B淋巴细胞对卡介苗颗粒性抗原的递呈作用

The possibility of human B lymphocytes to process and present BCG particulate antigen to BCG specific T cell line was studied. It was found that about 6% of B cells after incubated with BCG for 24 h, showed BCG bacilli in their cytoplasm, by acid fast stain, and became obscure 48 h later. These results demonstrated that human B lymphocytes could phagocytose, process, and degrade BCG particulate antigen. The BCG pulsed B cells acted as antigen presenting cells to BCG specific T cell line. The proliferation and IL-2 production of specific T cell line were significantly enhanced by BCG pulsed B cell stimulation. It was evident that BCG antigen was presented to T cell lines by B cell. The activity of BCG pulsed B cell was time depending. By treating B lymphocytes with chloroquine which interferes with normal lysosome functions could completely inhibit the proliferation of BCG specific T cell line when B lymphocytes were pulsed with BCG or express of BCG. The results revealed that B cells must process antigen before presenting antigen to T cells. It is concluded that B lymphocytes can phagocytose, process and present relevant determinants of BCG particulate antigen to BCG specific T cell line, and that human B lymphocytes may play an important role in the anti-tuberculous immunity in vivo, at least as antigen presenting cells. To pursue the study of this problem, it is suggested to use B lymphocytes deficient mice as experimental models for further investigation.     

树突状细胞的移行与递呈抗原作用的实验研究

借助异硫氰酸荧光素的可显示性，将其作为抗原免疫ＣＢＡ小鼠，以观察树突状细胞的移行及其抗原递呈方式与功能。结果表明，经ＦＩＴＣ两次刺激后，移行至局部淋巴结的树突状细胞数明显高于对照组ＦＡＣＳ的分析结果亦表明，局中淋巴结内的树突状细胞荧光阳性率显著率高，且荥光显微镜观察呈现不均一的膜荧光。提示该细胞的抗原递呈方式为单纯膜结合型，而无内在化过程。ＣｏｎＡ刺激的淋巴细胞增殖反应及ＦＩＴＣ特异性刺激的细胞增     

树突状细胞的移行与递呈抗原作用的实验研究

借助异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）的可显示性，将其作为抗原免疫ＣＢＡ小鼠，以观察树突状细胞的移行及其抗原递呈方式与功能。结果表明，经ＦＩＴＣ两次刺激后（皮内），移行至局部淋巴结的树突状细胞数明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。ＦＡＣＳ的分析结果亦表明，局部淋巴结内的树突状细胞荧光阳性率显著增高，且荧光显微镜观察呈现不均一的膜荧光，提示该细胞的抗原递呈方式为单纯膜结合型，而无内在化过程。ＣｏｎＡ刺激的淋巴细胞增殖反应及ＦＩＴＣ特异性刺激的细胞增殖反应则分别体现了树突状细胞抗原递呈作用的后效应。     

B淋巴细胞对卡介苗颗粒性抗原的递呈作用

作者通过体外试验,将分离纯化的人外周血B细胞先与卡介苗(BCG)共育,成为激发的B细胞,再与建立的对BCG具特异性的T细胞株细胞混合培养,在无单核巨噬细胞存在的情况下,检测B细胞对颗粒性抗原的递呈效应。结果显示,6％的B细胞与BCG共育24小时后,胞浆中可见有BCG菌体,48小时后菌体界限模糊;激发的B细胞能明显地刺激T细胞株出现增殖反应及产生IL-2,但可被氯奎所抑制。表明B细胞对颗粒性抗原有递呈给T细胞,使之有激活作用。     

树突状细胞和慢性病毒性肝炎

抗原提呈细胞(APCs)是免疫应答的始动者，作为APC之一的树突状细胞(Dendritic cells，DCs)，是人体内功能最强的抗原提呈细胞，其功能状态直接影响着细胞和体液免疫应答，研究发现DCs的功能与病毒性肝炎的慢性化密切相关。本文旨在对DCs的特性、与慢性病毒性肝炎的关系及其潜在的治疗价值进行综述。     

T细胞抗原识别MHC限制的发现

T细胞只能识别抗原提呈细胞表面特定的抗原肽MHC分子复合物,这就是T细胞抗原识别的MHC限制。这一现象是由澳大利亚的Peter.C.Doherty与瑞士的Rolf.M.Zinkernagel在实验时偶然发现的。之后,为了解释这一现象,他们又提出了两个模型:双重受体假说和修饰自身假说。在以后的20多年里,众多的科学家对这一现象做了大量相关的研究,逐步弄清了细胞介导的免疫反应的全过程,极大地推动了免疫学以及许多其他相关知识领域的发展。     

树突状细胞在免疫应答中的作用及其调控

18 68年 ,树突状细胞 (ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ,ＤＣ)的分支郎罕细胞(Ｌａｎｇｃｒｈａｎｓｃｅｌｌ,ＬＣ)首先在皮肤内被发现 ;本世纪 70年代初 ,Ｓｔｅｉｍａｎ和Ｃｏｈｎ正式报道了这类形态、功能均极为特殊的免疫细胞。此后的研究发现ＤＣ在免疫应答的首要环节 抗原提呈中扮演着重要的角色 ,是一类功能强大的抗原提呈细胞 (ａｎｔｉ ｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ,ＡＰＣ) ,在抗感染、器官移植、自身免疫疾病中具有广泛的应用前景。 90年代初 ,随着体外大量获取纯化ＤＣ实验技术的建立和成熟 ,对ＤＣ的研究飞速发展。在基础和…     

胶原抗原肽表位诱导的耐受性抗原递呈细胞对大鼠类风湿关节炎的治疗作用

目的:观察抗原肽表位(CTE)1和CTE2诱导、TGF-β2刺激的抗原递呈细胞(APC)对大鼠类风湿关节炎的疗效.方法:雌性Wistar大鼠32只,分为关节炎组、免疫性细胞组、耐受性细胞组和正常对照组,每组8只.关节炎、免疫性细胞和耐受性细胞组大鼠使用鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)加完全福氏佐剂诱导CIA后,分别静脉注射免疫性APC、耐受性APC和Hanks平衡盐溶液(HBSS),1周后观察大鼠关节炎指数,1月后检测外周血血清中抗CⅡ抗体吸光度(A)值,流式细胞仪检测各组大鼠外周血CD4+T细胞中Th1和Th2细胞比例.结果:各组大鼠关节炎指数、外周血抗CⅡ抗体A值和Th1型/Th2型CD4+T细胞比率比较,差异均有统计学意义(F=20.911、22.498和10.775,P＜0.001);耐受性细胞、免疫性细胞和关节炎组较正常对照组升高(P＜0.05),耐受性细胞组较免疫性细胞和关节炎组降低(P＜0.05).结论:CTE1和CTE2诱导、TGF-β2 刺激的APC对大鼠类风湿关节炎有抑制作用.     

T细胞的抗原认识和应答的多样性

前言Ｔ细胞对抗原的认识保持严密的特异性。长期以来 ,人们对这一有趣的问题进行了认真和广泛的研究及探讨。目前 ,对抗原多肽及其氨基酸被置换后的变构物的研究 ,使人们认识到了许多过去鲜为人知的有关Ｔ细胞的认识和应答机能 ,其中包括Ｔ细胞受体 (Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ ,ＴＣＲ)对ＭＨＣ拘束性的多肽抗原的认识后产生的应答反应和随后发生的细胞内的信息传递以及它们在Ｔ细胞的生存及死亡中的作用。这些Ｔ细胞的认识和应答机制的解明 ,从生理和病理意义来说 ,对某些疑难性疾病包括自身免疫性疾病 ,肿瘤 ,过敏性疾病以及爱滋病的病…     

氟烷性肝炎中抗体依赖细胞介导的细胞毒作用对肝细胞的毒性

目的：探讨氟烷性肝炎免疫应答中抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）对肝细胞的毒性作用。方法：雄性Hartley豚鼠在40％O2下吸入1％氟烷4h，诱导1次，或按分组需要间隔42d后同上再吸入1次，再隔42d后同上再吸入I次，诱导3次。对照组只吸入40％O2。分离淋巴细胞和肝Kupffer细胞，两种细胞按一定的分类和比例混合培养，再加入含有特异性抗体和细胞因子的上清液，对照分析机体吸入氟烷后诱导免疫应答过程中，ADCC对肝细胞的毒性作用。结果；氟烷诱导3次豚鼠肝细胞毒性作用包括特异性抗体介导的ADCC作用，氟烷诱导1次豚鼠ADCC作用仍需氟烷对离体肝细胞的再次诱导。Kupffer细胞诱导淋巴细胞增生成的特异性抗体和分泌的细胞因子对肝细胞无毒性作用。结论：体液免疫主要是ADCC，单纯的特异性抗体和细胞因子不能杀伤肝细胞。免疫应答反应的强弱与吸入氟烷有关。     

Kupffer细胞在原发性肝细胞癌患者肝脏中的分布及意义

目的 观察人原发性肝细胞肝癌患者肝脏Kupffer细胞(KCs)的分布并探讨其意义.方法 采用免疫组织化学方法,通过CD68定位KCs,运用ImageTool 3.0软件进行细胞计数,了解KCs在正常人肝组织、不同分化程度肝癌组织、癌旁肝组织和远癌肝组织的分布,并在电子显微镜下观察KCs的超微结构改变.结果 KCs呈卵圆形、星形或纺锤形,在肝癌组织、癌旁肝组织、远癌肝组织和正常肝组织中分布数量分别为(21.6±7.8)、(68.8±9.1)、(62.0±1.9)和(36.2±4.1)(P＜0.01),癌组织分化程度越低,其内KCs数量越少(P＜0.05).细胞超微结构观察结果显示,肝癌患者癌旁肝组织肝血窦中KCs数量明显增多,可见中性粒细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润,细胞质吞噬体和溶酶体增多.结论 原发性肝癌患者肝组织内KCs明显激活,但KCs在癌组织内分布数量明显减少,而且癌组织分化程度越低其内KCs数量越少,而在癌旁肝组织和远癌肝组织内较癌组织和正常肝组织显著增多,提示KCs可能通过复杂的途径参与对肝癌的防御作用.     

Kupffer细胞对实验性肝损伤脂质过氧化反应的影响

目的：探讨Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞对实验性肝损伤脂质过氧化反应的影响。方法：用半乳糖胺（ＧａｌＮ）诱发大鼠肝损伤，分别给予Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞吞噬功能促进剂甘油三酯（ＴＧ）或抑制剂二氧化硅，并设正常和损伤对照组。给ＧａｌＮ３０ｈ后处死动物，测定血浆及肝组织有关指标。统计学处理，用Ｆ和Ｈ检验。结果：损伤组肝组织／ｇ脂质过化物（ＭＤＡ）含量明显高于正常组，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和的型胱甘肽（ＧＳＨ）含量低于     

Stereological and cytochemical study on the pathogenesis of hepatitis induced by halothane in rats

ＳｔｅｒｅｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈａｌｏｔｈａｎｅｉｎｒａｔｓＺｈｅｎｇＷｅｉｑｉａｎｇ（郑唯强）；ＺｈａｎＲｏｎｇｚｈｏｕ（詹鎔洲）；ＹｕＷ...     

大鼠肝星形细胞、枯否细胞的同步分离培养与鉴定

目的:建立经济、简便的同步分离培养肝星形细胞及枯否细胞的方法。方法:应用胶原酶和蛋白酶对大鼠肝脏进行原位灌流、消化,获得大鼠肝脏非实质细胞,经18%(W/V)的Nycodenz密度梯度离心,一步分离肝星形细胞及枯否细胞;肝星形细胞处在界面,枯否细胞则处在界面下;台盼蓝染色鉴定细胞活力;Desmin免疫细胞化学染色鉴定肝星形细胞;溶菌酶免疫细胞化学染色鉴定枯否细胞。结果:该方法分离的肝星形细胞和枯否细胞的纯度达95%左右。肝星形细胞得率(3.0±0.5)×107/肝,枯否细胞得率(4.0±0.5)×106/肝。结论:应用Nycodenz一步密度梯度离心法可以很好的同时分离肝星形细胞和枯否细胞。     

肝炎肝硬变过程中贮脂细胞和枯否细胞的定量观察

应用免疫组化等方法,对乙型病毒性肝炎不同病变阶段肝组织的贮脂细胞和柘否细胞进行了定量观察。结果显示,贮脂细胞数量以中度慢活肝时最多,而在轻微病变和肝硬变时较少;溶菌酶阳性枯否细胞随病变加重而逐渐减少,以中度慢活肝达到最低值.结合电镜及免疫电镜观察,我们认为贮脂细胞在肝炎肝硬变过程中起重要作用,并且受到枯否细胞的调控影响.     

盐酸右美托咪定对H2O2诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响

目的：观察α2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定能否抑制过氧化氢(H2O2)诱导的库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)氧化应激和炎性反应。方法：分离和培养KCs,分别用盐酸右美托咪定或育亨宾处理24 h后,以H2O2作用30 min建立细胞氧化损伤模型,应用MTT比色法检测H2O2诱导的损伤细胞的存活率;用相应的试剂盒测定各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)释放量。结果：盐酸右美托咪定显著抑制H2O2诱导的KCs的损伤,提高细胞的存活率,抑制上清液中LDH,MDA,TNF-α释放,这种作用可以被α2受体拮抗剂育亨宾完全拮抗,而育亨宾本身对细胞的氧化损伤和炎性反应没有影响。结论：盐酸右美托咪定可以减轻H2O2诱导的KCs的氧化应激和炎性反应,其可能是通过α2肾上腺能受体发挥作用。     

Kupffer细胞在果糖引起的非酒精性脂肪肝中的作用

目的探讨肝脏Kupffer细胞在果糖引起非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及其可能的机制。方法选取48只雌性ICR小鼠随机分为4组:对照组、果糖组、三氯化钆(GdCl3)组和GdCl3+果糖组。对照组与GdCl3组小鼠均饮用自来水,GdCl3组同时给予GdCl3(10 mg/kg,ip)每周2次;果糖组与GdCl3+果糖组小鼠均饮用30%果糖水溶液,GdCl3+果糖组小鼠同时给予GdCl3(10 mg/kg,ip)每周2次。喂养10周后剖杀所有小鼠,取血清检测甘油三酯(TG)含量;取肝脏组织制备石蜡切片用于病理学检查,制备冰冻切片用于油红O染色;其它肝脏组织用于RT-PCR、Westernblot和肝脏TG含量检测。结果果糖组小鼠血清和肝脏TG含量显著升高,肝脏组织HE和油红O染色显示小鼠肝脏脂质沉积明显,而GdCl3干预明显降低果糖组小鼠肝脏TG含量,同时肝脏脂质沉积明显得到改善;果糖组小鼠肝脏核蛋白固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)明显激活,其靶基因肝脏脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)等TG合成相关酶表达水平显著上调,而GdCl3干预明显抑制肝脏核蛋白SREBP-1c的激活及其靶基因上调。结论果糖引起肝脏组织SREBP-1c激活导致肝细胞TG合成增加。肝脏Kupffer细胞激活在果糖诱导的小鼠肝脏SREBP-1c激活和脂质沉积中起重要作用。     

阻断Kupffer细胞TIM-4诱导iTreg细胞的产生影响小鼠肝移植免疫耐受

目的 探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)T细胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)诱导小鼠原位肝移植术后iTreg细胞的产生及其相关机制.方法 建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,分为sham组、control mAb组、TIM-4 mAb组.流式细胞仪检测KCs活化,Western blot检测肝脏TIM-4表达,TUNEL检测肝细胞凋亡指数(apoptotic index,AI).提取KCs,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,将KCs和提取的初始CD4+T细胞进行共培养,激光共聚焦检测Kupffer细胞TIM-4表达,分为control组、control mAb组以及TIM-4 mAb组;CFSE检测CD4+T细胞增殖,流式细胞仪检测CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞,ELISA检测IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot检测STAT6表达.建立小鼠移植模型,分为3组:iTreg组移植模型注入iTreg细胞(预先用TIM-4 mAb处理的TIM-4+ KCs与初始CD4+T细胞共培养所诱导),sham组和单纯肝移植组(LT)注入相应的PBS作为对照,检测各组AST、ALT、TBIL水平,HE染色评价肝组织排斥活动指数(rejective activity index,RAI),观察小鼠生存率.结果 肝移植术后24、48、72 h KCs的活化分别为15.9％、21.6％、28.3％,术后1、3、7 dTIM-4蛋白表达水平明显高于sham组(P＜0.05);control mAb组AI值(29.23 ±2.56)明显高于sham组和TIM-4 mAb组[(0.40±0.49),(11.04 ±2.28),P＜0.05].KCs与CD4+T细胞共培养后,control、control mAb以及TIM-4 mAb组CD4+T细胞的增殖率分另别为32.5％、31.6％、17.2％,CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞分化分别为12.4％、13.9％、28.1％,共培养上清液TIM-4 mAb组IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明显低于control mAb (P＜0.05),且加入TIM-4 mAb明显降低了与TIM-4+ KCs共培养的CD4+T细胞p-STAT6蛋白表达(P＜0.05),外源性加入IL-4可明显增高CD4+T细胞p-STAT6蛋白的表达(P＜0.05).移植模型注入iTreg细胞,iTregz组肝功指标明显好转,与LT组比较差异有统计学意义(P＜0.05).肝组织病理学检查,iTreg组RAI平均得分为(3.97±0.67),明显低于LT组[(8.47±0.90),P＜0.05],且iTreg组小鼠平均存活时间延长.结论 阻断KCs TIM-4能够抑制初始CD4+T细胞IL-4/STAT6信号通路的激活,从而诱导更多iTreg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受.     

日本血吸虫感染小鼠肝脏枯否细胞差异表达MicroRNA及基因的分析

目的筛选并验证日本血吸虫感染后,肝脏枯否细胞(Kupffer cells,KCs)内差异表达micro RNAs(mi RNAs)及基因。方法实验小鼠随机分为对照组、感染日本血吸虫组。用密度梯度离心和流式分选相结合的方法,分离肝脏F4/80~(hi)CD11b~(lo)枯否细胞。取感染后6周样本进行mi RNA芯片和转录组测序分析,并利用实时荧光定量PCR方法进行验证。结果与对照组相比,感染组肝脏F4/80~(hi)CD11b~(lo)枯否细胞数量急剧减少,与此同时感染组肝脏逐渐出现F4/80loCD11bhi非实质细胞。采用感染后6周宿主肝脏F4/80~(hi)CD11b~(lo)枯否细胞样本进行mi RNA芯片和转录组测序分析,与对照组相比,感染组肝脏枯否细胞差异表达的mi RNAs有106条,差异表达基因为1 083个,其中包含多个趋化因子。结论日本血吸虫感染导致宿主肝脏F4/80~(hi)CD11b~(lo)枯否细胞数量显著减少,并鉴定一批差异表达的mi RNAs和基因。