多聚酶链式反应速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）以３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＤＮＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融融解法快提切片ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸色性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ〈０．０１）。说明ＰＣＲ用于活检组织诊断理一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此     

石蜡包埋组织中结核菌DNA与抗酸菌L型检测意义的探讨

３５例病理及临床证实结核和１０例正常胎儿石蜡包埋组织在进行了ＩＫ染色和ＰＣＲ检测发现：结核组３５例，ＩＫ染色：抗酸菌Ｌ型２８例（８０．８％），抗酸菌杆菌型２例，总阳性检出率为８５．７％（３０／３５）；ＰＣＲ检测；ＴＢ－ＤＮＡ阳性２９例（８５．７％）。两种方法的阳性检出率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。１０例正常胎儿对照两法检测均无１例阳性，提示：两法对石蜡包埋组织中的抗酸菌Ｌ型及杆菌型检测，都具有较     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

联合检测胸水中TB-Ab和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值

目的 评价检测胸水中结核抗体（TB-Ab）和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值。方法 以胸水为标本，用斑点免疫金渗试验检测结核抗体，用荧光探针PCR（TaqManPCR）技术检测TB-DNA，同时对胸水进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果 179例结核性胸膜炎胸水．结核抗体阳性率为60．89％（109／179）、TB-DNA阳性率为63．13%（113／179），TB-Ab阳性及，或TB-DNA阳性共135例（75．4％）．涂片抗酸染色阳性率为1．1%（2／179）、罗氏培养阳性率为1．68％（3／179）。30例非结核性胸膜炎胸水，结核抗体阳性率为6．67％（2／30），TaqManPCR、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论 结核抗体和TB-DNA均是诊断结核性胸膜炎的较好指标．两者联检可进一步提高检测敏感性。     

胸水细胞蜡块抗酸染色在诊断结核性胸膜炎中的应用研究

目的 探讨胸水蜡块抗酸染色诊断结核性胸膜炎的价值。方法 对77例结核性胸膜炎患者胸腔积液同时进行常规的胸水涂片检查和胸水离心沉淀物行石蜡切片,进行抗酸染色,统计抗酸染色阳性率。结果 胸水常规涂片发现2例患者（2.6%）抗酸染色阳性;而胸水细胞蜡块有12例患者（15.58%）抗酸染色阳性。两者的抗酸染色阳性率统计分析得P=0.009375。结论 胸水沉淀后制作细胞蜡块进行切片抗酸染色,可以显著提高结核分枝杆菌的检出率。能够为结核性胸膜炎的诊断提供病原学的依据,具有较高的诊断意义。     

FQ-PCR检测肠黏膜结核杆菌DNA对肠结核的诊断价值

目的建立一种实时定量检测结核分枝杆菌（MTB）插入序列IS6110 DNA的方法,探讨其在肠结核（ITB）诊断中的价值。方法采用FQ-PCR技术对36例内镜活检ITB标本（30例石蜡、6例新鲜组织）、36例Crohn’s disease标本（16例石蜡手术标本,15例石蜡内镜活检标本,5例新鲜内镜活检组织）及34例阴性对照标本进行IS6110 DNA的实时定量检测,并比较上述标本抗酸染色结果。结果13例ITB抗酸染色阳性,CD无1例阳性,抗酸染色对ITB诊断的敏感性36.11%。MTBIS6110DNA检测结果：23例ITB（63.89%）阳性,6例CD（16.67%）阳性,另有1例阳性为升结肠腺癌癌旁正常组织。MTBIS6110 DNA在ITB与CD中的阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。FQ-PCR对ITB诊断的敏感性为63.89%,特异性83.33%。FQ-PCR敏感性显著高于抗酸染色（P〈0.05）。MTBIS6110 DNA阳性的ITB标本其定量结果范围为2.44×10^-4-2.26×10^1拷贝/细胞。结论FQ-PCR检测MTBIS6110 DNA是一种快速有效的ITB诊断方法,其定量范围广,检测灵敏度高。对活检组织少、病理改变不典型、抗酸染色阴性组织的诊断和鉴别诊断尤有意义。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

PCR检测技术在结核病诊断中的价值

用ＰＣＲ技术对１７５例临床可疑结核病，但常规培养或抗酸染色阴性的病理标本中结核菌ＤＮＡ进行了检测。结果发现有２２．３％（３９／１７５）的样本结核菌ＤＮＡ阳性。结果提示，ＰＣＲ技术在检测结核菌ＤＮＡ中具有简便、快速和灵敏的特点，其阳性结果说明被测样品中有结核菌的存在，对结核病的确诊有重要辅助意义。     

不同分子检测方法在肺结核诊断中的应用评估

摘要：目的 探讨不同分子检测方法在肺结核诊断中的应用价值。 方法 回顾性选取 ２０１９ 年 １ 月至 ２０２０ 年 １２ 月南京市第 二医院收治的住院患者 ２９３ 例，依据最终临床诊断分为肺结核组 １７１ 例，非结核肺病组 １２２ 例。 所有患者均采集痰液标本，进 行痰抗酸染色涂片、ＢＡＣＴＥＣ ＭＧＩＴ ９６０ 分枝杆菌快速培养、荧光定量 ＰＣＲ（ＦＱ?ＰＣＲ）检测结核分枝杆菌 ＤＮＡ、结核分枝杆菌 ＲＮＡ 恒温扩增检测技术（ＳＡＴ?ＴＢ）和结核分枝杆菌／ 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ）检测。 结 果 ２９３ 例患者中，最终临床诊断肺结核 １７１ 例，非结核肺病 １２２ 例；痰涂片总阳性 ７０ 例（２３．８９％），其中有 １３ 例经菌种鉴定 为非结核分枝杆菌；快速培养总阳性 ７０ 例（２３．８９％），ＳＡＴ?ＴＢ 总阳性 ５６ 例（１９．１１％），ＦＱ?ＰＣＲ 总阳性 ７５ 例（２５．６０％），Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 总阳性 ８５ 例（２９．０１％）；５ 种方法的敏感性分别为 ３３．３３％、４０．９４％、４３．８６％、３２．７５％、４９．７１％，痰涂片的特异性和阳性 预测值为 ８９．３４％、８１．４３％，其余方法均达 １００％，其中 Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 和临床诊断一致性最高（Ｋａｐｐａ ＝ ０．４５１）；１７１ 例肺结核患 者中，痰涂片阴性 １１４ 例（ ６６． ６７％），培养阴性 １０１ 例（ ５９． ０６％）；涂阳培阴肺结核 ８ 例（ ４． ６８％）、涂阳培阳肺结核 ４９ 例 （２８．６５％）、涂阴培阳肺结核 １９ 例（１１．１１％）、涂阴培阴肺结核 ９５ 例（５５．５６％），Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 在涂阳培阴肺结核、涂阳培阳肺 结核、涂阴培阳肺结核、涂阴培阴肺结核 ４ 组患者中的阳性检出率均最高（３７．５％、９７．９６％、７８．９５％、１７．８９％）。 结论 Ｘｐｅｒｔ ＭＴＢ／ ＲＩＦ 具有较高的阳性检出率、敏感性和特异性，与临床诊断的一致性较好，在肺结核诊断中具有较高的应用价值，适合推 广使用。     

结核感染T细胞、结核抗体、抗酸染色3种方法的临床评价

目的评价结核感染T细胞检测、结核抗体、抗酸染色3种方法检测对结核病诊断的价值。方法对怀疑结核的患者标本进行抗酸染色的检测、结核感染T细胞检测、结核抗体的检测,最后对3种方法的结果对结核病的诊断效果进行判断。结果本研究共纳入80例患者,抗酸染色阳性的24例,结核感染T细胞检测四项结果均阳性的58例,结核抗体阳性的65例,最终确诊结核患者为62例。结论 3种方法中抗酸染色作为一个传统的方法不可丢弃,抗酸染色的方法最可靠,但是阳性率偏低;结核感染T细胞检测容易出现假阴性,此方法检测时间漫长,但是是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术;结核抗体检测容易出现假阳性(打过卡介苗的患者也可以出现阳性),也是一种不可缺少的辅助诊断方法。在对结核病的诊断过程中,三者进行联合检测可以增加了对结核病诊断的正确率,减少假阳性率与假阴性率。     

常规胃镜清洗消毒方法对HP的清除效果

为了解目前常规清洗消毒胃镜方法─—三步法对幽门螺杆菌（ＨＰ）清除效果,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及ＨＰ培养法对４２例患者胃镜检查完,清洗消毒前后的胃镜活检通道冲洗液进行了检测,结果３１例（７３．８％）为ＨＰ感染者,ＰＣＲ检测清洗消毒前冲洗液有２６份（８３．９％）为阳性,清洗消毒后仍有９份（３４．６％）为阳性;而培养在清洗消毒前有１２份（３８．７％）为阳性,清洗消毒后均为阴性。另有２例患者胃窦粘膜组织Ｗａｒｔｈｉｎ－Ｓｌａｒｒｙ（Ｗ．Ｓ）染色ＨＰ为阴性者,胃镜检查后,其清洗消毒前冲洗液ＰＣＲ检测为阳性,清洗消毒后均为阴性。提示：目前胃镜清洗消毒方法对ＨＰ的灭活是有效的,但仍有ＨＰ的菌体或ＤＮＡ片段残留,还应该加强对胃镜的冲洗。     

结核分枝杆菌DNA实时定量PCR技术在临床病理诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)在临床组织病理学诊断中的应用价值。方法收集我院2013年5月-2015年2月临床确诊的144例结核病(tuberculosis,TB)患者,对其石蜡包埋组织标本行组织病理学检查,并同时采用组织切片抗酸染色及FQ-PCR技术检测MTB-DNA,并对这三种方法的阳性检出率进行比较。结果在144例临床诊断TB患者的石蜡包埋组织中,FQ-PCR法检测MTB阳性68例,阳性率为47.22%,抗酸染色法检测阳性22例,阳性率为15.28%,组织病理学法检测阳性74例,阳性率为51.39%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P0.01)。FQ-PCR法对肺活检标本、肺叶切除标本和胸膜活检标本MTB的阳性检出率均高于组织病理学法和抗酸染色法;对淋巴结活检标本和其他组织标本的阳性检出率高于抗酸染色法,但低于组织病理学法。结论 FQ-PCR技术简便、快捷,敏感性明显好于传统抗酸染色法,可作为TB分子病理诊断的重要检测方法,为组织病理学诊断提供可靠的依据,具有较高的临床应用价值。     

应用一致性检验对泌尿系结核3种检测方法的评估

目的评价结核分枝杆菌rpob基因和突变检测技术(Xpert MTB/RIF)、结核杆菌固体培养与抗酸染色镜检对泌尿系结核的诊断效能及其一致性。方法采用随机双盲、"金标准"对照的临床诊断实验设计,收集临床泌尿系结核可疑患者163例的晨尿,分别应用Xpert MTB/RIF、结核杆菌固体培养与抗酸染色镜检进行检测。以临床综合诊断作为泌尿系结核诊断的"金标准",评价3种检测方法的诊断效能并比较其检测结果的一致性。结果 163例患者尿标本使用Xpert MTB/RIF检出结核阳性51例(31.29%),结核杆菌固体培养法检出结核阳性40例(24.54%),抗酸染色镜检检出结核阳性39例(23.93%)。与"金标准"临床诊断泌尿系结核诊断比较,Xpert MTB/RIF检测和结核杆菌固体培养具有极高的一致性,抗酸染色镜检的一致性较弱。结论3种实验室检测方法均适用于临床泌尿系结核的诊断,其中结核杆菌固体培养法与临床综合诊断法具有更高的一致性。Xpert MTB/RIF不仅具有高度的一致性而且具有更高的灵敏度,适用于泌尿系结核的快速诊断。     

常规胃镜清洗消毒方法对HP的清除效果

为了解目前常规清洗消毒胃镜方法－－三步法对幽门螺杆杆菌（ＨＰ）清除效果,采用聚合酶锭反应（ＰＣＲ）及ＨＰ增减法对４２例患者胃镜检查完,清洗消毒前后在胃镜活检通道冲洗液进行了检测,结果３１例（７３．８％）为ＨＰ感染者,ＰＣＲ检查清洗消毒前冲洗液有２６份（８３．９％）为阳性,清洗消毒后仍有９份（３４．６％）为阳性;而增减清洗消毒前有１２份（３８．７％）为阳性清洗消毒后均为阴性。另有２例２胃窦膜组织Ｗａ     

PCR法诊断肺结核的研究

肺结核诊断一般根据临床表现、χ线检查、痰涂片镜检及结核菌培养等传统方法。但为了快速敏感、特异及早期诊断，我们自１９９６年２月至１９９８年５月用ＰＣＲ技术检测１６８例肺结核患者，现报告如下。材料与方法１６８例痰标本来源于我院传染科住院病人，留取晨痰，根据临床表现、χ检查及细菌学检验（涂片、ＰＣＲ）、血抗结核抗体诊断为肺结核。（ＰＣＲ诊断试剂由华远生物技术研究所提供）。其中男９１例，女７７例，年龄１６～７９岁，平均３５－４岁。晨痰标本直接涂片抗酸染色镜检。并用ＥＬＩＳＡ方法检测病人血清中特异性的结核…     

PCR法检测细针穿刺标本中的结核杆菌

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对６８例肺外肿块细针穿刺标本，进行结核病病原学诊断，结果２０例结核杆菌ＰＣＲ呈阳性，其中７例经手术活检，１３例经细胞学诊断，均证实为肺外结核病。４８例结核杆菌ＰＣＲ阴性者，均经细胞学诊断为非结核病。提示：用ＣＰＲ法检测肺外肿块细针穿刺标本中的结核杆菌，在鉴别诊断肺外结核病方面具有重要的意义。     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者．20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测．同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果73例结核性胸膜炎胸水,噬菌体生物扩增法阳性率为49．3％（36／73）、涂片抗酸染色阳性率为2.7％（2/73）、罗氏培养阳性率为4．1％（3／73）。20例非结核性胸膜炎。噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法．     

结核-聚合酶链反应在诊断结核性胸腔积液中的价值

目的：阐明结核－聚合酶链反应（ＴＢ－ＰＣＲ）在诊断结核性胸腔积液中的作用。方法：以胸膜活检病理结果为标准，总结了１１８例胸腔积液ＴＢ－ＰＣＲ的检测结果，并与结核菌涂片，培养两种方法进行对比，结果：ＴＢ－ＰＣＲ，涂片，培养三种方法的阳性率分别为３３％，０和５％，前者高于后两者（Ｐ〈０．００１），但ＴＢ－ＰＣＲ的假阴性率较高（６７％），结论：用ＴＢ－ＰＣＲ法诊断结核性胸腔积液的价值有限，最好做胸膜活检     

用聚合酶链反应和地高辛系统检测t（14;18）

探索聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛系统检测ｔ（１４；１８）的特异性和敏感性，方法用该法检测了不同来源ＤＮＡ标本中的ｔ（１４；１８）。结果３株阳性对照细胞系，１４例滤泡性非何灰金淋巴瘤（ＦＮＨＬ）中１３例，４例弥漫性非何杰金淋巴瘤（ＤＮＨＬ）中２例的ＤＮＡ内检出ｂｃｌ－２ＪＨ基因；阴性对照细胞系，正常人和其他肿瘤ＤＮＡ中均未检出ｔ（１４；１８），ＤＮＡ序列测定结果亦证实检出的阳性片段确实为ｂｃｌ－２     

噬菌体生物扩增法结合荧光染色法快速检测结核分枝杆菌

目的通过用噬菌体生物扩增法（PhaB）结合荧光染色法检测51例标本中的结核分枝杆菌，与抗酸染色和X线比较，来探讨此检测方法的临床价值。方法标本来源于门诊和住院病人，将每例标本进行噬菌体生物扩增法检测，并涂片进行抗酸染色法、结核杆菌荧光染色法检测，并与X线诊断结果和最后临床诊断进行比较，数据采用χ^2统计分析。结果噬菌体生物扩增法检出阳性率与X线检查阳性检出相符率、临床最后诊断相符率分别达95．0％和96．55％，诊断比较差异无显著性（P〉0．75）。而用单纯的抗酸染色法检查，相符率分别只达45．0％和62．07％，差异有显著性。结论采用噬菌体生物扩增法结合荧光染色法较单纯的抗酸染色法检查结核分枝杆菌阳性检出率和与临床最后诊断相符率显著增高，是一种敏感性高，特异性强，快速、简便和无创的检测方法，对防止漏诊，病情观察、疗效判断为临床提供了可靠的依据。