超声联合微泡造影剂对大鼠肾脏微血管通透性的影响

目的研究高机械指数诊断超声爆破微泡造影剂对大鼠肾脏微血管通透性的影响。方法实验中以伊文氏蓝(Evans blue,EB)为示踪剂检测超声爆破微泡对正常大鼠肾脏组织微血管通透性的影响。15只健康Sprague Daw-ley大鼠,雌雄不限,随机分为A、B、C三组,每组5只,A组为单纯注射EB组;B组为注射EB后接受超声辐照组;C组为注射EB和微泡后再接受超声辐照组。使用西门子S2000超声诊断仪,4P1探头,辐照方式为连续辐照。三组采用相同的频率(2MHz)、机械指数(1.4)、微泡剂量0.5ml/kg,超声辐照时间1min。15只大鼠均在EB注射30min后灌注、取材,使用Image-Pro Plus 6.0软件测量肾脏表面EB渗出面积百分比;使用激光共聚焦显微镜观察肾脏微血管周围EB外溢情况并进行视觉评分;使用标准曲线和分光光度法测量各组大鼠肾脏组织中EB含量,作为反映血管通透性的指标。结果 A组肾脏表面无EB渗出,B组肾脏表面有微量EB渗出,面积百分比为(0.089±0.013)%,C组肾脏表面有部分EB渗出,渗出面积(17.596±0.243)%明显高于A组和B组(P<0.05);C组激光共聚焦显微镜下可见肾脏微血管周围EB外溢,视觉评分等级为2级,显著高于A组(0级)及B组(0～1级);C组肾脏组织中EB含量为(28.11±0.97)μg/g,比A组(11.48±1.05)μg/g和B组(13.18±1.28)μg/g明显增加(P<0.05)。结论高机械指数超声联合微泡造影剂可使肾脏微血管通透性增加。     

超声微泡造影剂对大鼠骨骼肌毛细血管通透性的影响

目的 研究治疗剂量超声破坏微泡造影剂对大鼠骨骼肌毛细血管通透性的影响.方法 以伊文思蓝(EB)为指示剂,18只清清级SD大鼠,随机均分为EB组(E)、EB 超声组(E U)和EB 超声 微泡组(E U M)共3组进行实验.给予相同参数条件的超声进行照射,经颈动脉输/不输入微泡造影剂,在体荧光显微镜下观察EB外溢情况并行视觉评分;使用标准曲线和分光光度法测量各组大鼠脊斜肌中EB的含量.结果 E U M组镜下可见微血管周嗣EB外溢,视觉评分等级为2级.显著高于E组(0级)及E U组(0-1级)(P<0.05).E组及E U组两者相比无显著性差异(P>0.05).E U M组脊斜肌中EB含量为(51.57±3.89)μg/g,比E组[(28.99±4.67)vg/g]及E U组[(30.99±4.11)μg/g]明显增加(P<0.05).E组及E U组两者相比无显著性差异(P>0.05).结论 超声介导微泡造影剂破坏可使脊斜肌组织毛细血管通透性增加.可能是超声微泡造影剂增强基因转染的主要机制之一.     

高频诊断超声联合微泡对肝血管通透性影响的实验研究

目的探讨高频诊断级超声联合微泡对肝血管通透性的影响。方法选择机械指数(mechanical index,MI)为1.2的高频诊断超声,并经实验大鼠尾静脉注射0.2ml/kg微泡造影剂,超声辐照大鼠肝脏时间分为1、3、5、7min。用伊文氏蓝(Evens Blue,EB)观察超声辐照后肝血管通透性的改变,透射电镜观察肝血管内皮细胞及肝细胞结构改变。结果高频诊断超声联合微泡辐照肝脏后,肝组织EB含量与对照组相比差异有统计学意义,透射电镜证实肝血管内皮细胞肿胀,连接中断明显。结论高频诊断超声联合微泡辐照肝脏时可增加肝脏血管通透性。     

微泡增强的超声空化增加兔睾丸组织伊文思蓝浓度的研究

目的：探讨微泡增强的超声空化增加睾丸组织的药物浓度的可行性。方法18只雄性8月龄性成熟新西兰兔随机分为空白对照组（C）、单纯微泡组（MB）、治疗超声组（TUS）、超声联合微泡辐照组（MEUS）4组,每组各9个。MB组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg ;TUS组给予超声辐照5 min;MEUS组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg的同时超声辐照5min;每组在治疗前5min均经耳缘静脉注射2％伊文思蓝（EB）2.5 mL／kg;治疗后1 h取各组睾丸组织制备组织匀浆测量 EB 浓度。结果 MEUS组兔睾丸组织内 EB 浓度高于其他各组（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论微泡增强的超声空化可以明显提高睾丸组织内EB浓度。     

超声微泡联合EPO对于急性心肌梗死后大鼠心肌保护作用的研究

目的 观察超声微泡联合促红细胞生成素(EPO)对大鼠急性心肌梗死后的心肌保护作用.方法 采用结扎冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型.将40只成功制作模型的大鼠随机分为超声+微泡造影剂+ EPO组(A组)、超声+微泡造影剂组(B组)、单纯EPO组(C组)、单纯手术组(D组).术后7 d各组随机选取5只大鼠,尾静脉抽血.采用ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量.术后28 d心肌组织Ⅷ 因子免疫组织化学染色并在显微镜下计数心肌内新生血管和凋亡蛋白Bcl-2、Bax免疫组化染色.采用ELISA检测心肌组织内VEGF蛋白表达情况.结果 与其他各组比较,A组 TNF-α、IL-6表达降低,新生毛细血管数量最多,为43±4.7条/每高倍视野, Bcl-2表达上调,Bax表达显著下调, VEGF含量为(6.34±2.14)ng/g,差异有统计学意义(P<0.05).结论 超声微泡联合EPO能增强EPO促进毛细血管形成、抑制梗死周围区炎症反应及减少心肌细胞凋亡,从而达到改善急性心肌梗死后心脏功能的作用.     

超声微泡对大鼠前列腺中药物浓度的影响

目的:利用超声白蛋白微泡造影剂经一定声压超声辐照后产生的"声孔效应"(Sonoporation),以及其靶向性来提高前列腺内的药物浓度.方法:选取已建立慢性前列腺炎模型大鼠30只,随机分为对照组,给药组和给药加微泡组.将EA-10原料药以溶媒溶解后注射给药.对照组给予生理盐水,给药组以15 mg/kg剂量给药,微泡组以15 mg/kg剂量给药,给药后微泡尾静脉注射并用超声基因转染仪前列腺局部间歇辐照2 min.照射后取前列腺组织,匀浆后测量组织中EA-10的浓度变化.结果:对照组前列腺组织中没有药物,给药组和给药加微泡组前列腺组织中药物浓度较对照组高(P<0.01),给药加微泡组前列腺组织中药物浓度较给药组高(P<0.05).结论:超声白蛋白微泡造影剂的"声孔效应"对于前列腺组织药物浓度的提高有明显的促进作用.     

超声微泡造影剂介导血管生成素-1基因治疗下肢缺血

目的:探讨用超声微泡造影剂介导血管生成素-1(Ang-1)基因治疗兔下肢缺血的可行性?方法:将15只新西兰大白兔左侧股动脉及其分支切断结扎后随机分成3组:A组采用局部注射pEGFP/Ang-1质粒与超声微泡造影剂的混合物并用超声照射;B组采用局部注射pEGFP/Ang-1质粒;C组注射生理盐水作为对照组?治疗4周后进行血管造影,了解新生血管情况,免疫组化方法检测Ang-1的蛋白表达?结果:在侧支循环建立?胞浆棕褐色程度?新生血管方面,A组较多,B组其次,C组较少?结论:用超声微泡介导的Ang-1基因转染,可促进缺血骨骼肌的血管新生和侧支循环建立,为下肢缺血性疾病的基因治疗提供了一种新的途径?     

超声联合靶向微泡治疗急性脑血栓的动物实验研究

【摘要】 目的 探讨超声联合靶向微泡治疗急性血栓的效果,以及对纤溶系统的影响。方法 采用脑血管造影后将大白兔自体血栓通过导管注入颈动脉制备脑血栓动物模型。6 h后造影确定血栓未自溶。49只大白兔分为4组。A组（n=13）:经导管注射新型结合血小板Ⅱb /Ⅲa受体的靶向微泡（TMB）;B组（n=12）:经导管直接注射非靶向微泡（NTMB）;C组（n=12）:注射艾通立（重组纤溶酶原激活物r-TPA）:D组（n=12）:经导管注射生理盐水。A、B、D组均在治疗时应用低频超声(1 MHz,2.0 W/cm2)30 min。分别在治疗后立刻、1 h和2 h造影观察血栓溶解、血流再通情况,并在栓塞前和治疗后2 h取静脉血,检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（Fib）和D-二聚体。结果 A组6只（46.15%）,B组1只（8.33%）,C组4只（33.33%）,D组1只（8.33%）血栓溶解,A、C组血栓溶解率高于B、D组(P0.05),组间差异也无统计学意义(P>0.05),而C组中D-二聚体高于其他组（P<0.05）,Fib低于其他组（P<0.05）。结论 超声联合靶向微泡可快速溶解血栓使血管再通,其作用与 r-TPA相似而出血等副作用小。     

超声微泡促腺病毒载体转染MDR1基因效率的体外实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂在体外促进腺病毒载体介导的MDRl基因转染兔骨髓单个核细胞的效率,并初步探讨其安全性.方法 根据是否加入超声微泡造影剂和超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒MDRl基因转染组(B)、腺病毒MDRl基因转染+超声辐照组(C)、微泡造影剂+腺病毒MDRl基因转染组(D)、微泡造影剂+腺病毒MDRl基因转染+超声辐照组(E).收集各组细胞,应用RT-PCR法、流式细胞技术等分别从基因、功能及细胞生物学特性等方面检测外源性MDR1基因在骨髓单个核细胞内的功能性表达及安全性.结果 收获高滴度的Ad5-MDR1腺病毒载体并成功制备腺病毒微泡造影剂;RT-PCR结果 显示,除A组外其余4组在194 bp处均观察到特异性MDR1电泳条带,证实外源性MDR1基因通过腺病毒载体整合到细胞基因组中,且E组MDR1电泳条带的光密度比值明显高于B、C、D组(P<0.05);柔红霉素排出实验证实外源性MDR1基因表达产物P-gP有药物外排泵功能,且E组P-gp阳性率最高(P<0.05),而柔红霉素阳性率显著降低;一定强度的超声辐照及微泡造影剂对骨髓单个核细胞的细胞周期无明显影响.结论 低频超声波击碎微泡造影剂,能促进以腺病毒为载体介导的外源性MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的效率,且安全可行.     

心肌声学造影

在心血管领域,超声心动图以其优秀的时间和空间分辨率,具有可重复性、能床旁实时成像等特点而广泛用于临床。心肌声学造影(myocardialcontrastechocardiography,MCE)是超声心动图的一个重要分支。1968年,Gramiak和Shah[1]首次报道了经心腔注射生理盐水后经超声心动图观察到的主动脉根部显影现象。此后很长一段时间内,心脏声学造影的临床应用一直局限在认定心内结构及诊断分流性疾病等方面。这种原始的声学造影是心肌声学造影的前身。心肌声学造影是指能通过肺毛细血管床的微泡在特殊的造影成像技术作用下,造影剂与超声波相互作用,致使左室或心肌成像,从而对缺血性心脏病进行诊断。1984年,Fein stein[2]首次报道了采用声振的方法制备声学造影剂,所产生的微泡直径小于红细胞,经静脉注射可使左室显影,开创了声学造影剂的先河。在过去的10年中,随着对声学造影微泡及超声波相互作用认识的不断深入,声学造影发生了巨大变化。能通过肺血管床的微泡出现以及声学造影成像技术的发展使得左室成像已广泛应用到临床实践中,心肌声学造影也有望在不久的将来成为评估缺血性心脏病的常规临床手段。1心肌声学造影剂目前所用...     

超声联合微泡与高温热疗开放大鼠血脑屏障的对比研究

目的 探讨1MHz低频超声诱导微泡破坏和高温热疗两种方法对大鼠血脑屏障通透性的影响。方法将大鼠分为2个实验组与1个对照组,实验A组大鼠经股静脉注入微泡造影剂后,采用频率1MHz、声强1．2W／cm的超声波经大鼠颅骨照射3mm;实验B组大鼠于加温仓以36℃加温3h;对照组（C组）仅室温下静脉注射生理盐水。千湿重法测定脑水含量,伊文思蓝测定法观察大鼠血脑屏障通透性,光镜和电镜下观察脑组织、脑细胞和血脑屏障病理学改变。结果超声联合微泡组和热疗组血脑屏障通透性均显著高于对照组俨〈0．05）,电镜下微血管内皮紧密连接呈开放状态。结论超声照射联合微泡和全身热疗均可开放血脑屏障。     

两种不同开放血脑屏障方法的比较

目的 比较超声波诱导微泡破坏和甘露醇渗透性开放两种方法对大鼠血脑屏障通透性的影响.方法 大鼠分为2个实验组和1个对照组,1个实验组大鼠经股静脉注入微泡造影剂后,采用频率43 kHz、声强1.2 W/cm2的超声波经大鼠颅骨照射3 min;另1个实验组大鼠经颈内动脉注入20%甘露醇.干湿重法测定脑水含量,荧光显微镜观察伊文思蓝的渗出.结果 两种方法都可以可逆开放血脑屏障,利用超声波诱导微泡破坏法开放血脑屏障较甘露醇渗透性开放法局限且持久.结论 超声波诱导微泡造影剂破坏是一种无创和具靶向性开放血脑屏障的新方法.     

中药通心络对猪急性心肌梗死再灌注后无再流的影响

目的评价通心络防治猪急性心肌梗死(AMI)再灌注后无再流的作用。方法中华小型猪40只随机分成5组,每组8只:(1)AMI模型对照组(对照组),(2)通心络小剂量治疗组(0·05g·kg-1·d-1),(3)通心络中剂量治疗组(0·2g·kg-1·d-1),(4)通心络大剂量治疗组(0·5g·kg-1·d-1),(5)假手术组。通心络各组预给药3d后行冠状动脉结扎180min,松解60min制备AMI再灌注模型。AMI前、后和再灌注后均行血流动力学测定,心肌声学造影(MCE)检查和病理学分析。结果(1)与AMI前相比,对照组AMI后180min左室收缩压(LVSP)、心排量和左心室内压最大收缩和舒张变化速率(±dp/dtmax)均显著下降(P<0·05或P<0·01),左室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0·01);再灌注后60min仅LVSP显著恢复(P<0·05),然而±dp/dtmax继续显著下降(P<0·05)。小、中和大剂量通心络组AMI后180min各项指标变化与对照组相同;再灌注后60min仅大剂量通心络组LVEDP、±dp/dtmax和心排量均显著恢复(均P<0·05),且显著好于对照组(均P<0·05)。(2)对照组MCE和病理染色所测的冠脉结扎区心肌范围(LA)高度一致(P>0·05),再灌注后无再流区范围分别为78·5%和82·3%,心肌坏死面积占结扎区心肌面积的98·5%。3个通心络组LA与对照组相当(均P>0·05),但MCE和病理染色所测无再流范围在中及大剂量通心络组分别为41·1%、42·4%和24·1%、25·0%,坏死心肌范围分别为90·2%及81·2%,均显著小于对照组和小剂量组(P<0·05或P<0·01),大剂量组也显著小于中剂量组(P<0·05或P<0·01)。(3)对照组再灌注后即刻和再灌注后60min冠脉血流量仅占AMI前的45·8%和50·6%(均P<0·01),而大剂量通心络组冠脉血流量分别占AMI前的76·0%和73·5%,均显著高于对照组(均P<0·01)。结论通心络能有效地防治心肌梗死再灌注后无再流,缩小梗死面积;中剂量有效,大剂量更好。     

Effects of matrix metalloproteinase 9 inhibition on the blood brain barrier and inflammation in rats following cardiopulmonary resuscitation

Background Neuroprotective strategies following cardiopulmonary resuscitation （CPR） are an important focus in emergency and critical care medicine. Matrix metalloproteinases （MMPs）, especially MMP9 attracted much attention because of its function in focal brain ischemia/reperfusion injury. In the focal cerebral ischemia model in rats, SB-3CT can suppress the expression of MMP9, relieving brain edema, and there was no studies on global cerebral ischemiareperfusion injury after CPR. Methods One hundred and twenty rats were randomly assigned to sham-operated （n=40）, resuscitation treatment （n=40）, and resuscitation control （n= 40） groups. Sham-operated group rats were anesthetized only and intubated tracheally, while the resuscitation treatment and resuscitation control groups also received cardiac arrest by asphyxiation, In the resuscitation treatment group, SB-3CT was injected intraperitoneally after restoring spontaneous circulation （ROSC）, defined as restoration of supraventricular rhythm and mean arterial pressure （MAP） 〉 60 mm Hg for more than 5 minutes. The resuscitation control group also implemented ROSC without injection of SB-3CT. The rats were executed and samples were taken immediately after death, then at 3, 9, 24, and 48 hours （n=-8）. Brain tissue expression of MMP9 protein, MMP9 mRNA, water content, Evans blue content, TNF-α, IL-1, and IL-6 was measured, and the brain tissue ultramicrostructure studied with electron microscopy. Results In the resuscitation control group, brain tissue expression of MMP9 protein and mRNA, water content, Evans blue content, TNF-α, IL-1, and IL-6 were significantly elevated at 3 hours, and peaked at 24 hours after resuscitation, when compared with the sham-operated group （P 〈0.05）. 1issue ultramicrostructure also changed in the resuscitation control group. By contrast, although all these indexes were increased in the resuscitation treatment group compared with the sham-operated group （P 〈0.05）, they were lower than in the resuscitation control group （P 〈0.05）. Conclusions Expression of MMP9 protein and mRNA, water content, Evans blue content, TNF-α, IL-1, and IL-6 increased in rat brain tissue after CPR, indicating disruption of the blood-brain barrier and excess inflammatory reaction. MMP9 expression was reduced with SB-3CT, resulting in reduced brain injury.     

大分子葡萄糖酐血瘀证动物模型表征的偶氮蓝变化特征

目的探讨偶氮蓝与不同浓度大分子葡萄糖酐所致血瘀证动物模型血瘀程度表征变化规律的关系。方法用0.5%偶氮蓝配制的5%、10%、15%的大分子葡萄糖酐造模,观察偶氮蓝在大分子葡萄糖酐所致血瘀证模型动物耳廓、舌体呈现出的体表表征变化,检测耳廓、血浆中偶氮蓝含量。结果糖酐各组1h后耳廓及舌体出现不同程度蓝色瘀斑,且与大分子葡萄糖酐注射浓度呈正相关。同对照组大鼠相比,糖酐各组大鼠1h后耳廓偶氮蓝含量随大分子葡萄糖酐注射浓度的增加而增加,血浆偶氮蓝含量则随其注射浓度的增加而减少。结论大鼠尾静脉注射用0.5%偶氮蓝配制的不同浓度的大分子葡萄糖酐后能使血瘀证模型大鼠的血瘀程度在其耳和舌体等体表表征中较为直观地呈现出来,且大分子葡萄糖酐注射浓度不同所致血瘀证模型大鼠耳廓和血浆偶氮蓝含量变化与耳廓、舌体在同一时间出现的血瘀程度明显相关,说明偶氮蓝可以客观反映大分子葡萄糖酐所致血瘀证模型大鼠血瘀程度的表征变化。     

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响

目的：通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的活性及脑组织中伊文思蓝的含量，探讨灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法：复制脑缺血再灌注模型，并于术前15min腹腔注射灯盏花素注射液10mg／kg，采用明胶酶谱分析法检测脑组织海马区明胶酶的活性，同时经尾静脉注射2％伊文思蓝，检测脑组织伊文思蓝含量。结果：脑缺血再灌注后明胶酶（A、B）活性增加；灯盏花素组MMP-9活性明显低于脑缺血再灌注组，而灯盏花素对MMP-2作用不显著。脑缺血再灌注后4h起脑组织伊文思蓝渗出逐渐增多，48h达高峰，以后有下降趋势。灯盏花素组于术后伊文思蓝渗出明显低于相应时间的脑缺血再灌注组（P〈0．05）。结论：灯盏花素具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B的活性、降低血脑屏障通透性的作用。     

大分子右旋糖酐致血瘀大鼠体表特征研究

目的探讨大分子右旋糖酐致血瘀大鼠体表特征的变化规律。方法将64只大鼠随机分为8组,即模型组的30、60、120、240 min组与对照组的30、60、120、240 min组,每组8只。模型组大鼠尾静脉注射用0.5%的伊文思蓝溶液配制的10%的大分子右旋糖酐溶液,对照组大鼠尾静脉注射用生理盐水配制的0.5%的伊文思蓝溶液,造模后30、60、120、240 min时观察并拍摄各组大鼠耳廓及舌的颜色变化,测量其血浆及耳廓提取液中伊文思蓝含量,进行统计学分析。结果模型组大鼠造模30 min后耳根及舌尖出现蓝色瘀斑,随着时间的延长,蓝色瘀斑范围扩大,240 min时全耳廓呈现深蓝色,舌体瘀斑范围>1/2,对照组耳廓始终半透明,舌体颜色均匀;模型组血浆伊文思蓝含量明显低于对照组;模型组耳廓伊文思蓝含量明显高于对照组。结论静注大分子右旋糖酐所致血瘀证大鼠耳和舌的体表特征明显异于对照组,基本符合中医关于血瘀证的描述。     

大蒜素可预防心肌梗死猪模型再灌注无复流现象

Objective： To evaluate whether garlicin can prevent reperfusion no-reflow in a catheter-based porcine model of acute myocardial infarction （AMI）. Methods： Twenty-two male Chinese mini swines were randomized into 3 groups： sham-operation group （n=6）, control group （n=8）, and garlicin group （n=8）. The distal part of left anterior descending coronary artery （LAD） in swines of the latter two groups was completely occluded by dilated balloon for 2 h and a successful AMI model was confirmed by coronary angiography （CAG） and electrocardiograph （ECG）, which was then reperfused for 3 h. In the sham-operation group, balloon was placed in LAD without dilatation. Garlicin at a dosage of 1.88 mg/kg was injected 10 min before LAD occlusion until reperfusion for 1 h in the garlicin group. To assess serial cardiac function, hemodynamic data were examined by catheter method before AMI, 2 h after occlusion and 1, 2, and 3 h after reperfusion. Myocardial contrast echocardiography （MCE） and double staining with Evans blue and thioflavin-S were performed to evaluate myocardial no-reflow area （NRA） and risk area （RA）. Results： Left ventricular systolic pressure and left ventricular end-diastolic pressure significantly improved in the garlicin group after reperfusion compared with the control group （P〈0.05） and 2 h after AMI （P〈0.05）. MCE showed garlicin decreased reperfusion NRA after AMI compared with the control group （P〈0.05）. In double staining, NRNRA in the garlicin group was 18.78%, significantly lower than that of the control group （49.84%, P〈0.01）. Conclustions： Garlicin has a preventive effect on the porcine model of myocardial infarction reperfusion no-reflow by improving hemodynamics and decreasing NRA.