PEP-1介导铜锌超氧化物歧化酶对帕金森病小鼠氧化应激损伤的保护作用

目的 观察PEP-1-铜、锌超氧化物歧化酶(PEP-1-SOD1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病小鼠行为学和氧化应激损伤的影响,探讨其可能的神经保护机制.方法 36只C57/BL小鼠随机分为正常组、模型组和PEP-1-SOD1组.模型组给MPTP腹腔注射,连续5 d;PEP-1-SOD1组连续腹腔注射MPTP 5 d前给予PEP-1-SOD1腹腔注射3 d.通过爬杆实验观察小鼠行为学变化.取小鼠纹状体通过黄嘌呤氧化酶法检测铜/锌超氧化物歧化酶(SOD1)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,通过TBA法检测MDA含量.结果 模型组小鼠爬杆能力明显下降,PEP-1-SOD1组处理的小鼠行为学异常明显改善(P＜0.01).模型组小鼠纹状体SOD1和GSH-Px活性明显降低,MDA含量显著升高(P＜0.01).同模型组比较,PEP-1-SOD1组小鼠纹状体SOD1和GSH-Px活性显著增高,MDA含量明显减少(P＜0.01).结论 PEP-1-SOD1具有神经保护作用,其机制可能与减轻氧化应激损伤、增强抗自由基损伤能力有关.     

依达拉奉对脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

目的 探讨依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护机制.方法 将45只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉干预组各15只,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血2h再灌注即刻及12h干预组给予依达拉奉3mr/kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射.于24h后断头取脑,免疫组化法测细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),TUNEL法检测神经细胞凋亡,化学比色法测MDA、SOD,TTC染色测梗死体积.结果 假手术组无梗死现象,免疫反应阳性细胞及凋亡细胞亦少见.依达拉奉十预组与生理盐水对照组相比,Cyt C阳性细胞数、Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞数均明显减少,MDA含量减少,SOD活性有所恢复,差异均有统计学意义.生理盐水对照组可见明显大脑中动脉供血区梗死灶,依达拉奉干预组亦可见到梗死灶,与对照组比梗死体积占全脑体积的百分比明显缩小(t=6.576,P＜0.01).结论 依达拉奉有自由基清除作用,减少了Cyt C的释放,抑制了细胞凋亡,并缩小了梗死体积;依达拉奉可能通过线粒体途径抑制细胞凋亡.对脑缺血再灌注损伤有保护作用.     

血管紧张素-(1-7)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 对Sprague-Dawley(SD)大鼠制备大脑中动脉梗死(MCAO)模型和假手术模型,并于再灌注24 h和48 h以微型渗透泵从侧脑室给予Ang-(1-7)(100 pmol,0.5 μL/h)或人工脑脊液(aCSF)(0.5 μL/h),由此分组为假手术组(假手术+aCSF)、Ang-(1-7)治疗组[MCAO+Ang-(1-7)]和aCSF治疗组(MCAO+aCSF).检测实验大鼠神经功能评分、再灌注48 h后脑水肿以及再灌注24 h后脑梗死体积,并以试剂盒测定再灌注24 h和48 h后缺血脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,以原位末端标记法(TUNEL)检测再灌注48 h后脑梗死灶周围组织神经细胞凋亡数.结果 Ang-(1-7)治疗MCAO模型大鼠,能显著改善神经功能评分(P<0.05)、缩小脑梗死体积(P<0.05)、降低组织MDA含量(P<0.05)、提高组织SOD活性(P<0.01),并明显减少脑梗死灶周围组织神经细胞凋亡数(P<0.01),但对脑组织含水量无明显影响作用.结论 Ang-(1-7)可能通过抗氧化应急反应、减轻神经细胞凋亡程度等实现治疗缺血再灌注损伤、神经保护作用.     

乌司他丁对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及对Nrf2/HO-1通路影响的研究

目的观察乌司他丁对小鼠脑缺血-再灌注后脑损伤的保护作用及对Nrf2/HO-1通路的影响。方法健康成年雄性CD1小鼠120只,随机分成4组(n=30):假手术组、脑缺血-再灌注组、乌司他丁小剂量组和乌司他丁大剂量组,采用改良线栓法制备大脑中动脉缺血-再灌注模型。缺血60min,再灌注24h后,采用Western blot和RT-q PCR来观察脑缺血后梗死侧皮质Nrf2和HO-1蛋白及基因表达变化,比较各组神经功能,脑梗死体积,脑组织含水量,梗死侧皮质丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果乌司他丁能够明显上调缺血脑皮质组织Nrf2、HO-1的表达,增加SOD活性,减少MDA的含量,改善神经功能缺失,减轻脑水肿,减小梗死体积。结论 Nrf2/HO-1通路参与了脑梗死后乌司他丁对缺血脑组织的保护作用。     

利拉鲁肽对脑梗死小鼠保护作用的研究

目的探讨利拉鲁肽对实验性脑梗死小鼠的保护作用及分子机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为假手术组、对照组和利拉鲁肽组。烧灼法建立永久、局灶性右侧皮质梗死模型(dMCAO),假手术组仅分离血管。利拉鲁肽组于dMCAO术后连续3d分别给予腹腔注射利拉鲁肽(200μg·kg-1·d-1),对照组腹腔注射等体积生理盐水。TTC染色方法计算脑梗死体积,Rota-rod方法评价肢体功能。术后72h时采用Western blot测定三个实验组p-AMPK/AMPK和NF-κB蛋白水平。结果利拉鲁肽明显延长dMCAO小鼠的Rota-rod时间(52.22±4.588 s),并缩小梗死体积(0.0791±0.0025),上调p-AMPK蛋白水平和p-AMPK/AMPK比值,抑制NF-κB表达。结论利拉鲁肽减轻dMCAO小鼠炎症反应和缺血性脑损伤,激活AMPK、抑制NF-κB是利拉鲁肽保护缺血性脑损伤的分子机制。     

微压香氧预处理对MCAO大鼠Apaf-1表达的影响

目的探讨微压香氧(Micro-Hyperbaric Oxygen Aromatherapy,MHBO-AT)预处理对MCAO大鼠脑梨形皮质Apaf-1表达的影响。方法将雄性成年SD大鼠85只随机分为假手术组15只、模型组35只、微压香氧预处理组35只。除假手术组外其余各组根据再灌注后时间点不同又分为6 h、12 h、24 h 3个亚组,6 h、12 h每组10只,24 h组15只。观察24 h脑组织TTC染色,各时间点免疫组织化学法和Western blot检测大鼠脑梨形皮质凋亡酶激活因子(Apaf-1)的表达。结果 24 h TTC染色显示与模型组比较,微压香氧预处理组梗死体积明显缩小,差异有显著性(P 0. 05)。免疫组织化学法和Western blot显示与模型组相比,微压香氧预处理组各时点Apaf-1蛋白表达均降低(P 0. 05)。结论 MHBO-AT预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤产生神经保护作用,通过抑制脑梨形皮质中Apaf-1蛋白的表达可能是其作用机制。     

丹参酮ⅡA对局灶性脑缺血大鼠急性期脑保护作用的相关研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TashinoneⅡA,TSA)对局灶性脑缺血急性期大鼠顶叶皮质磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(phosphorylated cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,p-CREB)和CREB1活性调节转导子(transducers of regulated CREB1,TORC1)的蛋白表达和脑梗死体积的影响。方法采用成年健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、对照组、小剂量TSA组和大剂量TSA组,每组各12只。用线栓法制作右侧大脑中动脉闭塞模型,采用Longa评分判断动物模型成功与否。小剂量TSA组和大剂量TSA组在造模后立刻腹腔注射TSA溶液,剂量分别为:10 mg/kg及20 mg/kg,假手术组及对照组分别腹腔注射等量的生理盐水。造模成功后24 h将大鼠处死,采用2%2,3,5-三苯基四唑氮红染色计算梗死体积,应用Western blotting法检测各组手术侧顶叶皮质梗死灶神经细胞核TORC1和细胞核p-CREB以及细胞TORC1的蛋白表达。结果与对照组相比,大剂量TSA组大鼠脑组织梗死体积明显降低(P=0.004),细胞核TORC1表达显著增加(P0.001);与对照组相比,小剂量TSA组大鼠脑组织梗死体积减小,无显著差异(P=0.148),细胞核TORC1蛋白表达升高,也无显著差异(P=0.083),细胞核p-CREB和细胞TORC1的蛋白表达水平无论在大剂量组(P均0.001),还是小剂量组(P分别为0.002和0.001)均显著升高。结论 TSA可以上调脑梗死大鼠病灶侧顶叶皮质神经细胞TORC1-CREB信号通路的表达。     

肾上腺髓质素对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、梗死体积及Egr-1的影响(英文)

目的探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、梗死体积及早期生长反应基因Egr-1 mRNA表达的影响,进一步研究ADM在局灶性缺血再灌注脑损伤中的作用。方法采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,阻断血流2 小时后进行再灌注。TTC染色法测定梗死体积,TUNEL法检测神经元凋亡,原位杂交法检测Egr-1 mRNA阳性细胞表达。结果大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑梗死体积为269 ± 20 mm3,股静脉、颈动脉、侧脑室注射ADM 后,梗死体积分别缩小为239 ± 17mm3(减少11.2%),214 ± 14 mm3 (减少20.4%),209 ± 13 mm3 (减少22.3%)。颈动脉注射ADM和侧脑室注射ADM在减少脑梗死体积方面明显优于股静脉注射ADM(P < 0.05)。缺血再灌注组大鼠缺血侧大脑皮质、海马CA1区TUNEL染色阳性细胞明显多于假手术组(P < 0.01)。给予ADM后缺血侧大脑皮质、海马CA1区TUNEL染色阳性细胞显著少于缺血再灌注组,以颈动脉给予ADM组和侧脑室给予ADM组更明显(P < 0.01)。假手术组大鼠大脑皮质有少量Egr-1mRNA阳性细胞表达,缺血再灌注后缺血侧大脑皮质、海马Egr-1mRNA阳性细胞表达多于假手术组(P < 0.01),应用ADM后三组大鼠大脑皮质、海马Egr-1 mRNA阳性细胞的表达明显高于缺血再灌注组(P < 0.01),但以颈动脉给予ADM组和侧脑室给予ADM组Egr-1 mRNA阳性细胞表达增高最明显(P < 0.01)。结论股静脉、侧脑室和颈动脉给予外源性ADM能减少神经元凋亡,减少梗死体积,激活Egr-1 mRNA的表达。     

敬钊缨毛蛛毒素对小鼠脑缺血再灌注损伤神经保护作用

目的 探讨敬钊缨毛蛛毒素对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用. 方法 20只小鼠按随机数字表法分为4组:正常组、假手术组、模型组、蜘蛛毒素组,每组各5只.应用大脑中动脉栓塞法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型.TTC染色检测脑梗死体积,比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,RT-PCR和免疫组化染色分析环氧化酶-2(COX-2) mRNA和蛋白的表达变化. 结果 与模型组相比,蜘蛛毒素组脑梗死体积明显减小,血清SOD活性明显增加,MDA表达水平明显降低,COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 敬钊缨毛蛛毒素对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能是提高脑缺血后细胞抗氧化能力和下调COX-2表达量.     

低氧预适应对小鼠急性脑缺血性损伤保护作用的研究

目的 探讨低氧预适应对小鼠急性脑梗死致脑缺血性损伤的保护作用.方法 将Blb/c近交系小鼠按照随机数字表法分为正常对照组(N组),不做任何处理;假手术组(C组),仅行冷光源照射,不注射玫瑰红;急性脑梗死组(CI组),光化学法诱导制作小鼠脑皮层梗死模型;低氧预适应+急性脑梗死组(HP+CI组),低氧预适应后光化学法诱导制作小鼠脑皮层梗死模型.利用行为学、免疫荧光和激光共聚焦等实验方法.分别行神经功能评定、脑梗死体积测定、细胞凋亡检测.结果 (1)脑梗死体积比较:N组、C组未发现梗死灶,CI和HP+CI组均见明显缺血梗死灶,其中HP+CI组脑梗死体积较CI组明显减小,差异有统计学意义(P<0.05);(2)神经功能评分比较:N组、C组无神经功能缺损症状,CI组和HP+CI组出现明显神经功能缺损症状,神经功能评分明显降低,其中HP+CI组神经功能评分比CI组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);(3)细胞凋亡比较:N组、C组小鼠大脑皮层偶见TUNEL阳性细胞,CI组和HP+CI组TUNEL阳性细胞数明显增多,其中HP+CI组TUNEL阴性细胞数较CI组减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 低氧预适应可能通过减小小鼠急性脑梗死体积、减少细胞凋亡两个方面发挥脑缺血性损伤的保护作用.     

人尿激肽原酶对大鼠脑缺血再灌注后空间学习记忆功能及皮质巢蛋白表达的影响

目的 探讨人尿激肽原酶(HUK)对大鼠局部脑缺血再灌注后缺血侧皮质巢蛋白的表达及空间学习记忆能力障碍的作用. 方法 60只大鼠按随机数字表法分为5组:假手术组、脑缺血组、HUK低剂量组(3.5×10-3PNAU/kg)、HUK中剂量组(8.75×10-3PNAU/kg)和HUK高剂量组(17.5×10-3PNAU/kg),线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,HUK治疗组于术后2周内腹腔注射HUK.第15天开始各组大鼠采用Morris水迷宫装置评价大鼠的空间学习记忆能力,免疫组化染色检测缺血侧皮质巢蛋白的表达. 结果 脑缺血组大鼠在定向航行试验和空间探索试验中均表现出明显的空间认知功能障碍.在定向航行试验中,HUK中、高剂量治疗组大鼠平均逃避潜伏期与缺血组比较明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).在空间探索试验中,HUK中、高剂量治疗组大鼠原平台象限停留时间百分比以及穿过原平台位置次数均大于脑缺血组,比较差异有统计学意义(P＜0.05).缺血侧皮质巢蛋白免疫组化染色结果 显示,HUK中、高剂量治疗组大鼠缺血侧皮质巢蛋白的吸光度值明显高于脑缺血组,比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 HUK可以明显改善大鼠局部脑缺血再灌注后的空间学习记忆能力,其机制可能与HUK增加缺血侧皮质巢蛋白的表达,促进神经再生有关.     

基因芯片技术检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响

目的 探讨Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响.方法 建立小鼠脑皮质梗死模型,基因芯片技术筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织差异表达基因,并应用qRT-PCR技术对其差异性表达进行验证.给予Shh蛋白治疗后,应用qRT-PCR技术观察Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达.应...     

毛喉素在大鼠脑损伤后血脑屏障损害中的作用

目的 探讨提高细胞内cAMP制剂毛喉素在脑损伤后血脑屏障损害中的作用.方法 雄性SD大鼠60只按随机数字表分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和毛喉素治疗组,每组15只.后2组大鼠采用改进的自由落体硬膜外撞击方法制作脑损伤模型,治疗组大鼠于伤后0.5 h腹腔注射毛喉素,伤后24 h处死大鼠(处死前1 h静脉注射20 g/L伊文氏蓝),应用荧光显微镜观察伊文氏蓝的渗出,分光光度计恻定脑组织伊文氏蓝的含量.结果 正常对照组和假手术组大鼠损伤组织周围伊文氏蓝无明显渗出,脑损伤组伊文氏蓝大量渗出,治疗组与脑损伤组比较,伊文氏蓝渗出明显减少;脑损伤组大鼠左侧皮质、海马和右侧皮质、海马伊文氏蓝含量明显高于正常对照组和假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05);毛喉素治疗组左侧皮质伊文氏蓝含量明显低于脑损伤组,但仍高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 提高细胞内cAMP制剂毛喉素能明显阻止血脑屏障开放.

Abstract：

Objective To explore the role of forskolin, a reagent elevating the cellular content of cAMP, in blood-brain barrier (BBB) damage in rats after cerebral injury damage. Methods Sixty male SD rats were equally randomized into normal control group, sham-operated group, injured group and forskolin treatment group. Rat models of cerebral injury in the later 2 groups were induced by the improved device of Feeney weight-dropping. Foskolin treatment group was peritoneally administered forskolin 5 mg/kg 0.5 h after the brain injury. Twenty g/L Evens blue was given through intravenous injection 23 h after the injury; all the rats were sacrificed 24 h after the injury. The permeation of Evens blue was observed qualitatively with a fluorescence microscope and measured quantitatively with a spectrophotometer. Results No obvious permeation of Evens blue was noted in the surrounding areas of the damaged tissue of normal controls and sham-operated group; Evans blue significantly permeated in the injured group; as compared with that in the injured group, the permeation of Evens blue was significantly decreased in the forskolin treatment group (P＜0.05). The level of Evens blue in the cortex and hippocampus of both side of the brain in the injured group was significantly higher that that in the normal controls and sham-operated group (P＜0.05); the level of Evens blue in the cortex of the left side of the brain in the forskolin treatment group was significantly lower that that in the injured group, but obviously higher than that in the normal controls and sham-operated group (P＜0.05).Conclusion Forskolin, the reagent elevating the cellular content of cAMP, can significantly prevent BBB opening.     

降粘抗栓片联合依达拉奉治疗脑梗死临床观察

目的分析降粘抗栓片联合依达拉奉治疗脑梗死疗效及其对血液流变学与超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,并对药物抗血小板凝聚机制进行初步探讨。方法选取郑州大学附属郑州中心医院2013-02-2016-09收治的72例脑梗死患者,采用随机数字表法分为观察组(n=36)和对照组(n=36),2组均给予依达拉奉治疗,观察组加用降粘抗栓片治疗,治疗2周后统计2组总有效率,并对比2组治疗前和治疗2周后血液流变学指标[红细胞沉降率(ESR)、红细胞比积(PCV)、全血还原黏度(RV)、血小板黏附率(PADT)]、SOD、血浆血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1α)(6-keto-PCF_(1α))水平。结果 (1)疗效:观察组总有效率为91.67%,高于对照组的69.44%,差异具有统计学意义(χ2=5.675,P0.05);(2)血液流变学指标:观察组治疗2周后PCV、RV、PADT与对照组相比明显较低,差异具有统计学意义(P0.05);(3)SOD活性:治疗2周后2组SOD均高于治疗前,且观察组高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);(4)抗血小板凝聚机制:治疗2周后2组TXB2均低于治疗前,6-ketoPCF_(1α)均高于治疗前,且观察组TXB2低于对照组,6-keto-PCF_(1α)高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论降粘抗栓片联合依达拉奉治疗脑梗死可改善患者血液流变学,提高超氧化物歧化酶活性,疗效显著。     

急性脑梗死局部亚低温治疗的时间窗研究

目的 探讨局部亚低温治疗急性脑梗死的疗效和最佳治疗时间窗. 方法 将114例急性脑梗死患者按开始接受亚低温治疗时间的不同分为3组,即A组(≤6 h)、B组(6～24 h)和C组(≥24 h),每组再按随机数字表法分为治疗组(A1组、B1组、C1组)和对照组(A2组、B2组、C2组).对照组给予常规抗血小板等治疗,治疗组在常规治疗基础上给予病灶侧局部亚低温治疗48 h.各组患者均在人院时、治疗第7天、治疗第14天、治疗第30天进行美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,并在入院时及治疗第7天、治疗第14天动态监测血清中一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力. 结果 与A2组、B2组相比,A1组、B1组治疗第7天、治疗第14天、治疗第30天NIHSS评分明显降低,治疗第7天、治疗第14天血清中NO含量明显降低,SOD活力明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);而C1组在各时间点的NIHSS评分、NO含量、SOD活力与C2组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).A1组、B1组在治疗第7天、治疗第14天、治疗第30天NIHSS评分较C1组明显下降,在治疗第7天、治疗第14天NO含量较C1组明显下降,SOD活力较C1组明显提高,差异均有统计学意义(P＜0.05),尤以A1组突出. 结论 早期局部亚低温治疗急性脑梗死临床有效,理想的治疗时间窗为6 h,6～24 h开始亚低温治疗仍有效,但24 h后开始亚低温治疗则无效.

Abstract：

Objective To determine the effect of local mild hypothermia on patients with acute cerebral infarction and ascertain its optimal therapeutic window. Methods According to the time receiving treatment, 114 patients with acute cerebral infarction were divided into group A (≤6 h), group B (6-24 h) and group C (≥ 24 h). Then, each group was subdivided into 2 groups at random: treatment group (A1, B1, C1) and control group (A2, B2, C2). Patients in the control group were subjected to such conventional therapy as anti-platelet aggregation. Patients in the treatment group were treated with local mild hypothermia (33-35 ℃ body-core temperature) for 48 h besides conventional therapy. Clinical outcomes were assessed by the National institutes of health stroke scale (NIHSS) on admission and 7, 14,30 d after treatment. Furthermore, we detected the serum level of nitrogen monoxidum (NO) and superoxide dismutasc (SOD) on admission, and 7 and 14 d after treatment. Results Compared with the control group, treatment group enjoyed significantly decreased scores of NIHSS 7, 14 and 30 d after treatment and significantly decreased level of NO 7 and 14 d after treatment (P＜0.05), but obviously increased SOD vitality 7 and 14 d after treatment (P＜0.05). No significant differences in terms of NIHSS scores, level of NO and SOD vitality were noted between group C1 and group C2 at each time point (P＞0.05). Group Al and group B1 had obviously lower scores of NIHSS than group C1 on the 7th, 14th and 30th d of treatment, and had significantly lower level of NO and obviously increased SOD vitality as compared with group C1 on the 7th and 14th d of treatment (P＜ 0.05), and group A1 enjoyed its advantage.Conclusion Early local mild hypothermia therapy can improve neurological function in patients with acute cerebral infarction. The mild hypothermia induced within 6 h may be optimal therapeutic window;mild hypothermia induced at 6-24 h is less effective and that above 24 h is non-effective.     

慢性脑低灌注对大鼠皮层核因子E2相关因子2表达的影响

目的 研究慢性脑低灌注大鼠皮层核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.方法 用随机数字表法将大鼠分为双血管结扎术(2VO)-3周组、2VO-8周组和假手术组,2VO术式制备慢性脑低灌注大鼠模型并在相应时间点取材,采用免疫组化染色、实时定量PCR方法检测大鼠皮层Nrf2的表达,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量.结果 免疫组化染色结果显示,与假手术组(38.01%±4.51%)相比,2VO-3周组(50.18%±14.22%)、2VO-8周组(23.15%±7.42%)大鼠皮层Nrf2阳性细胞比例差异均无统计学意义(P＞0.05);与2VO-3周组相比,2VO-8周组大鼠皮层Nrf2阳性细胞比例明显降低,比较差异有统计学意义(P＜0.05).实时定量PCR结果提示,2VO-8周组大鼠皮层Nrf2 mRNA的表达(相对扩增倍数)较2VO-3周组降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).生化检测发现,与假手术组[(3.894±0.512)nmol/mg]相比,2VO-8周组大鼠皮层MDA含量[(6.855±1.351)nmol/mg]明显升高,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性脑低灌注大鼠皮层MDA含量随时间延长而不断增加,除3周时蛋白表达上调外,Nrf2蛋白与mRNA水平均有不同程度减低,提示慢性脑低灌注状态时氧化性损伤持续加重,这可能与内源性抗氧化系统受到抑制有关.

Abstract：

Objective To examine the effect of chronic cerebral hypoperfusion (CCH) on the expression of nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2) in rat cortex. Methods Rats were randomly divided into 2 operated groups and a sham-operated group; rat models of chronic cerebral hypoperfusion in the 2 operated groups were established by occlusion of bilateral common carotid arteries (2VO) for 3 and 8 weeks, respectively. The RNA and protein contents of Nrf2 in the cortex were detected by immunohistochemistry and real-time quantitative PCR, respectively, and the content of malonaldehyde (MDA) was measured by thiobarbituric acid-reactive substance assay. Results A significantly lower percentage of Nrf2-positive cells in the cortex of 2VO-8w group (23.15%±7.42%) was noted as compared with that in the 2VO-3w group (50.18%±14.22%) (P＜0.05); no significant differences on the percentage of Nrf2-positive cells were noted between the sham-operated group (38.01%±4.51%) and the 2 operated groups (P＞0.05). Though the RNA content of Nrf2 in the cortex of 2VO-8w group (0.993 ±0.492)decreased as compared with that in the 2VO-3w group (1.536±0.493)(P＞0.05), no statistical difference was noted between the sham-operated group (1.690± 1.195) and both the 2VO-3w group and the 2VO-8w group (P＞0.05). And the content of MDA in the 2VO-8w group ([6.855±1.351] nmol/mg) was significantly increased as compared with that in the sham-operated group ([3.894±0.512] nmol/mg) (P＜0.05). Conclusion The content of MDA keeps increasing. Additionally, except the protein expression up-regulates 3 weeks after occlusion, the RNA and protein expressions of Nrf2 in rat cortex are down-regulated with the process of CCH, suggesting that oxidative damage become much severe with theprocess of CCH, which may be partly attributed to the dysfunction of endogenous antioxidative mechanisms.     

鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应及环磷酰胺影响

目的 探讨脑缺血再灌注不同缺血区域炎症反应特点及环磷酰胺影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、对照组、环磷酰胺预处理组,建立局灶性脑缺血再灌注模型.用免疫组化法和生化法观察额顶部皮质和基底节区P-选择素表达、髓过氧化物酶(MPO)活性变化;并进行TTC染色和HE染色.结果 (1)再灌注3h缺血侧额顶部皮质和基底节区出现P-选择素表达,12h达高峰.环磷酰胺预处理组和对照组相比较,差异无显著性(P＞o.05).(2)再灌注12h以后MPO活性明显升高.基底节区的MPO活性在再灌注48h达到高峰后下降.额顶部皮质MPO活性在再灌注24h达到高峰后至96h仍维持较高水平.和对照组相比较,环磷酰胺预处理组MP(活性升高受抑制(P＜0.05).(3)环磷酰胺预处理可显著缩小脑梗死体积(P＜0.05).结论 (1)脑缺血再灌注损伤存在主动性炎症反应,额顶部皮质比基底节区的炎症反应更持久和剧烈.(2)环磷酰胺减少缺血侧中性粒细胞浸润数量,具有神经保护作用,但不直接影响P-选择素的表达.