCs with LDN-193189, BMPR1 selective inhibitor showed to abolish the stimulatory effect of carnosol on BMP2-induced osteogenesis. In conclusion, our data identified carnosol as a novel osteoanabolic phytochemical that can promote the differentiation of mBMSCs into osteoblasts versus adipocytes by activating BMP-signaling.     

Effect of Rat Serum Lipoproteins on mRNA Levels and Amiodarone Metabolism by Cultured Primary Rat Hepatocytes

Hyperlipidemia can significantly increase amiodarone (AM) in vivo liver uptake and decrease its velocity of microsomal metabolism. Here, hepatocytes isolated from normolipidemic (NL) and hyperlipidemic rats were incubated with AM in the presence or absence of diluted NL or hyperlipidemic serum. The serum was added either as preincubation before drug, or concurrently with drug; incubations without rat serum were used as controls. The hepatocyte levels of mRNA for several proteins and enzymes were also measured. Disappearance of AM was seen up to 72 h. There was little difference between hepatocytes from NL or hyperlipidemic animals in intrinsic clearance (CL_int) of AM. The effect of hyperlipidemic rat serum, either before or with AM, was profound, causing a significant reduction in the CL_int. Reductions were seen in mRNA for cytochrome P450 1A1, 3A2, and 2D1, some transporters, and low‐density lipoprotein receptors after exposure of hepatocytes to lipoprotein‐rich sera. In conclusion, exposure of isolated hepatocytes to hyperlipidemic serum caused decreases in AM CL_int and lower mRNA levels for some proteins involved in the uptake and metabolism of AM. When coincubated with serum, an additional effect of increased binding to lipoproteins seemed to further contribute to a reduced CL of AM.