miR-492对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-492对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:RT-qPCR检测NSCLC组织及细胞株（Calu-1、A549、H1650和H1299）中miR-492的表达。A549细胞瞬时转染miR-492 mimics或miR-492 inhibitors,并通过划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验证实miR-492调控的靶基因。结果:NSCLC组织及细胞株中miR-492表达明显升高。将miR-492 mimics转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显增强。将miR-492 inhibitors转染A549细胞后,细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。PTPN9是miR-492的直接靶基因。结论:miR-492可能通过调节靶基因PTPN9,从而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-211通过靶向下调SATB2表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-211及SATB2基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,探究miR-211在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及其相关机制。方法:双荧光素酶报告系统验证miR-211和SATB2的相互作用机制;qRT-PCR检测miR-211和SATB2在NSCLC组织及癌旁组织中的表达情况;向A549细胞中转染miR-211 mimics、miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2,检验转染效率及转染后A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白表达水平;采用CCK-8实验和Transwell小室分别检测miR-211和SATB2表达变化对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:双荧光素酶报告系统结果提示SATB2 3' UTR是miR-211直接结合的靶位点。NSCLC组织中miR-211表达上调,SATB2表达下调,两者表达呈线性负相关(P＜0.05)。转染miR-211 mimics显著下调A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05);转染miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2使A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。CCK-8实验显示,相较于对照组,miR-211过表达组的A549细胞增殖率显著增加(P＜0.05),miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞增殖能力下降(P＜0.05)。Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞迁移和侵袭能力明显降低(P＜0.05)。在miR-211过表达组共转染SATB2过表达,使miR-211介导的对A549细胞增殖、迁移及侵袭的促进作用受到抑制。结论:下调miR-211的表达可以增加NSCLC细胞中SATB2转录及转录后表达水平,从而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

miRNA-1靶向DDX5抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨微小RNA(miR)-1对食管癌细胞株EC-109生长、侵袭及迁移的影响和其相关作用调控机制。方法:采用脂质体瞬时转染技术,对体外培养的EC-109细胞转染miR-1 mimics,分别采用CCK-8法和Transwell实验检测miRNA-1对食管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响;生物信息学预测miR-1可能的靶基因,并用双荧光素酶报告基因和Western blot法验证其靶基因。结果:过表达miRNA-1后,CCK-8和Transwell实验结果显示食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力显著降低(P<0.05);生物信息学分析显示DDX5可能是miR-1的靶基因;双荧光素酶报告基因结果显示miR-1与DDX5 mRNA 3' UTR相结合;Western blot结果显示高表达miR-1后,DDX5表达下降。结论:miRNA-1可能通过靶向负调控DDX5的表达抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

目的:探讨miR-145靶向调控SMAD3的表达对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用qRT-PCR检测miR-145和SMAD3在30例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达水平并分析其相关性。利用靶基因预测网站预测miR-145的潜在靶基因SMAD3,利用双荧光素酶报告基因实验验证。利用细胞转染实验对非小细胞肺癌A549细胞进行了miR-145 mimics、miR-145 inhibitor、siRNA SMAD3及其相关对照的细胞转染,采用Transwell实验检测转染后A549细胞侵袭能力的变化。使用Western blot检测上调或下调miR-145表达对A549细胞中SMAD3蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-145低表达,SMAD3高表达,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示miR-145可以与SMAD3 的 3'-UTR特异性结合,SMAD3是miR-145的靶基因。Western blot 结果显示,转染miR-145 mimics可以显著降低SMAD3蛋白的表达水平（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor则显著提高SMAD3蛋白的表达水平（P<0.01）。Transwell体外侵袭实验结果显示,与对照组相比,转染miR-145 mimic显著降低了A549细胞的侵袭能力（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor显著提高了A549细胞的侵袭能力（P<0.05）;与对照组相比,敲低SMAD3的表达A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.001）;与单独敲低SMAD3相比,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 mimics A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.05）,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 inhibitor A549细胞的侵袭能力无显著差异（P>0.05）。结论:miR-145在非小细胞肺癌组织中低表达,miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达发挥对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的抑制作用,为临床综合治疗提供了新的作用靶点。     

miR-30a通过靶向调控ZEB2抑制非小细胞肺癌的迁移与侵袭

目的:探讨miR-30a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的表达情况及miR-30a在肺癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及其机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-30a在不同NSCLC细胞株中的表达情况;采用脂质体2000转染miR-30a mimics和E盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2） siRNA;通过qRT-PCR检验miR-30a mimics和ZEB2 siRNA的转染效率及转染后ZEB2 mRNA的表达水平变化;Western blot检测转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后ZEB2蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-30a和ZEB2的相互作用机制;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测上调miR-30a和干扰ZEB2对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:实验结果显示,与正常人支气管上皮细胞相比,在不同NSCLC细胞株中miR-30a的表达呈不同程度下调;NSCLC细胞转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后均获得满意的转染效果:miR-30a mimics和ZEB2 siRNA明显降低了NSCLC细胞中ZEB2的mRNA和蛋白的表达水平,组间差异具有统计学意义。双荧光素酶报告实验验证miR-30a对ZEB2 3' UTR具有直接调控作用。细胞迁移实验和侵袭实验结果显示,与Blank组和NC组相比,miR-30a过表达组和ZEB2基因沉默组的A549细胞迁移和侵袭能力均明显降低,说明miR-30a mimics和ZEB2 siRNA均对A549细胞细胞迁移和侵袭有抑制作用。结论:上调miR-30a的表达水平可以负调控ZEB2转录后表达水平,通过抑制上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的进程来抑制肺癌细胞的转移和侵袭。     

miR-424对非小细胞肺癌A549细胞生长和侵袭的影响及分子机制

背景与目的已有的研究表明miR-424可抑制肾癌细胞增殖,抑制宫颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力,而其对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞的影响目前尚无系统研究。本研究探讨miR-424对NSCLC A549细胞生长和侵袭迁移能力的影响并进一步研讨其分子机制。方法应用CCK8检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞增殖的影响。应用Transwell检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞侵袭能力的影响。应用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞中MMP9和MMP2蛋白水平的影响。构建E2F63’UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-424对E2F6的靶向作用。采用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达后,A549细胞中E2F6的表达。结果过表达miR-424后,A549的生长和侵袭能力显著降低。过表达miR-424后,A549细胞的MMP-2和MMP-9表达下降。荧光素酶活性检测表明miR-424能够抑制E2F6的荧光素酶活性。过表达miR-424后,细胞内E2F6的表达降低。结论 miR-424能够通过调控E2F6而抑制A549的生长和侵袭能力。     

miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响北大核心

目的:探讨miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:选取标本库中2015年10月至2016年12月在我院胸外二科行手术治疗的非小细胞肺癌患者85例,检测癌组织和癌旁组织中miR-940的表达水平。将miR-940 mimics和miR-940 inhibitors转染至A549细胞中,检测转染后各组A549细胞中miR-940的表达水平。根据细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化。双荧光素酶实验证实miR-940的靶基因。结果:miR-940在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织中的表达量,差异有统计学意义(P=0.004)。细胞增殖实验结果显示,miR-940 mimics组的细胞增殖率显著低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,miR-940 mimics组的划痕愈合率明显低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,miR-940 mimics组的侵袭细胞数显著低于miR-940 inhibitors组的侵袭细胞数,差异有统计学意义(P<0.01)。Cbl-b是miR-940的直接靶基因。结论:miR-940在非小细胞肺癌中呈低表达,miR-940可能通过靶向抑制Cbl-b基因,进而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

[摘要] 目的：探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及迁移的分子机制。方法：收集2017 年6 月至2018 年6 月承德市中心医院62 例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460 和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p 及高迁移率族蛋白A2（HMGA2）的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18 或pcDNA3.1-HMGA2 转染A549 和NCI-H460 细胞,用CCK-8 法、Transwell 实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2 及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18 对miR-17-5p 或miR-17-5p 对HMGA2 的靶向调控作用。构建敲降HCG18 的A549 细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果：lncRNA HCG18 在NSCLC 组织和细胞中均高表达（均P<0.01）,发生淋巴结转移及晚期NSCLC 患者中HCG18 的表达显著提高,且HCG18 高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低（均P<0.01）。转染Si-HCG18 显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（均P<0.01）,上调上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,小鼠移植瘤体积显著减小（P<0.05）。双荧光素酶报告基因验证了HCG18 与miR-17-5p 靶向结合,以及miR-17-5p 与HMGA2 靶向结合。转染miR-17-5p 后NSCLC 细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制（均P<0.01）,促进上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,而转染miR-17-5p+HCG18 后可抑制miR-17-5p 的作用。结论：HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2 分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。     

miR-93 通过靶向EphA4 激活ERK通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的：探讨miR-93/Eph受体A4（EphA4）分子轴通过细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）通路对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）H460 和H1299 细胞增殖和迁移的影响。方法：用qPCR 检测H460 和H1299 细胞中miR-93 表达水平。分别在H460 细胞中转染miR-93 模拟物（mimics）和EphA4 过表达质粒、在H1299 细胞中转染miR-93 抑制剂（inhibitor）后,用MTT、Transwell 实验检测miR-93 对转染细胞增殖和迁移的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93 与EphA4 之间的靶向调控关系。用Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、EphA4、ERK和p-ERK 蛋白的表达水平,用MTT、Transwell 实验检测同时过表达miR-93 和EphA4 对H460 细胞增殖和迁移的影响。结果：miR-93 在H1299 细胞中表达水平高于H460 细胞（P<0.01）。过表达miR-93 促进H460 细胞增殖和迁移（均P<0.01）,敲低miR-93 抑制H1299 细胞增殖和迁移（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-93靶向调控EphA4,过表达miR-93明显下调H460细胞中EphA4 mRNA和蛋白表达水平（均P<0.05）,过表达miR-93 通过靶向EphA4 并激活ERK通路促进H460 细胞的增殖和迁移（均P<0.01）。结论：miR-93 促进NSCLC细胞增殖和迁移,其机制可能与靶向调控EphA4 并激活ERK通路有关。     

Effect of miR-335 upregulation on the apoptosis and invasion of lung cancer cell A549 and H1299

MicroRNAs are small non-coding RNAs that may also function as oncogenes and tumor-suppressor genes, as the abnormal expression of microRNAs is associated with various human tumors. However, the effect of miR-335 on the lung cancer cells remains unclear. The aim of the paper was to study the expression of miR335 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and miR335’s relation to the metastasis, invasion, and apoptosis in lung cancer cells A549 and H1299. qRT-PCR was used to identify the miR-335 expression. The effects of miR-335 on cell proliferation, apoptosis, and invasion were further analyzed. Luciferase reporter assay and Western blot were to verify Bcl-w and SP1 as potential major target genes of miR-335. Finally, the effect of Bcl-w on miR-335-induced cell survival was determined. Our results showed that miR-335 expression was significantly lower in NSCLC tissue, which was significantly associated with lymph node metastasis. In contrast to cells in blank and negative control groups, incidence of apoptosis was significantly higher (P?<?0.05) and the number of cells migrating through matrigel was significantly lower (P?<?0.05) in miR-335 mimics transfected group. Western blot and luciferase reporter assay demonstrated that miR-335 could bind to the putative binding sites in Bcl-w (or SP1) mRNA 3′-untranslated region to visibly lower the expression of Bcl-w (or SP1). The introduction of Bcl-w cDNA without 3′-untranslated region abrogated miR-335-induced cell survival. These results indicated that upregulation of miR-335 can simultaneously suppress the invasiveness and promote apoptosis of lung cancer cell A549 and H1299 by targeting Bcl-w and SP1. Therefore, miR-335 may be a potential therapeutic target in NSCLC treatment.     

lncRNA SNHG11通过吸附miR-193a-5p促进NSCLC细胞A549的恶性生物学行为

目的：探讨lncRNA SNHG11对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能机制。方法:qPCR检测人胚肺细胞HEL-1和NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11和miR-193a-5p的表达水平,向A549细胞中转染SNHG11小干扰RNA(si-SNHG11)、miR-193a模拟物（miR-193a mimic）或miR-193a抑制剂（miR-193a inhibitor）后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室和细胞划痕实验检测对细胞侵袭和迁移的影响,WB法检测对细胞增殖抗原Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的影响,双荧光素酶报告实验验证lncRNA SNHG11与miR-193a-5p的靶向关系。结果：与人胚肺细胞HEL-1相比,NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11均呈高表达、miR-193a-5p呈低表达（均P<0.05）;沉默lncRNA SNHG11可抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,降低细胞中Ki67和Cyclin...     

miR-203下调Bmi-1基因对肺腺癌细胞侵袭转移的影响

目的 探讨miR-203在肺腺癌中的表达,并分析其与肺腺癌细胞侵袭转移的关系及其分子机制。方法 实时定量PCR检测40例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-203的相对表达水平及其与临床病理特征之间的关系;实时定量PCR检测H1650、A549、H1975、SPC-A-1肺腺癌细胞株中miR-203表达水平;生物信息学软件预测miR-203潜在的靶基因;脂质体2000介导miR-203模拟物、Bmi-1基因或Bmi-1 siRNA转染H1975细胞株;Western blotting检测Bmi-1蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-203是否作用于Bmi-1 mRNA的3’UTR 区预测靶位;Transwell小室侵袭实验检测H1975细胞株的侵袭转移能力。结果 40例肺腺癌组织中miR-203的相对表达量为0.065±0.013;肺腺癌miR-203表达与淋巴结转移有关,而与其他临床病理参数均无关;miR-203在肺腺癌细胞株H1650、A549、H1975、SPC-A-1中的相对表达量分别为0.280±0.102、0.308±0.168、0.167±0.073和0.287±0.096。生物信息学软件预测Bmi-1是miR-203的潜在靶基因;过表达miR-203可明显降低Bmi-1蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因检测证明miR-203可作用于Bmi-1基因mRNA的 3’UTR区预测靶位。过表达miR-203+Bmi-1 siRNA可显著抑制肺腺癌细胞株H1975的侵袭迁移能力;在miR-203过表达的H1975细胞株中同时过表达Bmi-1可恢复其侵袭能力。结论 miR-203可通过下调Bmi-1基因表达抑制H1975肺腺癌细胞株的侵袭转移,是一种潜在抑制转移的miRNA分子。     

miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

miR-374 a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况.采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975...