不同热缺血时间的无心跳供肝在肝移植中应用的疗效评价

目的:探讨不同热缺血时间的无心跳供肝在临床肝移植中应用的疗效。方法:回顾性分析142例冷保存时间在12h之内的不同热缺血时间的无心跳供肝肝移植患者的临床资料, 根据热缺血时间分为3组：Ⅰ组为5 min之内, 43例; Ⅱ组为5～10 min, 77例; Ⅲ组为10～15 min, 22例。比较3组间肝移植术后谷丙转氨酶（ALT）峰值、原发性移植肝无功能、急性排斥反应、胆道并发症、血管并发症、感染以及移植肝存活和受体存活的差异。结果:3组患者术后均未发生原发性移植肝无功能。Ⅱ组术后ALT峰值及感染发生率显著高于Ⅰ组; 而Ⅲ组术后ALT峰值、胆道并发症发生率、血管并发症发生率及感染发生率均显著升高。随访 8~32个月。Ⅲ组移植肝存活率及受体存活率均降低, 与Ⅰ组和Ⅱ组比较, 差异均有统计学意义。结论:冷保存时间在12 h之内的无心跳供肝能耐受热缺血的安全时限为10 min; 热缺血时间大于10 min的供肝, 移植术后相关并发症发生率显著增加, 移植肝和受体存活率显著降低。     

供肝热缺血后对冷保存的耐受时限初步探讨

目的探讨供肝热缺血后耐受冷保存的安全时限。方法利用本组所建立的小型猪肝移植模型，设定供肝热缺血时间为20min，根据在UW液中的冷保存时间不同分为3组，分别冷保存12、16、20h，于肝移植术中及术后检测肝功能、肝脏病理、肝组织ATP含量、移植肝脏再灌注后微循环血流量及动物术后1周存活率。结果uw液冷保存12h组肝移植后小型猪1周内全部存活，而冷保存16、20h组存活率分别为20％、0％；随着冷保存时间的从12h延长到20h，ALT、AST逐渐上升，肝脏ATP含量、肝脏微循环血流量逐渐下降，形态学结果显示肝组织细胞变性、坏死及超微结构损害的程度逐渐加重。冷保存12h组与后两组上述指标存在显著性差异，生化及肝脏微循环指标的改变与病理结果及动物生存率相符合。结论在本实验条件下，热缺血时间为20min的供肝耐受冷保存的安全时限约为12h。     

热缺血供肝耐受冷保存的时限研究

有研究表明，热缺血30min以内的供肝可考虑加以利用，本实验旨在探讨热缺血已达30min的供肝在UW液中冷保存的安全时限。     

供肝热缺血后对冷保存的耐受时限初步探讨

目的探讨供肝热缺血后耐受冷保存的安全时限。方法利用本组所建立的小型猪肝移植模型,设定供肝热缺血时间为20min,根据在UW液中的冷保存时间不同分为3组,分别冷保存12、16、20h,于肝移植术中及术后检测肝功能、肝脏病理、肝组织ATP含量、移植肝脏再灌注后微循环血流量及动物术后1周存活率。结果UW液冷保存12h组肝移植后小型猪1周内全部存活,而冷保存16、20h组存活率分别为20%、0%;随着冷保存时间的从12h延长到20h,ALT、AST逐渐上升,肝脏ATP含量、肝脏微循环血流量逐渐下降,形态学结果显示肝组织细胞变性、坏死及超微结构损害的程度逐渐加重。冷保存12h组与后两组上述指标存在显著性差异,生化及肝脏微循环指标的改变与病理结果及动物生存率相符合。结论在本实验条件下,热缺血时间为20min的供肝耐受冷保存的安全时限约为12h。     

供肝切取与保存16例体会

目的 探讨肝移植时快速切取供肝技术与保存方法。方法 结合我肝移植中心患者临床资料,回顾性分析16例供肝切取和保存方法。结果 16例供肝热缺血时间为3－6min,冷缺血时间为7－11h,供肝血管、胆管均完好,13例肝移植患者术后均未出现移植肝原发性无功能等严重并发症。结论 能否快速切取供肝和妥善保存是肝移植能否成功的重要保证之一。     

肝移植供肝的保存

保持供体器官离体后的活力,对于移植后器官迅速恢复功能和存活是十分重要的.迄今为止,肝移植供肝的静态低温保存仍是普遍采用的方法.虽然这种方法简单而且有效,但是随着供体老年化、边缘化和心跳停止供肝数量的增加,导致供肝的质量日益恶化,静态低温保存能否继续保持供肝活力令人怀疑.本综述介绍供肝保存及器官保存液的发展历史及最新进展,包括低温机器灌注.尽管低温机器灌注可能优于静态低温保存,但是供肝仍然存在低温相关损伤.因此,最近已有科研机构开始重视常温机器灌注的研究,并有望成为肝脏移植保存的新方法.     

大鼠供肝冷缺血时间与肝移植术后受者肺损伤的关系

目的 探讨大鼠供肝冷保存时间与肝移植术后受者肺损伤的关系。方法 用Wismr大鼠建立原位肝移植模型，按供肝冷保存时间的不同分为5组（n=10），A组为假手术组，B组、C组、D组及E组的供肝冷保存时间分别为45min、90min、120min及180min。各组大鼠在移植肝恢复血流180min后处死，观察肺组织病理学变化，测定肺组织湿干重比值（W／D）、肺组织中髓过氧化氢酶（MPO）的活性，同时检测肝脏流出道血清肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素18（IL-1β）的水平以及肺组织中TNF-α和IL-1β的表达。结果随着供肝冷保存时间的延长，肝脏流出道血清TNF-α和IL-1β水平及肺组织中TNF-α和IL-1β的表达均逐渐升高，肺组织W／D和MPO活性逐渐增高，肺损伤加重。结论供肝冷缺血时间与肝移植术后受者肺损伤相关，肺损伤随供肝冷缺血时间的延长而加重；血清中TNF-α和IL-1β升高及肺组织中TNF-α和IL-1β表达上调可能与肝移植后的肺损伤有关。     

冷保存大鼠部分肝移植模型的建立

目的建立稳定的大鼠部分肝移植模型，研究冷保存对部分肝移植后肝再生的影响。方法采用雄性SD大鼠，双袖套法行部分肝移植，观察不同冷保存时间受体生存状况以及各组手术情况。结果各组移植肝平均体积为62％-64％，无肝期为14-15min。长时间冷保存后大鼠7d存活率明显下降，生存分析显示各组间差异有显性。8h冷保存后大鼠7d存活率为40％，与临床辟裂式肝移植1年生存率相似。结论8h保存大鼠部分肝移植模型是研究冷保存对部分肝移植肝再生影响的较好模型。     

供肝保存液的演变和革新

器官保存液能够改善移植物冷缺血损伤和维持移植物良好的功能。目前,如何减少供肝在冷缺血期间引起的一系列损伤,改善和提高移植物的保存质量,是目前该领域研究的热点和难点。现阶段,临床上的保存液仍未达到理想的保存效果,尤其是对于边缘供器官的保护作用不尽如人意。在当今供者极度匮乏的情况下,为了改善移植物免受冷缺血损伤,其关键要素仍然是寻求最佳的供肝保存方案。本文总结了供肝在冷缺血期间的损伤机制,保存液的分类及供肝保存液的演变历程,探讨了供肝保存液的发展方向及面临的困境,为供肝保存液的研发提供新思路和参考。     

脂肪变性供肝在背驮式肝移植中的应用

目的 探讨脂肪变性供肝(SLD)在背驮式肝移植中的应用.方法 将64例SLD进行了背驮式肝移植,其中脂肪变性程度分级为轻(S1级)、中(S2级)、重(S3级)者分别为22、25和17例,随机抽出同期80例供肝无脂肪变性者作为对照.观察手术当天受者的肝、肾功能,术后近期肝功能恢复情况,术后1个月的并发症发生情况,以及受者的死亡情况.结果 与对照组比较,手术当天各级脂肪变性组的肝、肾功能的差异均无统计学意义(P＞0.05).术后21 d,对照组95％受者的肝功能恢复正常,S1级组、S2级组和S3级组分别为90.9％、80.0％和70.6％,S3级组有2例(11.8％)发生移植物原发性无功能.S1、S2和S3组分别与对照组比较,出血、感染、肝动脉栓塞、腹水、败血症等并发症发生率的差异有统计学意义(P＜0.05).术后1年内,对照组死亡2例,S1级组死亡1例,S2级组死亡1例,S3级组死亡5例.结论 SLD可以用于移植,但对重度脂肪变性肝脏的移植,即使在目前供者紧张的情况下,也应审慎进行.     

双层法氧合冷保存心跳停搏大鼠肝细胞移植研究

目的 观察双层法(TLM)氧合冷保存较UW保存能否改善心跳停搏供体(NHBD)肝细胞存活率和功能.方法 SD大鼠为供体,建立NHBD模型,NAPs大鼠为受体.根据热缺血时间(WIT)15 m/n和30 m/n分成2组;按TLM、UW分别保存3、12 h和未保存再各分5个亚组(n=5).检测NHBD肝细胞存活率和ATP水平,观察肝细胞移植(HTx)后肝细胞形态和功能.结果 TLM3、12 h组肝细胞存活率分别显著高于UW 3、12 h组[(69.7±4.1)%和(69.1±2.0)%比(55.1±2.3)%和(53.3±2.0)%;P<0.01];TLM 3、12 h组AlP水平分别显著高于UW 3、12 h组(3.25±0.79和3.06±0.67比2.25±0.53和1.63±0.40;P<0.05或P<0.01).HTx后几乎所有时间点TLM组血清白蛋白(ALB)水平都显著高于UW组(P<0.05或P<0.01).在HTx 14d后,形态学显示TLM组肝细胞保持强活力,糖原和ALB染色呈强阳性.结论 TLM氧合冷保存可显著改善和逆转NHBD肝细胞存活率和功能,减少NHBD肝细胞缺血性损伤.     

家犬无搏动供体心脏耐受热缺血时限的研究

目的 观察无博动供体(NHBDs)心脏可耐受热缺血的时限.方法 通过窒息法和放血法获得不同热缺血时间的家犬NHBDs心脏,以无热缺血心脏为对照组,其他各时间段为实验组,NHBDs心脏在4℃HTK液中保存2 h后进行原位心脏移植,供心复跳后继续辅助循环60min后撤机.监测再灌注3 h后的血流动力学参数,测定再灌注3 h后心脏组织含水量和超微结构改变.结果 窒息法获得的家犬NHBDs心脏能耐受的热缺血时间为16 min,热缺血17 min为其功能转折点;放血法获得的家犬NHBDs心脏能耐受的热缺血时间为27min,热缺血28min为其功能转折点.在热缺血安全时限点获得的NHBDs心脏用于移植后,窒息法NHBDs心脏的左室舒张功能(-dp/dtmax)要低于放血法NHBDs心脏(1361.68±231.47比1641.68±192.47,P＜0.05),但两者在左室收缩功能上差异无统计学意义(P＞0.05).结论 窒息法和放血法获得的家犬NHBDs心脏在耐受热缺血时都存在功能转折点,两者之间相差有11min.在热缺血安全时限内保存2 h的犬NHBDs心脏均成功用于移植,这为NHBDs心脏的初步活性判断提供实验依据.

Abstract：

Objective To study the warm ischemia time limit of non-heart-beating donors ( NHBDs) heart for transplantation. Methods The NHBDs heart endured different warm ischemia time limit by asphyxiation or depletion method in Canis familiaris ( 15 ± 3) kg, being harvested and preserved in 4 ℃HTK solution for transplantation. The NHBDs heart endured 0 min warm ischemia time as control. All NHBDs hearts were preserved for 2 h and transplanted to weight-matched recipients. The assist circulation was removed when the donor heart re-beat for 60 min, and the hemodynamic parameters were monitored at 3 h after reperfusion. Meanwhile, cardiac ultramicrostructure was also examined at 3 h after reperfusion. Results The warm ischemia time limit was 16 min in NHBDs heart induced by asphyxiation, and 27 min in NHBDs heart induced by depletion method in Canis Familiaris. The diastolic function of left ventricle ( - dp/dtmax) was decreased significantly in asphyxiation NHBDs heart ( 1361.68 ± 231.47 vs 1641.68 ±192.47 ,P ＜0. 05), but there was no significant difference in contractile function between asphyxiation or depletion Methods (P ＞ 0. 05 ). Conclusion The NHBDs heart harvested by asphyxiation or depletion method in Canis Familiaris all had a warm ischemia time limit and break point of function.     

Influence of cold ischemia time and graft transport distance on postoperative outcome in human liver transplantation

Purpose: The association between hepatic allograft cold ischemia time (CIT) and graft transport distance (GTD) in human liver transplantation was examined by investigating whether extended graft transportation prolongs the CIT and adversely affects graft survival. Methods: We retrospectively analyzed 186 consecutive orthotopic liver transplants (OLTs) done between May 1997 and July 1998. The number of miles from the donor hospital to the University of Pittsburgh Medical Center in a straight line was measured in each case, and defined as the GTD. The OLTs were divided into two groups according to whether the GTD was ≤200 miles or >200 miles. The latter group was then subdivided into groups of GTD 200–400 miles, GTD 400–600 miles, and GTD >600 miles. The CIT and graft outcome within 90 days after OLT were assessed. Results: Extended GTD prolonged the CIT (P < 0.001). The rate of hepatic allograft loss in the long GTD group was significantly higher than that in the short GTD group (P= 0.018). When the OLTs were subdivided according to GTD, the CIT increased and graft survival decreased as the GTD extended. Hepatic allograft transportation for a long distance prolonged the CIT and decreased the graft survival rate. Conclusion: Since prolonged CIT is a major risk factor, avoiding long-distance graft transportation is recommended when the donor risk factors are high. Received: September 6, 2001 / Accepted: March 5, 2002     

Successful liver transplantation from agonal non-heart-beating donors in pigs

An effective way to overcome shortage of donors in liver transplantation (LTx) is to consider such from non-heart-beating donors (NHBDs). We investigated how a liver graft should be treated before and/or after procurement for successful LTx from an NHBD. Porcine LTx was performed with FR167653 (FR), a dual inhibitor of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and interleukin-1beta (IL-1beta), and/or prostaglandin E(1) (PG). Animals were allocated to an FR group (n=4, donors and recipients were treated with FR), a PG group (n=4, donors and recipients were treated with PG), or an FRPG group (n=4, donors and recipients were treated with both FR and PG). No recipients in the FR group and only two of four recipients in the PG group survived, whereas all recipients in the FRPG group survived. Suppression of TNF-alpha and IL-1beta and maintenance of microcirculation are the key to successful transplantation from NHBDs.     

冷保存对大鼠部分移植肝再生的影响

目的探讨冷保存对大鼠部分肝移植术后肝再生的影响。方法健康SD大鼠分为Ⅰ组（肝切除组）、Ⅱ组（冷保存1h部分肝移植组）和Ⅲ组（冷保存8h部分肝移植组）。观察各实验组生存率，比较各组术后1、6、12、24、48、72、168h肝质量／体质量比率、肝再生率、有丝分裂指数及增殖细胞核抗原表达。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组7d存活率分别为100％、90％、40％；Ⅲ组术后2～3d大鼠肝质量／体质量比率、肝再生率、有丝分裂指数较Ⅰ、Ⅱ组明显偏低（P〈0．05）；Ⅲ组术后12h内增殖细胞核抗原表达较其余两组明显偏低（P〈0．05），48h才达高峰，至第7天阳性表达仍处高水平。结论长时间冷保存降低了部分肝移植术后的肝再生能力和大鼠术后生存率。     

Effects of portal vein clamping time on rat liver microcirculation following extended cold preservation and transplantation

Orthotopic rat liver transplantation (ORLT) following extended cold preservation in University of Wisconsin (UW) solution has been shown to induce alterations of the hepatic microcirculation, mainly characterized by areas of no-reflow. The present study was performed to determine whether these alterations were related to the portal vein clamping time (PVCT), shown to be the main determinant of survival after ORLT. The hepatic microcirculation was evaluated using the multiple-indicator dilution curve (MIDC) technique after ORLT following 24-hour cold ischemia in UW solution. Two groups of rats were studied: one with PVCTs of less than 14 min (survival conditions) and one with PVCTs of more than 18 min (nonsurvival conditions). Four hours after ORLT, only long PVCTs were associated with small, but significant, nonperfused areas, about 10 % of the liver not being perfused by water; however, in both survival and nonsurvival conditions, the sinusoidal sieving function was well-maintained in perfused areas. In addition, liver viability parameters and hepatocyte function were similarly and minimally altered. The hepatic microcirculation is minimally altered 4 h after ORLT following extended cold preservation in UW solution, whatever the survival condition. Although only found after long PVCTs, the low magnitude of areas of no-reflow should not be associated with lethal injury of the transplanted liver, a finding further supporting the concept that survival after ORLT following 24-hour cold preservation in UW solution is mainly influenced by extrahepatic factors. Received: 1 December 1998 Received after revision: 6 May 1999 Accepted: 19 July 1999     

热缺血损伤对大鼠移植肝组织能量代谢及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠肝组织能量代谢变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45和60min,随机分为7组。采用反相高效液相色谱法测定单纯热缺血后肝组织能量代谢指标并进行超微结构的观察。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察移植后24、48h各组肝组织能量代谢指标的恢复性变化,并统计生存时间。结果：供肝经受热缺血损伤后,肝组织ATP含量和EC水平远逐渐下降,其中前30min下降比较急剧,以后趋向平缓。热缺血30min内肝组织ATP含量和EC水平在肝移植再复流24h后基本得到恢复,术后大鼠仍可以获长期存活。45min组,移植肝在48h后能量代谢的功能也基本恢复,虽不足以影响术后的1周存活率,但对大鼠肝移植术后的3个月存活率影响显著。60min组,肝脏能量代谢储备功能难以恢复,大鼠术后生存天数显著降低。结论：供肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量和能荷（EC）水平以及其移植术后恢复的潜能是衡量供肝质量的重要标准。供肝热缺血损伤的时间与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。     

无心跳供肝发生胆道严重缺血性病变的危险因素分析

目的 探讨无心跳供肝发生严重胆道缺血性病变的危险因素.方法 北京朝阳医院2002年7月至2006年6月实施的同种异体原位肝移植病例中排除肝肾联合移植、二次肝移植、供受体ABO血型不符病例,统计人选病例131例,术后随访时间均>180 d.排除混杂因素后采用Logistic回归分析缺血再灌注相关性严重胆道并发症的危险因素.结果 无心跳供肝胆道二次热缺血时间>60 min是术后严重缺血性胆道并发症的独立危险因素.热缺血与冷保存协同作用于供肝,单独或同时延长热缺血、冷保存时间,术后严重缺血性胆道并发症发生率增高.结论 无心跳供肝热缺血或冷保存时间延长的协同作用以及胆道二次热缺血时间>60 min是肝移植术后严重缺血性胆道并发症的危险因素.将热缺血时间带入拟合直线回归方程可预知冷保存时间的相对"安全"时限.