胎盘滋养层细胞的乙型肝炎病毒感染与宫内感染机制

目的：检测HBV对胎盘、胎肝和滋养层细胞的感染情况，探讨HBV的宫内感染机制。方法：研究对象包括20例孕妇胎盘组织、6例引产胎儿胎肝组织及体外培养的胎盘滋养层细胞。ELISA法检测孕妇外周血、胎儿脐血和6个月婴儿外周血HBV标志物；荧光定量PCR法检测血清和滋养层细胞中的HBV DNA；免疫组织化学法和免疫荧光法检测胎盘、胎肝组织及滋养层细胞中HBV标志物的表达；末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口标记法（TUNEL）检测胎盘和滋养层细胞凋亡情况。结果：孕妇血清HBV DNA水平与胎儿脐血HBV DNA水平相关，脐血HBV DNA阳性者其母血HBV DNA〉1.0×10^7拷贝／mL；6例胎盘组织和3例引产胎儿胎肝组织中可见HBsAg免疫组织化学染色阳性细胞，其中1例胎肝组织中发现HBcAg阳性细胞；体外培养滋养层细胞与HBV DNA阳性血清共孵育后，可检测到HBsAg的表达，亦可检测到HBV DNA。体内和体外实验均检测到HBV感染后滋养层细胞凋亡呈增加趋势，且胎盘细胞的凋亡与脐血HBV DNA水平相关。体外实验结果显示，随感染时间的延长，滋养层细胞凋亡呈增加趋势。6个月后，12例新生儿有1例血清HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性，6例抗-HBs阳性。结论：HBV宫内感染的机制可能是通过HBV感染胎盘屏障而使胎儿发生HBV宫内感染。HBV在胎儿组织器官内的定位和复制可能是新生儿发生慢性HBV感染的重要因素。滋养层细胞凋亡可能是胎盘屏障阻断HBV宫内传播的一种保护性机制。     

人滋养层细胞培养上清液及裂解液中丙型肝炎病毒的检测

目的应用改良的分离、纯化方法对孕早期人绒毛滋养细胞进行原代培养,利用HCV阳性血清对滋养细胞进行体外感染,探讨HCV在体外培养条件下对细胞的感染及HCV在细胞中的复制状态。方法采用胰蛋白酶消化法消化正常人妊娠孕早期胎盘组织,以35%、45%2个Percoll密度梯度进行分离纯化、并免疫组化鉴定,获得纯度较高的滋养层细胞,应用HCV阳性且高载量的血清进行体外感染,应用免疫荧光染色检测滋养层细胞中HCV NS5表达,通过细胞裂解液裂解感染后细胞,应用荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测感染后细胞培养上清和细胞内的HCV RNA,以观察HCV的感染及复制情况。结果该法分离纯化的滋养层细胞生长良好,特异性角蛋白-7阳性,纯度高。原代滋养层细胞在与HCV阳性血清共同孵育后均未出现明显的细胞病变,感染后48 h在滋养层细胞细胞浆中可见HCV NS5表达,感染后分别于24、48、72、96、120 h收集的培养上清和感染后细胞内均可以检测到HCV RNA。排除了培养洗涤液HCV污染,进一步检测其细胞裂解液中HCV,结果检测HCV阳性。结论利用改良后人胎盘滋养层细胞的体外培养系统,HCV阳性血清能在体外感染原代培养的人滋养层细胞,HCV可在滋养层细胞中复制。     

新型乙型肝炎病毒细胞感染模型的建立

目的:建立一新型细胞株,使该细胞株既能自然感染HBV又能传代培养,评价杂交细胞对HBV的自然感染能力.方法:分离培养未携带HBV的人原代肝细胞,与诱导突变的HepG2细胞进行融合得杂交细胞,经HAT培养基筛选,利用胰蛋白酶G显带技术鉴定所得细胞,用含HBV的慢性乙型肝炎患者血清感染杂交细胞(同时感染HepG2作为对照),巢式PCR检测感染后细胞内HBVDNA合成及分泌情况及有无HBV复制中间产物HBV cccDNA,间接免疫荧光检测感染后细胞内HBcAg的表达,电化学发光法检测感染后细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg.结果:成功建立人原代肝细胞与HepG2的杂交细胞,能体外传代培养,染色体核型分析示杂交细胞染色体众数为99条,证实为融合细胞,HBV感染后第4天起,杂交细胞内和培养上清中均能检测到HBV DNA,HBV感染后第3天起,杂交细胞内可以检测到HBV的复制中间产物HBV cccDNA,HBV感染后第4天起,杂交细胞胞质及部分胞核内HBcAg始终是阳性表达,间接免疫荧光染色呈胞质弥漫性着色,电化学发光法检测培养上清中HBsAg及HBeAg持续表达;而感染后的HepG2细胞检测结果均为阴性.结论:成功建立的兼具有人原代肝细胞和HepG2遗传特性的杂交细胞株可以被慢性乙型肝炎患者血清中的HBV病毒自然感染,可进一步用作研究HBV感染的体外细胞模型.     

聚合酶RNA干扰对小鼠体内乙型肝炎病毒的抑制作用

目的:利用流体动力学法构建小鼠HBV感染模型,观察pSiHBV/P在体内对HBV的抑制作用.方法:以流体动力学法构建小鼠HBV感染模型,将pSiHBV/P与pHBV1.3尾静脉共注射Balb/c小鼠.转染后第6天,用酶联免疫分析法检测小鼠血清乙肝表面抗原(HBsAg),用荧光定量PCR检测血清HBV DNA的水平,用免疫组织化学方法检测肝内HBsAg、乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的表达,RT-PCR法半定量检测肝内HBV 3.5 kb mRNA、S-mRNA及0.7 kb mRNA的水平.结果:感染组和无关干扰组血清HBsAg表达量平均值分别为9.11±3.34和8.19±5.41,pSiHBV/P干扰组平均值1.94±1.78;pSiHBV/P干扰组血清中HBV DNA的含量较感染组明显下降(2.91±0.55 vs 4.32±0.57,P<0.05),抑制率为33%;干扰组肝细胞中HBsAg和HBcAg阳性细胞数较对照组明显减少;干扰组3.5 kbmRNA、S-mRNA的水平较感染组和无关干扰组均有明显下降(0.48±0.19 vs 1.06±0.40,0.88±0.54;0.46±0.18 vs 1.05±0.38.0.90±0.51,P<0.05).结论:RNAi技术在体内能高效、特异地抑制小鼠体内HBV.     

弓形虫感染对早孕期人绒毛膜滋养层细胞人类白细胞抗原G表达的影响

目的 研究弓形虫感染早孕期绒毛膜滋养层细胞中人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen G,HLA-C)表达水平的变化,探讨弓形虫感染致不良妊娠的分子免疫机制.方法 选取正常妊娠6～12周妇女行人工流产术后的绒毛组织,分离滋养层细胞.将绒毛膜滋养层细胞分为实验组和对照组,实验组加入1×104个弓形虫,对照组加入等量生理盐水,培养48 h后,采用实时荧光定量PCR检测各组人绒毛膜滋养层细胞HLA-G mRNA表达水平,流式细胞技术检测各组人绒毛膜滋养层细胞中HLA-G阳性细胞亚群数量.结果 实验组和对照组HLA-G mRNA平均表达水平分别为0.15±0.04和0.29±0.07,两组之间的差异具有统计学意义(P＜0.01);实验组绒毛膜滋养层细胞HLA-G阳性细胞亚群的数量为(12.19±2.04)%,对照组为(24.24±3.07)%,两组之间的差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 早孕期弓形虫感染可下调绒毛膜滋养层细胞HLA-G的表达,减少绒毛膜滋养层细胞中HLA-G阳性细胞亚群数量.     

TNFα对HBV体外感染人绒毛膜癌JEG Ⅲ细胞的促进作用

目的:检测TNF-α存在条件下HBV体外感染人绒毛膜癌细胞的情况,为HBV宫内传播机制的研究提供细胞学基础.方法:在TNF-α存在条件下,绒毛膜癌JEGⅢ细胞与HBV阳性血清(2×1012HBV DNA/L)共同孵育.感染后24 h,胰酶常规消化细胞,PBS充分洗涤,直至最后一遍洗液ELISA检测HBsAg阴性,重新接种细胞,加新鲜培养液继续培养,每隔12 h,收集培养标本,分别用Western blotting,免疫细胞化学方法,透射电镜检测培养物中HBV标志物.结果:HBV阳性血清感染JEGⅢ细胞36 h后,各时间点收集的细胞上清标本中Western blotting均检测到阳性的HBsAg条带,免疫细胞化学方法检测细胞铺片发现,在TNF-α存在的感染环境下,HBsAg呈阳性或强阳性表达,与TNF-α不存在的感染环境下相比有显著性差别(20.40±4016 vs 7.40±1.82,P＜0.01),而且HbsAg主要位于胞膜和/或胞质,透射电镜下,细胞扩张的粗面内质网腔内发现有杆状HBsAg颗粒.结论:HBV体外可以成功感染人绒毛膜癌细胞.本体外细胞感染模型是深入研究HBV宫内传播机制的关键.     

死胎胎盘组织中HBcAg表达的临床和病理研究

观察乙型肝炎病毒在胎盘、肝组织中的表达和引起胎盘组织的病理改变情况。采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎，常规尸检，取胎盘、肝组织，SP法检测HBsAg，常规病理观察；回访婴母产前静脉血HBV的检测结果。HBcAg阳性颗粒在死胎胎盘的蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞浆、血管中呈点、灶关分布，细胞的核不着色。HBV呈单项阳性、小三阳、大三阳的婴母分娩的死胎胎盘组织中HBcAg阳性率；死胎胎盘的蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞中HBcAg阳性率，彼此比较，差异不显著（P＞0．05）。死胎胎盘绒毛发育迟缓、慢性绒毛炎、单脐动脉的发生经；HBV呈单项阳性、小三阳、大三阳的婴母分娩的死胎肝组织中HBcAg阳性率，彼此比较，差异显著（P＜0．05）。HBV绩婴传播可能还存在一种从母体面向胎儿的细胞转移方式；HBV可以导致胎盘发育不良和屏障功能障碍；死胎胎盘组织中HBcAg阳性经与孕妇HBV静脉中HBV标志无关；胎盘组织中可能存在HBC复制；死胎肝组织中HBcAg阳性表达与孕妇HBV感染状态、静脉中HBV标志有关。     

弓形虫感染小鼠血清对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察RH株弓形虫感染小鼠血清在体外对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法B16细胞在含5%、10%和20%RH株弓形虫感染小鼠血清RPM1640中培养24和48 h,四甲基氮噻唑蓝（MTT）法检测B16细胞增殖抑制率;在10%、20%感染小鼠血清中培养24 h,Annexin V/PI染色,流式细胞检测细胞凋亡,HE染色观察细胞形态改变。结果正常血清能促进B16细胞增殖。5%、10%和20%弓形虫感染小鼠血清与B16细胞共孵育24和48 h,细胞生长抑制率分别为（9.06±0.36）%（、14.77±0.94）%（、23.74±0.5）%和（14.82±0.77）%（、24.56±1.04）%、（39.77±2.82）%,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;10%、20%弓形虫感染鼠血清组B16细胞24 h凋亡率分别为（26.01±3.27）%和（44.55±2.87）%,显著高于对照组凋亡率（5.01±2.62）（P〈0.05）。弓形虫感染鼠血清作用的B16细胞生长密度明显降低,细胞核固缩、浓染。结论RH株弓形虫感染血清能够抑制B16细胞增殖并促进其凋亡。     

PTD-HBcAg融合蛋白诱导特异性CTL抑制转基因小鼠HBV复制

目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白体内诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用.方法:20只HBV转基因小鼠随机分组, 融合蛋白PTD-HBcAg及对照蛋白HBcAg经皮下免疫小鼠, 每周1次, 共3次. 流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平; 微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平; 荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA水平; 肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.结果:PTD-HBcAg融合蛋白免疫转基因小鼠后, 能有效上调特异性CTL数量, 肝组织中炎性细胞的数量明显增多, 同时对小鼠血清中HBsAg及HBV DNA水平有明显的抑制作用.肝组织HBsAg免疫组织化学蛋白平均吸光度分析显示, 50 μg和100 μg PTD-HBcAg融合蛋白组中平均吸光度值与空白组和50 μg HBcAg组相比明显降低(127.77±4.92, 117.71±5.18vs 156.84±4.94, 138.70±5.92, 均P<0.05), 且组间比较差异有统计学意义.结论:PTD-HBcAg融合蛋白免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量, 显著降低血清中HBsAg及HBV DNA水平, 同时抑制肝脏中HBsAg的表达, 在HBV免疫治疗中具有抗病毒作用.     

胎盘HBsAg与新生儿乙型肝炎病毒血清学标志物的关系

目的 探讨HBsAg阳性孕妇胎盘HBsAg与新生儿HBV血清学标志物和HBVDNA的关系.方法 免疫组织化学亲和素-生物素复合物(ABC)法检测155例HBsAg阳性孕妇的胎盘HBsAg,ELISA法检测新生儿HBV血清学标志物,荧光定量PCR法检测新生儿血清HBVDNA.各指标阳性率的比较采用x2检验.结果 155例孕妇的胎盘各型细胞均存在不同程度的HBsAg阳性表达,总的胎盘HBsAg阳性58份,阳性率为37.4％;蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞和绒毛毛细血管内皮细胞HBsAg阳性各有58、40、29和11份,阳性率分别为37.4％、25.8％、18.7％和7.1％;胎盘从母体面的蜕膜细胞至胎儿面的绒毛毛细血管内皮细胞HBsAg阳性率逐渐下降(趋势x2=43.01,P=0.00).胎盘HBsAg阳性与新生儿HBsAg、HBeAg阳性均有关(x2=4.88,P＜0.05;x2 =3.86,P＜0.05),而与新生儿抗-HBe、抗-HBc无关(x2=3.36,P＞0.05;x2=0.00,P＞0.05).胎儿面的绒毛毛细血管内皮细胞和绒毛间质细胞HBsAg阳性时,新生儿HBsAg阳性的危险性高(OR=5.31,95 ％CI:1.38～20.40;OR=3.33,95％CI:1.16～9.52);而滋养层细胞和绒毛间质细胞HBsAg阳性时,新生儿HBeAg阳性的危险性较大(OR=3.04,95％ CI:1.45～6.39;OR=3.05,95％CI:1.32～7.03);胎盘HBsAg阳性与新生儿HBV DNA阳性无关(x2=0.09,P＞0.05).结论 越接近胎儿面的胎盘细胞HBsAg表达阳性,新生儿HBV血清学标志物阳性的危险性越大.HBsAg在胎盘中以“逐层转移”的方式进入胎儿血循环.     

表观扩散系数值与肝细胞癌分级的相关性以及相关性与肿瘤大小关系的分析

[摘要]　目的　探讨表观扩散系数（apparent diffusion coefficient, ADC）值与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织学分级的相关性以及不同直径肿瘤的ADC值与HCC的相关性。方法?回顾性分析2017年—2020年180例病理证实为HCC的病例资料,按肿瘤直径大小分为＜2 cm、≥2 cm且＜3 cm、≥3 cm且＜5 cm、≥5 cm 4组,标为I、II、III、IV组。分析ADC值与HCC组织学分级的相关性,并分析在不同直径肿瘤ADC值与HCC的相关性。结果?高、中和低分化HCC的ADC值分别为（1.159±0.302）×10-3、（0.951±0.213）×10-3和（0.811±0.239）×10-3 mm2/s,逐级降低（P＜0.05）。ADC值与总体HCC的组织学分级呈负相关（r=-0.474）,与I～III组HCC的组织学分级均呈负相关（r值分别为-0.663、-0.527、-0.364）,而与IV组HCC的组织学分级无相关性。结论?ADC值可以作为非侵入性预测HCC组织学分级的指标,预测结果受肿瘤大小影响,更适用于小肝细胞癌。     

Research and Evaluation of the Influence of the Construction of the Gate and the Influence of the Piston Velocity on the Distribution of Gases into the Volume of the Casting

Distribution of gasses to the cast volume and volume of pores can be maintained within the acceptable limits by means of correct setting of technological parameters of casting and by selection of suitable structure and gating system arrangement. The main idea of this paper solves the issue of suitability of die casting adjustment—i.e., change of technological parameters or change of structural solution of the gating system—with regards to inner soundness of casts produced in die casting process. Parameters which were compared included height of a gate and velocity of a piston. The melt velocity in the gate was used as a correlating factor between the gate height and piston velocity. The evaluated parameter was gas entrapment in the cast at the end of the filling phase of die casting cycle and at the same time percentage of porosity in the samples taken from the main runner. On the basis of the performed experiments it was proved that the change of technological parameters, particularly of pressing velocity of the piston, directly influences distribution of gasses to the cast volume.     

缺锌对孕鼠生长发育及其肝脏、胎盘中谷胱甘肽过氧化物酶及过氧化氢酶活性的影响

为观察喂养缺锌饲料对孕鼠生长发育及其肝脏、胎盘中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及过氧化氢酶(CAT)活性的影响。将16只受孕Wistar鼠随机分为缺锌组(ZD组)、加锌组(ZS组)和正常对照组(ZC组),分别喂饲缺锌饲料、加锌饲料和基础饲料,记录每只孕鼠每日体重变化。于妊娠21日将孕鼠处死,取其肝脏、胎盘作GSH-PX和CAT活性测定。结果为ZD组孕鼠体重未见增加,SC组和ZS组孕鼠体重增加明显;与ZC组和ZS组相比,ZD组孕鼠肝脏和胎盘中GSH-PX活性显著降低(P<0.05),孕鼠肝脏和胎盘中CAT活性显著升高(P<0.05)。故认为缺锌可影响孕鼠肝脏、胎盘中谷胱甘肽过氧化物酶及过氧化氢酶活性,并影响其生长发育。     

Ligaments of the larynx and the adjacent pharynx and esophagus

Two ligament systems of the larynx are demonstrated by dissection. The suspensory ligament of the esophagus is attached to the posterior aspect of the cricoid cartilage and is also a part of the fascial sheath which is common to the hyoid, thyroid, and cricoid. The ligaments at the inner margins of the vocal, ventricular, and aryepiglottic folds are distinctive in site and, inferentially, in function. The aryepiglottic ligaments join at the incisura between the arytenoid cartilages and are continued as the corniculopharyngeal ligament which splays into the flexible tissues in the anterior wall of the hypopharynx, posterior to the suspensory ligament of the esophagus. These ligament systems are involved in two different actions in swallow. The gross superior and anterior motions of the larynx are transmitted to the esophagus by the suspensory ligament, so that the esophagus is elevated in relation to the bolus and is also opened. These esophageal displacements resemble, in effect, the swallow displacements of the pharyngoesophageal segment and of the constrictor wall of the hypopharynx. The marginal ligaments of the laryngeal folds help to implement the constriction and closure of the larynx during swallow. By anatomical inference, the corniculopharyngeal ligament effects vertical traction within the flexible tissues of the anterior wall of the hypopharynx.     

Humanism and the suffering of the people

Abstract
Humanism includes, among its many contexts, the ideal of the universal perfection of health. Procedures for alleviation of disease existed through all epochs of human history, but efficacy was mostly lacking. The prototypic humanism of the Renaissance ( ad  1300−1600) scarcely involved the medical ­sciences other than human anatomy. The Enlightenment of the seventeenth century included discovery of the circulation of the blood, and applications of microscopy. Discoveries relevant to medical practice began in the nineteenth century, ushered in by vaccination and the germ theory of disease. This 200-year period saw a transformation of human health according to the surrogate marker of increased life-­expectancy. This has been variously attributed to: (i) increased prosperity following the industrial revolution, (ii) efforts of humanistic social and public health reformers and, more recently, (iii) advances in medical science. Yet the beneficiaries remain a minority of the world's population. The nexus between poverty, illness and low life-expectancy between and within nations is the major challenge for the future. Contemporary science is providing ever-expanding knowledge on means to achieve the goal of perfection of human health, but the need for humanism is as great as at any previous age. Fortunately, however, the targets are more clearly visible than during the periods of poverty, plagues and pestilence of the past. (Intern Med J 2003; 33: 195−202)