虎杖中有效成分白藜芦醇对HeP-2细胞的生长抑制及诱导凋亡作用初探

目的：对白藜芦醇的体外抗肿瘤作用进行研究，探讨其作用机制。方法：用体外细胞培养，采用MTT法，并用流式细胞仪观察不同浓度白藜芦醇对HeP-2细胞生长的影响。结果：一定浓度白藜芦醇能抑制HeP-2细胞的恶性增殖，诱导HeP-2细胞出现凋亡峰，使HeP-2G0／G1期细胞增加，S期细胞减少，呈现G0／G1期阻滞现象。同时，不影响正常小鼠成纤维3T3细胞的生长。结论：一定浓度白藜芦醇可以抑制HeP-2生长，诱导HeP-2细胞发生凋亡，具一定的时间—剂量依赖性，且对正常细胞是无害的。     

番茄红素对人前列腺癌细胞（DU145）生长抑制的离体和整体水平研究

目的：研究番茄红素对人前列腺癌细胞DU145的影响。方法：体外培养的人前列腺癌细胞DU145经番茄红素作用后用苔盼蓝色进行活细胞计数,绘制生长曲线并计算抑制率;应用流式细胞仪分析番茄红素对DU145细胞周期和凋亡的影响。制作裸鼠人前列腺癌模型,观察番茄红素在整体动物上的作用。结果：番茄红素可以明显抑制DU145细胞的生长,且呈剂量－效应和时间－效应关系。10、20、40μmol/L处理细胞7d后,细胞增长的抑制率分别为10．76％、92．90％99．11％（P＜0．01）。裸鼠人前列腺癌模型上的研究显示,6％番茄红素油树脂可显著抑制腺瘤的生长、300mg/kg剂量组腺癌抑制率可达到75．76％（P＜0．05）。用经番茄红素处理过的细胞致瘤力消失。流式细胞仪分析显示番茄红素影响该细胞周期并引起细胞凋亡,凋亡率高达42．42％。结论：番茄红素可以在离体细胞和整体动物水平明显抑制雄激素非依赖型人前列腺癌DU145,其抑制机制可能是通过影响人前列腺癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

虎杖中白藜芦醇提取分离研究

目的考察虎杖中白藜芦醇苷的最佳提取分离工艺。方法研究酶法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件,从酶的种类、温度、PH值、酶解时间等方面分析。结果最佳提取工艺为：采用植物水解酶,提取温度40℃,酶解pH值3.0,酶解时间7 h,为最佳提取条件。结论酶处理后,可显著提高虎杖中白藜芦醇的得率,且该提取工艺稳定性好且简便易行。     

虎杖白藜芦醇对人肝癌HepG-2细胞株增殖和生长周期的影响

目的探讨虎杖中白藜芦醇对人肝癌Hep G-2细胞株增殖和生长周期的影响。方法采用微波辅助法提取虎杖中白藜芦醇,将12.5,25.0,50.0,100.0μmol·L-1白藜芦醇作用人肝癌Hep G-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测虎杖中白藜芦醇对肝癌细胞Hep G-2细胞抑制增殖作用,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的分布。结果虎杖中白藜芦醇能显著抑制Hep G-2细胞的生长,并呈现时间-浓度依赖性。流式细胞仪结果显示,白藜芦醇作用于细胞Hep G-2且细胞被阻滞于S期,呈现出剂量依赖性。不同药物浓度白藜芦醇(12.5,25.0,50.0,100.0μmol·L-1)作用人肝癌Hep G-2细胞株48 h后,随着药物浓度的增大,G0/G1期的比例逐渐减小,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。而实验组细胞S期的比例随着浓度增大而增加,分别达到(44.82±1.21)%,(54.00±1.71)%,(65.21±3.66)%,(77.50±4.21)%,与对照组(34.75±3.92)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虎杖中白藜芦醇能明显抑制肝癌Hep G-2细胞的增殖,并诱导其细胞凋亡,可引起肝癌Hep G-2细胞的S期阻滞。     

酶法提取虎杖中的白藜芦醇

目的研究酶法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件。方法以白藜芦醇的提取率为指标,考察不同因素对提取率的影响规律,并在此基础上运用均匀设计和优化算法选出优化的因素组合。结果最佳提取工艺为:提取温度45℃,酶解pH值3.0,酶解时间8.13 h,植物水解酶的用量为29.7%(w/w),与传统不加酶的提取工艺相比,酶处理后提取率提高了近5倍。结论酶处理后,可显著提高虎杖中白藜芦醇的得率。     

虎杖中白藜芦醇提取纯化工艺研究

目的:研究虎杖中白藜芦醇的最佳提取纯化工艺。方法:采用碱提酸沉法,以CaO与原料的比例、料液比、酸的种类、浸提时间为考察因素,以白藜芦醇的含量和收率的加权平均值为综合评分指标进行正交试验。结果:最佳提取纯化工艺为CaO与原料的比例9:100,料液比1:8,酸为盐酸,浸提时间45 min。结论:所选工艺节约能源、操作简单,适合工业化生产。     

HPLC-PDA法测定虎杖中的白藜芦醇

目的 建立虎杖中白藜芦醇含量的测定方法 .方法 采用Waters Nova-Pak C18(3.9mm×150mm id.4μm),以甲醇:乙腈(70:30)为流动相,以306nm为检测波长.结果 测得虎杖中白藜芦醇的含量为0.544mg·g-1,平均加样回收率为96.23%,RSD为2.22%.结论 本方法 简便快捷,准确,适用于虎杖中的白藜芦醇的测定.     

酶解法提取虎杖中白藜芦醇

目的研究酒曲对虎杖中白藜芦醇的酶解提取效果的影响。方法采用单因素实验及正交试验进行优选,考察酶解温度、酶解时间、酒曲用量等因素的影响,优化提取条件;采用HPLC法测定提取液中白藜芦醇含量,计算提取率,比较提取效果。结果虎杖通过酒曲酶解后,能提高白藜芦醇的提取率。结论较优工艺为酒曲用量0．5％,40℃酶解3h。该工艺对比直接提取法提取率提高近2倍,且重现性好,适宜工业化生产。     

生物转化法提高虎杖中白藜芦醇的含量

利用微生物产生的糖苷酶将虎杖中的虎杖苷转化为白藜芦醇,可以提高虎杖中白藜芦醇的含量。本文从虎杖的微生物富集物中分离筛选到一株霉菌XW-2,其发酵制备的糖苷酶粗酶液处理虎杖,能显著提高其白藜芦醇含量。依据形态学特征和18SrDNA序列比对,XW-2菌株鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger);产酶培养基的主要成分和pH值经过优化后,发酵制备的糖苷酶粗酶液处理虎杖,虎杖中的白藜芦醇含量达到了9.24 mg/g,是未经处理虎杖中2.27 mg/g的4.1倍。利用黑曲霉发酵制备的糖苷酶粗酶液直接处理虎杖来提高虎杖中白藜芦醇含量,具有方法简单、成本低等优点,在中药现代化中有较高的应用价值。     

不同产地虎杖中白藜芦醇与白藜芦醇苷含量测定

目的建立测定广西不同产地虎杖药材中白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱：迪马C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相A：乙腈;流动相B：0.3%磷酸;梯度洗脱（15%～40%A,0～25 min）;检测波长：254 nm;柱温：25 ℃;流速：1.0 mL&#8226;min－1。结果测得广西产虎杖药材中白藜芦醇和白藜芦醇苷最高含量分别为1.998 3%和2.776 1%,最低含量分别为0.356 1%和0.370 5%。结论所建立的方法简便可靠,快速,重复性好,结果稳定,便于对虎杖药材进行质量控制。不同产地虎杖药材中白藜芦醇和白藜芦醇苷含量差异明显。     

电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究

基于发现的白藜芦醇苷对 L uminol电化学发光强烈的抑制作用 ,建立了电化学发光法测定白藜芦醇苷含量的新方法。白藜芦醇苷浓度在 0 .0 5～ 12 .6 mg· L-1范围内与发光减少值分段呈良好的线性关系。检出限为0 .0 5 mg·L-1。对 0 .2 5 mg· L-1白藜芦醇苷平行测定 11次 ,其相对标准偏差为 2 .2 5 %。该法具有简便、快速、灵敏的特点 ,应用于中药虎杖中的白藜芦醇苷的测定 ,结果满意。     

不同大孔树脂吸附虎杖白藜芦醇苷的研究

目的 筛选对虎杖中白藜芦醇苷具有最佳吸附和解吸作用的树脂。方法 用不同的树脂对白藜芦醇苷作静态吸附，以吸附量和解吸量为考察指标，选择最佳的树脂。结果SP850树脂饱和吸附量可达16．12mg／g，吸附率为93．29％；以75％的乙醇为洗脱液，解吸量为10.53mg／g，解吸率为74．44％，明显优于其他树脂。结论 SP850树脂对虎杖中白藜芦醇苷有较好的吸附分离性能。     

西南5个产区虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量比较

目的:建立同时测定虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量的方法,并对西南5个产区虎杖样品中2种成分的含量进行比较。方法:采用高效液相色谱法同时测定2种成分。色谱柱为AgilentC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(23:77,V/V),检测波长为306nm。结果:虎杖苷和白藜芦醇的进样浓度分别在48～480μg.mL-1(r=0.9990)、7.2～72.0μg.mL-1(r=0.9992)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;两者平均加样回收率分别为98.69%和99.42%,RSD分别为1.68%和3.39%(n均为6)。西南5个产区虎杖中虎杖苷含量高低依次为四川乐山>四川都江堰、重庆永川>贵州遵义、贵州毕节;白藜芦醇含量高低依次为贵州遵义、贵州毕节>四川都江堰、四川乐山>重庆永川。结论:本试验结果可为虎杖的质量控制提供参考依据。     

SP850树脂分离纯化虎杖白藜芦醇苷的研究

目的 研究SP850大孔树脂分离纯化虎杖白藜芦醇苷的工艺条件及技术参数。方法 以白藜芦醇苷吸附量和解吸率为指标，用高效液相色谱法（HPLC法）测定白藜芦醇苷的含量，选择最佳工艺条件。结果 虎杖浓度为0．20g／mL，流速为1BV／h（BV为柱长体积倍数）时，吸附效果较好；用7．5倍量树脂体积的40％乙醇解析效果较好。结论 用SP850大孔树脂分离纯化虎杖白藜芦醇苷可行，且具有较好的应用前景。     

高效液相色谱法测定复方虎杖紫草油中虎杖苷和白藜芦醇的含量

目的建立同时测定复方虎杖紫草油中虎杖苷和白藜芦醇含量的方法。方法采用Zorbax Eclipse XDB-C18（150×4.6,5μm）;流动相：乙腈-0.1%冰醋酸溶液,检测波长：307nm。结果虎杖苷和白藜芦醇分别在0.026～0.520mg.mL-1（r=0.9998）和0.017～0330mg.mL-1（r=0.9998）浓度范围内有良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.1%,98.3%;RSD%均小于2.0%。结论此方法操作简便、专属性强、灵敏度高、重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

虎杖中白藜芦醇苷提取方法及工艺的优化

目的:建立虎杖中白藜芦醇苷的提取方法及工艺.方法:采用回流提取、CO2超临界流体萃取、超声提取的方法,测定虎杖中白藜芦醇苷的含量.结果:从虎杖中提取白藜芦醇苷的最佳工艺为20倍75%乙醇回流提取1 h,白藜芦醇苷的得率达到25.8 mg·g-1.结论:采用乙醇回流方式提取白藜芦醇苷的效果明显优于水回流提取、CO2超临界流体萃取以及超声提取的效果.     

白藜芦醇抑制晶体上皮细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的 探讨白藜芦醇(Res)对晶体上皮细胞体外增殖的影响,观察Res诱导晶体上皮细胞凋亡的作用.方法 用不同浓度的Res处理晶体上皮细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测白藜芦醇对晶体上皮细胞增殖的影响,通过HE染色、电子显微镜、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪Annexin V荧光染色,观察细胞的形态学改变,并定量检测细胞凋亡.结果:Res抑制了晶体上皮细胞的生长与增殖(P＜0.01),呈浓度依赖性反应;Res能明显诱导晶体上皮细胞凋亡,对照组与100μmol/L、200μmol/L Res处理24h后的细胞凋亡率分别为4.67%、17.31%、32.77%.结论 Res能通过诱导晶体上皮细胞凋亡而抑制其生长与增殖,该研究为进一步探讨Res在白内障术后后囊膜混浊发生的防治提供了一定的实验依据.     

虎杖中白藜芦醇的提取工艺

目的 研究虎杖中白藜芦醇的最佳提取工艺.方法 采用L_9(3~4)正交实验,以白藜芦醇的提取率为评价指标.选用酸性溶剂超声提取.结果 乙醇浓度和提取次数对提取效率有显著影响,白藜芦醇的提取率可达0.86%.最佳提取工艺为:采用10倍量(pH2)的60%乙醇超声提取2次,每次10 min.结论 所用工艺对中药虎杖大规模开发利用具有重要意义.     

白藜芦醇通过上调TET1的表达抑制前列腺癌细胞系的迁移和侵袭

目的:研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人前列腺癌细胞系PC3和DU145增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:不同浓度的Res处理前列腺癌细胞(PCa)系后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法验证Res对PCa细胞生长的抑制,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Res对TET1表达的影响.采用...     

虎杖药渣中白藜芦醇的提取和纯化

建立了虎杖药渣中白藜芦醇的含量测定方法和提取纯化工艺.以白藜芦醇含量为评价指标,采用正交试验优化提取工艺.以大孔吸附树脂、柱色谱及重结晶法分离并纯化提取物浸膏中的白藜芦醇.结果表明,最佳提取工艺为虎杖药渣用90％乙醇加热至85℃回流提取3次,每次料液比均为1∶10,提取时间分别为1.5、1和0.5 h.所得提取物浸膏用水溶解后经D101型大孔吸附树脂吸附富集、硅胶柱色谱纯化和丙酮重结晶,可获得纯度达99％的白藜芦醇.