夏枯草抑制人淋巴瘤细胞增殖的机制

目的：研究夏枯草对淋巴瘤细胞生长的影响及其可能的机制。方法：参考临床常用剂量,分别采用50g·L^-1夏枯草（夏枯草组）、50g·L^-1夏枯草＋1μmol·L^-1wortmannin（wortmannin组）处理Raji细胞,以加入同体积生理盐水的naji细胞作对照,应用MTT法检测细胞增殖率,Western Blotting检测Akt磷酸化水平和Caspase-3的表达。结果：夏枯草组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0．05）;Akt磷酸化水平在夏枯草组中表达明显降低（P〈0．05）,但wortmannin可抑制其磷酸化,夏枯草组的Caspase-3显著增高（P〈0．05）。结论：夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,且这种抑制作用可能是通过抑制Akt信号转导通路,继而激活细胞凋亡来实现的。     

柚皮素对氧化应激所致成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的：观察柚皮素对氧化应激导致的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外分离培养成骨细胞,细胞分空白对照组、单纯 H2 O2作用组、H2 O2＋0 J．1μmol／L 柚皮素组、H2 O2＋1μmol／L柚皮素组、H2 O2＋10μmol／L柚皮素组。 MTT法检测成骨细胞活力;流式细胞术检测成骨细胞凋亡率;荧光显微镜观察活性氧（ ROS）含量;比色法检测丙二醛（ MDA）含量;Real time-PCR和Western-blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达情况。结果与空白对照组比较,单纯H2 O2处理组细胞活性明显降低,凋亡率及ROS、MDA含量明显增加;同时Bcl-2 mR-NA和蛋白表达明显下调,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调（ P ＜0．05）。与单纯H2 O2处理组比较,柚皮素预处理24 h能够明显增强细胞活性,降低细胞凋亡率及ROS、MDA含量,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达,呈剂量依赖性（ P ＜0．05）。结论柚皮素在氧化应激条件下能够促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Caspase-3表达有关。     

姜黄素与紫杉醇联用对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨姜黄素（CCM）与紫杉醇（PIX）联用对人子宫内膜癌细胞（Ishikawa）增殖的影响及其机制。方法（1）设置对照组（不加药物）、CCM组（不同浓度的CCM）、PIX组、联合组（PIX联合不同浓度的CCM）;（2）采用MTT法检测不同浓度的CCM联合PIX对细胞活力的影响;（3）流式细胞术检测细胞凋亡率;（4）免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果CCM联用PIX能抑制人子宫内膜癌细胞的增殖（P〈0．05）,且随CCM浓度的增加,抑瘤作用增加;两种药物均可诱导细胞凋亡,且各组凋亡率与药物浓度呈正相关（P〈0．05）;免疫组化结果显示随着染毒浓度的增加和联合作用,Caspase-3蛋白的表达升高（P〈0．05）。两药联用抗瘤作用增强。结论CCM、PIX均可抑制人子宫内膜癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡、上调细胞Caspase-3表达,呈剂量依赖性,且两者联用具有协同作用。     

硫酸右旋糖苷对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

摘要： 目的 探讨硫酸右旋糖苷 （DS） 对人胃癌MGC-803细胞增殖、 集落形成和凋亡的影响及可能的机制。方法 培养人胃癌MGC-803细胞, 分为对照组 （PBS处理） 和实验组 （0.3%DS处理）; 应用EdU细胞增殖实验检测DS对胃癌MGC-803细胞增殖能力的影响; 平板克隆形成实验检测DS对胃癌MGC-803细胞集落形成能力的影响; AnnexinⅤ-PI双染流式检测细胞凋亡的变化; 蛋白质印迹法 （Western blot） 检测细胞不同时间点 （2、 8、 12、 24 h） EZH2、 Cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果 EdU实验结果显示, 与对照组相比, DS明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖 （P＜0.01）。平板克隆形成实验结果表明, DS组集落形成能力较对照组显著降低 （P＜0.01）, AnnexinⅤ-PI双染流式结果显示, 实验组细胞凋亡率明显高于对照组 （P＜0.01）; Western blot结果表明, 实验组EZH2的表达较对照组明显下调 （P＜0.05）, Cleaved-caspase3的表达较对照组明显上调 （P＜0.05）。结论 DS能明显抑制人胃癌MGC-803 细胞增殖, 诱导凋亡, 其机制可能与抑制EZH2的表达有关。     

大葱精提取物对人胃癌细胞MGC-803诱导分化和凋亡的实验研究

目的本实验采用大葱精提物处理体外培养的人胃癌细胞MGC-803,观察其对胃癌细胞诱导分化和凋亡的作用,探讨大葱抗癌的有效成分。方法将大葱精提物分成脂溶性和水溶性两部分,大葱粗提物作对照组,分别作用于体外培养的人胃癌细胞MGC-803后：（1）每日计数细胞,计算增殖抑制率。（2）应用流式细胞仪分析细胞DNA含量和H周期分布,检测分化与凋亡。（3）采用TUNEL法检测细胞凋亡。（4）HE染色光镜下观察细胞分化和凋亡,计算细胞凋亡指数。（5）电镜观察细胞超微结构变化。结果（1）A组与C1组细胞72h内细胞数逐日增加,但C1组细胞生长增殖缓慢。72h以后,A组与C1组细胞均呈下降趋势（P〈0．05）。（2）C3组24h凋亡率高,但较c1、c2组差异无统计学意义（P〉0．05）;C1组分化比例低于C3组（P〈0．05）,c2组24h凋亡比例和二倍体比例均低于前两者（P〈0．05）,作用明显弱于前两者。（3）倒置显微镜下观察,10％浓度大葱粗提物作用16h,培养细胞由原来的梭状或多角状变为圆形细胞,24h后细胞从瓶壁脱落。0．5％大葱油作用2h细胞变为圆形,4h后细胞从瓶壁脱落。（4）光镜下爬片HE染色0．05％大葱油和10％大葱粗提物作用后的细胞,体积缩小,核质比例减小,细胞分裂相减少。（5）透射电镜下观察,0．05％大葱油和10％大葱粗提物作用后,均可出现典型的凋亡细胞形态学改变。结论大葱提取物能明显抑制体外培养的胃癌细胞生长增殖,即可诱导胃癌细胞分化,又可诱导胃癌细胞凋亡,其起主要作用的部分为脂溶性（大葱油）部分,水溶性部分作用较弱。作用机制有待深入研究。     

槲皮素对胃癌MGC-803细胞生长及凋亡作用的研究

目的研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响及诱导凋亡作用。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度槲皮素对MGC-803细胞的增殖活性的效应;原位末端核苷标记(TUNEL)法检测槲皮素诱导细胞凋亡的凋亡指数(AI)。结果槲皮素浓度为40~100μmol/L时对MGC-803细胞增殖有显著的抑制效应,且呈剂量依赖性;细胞加入槲皮素诱导48h后AI明显高于未加入组(P<0.05)。结论槲皮素在一定浓度范围内能显著抑制MGC-803细胞的增殖并能诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖性。     

维生素B2在胃癌中的作用及机制研究

摘要：目的　探讨维生素B2（Vit B2）在胃癌中的表达及其生物学意义。方法　选择39例胃癌患者（胃癌组）和40例健康体检者（对照组）,检测2组血清Vit B2水平,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。培养人胃癌MGC-803细胞,并取对数生长期细胞分别给予0、10、25、50、100 μmol/L Vit B2处理,检测细胞氧化磷酸化（葡萄糖、乳酸和琥珀酸脱氢酶）水平。实时荧光定量PCR（qPCR）检测己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和葡萄糖转运体1（GLUT1）mRNA水平。CCK-8法检测胃癌MGC-803细胞的增殖活性。流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果　胃癌患者血清Vit B2水平低于对照组［（207.85±39.71）μg/L vs. （246.07±45.43）μg/L］,且血清Vit B2水平与胃癌患者的TNM分期和分化程度有关;与0 μmol/L Vit B2组相比,25、50、100 μmol/L Vit B2组细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量均降低,琥珀酸脱氢酶含量均升高,HKⅡ、PKM2和GLUT1 mRNA水平均降低（均P＜0.05）;且50 μmol/L Vit B2组变化最明显。对照组、Vit B2组、阿帕替尼组和联合用药组胃癌细胞增殖活性依次降低,细胞凋亡率依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　胃癌患者血清Vit B2水平降低,Vit B2和阿帕替尼联合用药可提高其对胃癌的抗肿瘤效果。     

重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用

目的研究重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测重楼总苷对MGC-803细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡率,并分析E-phA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长,并且呈时间-剂量依赖关系;可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论其作用机制可能与下调EphA2和survivin的表达以及促进Caspase-3的表达有关。     

华蟾素诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

目的：观察华蟾素（cinobufacini）对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用的机制。方法：以HL-60细胞为研究对象，采用MTT法观察细胞增殖作用；Annexin V-FITC／PI双染和吖啶橙／溴乙锭（AO／EB）荧光染色法检测细胞凋亡；罗丹明染色法检测线粒体膜电位；分光光度法检测Caspase-3活性。结果：在0．78～6．25μg&#183;ml^-1，华蟾素能明显的抑制HL-60细胞的增殖；华蟾素作用24h后，AnnexinV阳性的细胞从7．81％增加至66．02％，而且在荧光显微镜下可以明显观察到凋亡细胞；线粒体膜电位下降和Caspase-3活性升高。结论：华蟾素能够抑制HL-60细胞增殖，这种作用与其诱导细胞凋亡破坏线粒体功能和激活Caspase-3有关。     

不同类型黄酮对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的：观察不同类型的黄酮类化合物红花黄色素A（查儿酮）、高良姜素（黄酮醇）、陈皮素（二氢黄酮）对H2O2诱导的心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法：取Wistar大鼠乳鼠心肌细胞做原代培养，制备H2O2诱导的心肌细胞凋亡模型。MTT法检测3种黄酮类化合物适宜的实验浓度，TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫组化法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果：MTT法显示各组药物只有5μmol／L组与空白组相比差异无统计学意义（P〈0．05）。仅30μmol／L组细胞活力显著高于模型组，随后实验选用30μmol／L作为试验浓度。TUNEL法检测细胞凋亡率，除红花黄色素A组外各药物组细胞凋亡率均显著小于模型组（P〈0．05）。流式细胞术检测显示，各药物组均能降低细胞凋亡率和坏死率。免疫组化显示，Caspase-3蛋白阳性表达除红花黄色素A组（与空白对照组比较P〉0．05）外各药物组均显著小于模型组（P〈0．05）。Bcl-2／Bax比值除红花黄色素A组（与正常组比较P〉0．05）外各药物组均显著高于模型组（P〈0．05）。TUNEL法检测凋亡率、Caspase-3蛋白阳性表达、Bcl-2／Bax比值均显示陈皮素和高良姜素组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：陈皮素和高良姜素抑制100tnnol／LH2O2诱导新生乳鼠心肌细胞凋亡的效果相当，可调节Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达，起到保护心肌细胞作用；而红花黄色素A对细胞坏死的影响可能比对细胞凋亡的作用更强。     

丹参多酚酸盐对糖尿病心肌病保护作用及可能机制

目的探讨丹参多酚酸盐对糖尿病心肌病保护作用及其可能机制。方法40只健康雄性wistar大鼠随机分成4组,正常对照组（Normal control,NC）、糖尿病对照组（Diabetic control group,DC）、丹参多酚酸盐高剂量（15mg·kg^-1）治疗组（High-dose treatment group,HT）及低剂量（5mg·kg^-1）治疗组（Low-dose treatment group,LT）,每组10只,其中3组（DC、HT、LT）大鼠给予腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型。建模后第7天开始给予治疗组丹参多酚酸盐腹腔注射,NC及DC组大鼠给予相同体积生理盐水注射。给药8周后超声多普勒检测大鼠心功能,转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测心肌细胞Bcl-2、Caspase-3表达。结果与NC组比较,DC组凋亡心肌细胞数增多（P〈0．05）,Bcl-2表达减弱（P〈0．05）,Caspase-3表达增强（P〈0．05）;与DC组比较,治疗组凋亡细胞数减少（P〈0．05）,Bcl-2表达增强（P〈0．05）,Caspase-3表达减弱（P〈0．05）;应用丹参多酚酸盐治疗后,可有效改善心功能,HT组较LT组作用更加明显,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论糖尿病组大鼠心功能明显下降,丹参多酚酸盐通过增强Bcl-2表达,抑制Caspase-3表达,阻遏心肌细胞凋亡,改善心功能,高剂量丹参多酚酸盐的作用更加明显。     

联合使用脱甲基化药物和紫杉醇对肾癌细胞的侵袭能力影响机制研究

目的：观察联合使用脱氧杂胞苷（ DAC）与紫杉醇（ PTX）对肾患细胞是否存在协同作用,并探究其机制。方法离体培养肾透明细胞癌ACHN细胞株,将120培养皿随机分为空白对照组、DAC组、PTX组、联合组,每组30个。 DAC组：用DAC：0．5、1、2、4、8μmol／L处理3 d;PTX组：用PTX：1、2、4、8、16 nmol／L处理3 d;联合组：用DAC＋PTX处理3 d。使用高速分选流式细胞仪观察T肽协同树突状细胞对肾癌细胞的凋亡率;通过ELISA检测淋巴细胞增强因子（LEF1）和E－cadherin在肾癌细胞中的表达;通过ELISA技术检测凋亡蛋白caspass－3在肾癌细胞中的表达。结果 DAC组、PTX组以及联合组对肿瘤细胞的抑制作用明显,其中联合组对肿瘤细胞的抑制作用最强（ P＜0．05）,而且DAC和PTX对肿瘤细胞的抑制作用与药物浓度成正比（P＜0．05）。与DAC组、PTX组比较,联合组中LEF1的表达水平最低（P＜0．05）,E－cadherin、caspass－3的表达水平最高（P＜0．05）,而且DAC和PTX对LEF1表达的抑制作用、对E－cadherin、caspass－3的表达的促进作用与药物浓度成正比（P＜0．05）。结论 DAC与 PTX联合干预肾癌细胞,具有协同作用,而且LEF1是新的肾癌治疗靶点,DAC与 PTX合用可以提高肾癌细胞的凋亡率,并且降低肾癌细胞的侵袭转移能力。     

青蒿琥酯激活ATF4/CHOP通路对人胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

摘要：目的:探究青蒿琥酯（ART）对人胃癌细胞增殖、凋亡和自噬以及激活转导因子4/C/EBP同源蛋白（ATF4/CHOP）通路的影响。方法:细胞计数试剂盒8（CCK-8）法和乳酸脱氢酶（LDH）法筛选ART干预人胃癌细胞系MGC803的最佳条件。原位末端标记（TUNEL）染色法观察细胞凋亡,并对半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3和Caspase-9活性进行测定;免疫荧光染色法观察细胞自噬蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3）表达;Western Blot分析验证自噬（Beclin和ATG5）和ATF4/CHOP通路相关蛋白表达。结果:ART以浓度依赖性方式降低MGC803细胞活力（P＜0.05）。ART治疗后促进MGC803细胞凋亡、Caspase-3和Caspase-9活性,增强LC3、Beclin和ATG5表达,上调ATF4和CHOP表达（P＜0.05）。自噬抑制剂3-MA或沉默ATF4可部分逆转ART对胃癌细胞的影响（P＜0.05）。结论:ART可能通过激活ATF4/CHOP通路在胃癌细胞中发挥抗增殖和促凋亡、自噬作用。     

大鼠急性胰腺炎 Caspase－3及 Survivin 在胰腺组织中表达的实验研究

目的：检测 Caspase－3及 Survivin 在急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的表达并探讨其与胰腺组织损伤的关系。方法60只 SPF 级雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术组、胰腺炎6 h 组、胰腺炎12 h 组及胰腺炎24 h 组。采用胰腺被膜下注射牛磺胆酸钠（Na－Tc）建立急性胰腺炎模型。分别检测4组大鼠血清淀粉酶（AMY）、胰腺病理损伤、胰腺组织中 Caspase－3及 Survivin 的表达程度。结果假手术组、胰腺炎6 h、12 h、24 h 组组间两两比较血清淀粉酶及胰腺组织病理评分胰腺组织 Caspase－3及 Survivin 平均光密度表达差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。 Caspase－3、Survivin、血清淀粉酶及胰腺病理评分均有相关性（ P ＜0．05）。结论急性胰腺炎过程中伴随着 Caspase－3及 Survivin 的表达紊乱,并且与胰腺损伤密切相关。     

原花青素通过Caspase途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的研究原花青素(Proanthocyanidin/Procyanidin,PC)诱导人乳腺癌细胞凋亡以及凋亡通路,揭示其抗乳腺癌的部分作用机制。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和PC组,MTT法检测PC对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;ELISA法检测培养上清液中Caspase-9、Caspase-12的含量。结果 PC(10～320μg/mL)6个剂量组可显著抑制MCF-7细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;在40、80和160μg/mL 3个浓度下体外培养,PC可提高MCF-7细胞的凋亡率,并诱导出现G2-M细胞周期阻滞;PC作用48 h后,Caspase-9、Caspase-12蛋白表达量增加。结论 PC抑制人乳腺癌MCF-7细胞的作用机制与阻滞细胞周期于G2-M期和诱导细胞凋亡有关,其凋亡通路与Caspase途径有关,并涉及Caspase家族的内质网和线粒体两条通路。     

澳洲茄边碱对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨澳洲茄边碱（SM ）对 HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法用不同浓度SM 5、10、15和20μg／ml分别处理 HepG2细胞3、6、12和24 h ,并设不加药的对照组。采用MTT法检测 HepG2细胞增殖,DAPI染色法观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot法检测B细胞淋巴瘤‐白血病2（Bcl‐2）、Bcl相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase‐3）及Ki67的蛋白表达。结果与对照组相比,SM 呈剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖,促进HepG2细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G2／M期,并且上调Bax和Caspase‐3蛋白表达,下调Bcl‐2和Ki67蛋白表达（P＜0．05或P＜0．01）。结论 SM 能有效抑制 HepG2细胞的增殖,促进细胞凋亡的发生;SM上调Bax和Caspase‐3表达,下调Bcl‐2和Ki67表达,细胞周期阻滞于G2／M期可能是其发挥上述作用的机制。     

毛萼乙素联合FBXO11基因siRNA对胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其机制研究

摘要：目的:探讨毛萼乙素（EriB）联合F-box蛋白11（FBXO11）基因siRNA对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:以人胃黏膜上皮细胞GES-1为对照,Western blotting法检测胃癌MGC-803、MKN-28及BGC-823细胞中FBXO11蛋白表达。将FBXO11小干扰RNA（si-FBXO11）转染至MGC-803细胞,Western blotting检测FBXO11蛋白表达验证转染效果。采用0,0.2,0.5,1.0μmol·L-1EriB处理MGC-803细胞48 h,MTT法检测细胞活力。将MGC-803细胞分为空白组、EriB组、siFBXO11组和EriB+si-FBXO11组,MTT检测各组细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达。结果:与GES-1细胞比较,胃癌MGC-803、MKN-28及BGC-823细胞中FBXO11蛋白表达升高（P<0.05）。与0μmol·L-1EriB组比较,0.2,0.5,1.0μmol·L-1EriB组MGC-803细胞活力降低（P<0.05）。与空白组比较,EriB组和si-FBXO11组MGC-803细胞活力、侵袭数、迁移数及PCNA、Vimentin蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与EriB组或si-FBXO11组比较,EriB+si-FBXO11组MGC-803细胞活力、侵袭数、迁移数及PCNA、Vimentin蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论:EriB毛萼乙素及抑制FBXO11表达均可降低胃癌MGC-803细胞活力、侵袭和迁移能力,且两者联合作用对胃癌细胞活力、侵袭和迁移能力的抑制作用更强,机制可能与调节PCNA、E-cadherin和Vimentin表达有关。     

红景天苷通过AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究红景天苷(salidroside, SAL)对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用0、25、50、100μmol·L^-1剂量红景天苷处理SW480细胞,将细胞随机分为4组：SAL 0μmol·L^-1组、SAL 25μmol·L^-1组、SAL 50μmol·L^-1组和SAL 100μmol·L^-1组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠随机分为2组：Control组和Salidroside 50 mg·kg^-1组,检测裸鼠肿瘤重量,TUNEL染色检测裸鼠肿瘤细胞凋亡率,免疫组化染色检测Ki67、Caspase-3阳性细胞数。结果 体外实验中,与SAL 0μmol·L^-1组相比较,SAL...     

丹参单体 IH764-3对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害的保护机制研究

目的：探讨丹参单体IH764-3在马兜铃酸（aristolochic acid,AA）导致人肾小管上皮细胞系（HK-C）损害中的保护作用及机制。方法以含体积分数0．10胎牛血清的DMEM培养液培养HK-C细胞72 h。实验分为3大组（8小组）,AA组在培养液中加入浓度为20 mg／L的AA;观察组在培养液中加入浓度为20 mg／L的AA和不同浓度丹参单体IH764-3;对照组培养液中不加AA。培养24、48、72 h后,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各细胞培养液中转化生长因子β1（TGF-β1）、纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）、金属蛋白酶2（MMP-2）;采用MTT法观察HK-C细胞活性,实时荧光定量PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA的表达情况。结果 AA刺激后,诱导TGF-β1、TIMP-1、PAI -1表达增加,MMP-2表达减少（ P ＜0．05）。经丹参单体IH764-3干预后,TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表达减少,MMP-2表达增加,其中以IH764-380 mg／L效果最佳（ P ＜0．05）。 AA组及观察组较对照组HK-C细胞的活性均受到抑制,细胞的凋亡率增加,Caspase3-mRNA表达增高（ P ＜0．05）。观察组较AA组细胞活性明显增高,细胞的凋亡率明显下降,Caspase-3mRNA表达降低,观察组中以丹参单体IH764-380 mg／L效果最佳（ P ＜0．05）。结论丹参单体IH764-3可明显提高HK-C细胞抵抗AA导致细胞损伤的能力,保护HK-C细胞,其具体途径可能与抑制TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、Caspase-3mRNA,升高MMP-2的表达而发挥作用。     

甲基化调节miR-200b的表达及其对胃癌MGC-803细胞增殖侵袭能力的影响

目的 体外研究基因mi R-200b发生甲基化的不同程度及其表达量的差异对胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭、凋亡及对上皮间质转化的影响。方法 以正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803为研究对象,提取细胞总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR检测2种细胞系中mi R-200b的表达量;亚硫酸氢钠修饰PCR(BSP)法检测mi R-200b启动子区甲基化水平。用不同浓度5-氮杂胞苷(5′-Aza-Cd R)药物处理MGC-803细胞72 h后,同法检测mi R-200b的表达量及启动子区甲基化水平变化。根据上述实验结果选择合适的药物作用浓度和时间即(10μmol/L,72 h)作为处理组。通过Transwell侵袭实验观测细胞侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡的分布情况;Western-blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin、ZEB1、Slug、基质金属蛋白酶(MMP)9等的表达水平。结果 mi R-200b在GES-1中表达量较MGC-803高(P=0.022)。启动子区甲基化水平则与之相反(P=0.034)。药物不同浓度作用后的MGC-803细胞系mi R-200b表达量有随浓度升高而升高的趋势,作用浓度为10μmol/L时mi R-200b启动子区甲基化水平较对照组低(P=0.043)。与对照组相比,处理组细胞晚期凋亡数增多;G0/G1期细胞数显著增多,S期显著减少;穿过Transwell小室细胞数显著减少;Western-blot实验表明E-cad-herin表达量升高,N-cadherin、ZEB1、Slug、MMP9表达量降低。结论 mi R-200b启动子区甲基化程度的不同可以影响其表达量,而mi R-200b表达量的异常又与胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭能力密切相关。