义眼台植入对兔眼眶骨细胞的影响

目的 观察眼球摘除和义眼台植入对兔眼眶骨细胞凋亡的影响,初步探讨义眼台植入对眼眶畸形发育防治的作用机制.方法 实验研究.选用同龄、健康、体重相近新西兰幼兔21只,随机分为眼球摘除组、义眼台植入组及正常对照组.1个月龄时对眼球摘除组和义眼台植入组的兔分别行左侧眼球摘除或眼球摘除联合义眼台植入术,正常对照组左侧眼眶作为参照.2个月龄时处死全部兔子,采用光镜、透射电镜和TUNEL法检测其眶骨骨细胞凋亡,并用TUNEL法计量分析3组骨细胞的凋亡情况,采用LSD法对3组骨细胞凋亡率间进行比较.结果 在3组眶骨组织中均可检测到凋亡骨细胞,用TUNEL法观察可见凋亡骨细胞呈散在不规则性分布;TUNEL法计数结果显示眼球摘除组、义眼台植入组及正常对照组骨细胞凋亡率分别为20.56%±2.13%、14.29%±3.60%、12.57%±2.40%,眼球摘除组骨细胞凋亡率与义眼台植入组及正常对照组骨细胞凋亡率之间差异有统计学意义(P<0.01),义眼台植入组和正常对照组骨细胞凋亡率之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 眶骨细胞凋亡参与了义眼台植入防治眼球摘除后眼眶畸形发育的过程.(中华眼科杂志,2008,44:700-704)     

眶内植入物对眼眶畸形发育防治机制的研究

目的 探讨眶内植入物在眼眶畸形发育防治中的作用机制.方法 新西兰幼兔21只,随机分为眼球摘除组、眶内植入物组和正常对照组.1月龄时对眼球摘除组和眶内植入物组的兔分别行左侧眼球摘除、眼球摘除联合眶内植入物植入术,正常对照组左侧眼眶作为对照.2月龄时处死全部兔子,取左侧颧骨脱钙后制成石蜡切片.对比观察3组的眶骨组织学改变,并测量其骨吸收参数N.Oc/B.Pm.结果 眼球摘除组较其余两组的皮质骨表面边缘不规整,骨吸收现象明显,骨板排列不整齐,粘合线明显紊乱.眼球摘除组骨吸收参数N.Oc/B.Pm明显高于其余两组(P＜0 01),眶内植入物组和正常对照组N.Oc/B.Pm差异无统计学意义(P ＞0 05).结论 眼球摘除后眶骨骨吸收增强参与了眼眶畸形的发育过程,眶内植入物防治眼球摘除后眼眶畸形发育的作用至少部分是通过减弱骨吸收来实现的.     

义眼台植入对眶骨组织中转化生长因子－β1表达的影响

【摘要】背景义眼台植入是防治眼球摘除术后眼眶畸形发育的主要手段，但其作用机制尚不十分清楚。研究表明骨局部生长因子在骨组织的发生、发育、损伤修复等过程中具有重要作用，转化生长因子-β1（TGF-β1）的作用更值得关注。目的检测眼球摘除和义眼台植入后眶骨组织中骨局部TGF-β1．的表达情况，探讨眼球摘除后眼眶畸形发育防治的作用机制。方法选用同龄、健康、体质量相近的新西兰幼兔21只，按随机数字表法分为眼球摘除组、义眼台植入组和正常对照组。实验兔1月龄时对眼球摘除组和义眼台植入组分别行左眼球摘除或眼球摘除联合义跟台植入术，正常对照组左眼眶作为对照。术后1个月时处死全部兔，用酶免疫组织化学法和FITC免疫荧光标记法对眼球摘除组、义眼台植入组和正常对照组兔眶骨组织中TGF-β1蛋白表达情况进行检查，利用ELISA法测定兔眶骨组织中TGF—p，蛋白的表达水平。结果术后1个月义眼台植入组和正常对照组兔眶高和眶宽的数值均明显高于眼球摘除组，差异均有统计学意义（眶高：P=0．00、P=0．00；眶宽：P=0．00、P=0．00）。免疫组织化学检测发现，义眼台植入组和正常对照组兔眶骨组织中TGF-β1，的染色强度明显高于眼球摘除组，骨组织中着色细胞多，染色较深，而义眼台植入组和正常对照组兔眶骨组织中TGF-β1的染色强度相近。TGF-β1免疫荧光法染色结果表明，义眼台植入组和正常对照组兔眶骨组织中TGF--β1的荧光细胞数量多于眼球摘除组。ELISA检测结果显示，眼球摘除组兔骨组织中TGF-β1的质量分数较义眼台植入组和正常对照组低，差异均有统计学意义（P=0．00、P=0．00），义眼台植入组和正常对照组骨组织中TGF-β1，质量分数的差异无统计学意义（P=0．41）。结论TGF-β1参与了眶骨发育过程及义眼台植入防治眼球摘除后眼眶畸形发育的过程。     

兔眼球摘除后眼眶畸形发育机制的初步研究

目的：初步探讨兔眼球摘除后眼眶畸形发育的机制。方法：选取7只1月龄、体重相近健康的新西兰幼兔，行单侧眼球摘除，另一侧作为对照。手术1个月后将兔处死，对比研究双侧眼眶的大体形态学和眶骨组织学改变，并测量反映骨吸收情况的骨计量学指标N．Oc／B．Pm。结果：眼球摘除侧眼眶发育畸形，摘除侧骨组织吸收现象活跃。结论：眼球摘除后骨吸收异常参与了眶骨的畸形发育，摘除侧眶骨自身的塑造是一个异常的过程。     

角膜中期保存过程中细胞凋亡的初步研究

目的 搪塞角膜中期保存过期中细胞凋亡现象,为改进角膜保存方法提供理论依据。方法采用Ｍ－Ｋ液、Ｍ－Ｋ＋ＥＧＦ液和Ｏｐｔｉｓｏｌ３种保存２液保存兔和人角膜,用光镜、电镜及Ｔ ＵＮＥＬ标记技术检测细胞凋亡发生情况。中保存液保持３、５、７天的兔角膜上皮、项质及内皮细胞层均可见细胞凋亡发生。结论细胞凋 角膜中期保存２过程中细胞失丧失的另外一种可能机制;细胞凋亡的发生对角膜中期保存效果存在一定的影响;表皮生长     

实验性大鼠视网膜光损伤与视细胞凋亡的关系

目的 :研究视网膜光损伤与视细胞凋亡的相互关系 ,以探讨视网膜光损伤的发生、发展机制。方法 :所有SD大鼠在循环光环境中适应 7d ,在实验前先行暗适应 36h ,分别于光照 3、6、9、12、15和 18h时灌流固定 ,摘除眼球。光镜标本在常规脱水、透明、石蜡包埋切片后 ,行HE、TUNEL法染色 ,用光镜观察 ;电镜标本在树脂包埋、超薄切片、醋酸 柠收稿日期 :2 0 0 2 -0 7-15 ;修回日期 :2 0 0 2 -10 -2 0基金项目 :辽宁省教育厅资助项目 ( 99172 114 9)。作者简介 :刘学政 ( 1962 -) ,辽宁葫芦岛人 ,医学博士 ,解剖学教授 ,研究生导师。通信作者 :刘学政 (E -mail:xuezheng @hotmail.com)。檬酸铅双重染色后 ,用透射电镜观察 ;应用CIAS 10 0 0图像分析系统定量检测外核层面积和视细胞凋亡指数 ,所得数据做统计学分析。结果 :视网膜出现了光损伤和视细胞凋亡现象 ,随着光照时间的延长 ,视网膜光损伤逐渐加重 ,视细胞凋亡逐渐增多。在外核层 ,透射电镜观察见核染色质浓集 ,而无炎性反应。外核层面积和视细胞凋亡指数做相关性分析 ,显示有显著性意义。结论 :视细胞凋亡是视网膜光损伤的重要机制。光损伤启动了视细胞凋亡的发生 ,外核层细胞核的丢失是视细胞凋亡的结果。视网膜光损伤与视细胞凋亡有着密不可分的联系。     

视网膜母细胞瘤中Fas/Fas配体表达及 与凋亡的关系

目的观察视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)　Fas/Fas 配 体 (Fas ligand ,FasL)表达及与凋亡的相关性。方法应用免疫组织化学染色法观察32例RB标本中 Fas/FasL的表达及分布,并对32例用光镜、其中4例用电镜及12例用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱氧尿苷三磷酸末端标记 (t erminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotin dUTP nick end labeling, T UNEL)染色观察细胞凋亡,分析与Fas/FasL表达的关系。结果光镜下凋亡细胞主要位于RB退化区,电镜下可见染色质边集和凋亡小体等凋亡特征 ;TUNEL显示阳性标识主要位于RB退化区及死亡区。Fas及 FasL在所有RB中均呈阳性表达 。Fas和 FasL表达与凋亡指数 (apoptosis index, AI)呈正相关 (P<0．01 ,P<0．001)。结论凋亡在RB中普遍存在,可能是触发RB细胞死亡的 主要方式;Fas系统在RB的发生发展中起重要作用。Fas系统上调可能会诱导RB细胞凋亡。(中华眼底病杂志,2001,17:21-23)     

眼球摘除对眼眶发育的影响及其防治研究进展

在眼科手术中，平均眼球除率为2．8／10万。在成人眼球除后，常导致眼球除后综合征。在儿童除眼球后，不仅会导致眼球除综合征，而且导致眶骨发育迟缓，严重造成颜面畸形。为此，本就眼球除适应证、眼球除综合征发生机制和防治，以及眶内植入对眶骨发育影响等方面的系统研究加以综述。     

早期非肥胖性糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡

目的:观察糖尿病早期视网膜细胞凋亡情况.方法:NOD雌鼠随机分为糖尿病组(n=10)和正常对照组(n=10),每组在4 wk和12 wk处死小鼠,摘除眼球并制作组织切片,用TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡.电镜观察视网膜超微结构改变.结果:视网膜神经元病变和微血管病变在糖尿病早期都有发生,糖尿病组视网膜神经节细胞和内皮细胞凋亡数目明显较对照组增多(P＜0.01).结论:视网膜神经元凋亡可促进视网膜神经元病变的发生和发展.     

细胞色素c在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞凋亡中的作用

目的观察年龄相关性白内障晶状体上皮细胞细胞色素c表达情况，探讨其与晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法取手术中取下的年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜。采用免疫组织化学染色法（SP）检测晶状体上皮细胞细胞色素c表达情况，TUNEL法检测晶状体上皮细胞凋亡情况，并分析与细胞色素c表达的关系。透射电镜观察分析晶状体上皮细胞超微结构。结果正常人晶状体上皮细胞可见细胞色素c均匀胞浆低表达。年龄相关性白内障组在细胞色素c胞浆低表达细胞中，可见散在分布的胞浆高表达细胞。TUNEL阳性细胞仅存在于白内障组。细胞色素c表达与凋亡指数成正相关（P〈0．01）。电镜下可见染色质边集、凋亡小体和线粒体肿胀等特征。结论晶状体上皮细胞凋亡可能参与年龄相关性白内障的形成，线粒体细胞色素c凋亡途径可能在白内障的发生发展中起重要作用。     

紫杉醇诱导兔晶状体上皮细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的 探讨紫杉醇(Taxol)诱导兔晶状体上皮细胞(RLECs)凋亡和对细胞周期改变的作用以及对Fas和FasL基因表达的影响。方法 流式细胞仪分析检测Taxol诱导RLECs细胞周期的阻断；光镜和电子显微镜下观察细胞形态的变化；应用TUNEL法检测药物诱导的细胞凋亡；兔疫组化方法检测该药对Fas和FasL基因的表达。结果Taxol可将RLECs阻断于G2／M期并诱导其凋亡；可见凋亡小体；TUNEL染色显示散在的阳性细胞，且凋亡的细胞量随药物质量浓度的增加而增多；Taxol对RLECs的Fas及FasL基因的表达无明显影响。结论 Taxol不仅能阻断RLECs的分裂，还能诱导其发生细胞凋亡，但不是通过Fas／FasL途径介导的。     

白内障患者晶状体上皮细胞中Fas蛋白的表达

目的:了解不同类型白内障患者晶状体上皮细胞(lens epi-thelial cell,LECs)的凋亡情况及其与Fas蛋白(CD95)的关系。方法:取年龄相关性白内障、糖尿病性白内障及高度近视并发性白内障患者超声乳化手术中取下的前囊膜标本共73例。应用光镜、透射电镜及TUNEL标记法观察LECs的凋亡情况。同时应用免疫组化和流式细胞分别定性、定量检测Fas蛋白(CD95)在LECs中的表达。结果:光镜下3种白内障患者的LECs都呈透明样变性,细胞内有空泡。电镜下可见正常以及变性、坏死的LECs。部分LECs细胞内染色质凝集并边缘化,呈早期细胞凋亡改变。TUNEL检测发现3种白内障患者的LECs中均有TUNEL阳性细胞存在,LECs的凋亡率分别为(32.20±7.91)%、(31.00±9.43)%、(28.20±8.04)%,3种白内障间未见统计学差异。免疫组化结果表明在3种白内障患者的LECs中均有Fas蛋白(CD95)表达。流式细胞定量检测年龄相关性、糖尿病性及高度近视并发性白内障患者LECs中Fas蛋白(CD95)的表达量分别为(65.72±9.95)%、(63.46±13.30)%、(31.46±17.25)%,高度近视并发性白内障LECs中Fas蛋白(CD95)的表达与其他两种白内障间存在统计学差异(t检验,P<0.05)。结论:年龄相关性白内障、糖尿病性白内障及高度近视并发性白内障患者的LECs均出现凋亡,LECs的凋亡很可能是非先天性白内障发病的细胞病理学基础。Fas蛋白(CD95)介导的LECs的凋亡在年龄相关性白内障及糖尿病性白内障的形成中起重要的作用,而在高度近视并发性白内障LECs凋亡中可能存在其他通路。     

挫伤性视网膜病变感光细胞凋亡的实验观察

目的 观察挫伤性视网膜病变感光细胞凋亡情况。方法 以3J的能量自由落体的方式造成兔眼挫伤性视网膜病变模型，通过光、电镜及末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化dUTP(脱氧三磷酸尿苷)缺口末端标记(teminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)染色观察视网膜病变及感光细胞凋亡情况。结果 以3J的能量挫伤后的视网膜病变中存在着感光细胞凋亡现象。结论 细胞凋亡是挫伤性视网膜病变的一个重要机制。     

圆锥角膜中细胞凋亡及Fas-L蛋白的表达

目的 探讨凋亡与圆锥角膜发病的关系及凋亡相关蛋白Fas-L的表达.方法 对20例圆锥角膜及5例正常角膜用原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡,用免疫组织化学SP法检测Fas-L蛋白的表达;透射电镜观察凋亡细胞的形态学变化.结果 TUNEL染色示圆锥角膜组中上皮层、基质层及内皮层中细胞凋亡与正常角膜组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学示圆锥角膜组与正常角膜组基质层间Fas-L表达比较差异有统计学意义(P＜0.05);透射电镜可见圆锥角膜中存在凋亡特征的细胞.结论 圆锥角膜中存在凋亡,Fas-L蛋白的表达存在异常,Fas-FasL系统可能在圆锥角膜细胞凋亡中发挥了重要作用.     

Light-induced Apoptosis: Differential Timing in the Retina and Pigment Epithelium

Apoptosis is a genetically regulated form of cell death. Individual cells show condensed nuclear chromatin and cytoplasm, and biochemical analysis reveals fragmentation of the DNA. Ensuing cellular components, apoptotic bodies, are removed by macrophages or neighboring cells. Genes involved in the regulation of apoptosis as well as stimuli and signal transduction systems, are only beginning to be understood in the retina. Therefore, we developed a new in vivo model system for the investigation of events leading to apoptosis in the retina and the pigment epithelium. We induced apoptosis in retinal photoreceptors and the pigment epithelium of albino rats by exposure to 3000 lux of diffuse, cool white fluorescent light for short time periods of up to 120 minutes. Animals were killed at different time intervals during and after light exposure. The eyes were enucleated and the lower central retina was processed for light- and electron microscopy. DNA fragmentation was analysed in situ by TdT-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) or by gel electrophoresis of total retinal DNA. We observed that the timing of apoptosis in the photoreceptors and pigment epithelium was remarkably different, the pigment epithelium showing a distinct delay of several hours before the onset of apoptosis. In photoreceptors, apoptosis was induced within 90 minutes of light exposure, with the morphological appearance of apoptosis preceding the fragmentation of DNA. In the pigment epithelium, the morphological appearance of apoptosis and DNA fragmentation were coincident. Different regulative mechanisms may lead to apoptotic cell death in the retinal photoreceptors and pigment epithelium. This in vivo model system will allow measurement of dose-responses, a potential spectral dependence and the molecular background of apoptotic mechanisms in the retina.     

氩绿激光致兔视网膜感光细胞凋亡的实验研究

目的:观察氩绿激光对兔视网膜损伤及修复的组织学改变及对兔视网膜感光细胞凋亡的影响。方法:将8只有色兔(16眼)中每只眼的上、下方视网膜随机分配为激光光凝区及空白对照区,光凝后24h、4wk通过光镜和电镜及TUNEL技术观察视网膜改变及感光细胞凋亡。结果:(1)光镜观察:光凝处视网膜损伤不明显但脉络膜小静脉充血,4wk后消退。(2)电镜观察:光凝处外节膜盘排列稀疏,神经节细胞轻微肿胀,外核层细胞异染色质增多,4wk后色素增殖,胶原增生。(3)TUNEL染色观察:光凝后24h,光凝处外颗粒层可见较多阳性细胞,内颗粒层偶见,4wk后接近正常。(4)感光细胞凋亡率:光凝后24h,感光细胞凋亡率较正常对照组增加,差异有统计学意义(P<0.01)。光凝后4wk较24h凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:轻度氩绿激光光凝视网膜损伤轻微。     

眼眶横纹肌肉瘤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax,p53的蛋白表达

目的 分析眼眶横纹肌肉瘤中的细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2，Bax和p53的表达状态。方法 对31例标本，利用TUNEL技术显示凋亡细胞，用免疫组织化学方法检测Bcl-2，Bax及p53蛋白表达。结果 凋亡细胞检测率90．3％，肿瘤增生活跃区多见。Bcl－2阳性率29％，Bax阳性率54．5％，p53阳性率64．5％。Bcl-2与Bax表达呈正相关（P＜0．01）。Bcl-2阳性细胞与凋亡细胞分布区域明显不同。Bax与p53表达与细胞凋亡无相关关系（P＞0．05）。结论 眼眶横纹瘤中存在细胞凋亡与肿瘤增生有关。Bcl－2抑制Bax的功能进而抑制肿瘤细胞凋亡。p53在该肿瘤中可能不是调控细胞凋亡的主要因素。     

c—myc反义寡核苷酸抑制半乳糖性白内障晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的研究c-myc反义寡核苷酸（ASODN）对半乳糖性白内障晶状体上皮细胞（LECs）凋亡的影响。方法将Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、半乳糖组和半乳糖＋c-myc ASODN组,每组36只。半乳糖组及半乳糖＋c—mycASODN组每日球后注射O．2mL20％半乳糖,制作大鼠半乳糖性白内障模型,半乳糖＋c—mycASODN组球后注射半乳糖4h后加注Lipo—mycASODN复合液0．2mL,隔日1次。分别于给药后7、14、24d处死动物,取出晶状体,检测LECs的凋亡情况,采用TUNEL法检测c—mycASODN对半乳糖诱导LECs凋亡的影响,透射电镜下观察LECs超微结构的改变。结果各组在7、14、24d的LECs凋亡率比较,差异均有统计学意义（F7 days=3418．495,P〈0．01;F14 days=1137．555,P〈0．01;F14 days=2198．871,P〈0．01）;24d时半乳糖组LECs的凋亡率为56．57±3．20,生理盐水组为0．37±0．11,差异有统计学意义（P〈0．01）;半乳糖＋c．mycASODN组细胞凋亡率为29．35±1．63,较半乳糖组明显降低（P〈0．05）。透射电镜下观察发现,半乳糖组可见LECs呈凋亡细胞的早期改变;随着高糖诱导时间的延长,凋亡细胞逐渐增多;生理盐水组几乎未见到凋亡细胞;半乳糖＋c—mycASODN组凋亡细胞数量较同期半乳糖组少。结论在白内障形成过程中半乳糖能诱导LECs凋亡,c．mycASODN能够抑制半乳糖诱导的LECs凋亡。