5-氨基乙酰丙酸介导的光动力对人脑胶质瘤细胞的治疗作用

目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力学对人脑胶质瘤U251细胞的治疗作用方法使用荧光显微镜及共聚焦显微镜检测5-ALA所产生的光敏剂原卟啉(PpIX)在U251细胞中的定位。将5-ALA加入U251细胞中,随之以635nm的激光辐射,使用MTT法测定细胞生存率结果5-ALA与U251细胞共培养可以产生光敏剂原卟啉。原卟啉弥散地分布在U251细胞的胞浆中,胞核区未见分布。5-ALA介导的光动力对人脑胶质瘤U251细胞的杀伤作用随着5-ALA与U251细胞孵育时间的延长及5-ALA浓度的增加而增加,但在孵育6h、5-ALA浓度为2mmol/L时达饱和。而单用5-ALA或单纯激光辐射,对U251细胞无明显的杀伤作用。结论5-ALA介导的光动力治疗是很有前途的人脑胶质瘤治疗方法,5-ALA与U251细胞孵育的最佳时间为6h,最佳5-ALA药物浓度为2mmol/L     

5-ALA的光动力学治疗在脑胶质瘤中的应用进展

人脑胶质瘤是一种侵袭性的恶性肿瘤,其边界不清,手术难以全切,术后的放、化疗效果差,不尽人意。5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulimic acid,5-ALA）是人体合成卟啉和血红素的前体。外源性的5-ALA诱导产生的血红素合成前体原卟啉IX,能够选择性地聚集于人脑胶质瘤细胞内,在一定波长的光辐射下,发生荧光反应和光促氧化反应。利用这种荧光反应可以进行术中定位脑胶质瘤边界,辅助切除肿瘤残留组织并保护正常脑组织;并且进一步通过光促氧化反应产生活性氧物质杀伤肿瘤组织。近来大量临床研究表明,光动力学定位（Photodynamic diagnosis,PDD）及治疗（Photodynamic therapy,PDT）能够明显减少肿瘤复发的机会并延长患者生存时间。因此我们将就5-ALA在脑胶质瘤中的应用作一综述。     

自噬在ALA-PDT诱导C6胶质瘤细胞死亡中的作用机制

目的 探讨自噬在光敏剂5-氨基乙酰丙酸(aminolaevulinic acid,ALA)介导的光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)C6胶质瘤细胞死亡中作用机制.方法 ALA-PDT处理后不同时间,用自噬特异染料MDC和免疫荧光法观察自噬水平变化,Western blotting检测自噬相关蛋白cathepsin B的表达水平.结果 MDC染色和免疫荧光观察可见ALA-PDT后C6胶质瘤细胞内有大量含点状荧光颗粒的自噬泡和自噬体标志物LC3绿色荧光蛋白,Western-blot示自噬相关蛋白cathepsin B表达水平明显升高,其白噬水平随AIA-PDT后时间而逐渐增强.结论 ALA-PDT可诱导C6胶质瘤细胞发生自噬,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与溶酶体酶cathepsin B大量释放有关.     

白藜芦醇增强5-氨基酮戊酸在人脑胶质瘤细胞中的光动力治疗作用

目的研究白藜芦醇不但具有直接治疗脑胶质瘤的作用,而且作为一种ABCG2抑制剂,可以通过抑制BCRP/ABCG2,影响原卟啉Ⅸ(PpⅨ)排出细胞。探讨白藜芦醇增强对于经5-氨基酮戊酸(5-ALA)处理过的人脑胶质瘤细胞的光治疗(PDT)效果。方法 4种恶性脑胶质瘤细胞系(U87MG,U251,A172和T98G)在和不同浓度(0. 01～1. 0μmol/L)的白藜芦醇作用之前,与5-ALA(1 mmol/L)相互作用。测定白藜芦醇对细胞内外的PpⅨ水平,BCRP/ABCG2 mRNA和ABCG2蛋白的表达,以及体外PDT的效果。结果0. 1μmol/L或更高浓度的白藜芦醇,可以提高恶性脑胶质瘤细胞内的PpⅨ水平,在所有4种细胞系均呈药物剂量依赖性。白藜芦醇不但可以降低BCRP/ABCG2 mRNA的表达水平,而且可以减少细胞膜上BCRP/ABCG2蛋白的表达;并且有效地提高恶性脑胶质瘤细胞PDT的效果。结论白藜芦醇不但可以抑制BCRP/ABCG2介导的恶性脑胶质瘤细胞内PpⅨ的外流,并且可以增加细胞内的PpⅨ的含量,从而达到提高PDT的效果。     

5-氨基乙酰丙酸荧光导航技术在恶性胶质瘤手术治疗中的应用

由于胶质瘤浸润性生长,术中很难识别瘤腔边缘残留的肿瘤组织,故全切困难,预后不佳。探索新的、有效和安全的治疗方法一直是人们关注的焦点。5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)是体内血红素生物合成途径的代谢产物。近来发现5-ALA可以被恶性胶质瘤细胞摄取并转化成发强荧光的卟啉,这种荧光可以用来辅助切除残留肿瘤组织,具有较大的实用价值。由于5-ALA荧光引导具有较好的有效性和安全性,在国外已被用于成人恶性胶质瘤(WHOⅢ和Ⅳ级)的手术治疗。为了达到最佳效果,需要对5-ALA荧光引导技术的原理、实施方法、设备要求、注意事项、可能遇到的困难和风险以及相应防范措施有一全面的了解。     

5-氨基乙酰丙酸荧光引导显微手术切除人脑胶质瘤

目的探讨临床应用荧光物质引导的显微手术切除人脑胶质瘤的要点,评估该技术的安全性及疗效。方法2006年4月至2006年10月术前经CT或MRI证实胶质瘤的11例病人接受了荧光引导胶质瘤手术。男5例,女6例。年龄35～66岁,平均48．5岁。术前应用5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）,术中根据所提供的荧光影像判定肿瘤边界并切除肿瘤。根据不同荧光强度取材进行HE染色以检测手术切除情况。术后行MRI检查以确定肿瘤的切除情况。结果胶质瘤在荧光光源的照射下被激发出红色荧光,而正常脑组织不发光。荧光强度高的肿瘤组织HE染色显示含有大量的肿瘤细胞,并可见血管内皮细胞增生,荧光强度较弱或者没有荧光的区域仅有少量的肿瘤细胞和血管内皮细胞增生。病人术后的MRI检查证实肿瘤切除比较完全。结论该方法能够有效的切除胶质瘤,并为手术者提供客观的肿瘤边界,提高了手术切除率。对该方法的确切评估尚需对手术病人进行长期随访。     

不同条件下光动力治疗对C6胶质瘤细胞的作用

目的 分析不同条件下应用血卟啉衍生物(HpD)的光动力学疗法(PDT)对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法 MIT法检测PDT后C6细胞的生存率:(1)不同HpD浓度组(0、2、5、10、20、30及40 mg/L)C6细胞PDT(628 nm、20 mW/cm2、照光5 min)后的生存率;(2)C6细胞分别与不同浓度HpD(0、5、10、20、30及40 mg/L)孵育不同时间(0.5、1、3、6、12及24 h)行PDT(628nm,20 mW/cm2)后的生存率;(3)不同照光强度下(10、20及30 mW/cm2)PDT后C6细胞的生存率.结果 不同条件下PDT治疗对C6细胞的作用不同:(1)当HpD浓度低(2mg/L)、HpD与细胞孵育时间短(<3 h)时不能对细胞产生抑制或杀伤效应;(2)PDT后C6细胞的生存率随着HpD浓度的升高而降低,随着细胞与HpD孵育时间的延长而降低(>12 h后各组间差异无统计学意义),随着照光强度的增强而下降(20与30 mW/cm2之间差异无统计学意义).结论 HpD介导的PDT对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用与HpD浓度、HpD与细胞孵育时间及照光强度等有关,在不同条件下可表现为促进肿瘤细胞生长或杀伤肿瘤细胞的作用.     

光动力疗法辅助手术治疗功能区脑胶质瘤

目的 介绍光动力疗法辅助手术治疗功能区脑胶质瘤的方法和疗效。方法 1999年7月至2000年6月收治的脑胶质瘤病人中,有10例给予光动力辅助手术治疗。术中暴露肿瘤的同时静脉推注光敏剂,显微镜下切除肿瘤后,应用LH400型激光动力治疗仪对肿瘤残腔进行光动力照射,以杀伤残存肿瘤细胞。术后避光3d,随访其术后效果。结果 术后近期临床效果满意,无皮肤光毒反应;随访至今全部病例临床症状改善,未见肿瘤复发。结论 激光光动力疗法是一种有效的脑胶质瘤辅助治疗方法,它与手术结合综合治疗功能区脑胶质瘤,有利于减轻脑损伤,减少功能缺失,提高病人生存质量和疗效。     

光动力疗法治疗脑胶质瘤的护理

目的 总结脑胶质瘤光动力治疗围手术期护理经验。方法 回顾性分析14例行光动力治疗的胶质瘤的临床资料。结果 14例均手术顺利,多数肿瘤切除比较完整,与肿瘤相关的临床症状得以减轻及控制,3例出现皮肤过敏,5例术后有血压升高,7例术后有呕吐现象,经过医护的精心护理,对症治疗,症状很快得以控制。结论 加强对胶质瘤光动力手术了解,掌握光动力治疗胶质瘤的护理措施,了解围手术期护理的问题及注意事项,可提高该手术的成功率、减少并发症的发生率。     

胶质瘤光动力疫苗的体外细胞毒性实验研究

目的制备胶质瘤光动力疫苗并检测体外抗肿瘤效应。方法采用4种不同方法制备胶质瘤疫苗。冻融疫苗:冻融法制备人胶质瘤细胞U251抗原,呈递给树突状细胞(DC)制备疫苗。热休克疫苗:热休克法处理人胶质瘤细胞U251并提取抗原,呈递给DC制备疫苗。光动力全细胞抗原疫苗:光动力法提取人胶质瘤细胞U251全细胞抗原并呈递给DC制备疫苗。光动力洗脱抗原疫苗:光动力法处理人胶质瘤细胞U251后,再用弱酸洗脱法提取活细胞表面抗原,呈递给DC制备疫苗。将上述4种不同方法制备的疫苗在体外与自体淋巴细胞以及靶细胞U251反应,然后用MTT法检测靶细胞凋亡率及坏死率,比较4种疫苗的体外抗肿瘤细胞效应。结果冻融疫苗、热休克疫苗、光动力全细胞抗原疫苗和光动力洗脱抗原疫苗的靶细胞死亡率分别是:(10.02±0.32)%、(18.34±0.46)%、(35.56±1.75)%和(54.45±2.14)%,4组疫苗抗肿瘤细胞效应是光动力洗脱抗原疫苗光动力全细胞抗原疫苗热休克疫苗冻融疫苗。结论胶质瘤光动力洗脱抗原疫苗是一种具有良好体外抗肿瘤效应的新型疫苗。     

盐酸氨基酮戊酸介导的光动力疗法增高U251细胞蛋白酶体的表达

目的探讨盐酸氨基酮戊酸(5-ALA)做为光敏剂的光动力疗法(PDT)对人胶质瘤细胞株U251细胞的杀伤效应及其对U251细胞蛋白酶体亚基低分子量多肽(LMP)2、7表达的影响。方法培养U251细胞,利用细胞计数药盒确定的5-ALA-PDT对U251细胞半抑制剂量为试验条件。分别收集5-ALA-PDT处理后3、6、9、12、15、18、21和24 h及对照组U251细胞LMP2和LMP7,RNA与蛋白质,分别行实时PCR、Western Blot分析。结果强度为20 mw/cm2激光照1、2、3和4 min后U251细胞抑制率分别为11.18%、19.6%、48.62%、66.21%。以强度为20 mw/cm2照射3 min为条件,照射后3、6、9、12、15、18、21和24 h,U251细胞蛋白酶体亚基LMP2、LMP7蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01)。结论以5-ALA为光敏剂的PDT能有效抑制体外培养U251细胞生长,并促进蛋白酶体的表达。     

光动力学治疗后C6胶质瘤血管内皮生长因子的表达

目的 探讨光动力学治疗（PDT）后C6胶质瘤血管内皮生长因子（VEGF）的表达。方法 在不同剂量（5mg/kg，10mg／kg，20mg/kg，30mg／kg）光敏剂——血卟啉衍生物（HPD）条件下，激光照射裸鼠皮下C6胶质瘤。在治疗后不同时间检测瘤组织中VEGF的表达。结果 在5mg/kg剂量组VEGF的表达在PDT24h后达高峰，与对照组及治疗后3d、7d和10d相应值比，差异显著（P〈0．01）。其它剂量组VEGF表达亦在治疗后24h达高峰，但与治疗后其它时间比，相差无显著性（P〉0．05）。结论 PDT治疗后24hVEGF表达达高峰，针对VEGF的抗血管治疗应在24h内进行。     

ALA-PDT诱导C6胶质瘤细胞自噬和胞内Ca^2＋浓度变化的研究

目的探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗（ALA—PDT）诱导大鼠C6胶质瘤细胞发生的自噬与细胞内游离钙的关系，及自噬特异抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对自噬和胞内游离钙浓度的影响。方法C6细胞经ALA—PDT后不同时间用单丹磺酰戊二胺（MDC）染色和电镜观察其胞内自噬现象，流式细胞仪检测细胞的凋亡率，并测定胞内游离钙离子浓度的变化。结果ALA—PDT诱导C6胶质瘤细胞发生了自噬被观察到，且ALA—PDT后C6胶质瘤细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0．05）。与此同时胞内钙离子浓度较对照组明显升高，以ALA—PDT后20min和6h最为明显（P〈0．05）；3-MA可显著抑制ALA—PDT所致的胞内Ca2^浓度升高并能降低凋亡细胞比例（P〈0．05）。结论在体外条件下ALA—PDT可诱导C6胶质瘤细胞发生自噬＋，其发生可能与ALA-PDT导致细胞内游离钙升高有关；3-MA可能通过抑制胞内游离钙的升高而抑制ALA-PDT诱导的细胞自噬。     

局部热化疗诱导鼠C6胶质瘤细胞凋亡的研究

目的研究局部热化疗对大鼠胶质瘤细胞凋亡的作用,探讨其作为胶质瘤辅助治疗的可行性。方法将传代培养的C6细胞接种于大鼠背部皮下熏肿瘤生长至1.5～2cm直径时,分组进行局部热疗、化疗和热化疗。继续观察皮下肿瘤生长情况,测量瘤体体积和重量;用免疫组化s-p法检测bax、bcl-2蛋白表达;用HE染色法、电镜、TUNEL法观察细胞凋亡;电镜观察肿瘤血管的变化。结果肿瘤接种32d后,热疗、化疗及热化疗组肿瘤的重量分别为(1.95±0.34)g,(1.86±0.40)g,(1.09±0.21)g,明显较对照组(2.95±0.36)g轻(P<0.001);各治疗组肿瘤体积也明显小于对照组;各治疗组bax蛋白表达亦明显强于对照组(P<0.001),且热化疗组也强于单纯热疗和化疗组(P<0.001);bcl-2蛋白表达改变不明显(P>0.05);热疗、化疗及热化疗组细胞凋亡指数分别为18.96±2.54、20.05±3.64、36.62±8.96,明显大于对照组的4.68±1.68(P<0.001)。各治疗组肿瘤微血管外径变小,血管壁变厚,血管减少,血管内皮细胞紧密连接增多,细胞连接间隙减小,有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论①热疗、化疗能抑制肿瘤增殖,且阿霉素与热疗联合使用有协同作用。②热疗、化疗、热化疗能促进bax蛋白表达,使bcl-2/bax比值减小,诱导细胞凋亡。③热疗可直接损伤细胞和周围血管,     

应用国产光敏剂光动力学辅助治疗恶性脑肿瘤5例报告

目的分析应用国产血卟啉衍生物（HPD）的光动力辅助治疗（PDT）恶性脑肿瘤的疗效及安全性。方法4例恶性胶质瘤和1例转移性鳞癌病人于显微手术切除术后应用国产HPD进行PDT治疗,HPD剂量为5.0mg/kg,光波长为628nm,总能量为240J/cm^2。通过颅内压监测、并发症观察及影像学随诊观察治疗的效果和安全性。结果5例病人治疗后3d内颅内压有轻微升高,用脱水药物可得到控制,PDT对瘤床1.0cm深的肿瘤有治疗作用,可使肿瘤复发时间延迟2~3个月,未出现过敏反应、肝肾功能损害等并发症。结论应用国产HPD单次PDT治疗恶性脑肿瘤有一定的治疗作用,脑水肿及颅内压可以控制,安全性好。     

Experience with 5-Aminolevulinic Acid in Fluorescence-Guided Resection of a Deep Sylvian Meningioma

The 5-aminolevulinic acid (5-ALA)-induced tumor fluorescence is a useful intraoperative marker for the diagnosis and the detection of various malignancies, but its use in meningioma is only reported infrequently. In meningioma, a complete resection of the tumor mass is crucial for the prevention of recurrence and postoperative morbidities. Deep sylvian meningioma is a rare type of meningioma where complete tumor removal is complicated by its deep anatomical location and close involvement with the middle cerebral artery. From our experience, 5-ALA-mediated fluorescence facilitated a safe excision whilst preserving critical neurovascular structures. To our best knowledge, this is first report from use of 5-ALA in a deep sylvian meningioma.     

VEGF165反义RNA抑制C6胶质瘤大鼠体内生长的实验研究

目的针对VEGF及其受体的抗血管生成治疗，已成为恶性胶质瘤治疗研究的新方向，为临床应用VEGF165反义RNA治疗胶质瘤提供实验室证据。方法本研究在建立大鼠C6胶质瘤模型基础上，利用脂质体法将pcDNA3-AVEGF165质粒导入C6胶质瘤细胞，以G418筛选阳性克隆。将阳性克隆及对照C6细胞定向移植人大鼠右脑尾状核，比较大鼠生存时间、肿瘤生长速率的变化，评判VEGF165反义RNA对脑胶质瘤生长的抑制作用。结果①成功将pcDNA3-AVEGF165质粒导入C6胶质瘤细胞，并筛选出阳性克隆株；②对照组和实验组C6细胞周期特征无明显变化；③VEGF165反义RNA对荷瘤大鼠有延长生存时间，延缓肿瘤生长速度的作用。结论VEGF165反义RNA对大鼠C6胶质瘤生长有明显抑制作用。     

大鼠树突状细胞疫苗治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究树突状细胞疫苗对C6荷瘤大鼠的免疫治疗效应,并比较免疫治疗策略的异同。方法将成年健康SD大鼠40只平均分为4组,分别经RN A致敏和C6冻融抗原致敏的DC免疫以及对照组经未致敏D C和R PM I1640免疫,采用LD H试剂盒检测CTL的体外杀伤活性。建立大鼠C6脑胶质瘤颅内肿瘤模型,观察其生存期,并进行病理学检查。结果肿瘤RN A致敏的D C疫苗活性最强,与C6冻融抗原致敏的DC疫苗相比,CTL杀伤活性差异不显著(P>0.05),但与对照组相比,差异非常显著(P<0.01)。治疗组荷瘤大鼠生存时间与对照组相比,差异非常显著(P<0.01);两治疗组之间差异不显著(P>0.05)。治疗组肿瘤生长明显抑制。结论C6冻融抗原和肿瘤细胞R NA致敏的树突状细胞疫苗均是有效的免疫治疗方法。