地中海贫血患者珠蛋白基因mRNA和肽链水平的检测及其相关性分析

目的 研究β地中海贫血（简称地贫）患者外周血中α,β,γ珠蛋白基因ｍＲＮＡ和肽链的相对含量,为进一步研究珠蛋白基因表达的调控提供基础。方法 应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ和血红蛋白电泳,以α珠蛋白基因ｍＲＮＡ和α珠蛋白连为内对照,检测了正常人和β地贫患者外周血中β和γ珠蛋白基因和肽链的相对含量。结果 β地贫患者外周血中β珠蛋白基因ｍＲＮＡ和β珠蛋白肽链都有不同程度的减少和γ珠蛋白基因产物代偿性增高,同时两     

反义RNA对培养的红系细胞βIVS—2—654C→T基因剪接缺陷的纠正

目的观察反义ＲＮＡＡ２对培养的红系细胞中βＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变基因剪接异常的纠正作用。方法将构建的反义核酸真核表达载体通过脂质体介导转染培养的成人红系细胞（ｈＡＥ），应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量测定β珠蛋白ｍＲＮＡ及微量珠蛋白生物合成技术分析转染前后ｈＡＥ细胞内珠蛋白基因表达的变化。结果β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞内，正常剪接的βｍＲＮＡ占总βｍＲＮＡ的比例从转染前的０．０２４上升到第８天的０．３８０；β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．３９６上升到０．８８３；与此相应，新合成的β珠蛋白链也出现升高：β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞β／α比值从０．０５２升至０．３５９，β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．６２４升至０．８２０；正常人ｈＡＥ细胞珠蛋白基因表达不受反义ＲＮＡ的影响。结论反义ＲＮＡＡ２能有效地纠正ｈＡＥ细胞内β６５４ｍＲＮＡ前体异常剪接，进而明显地升高β珠蛋白链的合成，为β６５４地中海贫血的反义ＲＮＡ治疗提供了科学依据。     

五例β地中海贫血患者的珠蛋白合成

本实验测定了三例对照及五例β地中海贫血患者的珠蛋白链合成速率比对照组的α和非α链的合成处于平衡状态。一例β~0地贫纯合子无β链的合成,γ/α值为0.34,其他四例患者的β/α值为0.39—0.70,β链的合成速率明显减慢,并证实β地贫患者的红细胞内有一个较大的游离α链池。本文对珠蛋白链合成速率测定中常出现的放射前峰进行了其生成机制的初步探讨,认为前峰可能系珠蛋白链的衍生物及白细胞合成的非珠蛋白所构成。     

沙利度胺对重型β地中海贫血患者红系细胞γ珠蛋白基因表达及分化的作用研究

目的:探讨沙利度胺对重型β地中海贫血患者体外红系细胞γ珠蛋白基因(HBG)表达及分化的作用及相关调控机制.方法:以沙利度胺为实验组、羟基脲为阳性对照组、等体积溶剂二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照组,分别作用于体外培养的重型β地中海贫血患者红系细胞.采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测HBG及参与调控HBG的转录因子...     

K562细胞7种珠蛋白基因mRNA水平的研究

目的：研究K562细胞α、β、Gγ、Aγ、ζ、ε、δ珠蛋白基因mRNA水平。方法：采用RT-PCR在相同条件下同时扩增成功7种珠蛋白mRNA，比较K562细胞内各珠蛋白mRNA水平。结果：α基因簇中α-mRNA水平明显高于ζ-mRNA,β基因簇mRNA表达水平依次为Gγ、Aγ、ε、δ，K562细胞不表达β-珠蛋白mRNA。结论：转录后水平的调控可能在K562细胞α基因簇的表达中起重要作用，β-基因簇各珠蛋白mRNA水平和蛋白质水平基本相符。     

FQ—RT—PCR法检测β地中海贫血患者β与γ珠蛋白mRNA水平的研究

目的 :探讨 β地中海贫血患者中 β与γ珠蛋白mRNA水平及意义。方法 :用FQ RT PCR技术检测 2 7例 β地中海贫血患者和 2 5例正常对照组外周血中 β与γ珠蛋白mRNA水平。结果 :重型 β地中海贫血患者中γ/ (β+γ)mRNA比值 (70 83±2 2 1 7% )显著高于轻型 β地中海贫血患者 (0 99± 1 0 1 % )及正常对照组 (1 5 5± 4 1 4 % ) (P <0 0 0 1 )。轻型 β地中海贫血患者及正常对照组的γ/ (β +γ)mRNA比值两组比较无明显差别 (P >0 0 5 )。结论 :(1 )FQ RT PCR技术是一种敏感性强、特异性强、定量准确的新方法 ,适合于血红蛋白珠蛋白mRNA水平的定量测定。 (2 )γ/ (β+γ)mRNA比值增高是重型β地贫病人的特征之一。对 β地中海贫血患者珠蛋白mRNA水平的研究对β地中海贫血的临床疗效观察具有重要意义     

重症β-地中海贫血高风险胎儿的产前基因诊断

目的：为父母双方均为β－地中海贫血携带者的高风险胎儿进行产前基因诊断。方法：用PCR扩增结合反向点杂交技术（RDB）对胎儿羊水细胞进行β－地中海贫血的基因分析。结果：该家庭父亲为β－Ⅱ-654（G→T）杂合子，母亲为β－CD17（A→C）杂合子，胎儿为CD17突变杂合子，属无症状β-地中海贫血携带者。结论：PCR－RDB技术产前基因诊断β-地中海贫血高风险胎儿方法可行，避免重症患儿出生，可达到优生目的。     

桂林市β地中海贫血婚前筛查

β地中海贫血是我国南方最常见、危害最严重的遗传性疾病之一 [1 ] 。通过在婚检对象中检查地中海贫血 ,并指导结婚生育 ,是目前最为有效的预防该病的措施。为此 ,我们对 2 0 0 0年在我院进行婚前检查的 895 4名青年进行了 β地中海贫血检测 ,现将结果报告如下。1　方法和结果1.1　对象　 2 0 0 0年 1月 1日至 12月 31日在我院进行婚前检查的青年共 895 4例 ,其中男性 44 6 5例 ,年龄 2 2～ 38岁 ;女性 44 89例 ,年龄 2 2～ 36岁。1.2　方法　血红蛋白电泳 ,支持物为琼脂糖凝胶。血红蛋白A2 (Hb A2 )增高量在 3.7%～ 8.0 %之间 ,可诊断为 …     

红系增强子对鼠红白血病细胞中β—珠蛋白基因表达的作用

为寻找合适长的红系增强子，在不曩病毒滴度和前病毒整合稳定性前提下，提高外源β－珠蛋白基因的表达水平，作者将完整β基因（β）或部分缺失ＩＶＳＩＩ（第二内含子）的β－基因（△β）和不同长度的红系增强子（３６、２９２、与３４１ｂｐ）分别克隆于反转录病毒载体Ｎ２Ａ上，重组体分别转染ψ－２单向性包装细胞系，由ψ－２出芽的病毒颗粒感染ＰＡ３１７双向性包装细胞系，筛选病毒滴度较高，前病毒整合完整的ＰＡ３１７ＸＬ     

荧光定量RT-PCR技术分析人地中海贫血β654珠蛋白基因转基因小鼠mRNA的表达

目的 采用荧光定量RT-PCR技术检测所制作的人地中海贫血β^654珠蛋白基因转基因小鼠模型mRNA的表达情况,评价该技术应用于小鼠mRNA分析的价值.方法 根据GenBank小鼠mRNA序列,设计用于扩增小鼠mRNA的引物和反向探针,构建荧光定量RT-PCR技术.实验分两组,分别对转基因小鼠和正常小鼠中mRNA进行检测.采用SPSS统计软件,分析和比较两组动物中mRNA的表达量及表达的稳定性.结果 所检测的11只转基因阳性小鼠中检测出人β^654珠蛋白基因mRNA和小鼠内源性mRNA;而在33只正常小鼠中只检测到小鼠内源性mRNA.荧光定量RT-PCR技术可检测到105拷贝数的人β^654珠蛋白基因mRNA和115拷贝数的小鼠内源性mRNA.荧光定量RT-PCR技术分别在F1代和F2转基因阳性小鼠中稳定地检测到,表明转基因小鼠mRNA获得稳定表达.结论 所构建的荧光定量RT-PCR技术分析转基因小鼠mRNA表达具有检测定量、敏感、高效快捷的特点,该方法在鉴定和评估转基因小鼠mRNA的表达中稳定性好、定量准确,具有非常重要的应用价值.     

带红系增强子的人β珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达

带红系增强子的人β珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达李政刘德培刘庆辉郭志晨章秋珩李志杰贾佩臣梁植权β４１／４２是印度次大陆、东南亚及我国南方常见的一种血红蛋白病，纯合子呈严重的β－地中海贫血。本实验旨在建立带红系，增强子５′ＨＳ２的人β４１／４２珠蛋白基...     

β—地中海贫血基因治疗研究：I.以逆转录病毒作载体将人...

We used a replication-defective retrovirus vector containing the human beta-globin gene to transfect the ecotropic packaging cell line psi-2, and then harvested the virus supernatant to infect the amphotropic packaging cell line PA317. As a result, a recombinant vector producing cell line (PIW beta) with a titer of 1.1 x 10(5) CFU/ml was isolated. By infecting Friend cells with this high titer virus vector, high efficiency gene transfer was achieved. Southern blot hybridization analysis indicated that the intact human beta-globin gene was stably integrated into the genome of the target cells. Our results provide a useful reference for further studies of gene therapy of beta-thalassemia.     

中间型β地中海贫血的基因诊断

研究中间型β地中海贫血（地贫）的分子缺陷，为中间型β地中海贫血的基因诊断和产前诊断提供科学依据。方法应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、多重等位基因特异聚合酶链反应（ＭＡＳ－ＰＣＲ）、双链ＤＮＡ循环测序和珠蛋白肽链生物合成速率测定等技术，对１４例中间型β地贫病例进行了血液学、珠蛋白基因（α、β和γ）以及珠蛋白肽链生物合成速率的分析。并对２５０例脐带血的α珠蛋白基因组织进行了鉴定。结果１４例β地贫病人中４例为β地贫杂合子复合右侧和（或）左侧不等交换型α珠蛋白基因增多（ααａｎｔｉ３．７和／或αααａｎｔｉ４．２），３例为β地贫遗传复合体复合α珠蛋白基因减少，１例为β地贫遗传复合体复合γ珠蛋白基因上游启动区－１５８ｎｔＣ→Ｔ的突变杂合子，６例的α和Ｇγ珠蛋白基因未见异常。对２５０例脐带血共５００条染色体的α珠蛋白基因的分析表明，共有８条染色体的α珠蛋白基因异常，占染色体总数的１．６％，其中—ＳＥＡ１条，α－３．７４条，αααａｎｔｉ３．７３条。结论除β地贫基因纯合子或遗传复合体复合α珠蛋白基因缺失外，β地贫基因杂合子复合α珠蛋白基因增多是导致中间型β地中海贫血的又一种重要的分子病因。     

β-地中海贫血基因分析与临床

目的：探讨β-地中海贫血的基因型与临床表现之间的关系。方法：小细胞低色素贫血患儿外周血用血红蛋白电泳法作临床诊断。以8种中国人最常见的β地中海贫血寡核苷酸探针阵列用荧光斑点杂交法对患儿及其父母进行基因突变分析。结果：24例患儿中重型地中海贫血14例，β^E3例，轻型7例，发现10种基因突变类型，轻型者其基因型全部为杂合子，重型1例是纯合子（17/17），13例是双重杂合子，他们的临床表现为起病早，贫血程度重，HbF显著增高，需要长期输血才能维持其生命和生长发育，B^E中1例为重型，2例为中间型，结论：β-地中海贫血的临床表现和其基因型密切相关，本地区重型β-地中海贫血以双重杂合子多见。患儿双亲均为携带者。本组病例中以CD17，IVS-Ⅱ-654，CD71-72基因突变发生率较高，β^E的患儿临床表现差异较大。     

红系增强子对鼠红白血病细胞中β－珠蛋白基因表达的作用

为寻找合适长度的红系增强子，在不影响病毒滴度和前病毒整合稳定性前提下，提高外源β－珠蛋白基因的表达水平，作者将完整β基因（β）或部分缺失ＩＶＳＩＩ（第二内含子）的β－基因（Δβ）和不同长度的红系增强子（３６、２９２、与３４１ｂｐ）分别克隆于反转录病毒载体Ｎ２Ａ上，重组体分别转染ψ－２单向性包装细胞系，由ψ－２出芽的病毒颗粒感染ＰＡ３１７双向性包装细胞系，筛选病毒滴度较高，前病毒整合完整的ＰＡ３１７细胞克隆的病毒上清感染鼠红白血病（ＭＥＬ）细胞，用ＲＮａｓｅ保护实验检测β－珠蛋白基因的表达。结果表明，不仅获得了稳定的前病毒整合和较高的病毒滴度，而且含２９２ｂｐ和３４１ｂｐ红系增强子的β－基因表达水平接近或达到内源性α基因。     

siRNA对体外培养红系细胞α-珠蛋白基因表达的影响

目的 研究针对α-珠蛋白基因的小分子干扰RNA(siRNA)对体外培养红系细胞α-珠蛋白肽链mRNA表达的影响.方法 将针对α-珠蛋白肽链设计、化学方法合成的siRNA通过脂质体转染体外培养正常人的红系细胞,在转染后24、48、72 h,用流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测α链mRNA表达水平.结果 脂质体转染FCM标记的siRNA进入红系细胞后,24、48、72 h的转染效率分别为61.2%、44.3%、33.7%.siRNA作用于体外培养的红系细胞,经RT-PCR检测,转染后α-珠蛋白基因mRNA相对表达量下降,浓度越高,相对表达量越低.随着作用浓度增加,红系细胞台盼兰拒染率越低;且作用时间越长,台盼兰拒染率也越低.结论 脂质体转染siRNA能特异性地抑制体外培养的红系细胞中α-珠蛋白基因表达,可能会成为β-珠蛋白生成障碍性贫血基因治疗的一个新靶点.     

siRNA抑制BCL11A表达对重型地中海贫血患者红系细胞γ-珠蛋白表达的影响

目的探讨通过阻断BCL11A基因治疗重型β地中海贫血的可能性。方法对6例确诊重型β地中海贫血患者,CD34＋免疫磁珠分离外周血CD34＋胞后培养与诱导分化成体外原代红系细胞。培养第11天时处理组电转方法将针对BCL11A的siRNA电转入细胞,对照组导入随机siRNA,继续培养3天后以实时荧光定量检测XL和L型BCL11A水平,Western blot检测BCL11A表达水平。结果与对照组比较,BCL11A siRNA干扰组BCL11A mRNA表达水平下降0.48倍,γ-珠蛋白基因mRNA表达水平上升1.51倍。结论 BCL11A可作为重新激活HbF治疗β-地贫的分子靶标。