阿霉素通过激活Notch信号通路促进骨肉瘤细胞干性特性

  目的   骨肉瘤干细胞具有化疗耐药性。本文拟探讨耐阿霉素细胞干细胞样特性的改变,以及Notch通路在其中的调控作用。   方法   采用2 μM的阿霉素处理骨肉瘤细胞143B 24 h,去药继续培养5 d,检测干细胞样特性的改变,包括形态学的改变、Stro-1+/CD117+双阳性细胞比例、干细胞相关基因表达、悬浮成球的能力、EMT特性。qPCR及Western blot检测Notch通路受体及靶基因表达情况。利用Notch抑制剂DAPT预处理,检测其对耐阿霉素骨肉瘤细胞的干细胞样特性的影响。构建裸鼠移植瘤模型,检测Notch抑制剂对体内成瘤的影响。   结果   耐阿霉素骨肉瘤细胞中Stro-1+/CD117+比例增高,干细胞相关基因Oct4、Sox2表达量增加,悬浮成球能力增强,EMT特性上调。qPCR及Western blot结果显示阿霉素耐药的骨肉瘤细胞中Notch受体胞内段NICD1及靶基因Hes1、Hey1等表达量上调。Notch信号抑制剂能够增强骨肉瘤对阿霉素的化疗敏感性,抑制体外阿霉素对骨肉瘤干细胞的富集作用。动物实验表明,Notch抑制剂DAPT能够抑制体内成瘤。   结论   阿霉素能够富集骨肉瘤干细胞,Notch信号通路参与其中调控机制,抑制Notch通路能够靶向杀伤骨肉瘤细胞,增加化疗药物敏感性。      

Fas通路通过激活ERK1/2通路在结肠癌细胞中诱导上皮-间质转化

  目的   探索Fas通路在结肠癌细胞中诱导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的分子机制。   方法   分别对结肠癌细胞SW480及DLD1予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理。作用3d后分别提取实验组和对照组细胞的总蛋白、总RNA, 并进行Western blot、RT-PCR检测, 分析FasL作用下结肠癌细胞的上皮标记物、间质标记物以及EMT相关的转录因子的表达状况。在低剂量FasL作用3d后行免疫荧光检测, 观察EMT相关转录因子在细胞内的分布情况。建立稳定敲除Snail及Twist的结肠癌细胞系, 再予以低剂量FasL刺激, 采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程。对结肠癌细胞SW480予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理后, 通过Western blot检测实验组和对照组细胞ERK1/2通路及p38通路的激活状况。对SW480细胞进行信号通路抑制剂的预处理, 再予以低剂量FasL刺激, 采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程, 从而探索Fas通路诱导EMT的可能机制。   结果   低剂量FasL可使结肠癌SW480和DLD1细胞的上皮标记物表达下调, 间质标记物表达上调, EMT相关转录因子在细胞核周聚集, 细胞发生梭形改变, 提示发生EMT。而将结肠癌细胞的Snail或Twist基因敲除后, FasL的上述诱导作用明显减弱。低剂量FasL可激活结肠癌细胞的ERK1/2通路激活, 而ERK抑制剂可减弱FasL诱导的EMT过程   结论   Fas通路可能通过激活ERK1/2通路诱导结肠癌细胞发生EMT。      

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。     

与肿瘤转移相关的上皮间质转化信号通路研究进展

恶性肿瘤细胞的侵袭和转移是患者死亡的主要原因,而上皮间质转化（epithelial　mesenchymal　transition,EMT）是肿瘤细胞侵袭和迁移的关键步骤。肿瘤细胞发生上皮间质转化可通过多种信号通路介导产生,深入了解与EMT相关的信号通路,可在信号通路中设立靶点,中止EMT的发生,进而阻止肿瘤侵袭、转移。本文就与肿瘤转移相关的EMT信号通路研究进展作一综述。     

Gab2通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的上皮-间质转化

背景与目的：越来越多的证据显示,Grb2协同结合蛋白2(Grb2 binding protein-2,Gab2)与肿瘤的侵袭转移相关,但Gab2与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系尚不清楚。本研究旨在探讨Gab2对乳腺癌EMT标志物的影响,明确Gab2在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法：采用免疫组织化学染色法检测80例乳腺癌组织中Gab2及EMT标记物上皮性钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况并分析其相关性,用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测乳腺组织Gab2的表达情况,采用小干扰RNA(siRNA)技术降低乳腺癌细胞系MDA-MB-231中Gab2的表达,采用划痕实验检测表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后转染细胞的侵袭能力变化,用Western blot检测敲低Gab2后MDA-MB-231细胞中E-cadherin及vimentin的表达情况,同时检测p-GSK-3β的表达情况、转录因子Snail转核情况。结果：Gab2在乳腺癌组织中的表达与E-cadherin的表达呈负相关,而与vimentin的表达呈正相关(P<0.05);乳腺癌组织中Gab2的表达量明显高于正常乳腺组织;siRNA质粒转染后,SiGab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功,划痕实验显示细胞的侵袭能力减弱,表明Gab2影响乳腺癌细胞系的侵袭能力;敲低Gab2后,MDA-MB-231细胞中的E-cadherin的表达明显升高,而vimentin的表达明显降低;GSK-3β的磷酸化受到抑制,而Snail在敲低Gab2的细胞核中的表达明显下调。结论：Gab2可以通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的EMT,从而促进乳腺癌的侵袭和转移。     

Snail调控肿瘤细胞上皮间质转化的相关信号通路

肿瘤的转移和侵袭是肿瘤患者死亡的主要原因,肿瘤转移和侵袭的过程中涉及多种因素,上皮间质转化（EMT）是促进其中某一环节的关键因素。转录因子Snail作为肿瘤细胞EMT的关键调控因子,起到了重要的作用。通过对Snail调控肿瘤细胞EMT的相关信号通路的研究,有助于我们更好的理解肿瘤的转移及侵袭机制,为寻找有效的靶点提供理论依据。     

结肠癌上皮间质转化信号通路机制研究

上皮间质转化(EMT)在结肠癌发生发展、侵袭转移中发挥重要作用.转化生长因子-β、Wnt/β-catein、Notch、核转录因子-κB、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路对结肠癌EMT过程起重要的诱导调控作用.进一步阐明EMT信号通路,可为结肠癌靶向治疗带来更多的机会.     

信号通路调控上皮间质转化参与肿瘤侵袭转移的分子机制

上皮间质转化（EMT）是上皮细胞向间充质细胞分化的过程,EMT在恶性肿瘤的侵袭转移中广泛存在。EMT的发生与多种细胞因子、信号转导通路及转录因子有关,受多种影响因素的共同调控。上皮细胞表型的不同程度转化是细胞内外信号传递共同作用的结果。细胞外信号通过与细胞表面特异性受体相结合将信号转入细胞内,再通过胞内的信号转导途径,活化不同的核内转导因子,最终调节转导基因的表达。     

毛兰素通过Hedgehog 信号通路调控结直肠癌HT29 细胞的上皮间质转化和血管生成

目的： 基于Hedgehog 信号通路探讨石斛提取物毛兰素（erianin,ER）抑制结直肠癌HT29 细胞上皮间质转化（EMT）和血管生成的作用机制。方法: 将HT29 细胞分为空白对照组、ER-L（25 μg/mL）组、ER-M（50 μg/mL）组、ER-H（75 μg/mL）组、 ER-H（75 μg/mL）+PM（Hedgehog 通路激活剂,1.5 μmol/L）组。MTT法检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell 实验检测细胞迁移与侵袭能力,血管拟态形成实验检测血管生成能力,WB法检测与EMT进程、Hedgehog信号通路和拟态血管生成相关蛋白质的表达。结果: HT29 细胞增殖活性随着ER质量浓度的升高而逐渐降低（P<0.05）;与空白对照组比较,ER各组细胞克隆形成率、迁移与侵袭能力、血管形成能力、间质标志蛋白（N-cadherin、vimentin）、血管生成相关蛋白（VEGF、VE-cadherin）及Hedgehog 通路相关蛋白（SHH、GLI1、SMO、c-Myc）表达均显著下降（均P<0.05）,上皮标志蛋白（E-cadherin）、Hedgehog 通路中融合蛋白抑制剂（SUFU）蛋白表达均显著上升（均P<0.05）;PM 处理在一定程度上逆转了ER 对于HT29细胞增殖、EMT和血管生成的抑制作用（均P<0.05）。结论: ER可以抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移与侵袭、EMT和血管生成,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关。     

ROR1-AS1调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体 1 反义 RNA 1（tyrosine protein kinase transmembrane receptor 1 antisense RNA 1,ROR1-AS1）调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化。乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC（转染shRNA 对照）、sh-ROR1-AS1（转染ROR1-AS1 shRNA）、sh-ROR1-AS1+Jagged1组（转染ROR1-AS1 shRNA,Notch1通路激活剂Jagged1处理）。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9,C-Caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3,C-Caspase-3）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、Notch1、Hes1蛋白表达。 ［结果］ 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞中ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞（P<0.05）。与对照组、sh-NC组比较,sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00%±9.82%,99.74%±12.05%,58.91%±6.33%),细胞凋亡率升高(4.81%±0.26%,4.93%±0.34%,20.58%±2.11%）,细胞迁移数目( 225.36±12.84个,224.89±19.56个,140.89±13.64个）和侵袭数目(180.47±16.32个,177.54±16.92个,110.44±10.87个)减少,细胞中C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加,N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与sh-ROR1-AS1组比较,sh-ROR1-AS1+Jagged1组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00%±11.58% vs 147.36%±12.05%）,细胞凋亡率降低(19.54%±1.74% vs 8.36%±0.75%),细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目（107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个）均升高,C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低,N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高（P<0.05）。［结论］ 下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力,激活细胞凋亡。     

Notch信号通路在肿瘤干细胞中的研究进展

肿瘤干细胞是一类具有自我更新分化能力,在移植动物宿主中具有致瘤性且对放化疗抵抗的细胞小亚群,是肿瘤复发转移的主要原因。Notch信号通路在进化中高度保守,具有调控细胞增殖、分化和凋亡的功能,且在维持肿瘤干细胞的干细胞特性方面发挥重要作用,在干细胞中与多个信号通路存在交互作用。通过抑制Notch信号通路靶向作用肿瘤干细胞的治疗策略已进入临床试验阶段,具有广阔的发展前景。全文就Notch信号通路在肿瘤干细胞中的作用及其与Wnt、TGF-β、Her-2信号通路的交互作用进行阐述与分析。     

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞中的激活及对细胞周期的影响

目的 观察Notch1信号途径在食管鳞癌EC9706细胞中的激活状态及 其对细胞周期的影响。方法 通过免疫细胞化学检测Notch1基因在 食管鳞癌细胞株EC9706细胞中的表达,并通过免疫荧光方法研究 Notch1基因在EC9706细胞中的激活状态。并且利用CCK-8试剂检测食管癌细胞的增殖状态。此外,采用RT-PCR和Western blot技术检 测与细胞周期相关基因的表达,最后通过流式细胞仪进一步探索激 活的Notch1信号途径对细胞周期的影响。结果 转染pcNICD后的食 管鳞癌细胞株中发现Notch1基因的表达。免疫荧光结果显示,转染 pcNICD后的食管鳞癌细胞株中Notch1信号途径处于激活状态。与未处理和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细 胞的生长速率明显受到抑制（P<0.01）。此外,与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细胞的CDK2, cyclin D1和E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调（P<0.05）。转染pcNICD的EC9706细胞在G0/G1期的比率高达74.5%,而未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞在G0/G1期的比率分别为59.1%和59.0%。细胞周期分析显示瞬时表达NICD的EC9706细胞在G0/G1期比率的增加,提示激活的Notch1信号途径能够诱导细胞静止在G₀/G₁ 期。结论 Notch1信号途径的激活引起食管鳞癌细胞的细胞周期 静止,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。     

ROCK2调控骨肉瘤细胞的侵袭及迁移

目的探讨骨肉瘤组织中ROCK2的表达对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学染色法检测骨肉瘤组织中ROCK2的表达;沉默骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,采用划痕愈合及Transwell实验分析骨肉瘤细胞的侵袭及迁移能力,并通过尾静脉转移实验检测降低ROCK2表达对体内转移的影响。检测骨肉瘤细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,并在下调ROCK2的骨肉瘤细胞中加入EMT诱导剂TGF-β,检测其对细胞侵袭及迁移的影响。结果 ROCK2在骨肉瘤组织中的表达显著高于其相应的癌旁组织(P<0.05),下调骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,其体内外侵袭及迁移能力明显被抑制(P<0.05);EMT相关蛋白E-cadherin表达下降,而N-cadherin及Vimentin蛋白明显增加;诱导骨肉瘤细胞中EMT发生后能够减弱下调ROCK2对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的抑制作用。结论 ROCK2在骨肉瘤组织中表达升高,通过诱导EMT的发生进而促进骨肉瘤细胞的侵袭及迁移。ROCK2可能是骨肉瘤靶向治疗的潜在生物标志物。     

The Notch pathway in colorectal cancer

Colorectal cancer (CRC) is the third leading cause of cancer death worldwide. It is also the third most common cancer diagnosis among men, and the second most common cancer diagnosis among women. Globally, CRC can account for nearly 694,000 annual deaths. It is widely appreciated that CRC is the result of dysregulated cellular pathways that promote an inappropriate stem‐cell‐like phenotype, apoptotic resistance, unchecked proliferation and metastatic spread. While no single pathway is responsible for all of these attributes, an array of recent studies suggests a pivotal role for abnormal Notch‐1 signaling in CRC, in part due to interconnectivity of Notch with other pathways. This review will summarize recent evidence for a role of Notch signaling in CRC, will consider interconnectivity between Notch and other pathways involved in CRC and will discuss the possible utility of targeting Notch as a CRC therapeutic.     

Notch及Wnt信号通路与子宫内膜癌

Notch信号通路是少数反复调节细胞增殖和凋亡的信号转导系统;Wnt信号通路是一个多环节、多作用位点的生长发育调控信号通路.二条通路的异常激活或结构性活化与子宫内膜癌的发生发展有关,本文就Notch及Wnt信号通路与子宫内膜癌发生发展的研究概况作一综述,为未来子宫内膜癌的治疗提供理论参考.     

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡CSCD

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。     

抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。     

HOXD Antisense Growth-Associated Long Noncoding RNA Promotes Triple-Negative Breast Cancer Progression by Activating Wnt Signaling Pathway

PurposeTriple-negative breast cancer (TNBC) is the most lethal subtype of breast cancer owing to high heterogeneity, aggressive nature, and lack of treatment options, which has a substantial deleterious effect on patients'' lives. HOXD antisense growth-associated long noncoding RNA (lncRNA) (HAGLR) plays tumor-promoting roles in many cancers. In this study, we aimed to explore the role of HAGLR in TNBC.MethodsQuantitative real-time polymerase chain reaction assays were used to examine the expression of RNAs. Functional experiments were conducted to test the biological behavior of TNBC cells. Moreover, MS2-RNA immunoprecipitation, luciferase reporter, and RNA pull-down assays were conducted to verify the binding relationship between HAGLR, microRNA-143-5p (miR-143-5p), and serine- and arginine-rich splicing factor 1 (SRSF1).ResultsHAGLR was found to be highly expressed in TNBC tissues and cells, and inhibiting HAGLR suppressed cell proliferation, migration, and invasion and promoted cell apoptosis in TNBC. Meanwhile, miR-93-5p was shown to bind to HAGLR and SRSF1. In addition, SRSF1 plays an oncogenic role in TNBC. Importantly, HAGLR could activate the Wnt signaling pathway by sponging miR-93-5p to upregulate SRSF1; thus, accelerating TNBC progression.ConclusionHAGLR could promote the progression of TNBC through the miR-93-5p/SRSF1 axis to activate the Wnt signaling pathway.