何首乌提取物对人乳腺癌细胞脂肪酸合酶的抑制研究

目的 研究何首乌提取物对人乳腺癌MCF7细胞脂肪酸合酶(fatty acid synthase，FAS)的抑制作用。方法 MTT法测定人乳腺癌MCF7细胞增殖速度，采用超速离心技术部分纯化人乳腺癌MCF7细胞FAS。不同浓度何首乌提取物与FAS相互作用不同时间后，加入底物，用分光光度法观察何首鸟提取物对FAS的抑制作用。结果 何首鸟提取物对人乳腺癌MCF7细胞的增殖有一定的抑制作用。人乳腺癌MCF7细胞FAS被部分纯化，三种浓度何首乌提取物(0．1，0．5，1g／L)与FAS在催化前相互作用0、5和10min，对FAS活性的抑制率分别为24．60％、27．30％、and42．75％(0．1g／L)；43．50％、50．30％、and94．03％(O．5g／L)；98．60％、97．30％ and97．05％(1g／L)。结论 何首乌提取物对人乳腺癌MCF7细胞FAS具有抑制作用；作用强度既依赖于抑制剂浓度，又依赖于抑制剂与酶相互作用时间。     

青蒿素和青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用比较研究

目的 对比研究青蒿素及其衍生物青蒿琥酯对人乳腺癌MCF—7细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法 采用体外培养的人乳腺癌MCF—7细胞株，利用SRB法测定青蒿素和青蒿琥酯对MCF—7细胞增殖的影响，FCM法测定细胞周期的变化，亚Gl期含量测定和DAN荧光染色法观察细胞凋亡。结果 10μmol/L青蒿素和lμmol/L青蒿琥酯能明显改变MCF—7细胞的细胞周期，使S期细胞显著减少，G0 Gl期细胞明显增加。青蒿素对MCF—7细胞增殖仅有微弱抑制作用，但其衍生物青蒿琥iB却有显著的抑制作用，IC50为0．3lμmol/L。同样，lμmol/L青蒿琥酷引起MCF—7细胞的凋亡和直接的细胞毒作用明显强于10μmol/L青蒿素的作用。结论 体外研究表明，对肿瘤细胞增殖的抑制青蒿琥酯比青蒿素作用强。     

山楂提取物对脂肪酸合酶的体外抑制作用

[目的]研究山楂提取物对脂肪酸合酶(FAS)的体外抑制作用,并初步探索抑制作用机制。[方法]采用紫外—分光光度法,通过监测340 nm下还原型辅酶Ⅱ(NADPH)吸光度值的变化,测定FAS全反应及不同反应中心的活性,研究不同剂量山楂醇提物和水提物对FAS体外抑制作用。[结果]山楂水提物给药浓度为100μg/mL时,酶剩余活性为34.2%,醇提物给药浓度达到150μg/mL时,仍剩余64.2%的酶活性。两者都作用于FAS结构域中的酮酰还原域(KR)和烯酰还原域(ER),并且这两个结构域是山楂醇提物抑制FAS的重要作用位点。[结论]山楂提取物对FAS存在抑制作用。     

核受体激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶的调节作用

目的：探讨各种核受体包括过氧化酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和α(PPARα)、维甲酸受体(RAR)、维甲类X受体(RXR)、维生素D受体(VDR)、甲状腺素受体(TR)和糖皮质激素受体(GR)的激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性的调节作用。方法：测定人卵巢颗粒细胞和MCF—7细胞在上述各种核受体激动剂处理前后芳香化酶活性的变化和细胞色素P450芳香化酶(P450arom)mRNA的表达水平。结果：(1)PPARγ和RXR激动剂均能显著抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性，两者结合使用抑制作用更进一步增强，并且伴有P450arom mRNA水平下降；(2)RAR和RXR激动剂合用能显著刺激乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性，并使P450arom mRNA表达水平升高。结论：人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性受不同的核受体激动剂调节。     

野鸢尾黄素对人乳腺癌细胞MCF7增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨野鸢尾黄素对人乳腺癌细胞MCF7增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的作用机制。方法 将MCF7细胞分为低剂量组、高剂量组和对照组。低、高剂量组分别加入40μmol/L和80μmol/L野鸢尾黄素,对照组不加任何药物。用CCK-8实验检测细胞增殖能力,用细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,用Tranwell小室实验检测细胞的侵袭能力,用蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白及p-GSK-3β-ser9的表达水平。结果 干预48 h后,对照组和低、高剂量组的细胞增殖率分别为(100±4.00)%、(62.9±2.60)%、(32.2±6.25)%,迁移的距离分别为(392±7.32)μm、(272±17.45)μm和(92±5.36)μm,侵袭细胞数量分别为(130±3.33)个、(96±3.33)个和(66±2.66)个,β-catenin相对GAPDH的相对表达量分别为0.567±0.06、0.312±0.06和0.243±0.05,p-GSK-3β-ser9相对GAPDH的相对表达量分别为0.501±0.06、0.236±0.04和0.166±0.03。低、高剂量组的上述指标分别与...     

人乳腺癌MCF—7细胞凋亡过程中p53与bcl—2表达的时序性

目的：研究细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２基因表达变化的时序关系，以探索ｐ５３调控ｂｃｌ－２的可能性。方法：选择具有野生型ｐ５３的人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系，用５－Ｆｕ为诱导剂诱导细胞凋亡；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２表达变化的时序性。结果：ｐ５３表达增高出现在ｂｃｌ－２表达降低之前。结论：ｐ５３在时序上具有作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的可能性     

乳腺癌相关成纤维细胞对MCF7细胞调控效应的研究

目的 研究乳腺癌相关成纤维细胞(CAFs)对MCF7细胞的调控效应,探讨肿瘤微环境在乳腺癌发展中的作用.方法 采用I型胶原酶法分离并培养CAFs.DCFHDA法进行活性氧自由基(ROS)检测.应用鸡胚卵黄囊尿囊膜进行血管生成实验.结果 共培养乳腺癌MCF7细胞和CAFs能促进二者增殖,并可促进ROS生成.在共培养体系中加入过氧化物酶能抑制ROS生成.另外,共培养能明显促进乳腺癌细胞新生血管的生成,而在CAFs中过表达过氧化物酶能显著抑制该过程.结论 CAFs对乳腺癌MCF7细胞的 ROS表达具有调节作用,并可促进肿瘤新血管生成.     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

新城疫病毒D90株对乳腺癌MCF－7细胞作用的实验研究

目的:国内外研究表明,新城疫病毒在体内外对多种肿瘤具有明显抑制作用?本研究旨在探讨新城疫病毒D90株体外对乳腺癌MCF－7细胞的作用及可能机制?方法:CCK－8法检测MCF－7细胞增殖抑制;光学显微镜及DAPI染色观察D90株对MCF－7细胞形态学影响;流式细胞术检测MCF－7细胞凋亡率;Western blot检测MCF－7细胞凋亡相关蛋白的表达情况?结果:D90株对MCF－7细胞具有显著抑制作用并呈浓度和时间依赖性;D90株能够诱导MCF－7细胞凋亡并调节凋亡相关蛋白的表达,包括上调Bax蛋白?下调Bcl－2蛋白,并促进Caspase－3和 Caspase－9的裂解活化?结论:D90株能够调节凋亡相关蛋白的表达,并促进Caspase－3和 Caspase－9的裂解活化,通过线粒体途径诱导MCF－7细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性?     

银杏叶提取物对老年大鼠肠系膜微动脉一氧化氮合酶表达和一氧化氮释放的影响

目的 探讨银杏叶提取物( GBE)对老年大鼠肠系膜微动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达和一氧化氮(NO)释放的影响,初步阐明其血管保护作用的机制。方法 (1)细胞学实验：体外培养人脐静脉内皮细胞( HUVEC),分成对照组、eNOS阻断剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)组和GBE组。L-NAME组中加入100 μmol L-NAME孵育48 h;GBE组中先加入100 μmol L-NAME孵育24h,再加入GBE 20 g/L共同孵育24h。观察各组eNOS蛋白的表达。(2)动物实验：取24月龄雄性SD大鼠32只,抽签随机分为健康对照组（8只）和GBE组（分为3组分别给药3、5、7d,每组8只）,并分别测定20、40、60、80、100、120、140 mm Hg(l mm Hg=0.133 kPa)血管内压力下大鼠肠系膜一级微动脉的直径,推算血管的弹性,并检测大鼠肠系膜微动脉在15 dyn/cm2流体切应力刺激下NO的释放量以及eNOS蛋白与基因的表达。结果 (1)细胞学实验：L-NAME组HUVEC eNOS蛋白表达明显低于对照组和GBE组（0.57±0.06比0.96±0.05、0.81±0.09,均P＜0.01）。(2)GBE3、5、7d组大鼠肠系膜微动脉NO释放量(8.01±0.24、12.11 ±0.78、14.72 ±0.70) pmol·mm-2·min-1均显著高于健康对照组[(5.83 ±0.75) pmol·mn-2·min-1,均P ＜0.05],且7d组最高;大鼠肠系膜微动脉eNOS蛋白的表达也明显高于健康对照组（0.59±0.20、0.86±0.02、1.09±0.13比0.41±0.16,均P＜0.05）,且7d组最高;eNOS mRNA的表达也均高于健康对照组(0.79±0.04、0.85±0.07、0.99±0.03比0.58±0.05,均P＜0.05),且7d组最高。结论 GBE可能通过增加微动脉NO的释放量以及eNOS的表达改善血管的弹性,从而发挥保护血管的作用。     

脂肪酸合酶抑制剂阻遏人结肠癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨脂肪酸合酶抑制剂对人结肠癌细胞增殖的影响。方法：应用细胞形态学、ＭＴＴ法及成集落实验方法进行检测和观察。结果：癌细胞在脂肪酸合酶抑制剂浅蓝菌素作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量—效应关系。同时发现癌细胞呈现细胞凋亡的形态学改变。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质凝聚、边集或断裂。浅蓝菌素对人成纤维细胞增殖无明显影响。结论：脂肪酸合酶抑制剂可能通过抑制ＬｏＶｏ细胞内源性脂肪酸合成,诱发细胞凋亡来阻遏ＬｏＶｏ细胞的增殖。     

不饱和脂肪酸逆转乳腺癌细胞株耐药性研究

目的　探讨不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸 (DHA)是否能够逆转人乳腺癌细胞的多药耐药性(MDR)。方法　采用MTT法对DHA和阿霉素合用时肿瘤细胞的半数抑制率 (IC50 )进行检测。结果　DHA(10 μg/ml)组能提高MCF 7/R细胞株对阿霉素敏感性 3.2倍 ,DHA(2 0 μg/ml)组提高 5 .1倍 ,均有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　DHA能部分逆转乳腺癌耐药细胞对阿霉素的耐药性     

FASN和A-FABP在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与 临床病理学特征的关系

目的探讨脂肪酸合成酶(FASN)与脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)在乳腺浸润性导管癌(IDC)组织和人乳腺癌细胞系中的表达及其与临床病理学特征的关系,探讨FASN与A-FABP的相关性及其与癌细胞侵袭的关系。方法用免疫组织化学染色方法检测FASN与A-FABP在58例IDC组织及12例正常乳腺组织中的表达分布,根据阳性细胞数百分率及阳性沉淀物的显色程度计算阳性表达百分率;用细胞划痕实验检测SKBR3和MCF-7细胞的迁移侵袭性,并用Western blot方法检测FASN与A-FABP细胞在SKBR3和MCF-7细胞株中的表达差异。结果正常乳腺组织中FASN和A-FABP阳性表达率分别为8.3%(1/12)和16.7%(1/6),58例IDC组织中FASN、A-FABP阳性表达率分别为72.4%(42/58)、79.3%(46/58),FASN和A-FABP在正常乳腺组织中阳性表达率与IDC组织中阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),FASN和A-FABP在IDC有淋巴结转移、且肿瘤直径>2cm组织中阳性表达百分率较无淋巴结转移、肿瘤直径≤2cm组织中高,差异均有统计学意义(P<0.01);在IDC组中FASN与A-FABP表达具有相关性(r=0.797,P<0.001)。SKBR3细胞迁移率在划痕12、24h高于MCF-7细胞(P<0.05),FASN在SKBR3细胞中表达较MCF-7高。结论 FASN和A-FABP在乳腺浸润性导管癌组织中的表达与淋巴结转移及肿瘤大小有关,且在IDC组织中FASN与A-FABP表达存在相关性。在乳腺癌细胞株中FASN与乳腺癌的侵袭转移有关。     

葛根素糖苷生物合成及对乳腺癌细胞增殖抑制的影响

目的 研究约氏不动杆菌G2菌株对葛根素糖苷生物合成的最佳转化条件,以及葛根素糖苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖抑制作用。方法 考察生物合成体系中转化温度、pH和蔗糖浓度对转化率的影响;并以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）观察不同浓度的葛根素及葛根素糖苷对MDA-MB-231细胞生长的影响。结果 葛根素糖苷的最佳转化条件为温度30 ℃,pH 7.38,蔗糖浓度60 g/L,在此条件反应24 h,转化率为85%。MTT法显示,不同浓度的葛根素及其糖苷对MDA-MB-231细胞均有抑制作用,并随浓度升高而抑制作用增强;其中200 μmol/L浓度葛根素及葛根素糖苷作用MDA-MB-231细胞48h后,其抑制率分别为61.91%和59.42%。结论 约氏不动杆菌G2菌株可有效催化葛根素合成葛根素糖苷;葛根素及其糖苷均能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖。     

新藤黄酸对人乳腺癌耐药细胞体外作用的研究

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的作用.方法 采用MTT法观察GNA、阿霉素（adriamycin,ADR）及两者联用对MCF-7/ADR细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞仪观察MCF-7/ADR细胞内ADR浓度.结果 GNA能剂量依赖地抑制MCF-7/ADR细胞的生长,作用48 h时,GNA对MCF-7/ADR细胞的IC50为12.88 μmol/L;4 μmol/L GNA可增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性,使ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50由80.22 μmol/L降至12.54 μmol/L;GNA显著增强MCF-7/ADR细胞内ADR的积累,呈剂量依赖关系.结论 低剂量GNA能显著增加MCF-7/ADR细胞对ADR的敏感性.     

硒化不饱和脂酸及相应脂酸对人肝癌细胞株DNA合成的抑制作用

本实验以~3H-TdR(~3H-胸腺嘧啶核苷)掺入法研究了相同碳链长度的硒化不饱和脂酸及相应未硒化脂酸对7402人肝癌细胞株DNA合成的抑制作用。实验证明,终浓度为150ug/ml的受试物对人肝癌细胞株DNA合成的抑制作用以硒化亚麻酸量强,与硒化亚油酸、硒化油酸和油酸相比,差异非常显著(P<0.01),与亚油酸相比,差异显著(P<0.05),但与亚麻酸相比,差异未达统计学的显著程度(P>0.05),硒化亚油酸与亚油酸之间无差异(P>0.05),而硒化油酸与油酸则差异非常显著(P<0.01)。表明:含2-3个双键的脂酸,硒化与否,抑制癌细胞DNA合成强度差异不大,但对仅含一个双键者,硒化可显著增强对DNA合成的抑制作用。各种受试物对人肝癌细胞株的杀伤作用也以硒化亚麻酸最强。     

苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响 及其作用机制探讨

目的:观察苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTT法检测苦参碱对Bcap-37细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:苦参碱对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,药物作用24、48、72h后,苦参碱组的凋亡率均明显增高(P<0.01),并以作用48h最明显。Caspase-3、Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白降低。结论:苦参碱对Bcap-37细胞生长具有明显抑制作用,其作用机制可能与上调Caspase-3、Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关。     

缺氧对乳腺癌细胞MMP-2、u-PAR、FN表达的影响

目的研究体外缺氧对乳腺癌细胞系MCF7浸润能力及其细胞表面金属蛋白酶MMP-2、丝氨酸蛋白酶u-PA受体u-PAR和细胞基质蛋白FN的表达的影响。方法本实验模拟体外缺氧环境,观察缺氧对乳腺癌细胞MCF7浸润穿透Metrigel的能力;以及采用半定量RT-PCR检测细胞表面MMP-2、u-PAR和FN表达情况。结果缺氧状态下MCF7细胞的浸润能力明显增强;其表面的MMP-2、u-PAR、FN基因表达升高。结论缺氧可以上调与乳腺癌浸润转移有关的基因的表达,缺氧条件促进乳腺癌细胞的浸润转移。     

类胡萝卜素和维甲酸对不同雌激素状态乳腺癌细胞增殖的影响

目的：通过体外细胞研究,观察类胡萝卜素和维甲酸对人乳腺癌细胞的作用。方法：用噻唑蓝（MTT）法观察维甲酸和类胡萝卜素对体外培养的雌激素受体阳性（ER＋）乳腺癌细胞MCF－7和雌激素受体阴性（ER－）乳腺癌细胞MDA－MB－435S的抑制作用。结果：发现维甲酸和类胡萝卜素对乳腺癌细胞的增殖抑制表现出剂量、时间和结构效应以及细胞的特异性。其中β-胡萝卜素对ER＋和ER－乳腺癌细胞均有很强的抑制作用,而维甲酸和其他4种类胡萝卜素（玉米黄素、虾青素、角黄素、玉米黄素双棕榈酸酯）对ER＋乳腺癌细胞的抑制作用强于ER－乳腺癌细胞。结论：β－胡萝卜素对乳腺癌细胞的抑制机制不同于维甲酸和其他4种类胡萝卜素,也不需转化为维甲酸而起作用。