豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析

目的：探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况.方法：采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性.结果：克隆测序结果为一923 bp的片段,相当于Genbank上公布的小鼠无毛基因cDNA序列的3 150～3 565 bp位置,包含4个外显子（外显子13～16）及3个内含子（内含子13～15）;与本室以前所测昆明小鼠无毛基因部分DNA序列100%同源,其外显子部分共416 bp,可编码138个氨基酸,与国外公布的小鼠、大鼠、人的无毛基因核苷酸同源性分别为100%、95%、84%,氨基酸同源性分别为100%、97.8%、84%.结论：①克隆定序了豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列;②排除了豫医无毛小鼠无毛基因的突变发生于本段序列的可能;③无毛基因在哺乳动物体内同源性很高,应属保守基因,其蛋白质产物可能在一些基本的调节途径中起重要作用,推测豫医无毛小鼠的无毛基因可能也位于14号染色体.     

豫医无毛小鼠无毛基因DNA原位PCR检测

目的：探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法：应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片，并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加Taq DNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果：豫医无毛小鼠皮肤和脾石蜡组织切片中检测到清晰的杂交信号，而且杂交信号位于细胞核内；4组对照均未出现杂交信号。结论：原位PCR在基因组变异检测方面实用、有效。     

豫医无毛小鼠无毛基因的比较生物学分析

目的:分析豫医无毛小鼠与其他物种间无毛基因组成的差异.方法:采用RT-PCR方法对豫医无毛小鼠无毛基因的cDNA序列进行克隆测序,并借助生物信息学分析技术对小鼠、大鼠、猴和人的无毛基因及其所编码的氨基酸序列进行比较生物学分析.结果:获得了豫医无毛小鼠无毛基因的全长4 014 bp的cDNA序列 (GenBank 登录号:AY547390).豫医无毛小鼠与国内外报道的2种小鼠、大鼠、猴、人等5种动物的核苷酸同源性分别为99.9%、99.7%、94.3%、 81.7%、 81.8%,氨基酸同源性分别是99.8%、99.7%、94.5%、79.8%、80.0%.结论:无毛基因是一个高度保守基因,不同物种间具有高度同源性.     

豫医无毛小鼠无毛基因部分内含子突变研究

目的 研究豫医无毛小鼠突变的分子机制。方法 对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对二者扩增片段克隆后测序,对结果进行比较,以确定豫医无毛小鼠无毛基因的特异性程度。结果 本实验共测出豫医无毛小鼠DNA序列1746bp和昆明小鼠DNA序列1733bp,两者不同之处有32处,均位于内含子,突变形式包括插入、缺失和点突变。结论 无毛性状的产生可能与内含子中的插入、缺失和点突变有关。     

豫医无毛小鼠细胞遗传学及生物学特性研究

目的 :研究无毛小鼠细胞遗传学及生物学特性。方法 :采用血液学常规法、α醋酸萘酯酶染色法(ANAE)、组织HE染色法、骨髓染色体G带方法、骨髓嗜多染红细胞微核法、测交实验法进行细胞遗传学及生物学特性的研究。结果 :①豫医无毛小鼠雌雄间血液学 5项指标均无显著性差异。②豫医无毛小鼠细胞免疫与正常昆明小鼠无异常。③各年龄段无毛小鼠表皮均有一层角化过度的角质层 ,毛干消失 ,毛球结构不正常 ,毛囊被一些角化物质充填。但真皮层差别较大。④豫医无毛小鼠染色体G带无异常 ,并在此基础上绘制了近交系豫医无毛小鼠G带核型模式图。⑤无毛小鼠骨髓嗜多染红细胞对环磷酰胺及煤焦油致突变作用与昆明小鼠相一致 ,是一种评价化学物遗传毒性的有效模型。⑥无毛小鼠无毛性状遗传完全符合孟德尔基因分离规律 ,且和性别无关。结论 :①成功的培育了国内无毛小鼠新品系 ,填补了国内没有无毛小鼠品系的空白。②血液学常规指标的分析、生长发育、免疫能力、皮肤组织结构等一系列生理生化指标的测定 ,首次揭示了豫医无毛小鼠的生物学特性。③首次报道了豫医无毛小鼠染色体G带核型及模式图 ,为突变基因定位奠定了基础。④确定突变基因的类型为纯合单一隐性遗传 ,近交系毛色基因可能为AABBccDD ,封闭群的毛色基因可能为A     

豫医无毛小鼠封闭群的生物学特性

目的：对培育的豫医无毛小鼠封闭群的生物学特性进行研究。方法：以昆明小鼠作对照,分别对不同日龄豫医无毛小鼠的体重、体长及脏器重进行测定。测交实验测定突变基因的类型。一般组织学方法研究其皮肤结构,并观察描述了无毛小鼠的脱毛规律。结果：无毛小鼠生长发育迟缓,寿命缩短,且皮肤组织学结构变化显著,突变基因经测交试验证实为常染色体上的单一隐性基因。结论：无毛小鼠有别于裸鼠和昆明小鼠,具有独特的生物学特性。     

豫医无毛小鼠封闭群的生物学特性

目的：对培育的豫医无毛小鼠封闭群的生物学特性进行研究。方法：以昆明小鼠作对照,分别对不同日龄豫医无毛小鼠的体重、体长及脏器重进行测定。测交实验测定突变基因的类型。一般组织学方法研究其皮肤结构,并观察描述了无毛小鼠的脱毛规律。结果：无毛小鼠生长发育迟缓,寿命缩短,且皮肤组织学结构变化显著,突变基因经测交试验证实为常染色体上的单一隐性基因。结论：无毛小鼠有别于裸鼠和昆明小鼠,具有独特的生物学特性     

豫医无毛小鼠皮肤组织细胞凋亡及神经细胞黏附分子检测

目的：研究豫医无毛小鼠皮肤组织细胞凋亡及细胞黏附分子（NCAM）的表达情况。方法：以21日龄、4月龄和9月龄昆明小鼠和豫医无毛小鼠背部皮肤为标本,采用TUNEI法检测皮肤细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测NCAM。结果：豫医无毛小鼠毛母质和毛乳头均有细胞凋亡,昆明小鼠仅毛母质细胞存在凋亡,毛乳头细胞不发生凋亡。随鼠龄的增长,昆明小鼠及预医无毛小鼠毛乳头NCAM表达均逐渐降低（P〈0.05）;同昆明小鼠比较,豫医无毛小鼠毛乳头部位NCAM表达较弱（P〈0.05）。结论：无毛基因可能通过诱导小鼠皮肤毛乳头细胞的凋亡而影响毛囊的正常生长发育。     

豫医无毛小鼠眼球组织学观察

目的:观察豫医无毛小鼠眼球组织学的结构,探讨豫医无毛小鼠视物能力差的原因.方法:取豫医无毛小鼠及昆明小鼠各5只,于室温(20～28 ℃)饲养,饲养期间观察2组小鼠眼睑、眼球外观,12周后采用颈椎脱臼法处死小鼠,取眼球组织进行HE染色观察.结果:豫医无毛小鼠仔鼠时期眼睑外观正常,12周龄时眼睑及皮肤有许多油脂黏附,头侧、眼睑及体侧出现皱纹和褶痕,眼睑松垂,眼球变混浊,视物能力、敏感性及行动性均降低.昆明小鼠饲养期间眼睑及眼球无明显变化.豫医无毛小鼠角膜、视网膜、睫状体组织学结构与昆明小鼠相比无明显差异.结论:豫医无毛小鼠眼球的组织学结构与昆明小鼠相同,其视物能力差可能是由眼睑松垂所致.     

无毛小鼠同类系的建立

目的：培育包含无毛基因的同类系小鼠新品系，明确无毛基因在不同遗传背景下的表达方式。方法：将无毛基因通过杂交互交导入法分别导入615、C57BL／6、BALB／c、DBA／2共4种近交系。结果：已完成4代导入杂交的第1代、第3代均表现有毛，第2代、第4代互交育出615、C57BL／6、BALB／c、DBA／2共4种无毛小鼠，其脱毛规律同豫医无毛小鼠。结论：无毛基因可以在不同的遗传背景下表达。     

近交系豫医无毛小鼠G显带带型分析及模式图

目的：观察近交系豫医无毛小鼠染色体G显带，并绘制出其染色体G带带型模式图。方法：取近交系豫医无毛小鼠骨髓细胞制备染色体标本片，以胰酶法获取分散充分，带型清晰的早中期及中期分裂相。结果：同一个中期细胞中染色体的带没有Nesbitt模式图的带多，不同细胞中带最多的染色体，其带的数目和位置与Nesbitt模式图基本一致。在核型分析的基础上绘制了近交系豫医无毛小鼠G带模式图，描述了各号染色体G带带型特征。结论：近交系豫医无毛小鼠G带模式图的绘制，为豫医无毛小鼠细胞遗传学的研究提供依据。     

豫医无毛小鼠末梢血T淋巴细胞酯酶染色法的观察

目的：观察豫医无毛小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群与正常昆明小明鼠有无差异。方法：用α醋酸萘酯酶法（ＡＮＡＥ）对豫医无毛小鼠进行了末梢血Ｔ淋巴细胞及其亚群的观察。结果：１月龄和２月龄豫医无毛小鼠Ｔ淋巴细胞总数和Ｔ抑制细胞数无显著差异，Ｔ辅助细胞数高于正常昆明小鼠，但６月龄无毛小鼠与正常昆明小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群无明显差异。结论：豫医无毛小鼠６月龄后Ｔ淋巴细胞及其亚群趋于正常，与正常昆明小鼠无显著差异。     

豫医无毛小鼠与昆明小鼠部分血液生化特性的比较研究

目的：比较豫医无毛小鼠与昆明小鼠血液生化特性有无差异。方法：测定总蛋白（ＴＰ）、白蛋白（ＡＬ）、丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、γ 谷氨酰转肽酶（γ ＧＴ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）均采用卫生部临床检验中心推荐的常规微量检测方法。结果：豫医无毛小鼠ＡＬ和ＡＬＴ测定值显著高于昆明小鼠（Ｐ＜００５）。结论：豫医无毛小鼠具有某些独特的生化特性。     

近交系豫医无毛小鼠STR位点的遗传检测

目的：探讨近交系豫医无毛小鼠（YYHL）短串联重复序列（STR）位点的遗传多态性。方法：随机选择位于小鼠3、4、7、16号染色体上的5个STR位点，用PCR技术对近交系YYHL、DBA近交系小鼠及昆明小鼠进行多态性分析。结果：5对引物在近交系YYHL各基因座上均出现一条带，其中D7Nds1、D3Mit22、D16Mit4三基因座表现为多态性，D3Mit21、D4Mit2二基因座表现为单态性。结论：D7Nds1、D3Mit22、D16Mit4三基因座可用于检测近交系小鼠遗传特异性，结合近交系豫医无毛小鼠皮肤移植实验，近交系豫医无毛小鼠符合近交要求。     

豫医无毛小鼠正常肝脏功能指标的测定

对河南医科大学实验动物中心培育的豫医无毛小鼠(YYHL)肝脏功能正常指标进行测定,结果表明所测8项指标中雌雄小鼠间无显著性差异。ALT,AL值高于文献报导的正常昆明鼠。G值偏低,AKP,TBIL,TP与文献报导基本一致,提示豫医无毛小鼠部分肝脏功能指标正常值已发生改变。     

豫医无毛小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验研究

采用骨髓嗜多染红细胞微核技术对豫医无毛小鼠进行骨髓微核实验研究。结果:(1)豫医无毛小鼠嗜多染红细胞自发微核率与正常昆明小鼠无显著性差异P>0.05。(2)腹腔注射环磷酰胺后,豫医无毛小鼠与昆明小鼠骨髓微核率均显著升高,但两者之间无显著性差异P>0.05。提示:豫医无毛小鼠与昆明小鼠自发微核率相似,对环磷酰胶诱变剂的敏感性相一致。     

豫医无毛小鼠近交系毛色基因遗传学测试

目的考核豫医无毛小鼠(YYHL)近交系纯化程度及毛色基因型.方法用复隐性基因小鼠DBA/2、615分别对YYHL近交系进行了毛色基因测试.结果和结论杂交所生的F1代全部为野生色,表明其毛色基因为纯合,其基因型为AABBccDD.豫医无毛小鼠近交系已达到近交系的国际标准.