雌激素对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡的影响

目的探讨雌激素对血清饥饿诱导体外培养大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法新生SD大鼠颅骨第2、3代成骨细胞随机分为对照组、血清饥饿组和血清饥饿＋雌激素组，每组细胞分别培养24h、48h、72h、5d、7d、14d后行TUNEL染色观察凋亡细胞的形态特征：流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果对照组细胞核未见明显异常；血清饥饿组可见细胞核内有紫兰色颗粒的凋亡细胞；血清饥饿＋雌激素组凋亡细胞明显减少；与对照组比较，血清饥饿组细胞凋亡率升高，血清饥饿＋雌激素组细胞凋亡率降低（P〈0．05）。结论雌激素能抑制血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡。     

健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

背景:成骨细胞数量减少或凋亡进程加速,使骨形成少于骨吸收可导致骨质疏松的发生.肿瘤坏死因子а在去势大鼠或绝经后骨质疏松患者骨组织中呈高表达,在体外可刺激成骨细胞凋亡.健骨颗粒可降低骨质疏松模型鼠血清肿瘤坏死因子а水平.目的:验证健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子а诱导的鼠成骨细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-07/2006-12在福建巾医学院骨伤系分子生物学实验室完成.材料:3月龄SD雌性大鼠40只用于制备含药血清,24 h SD乳鼠5只用于培养成骨细胞.健骨颗粒由煅狗骨、淫羊藿、山茱萸、党参等药味组成,原约材由福建省药材公司提供,福建中医药研究院中试车间加工制备,每克颗粒含原生药2.9 g.方法:用酶消化法培养成骨细胞.随机将40只SD大鼠分为高、中、低剂量含药血清组和生理盐水对照组,每组10只,分别将健骨颗粒按4,2,1 g/(kg·d)的药量灌服,对照组每天灌服2 mL生理盐水.连续给药7 d后腹主动脉取血得到健骨颗粒含药血清,将含药血清作用于成骨细胞48h后,再用肿瘤坏死因子а诱导24 h.运用TUNEL技术、流式细胞术、免疫细胞化学结合图像分析方法,检测成骨细胞凋亡情况.主要观察指标:①成骨细胞凋亡指数.②成骨细胞凋亡峰.③成骨细胞Bcl-2、Bax表达.结果:用肿瘤坏死因子а诱导的各组成骨细胞均出现凋亡现象,其中中、高剂量含药血清组的细胞凋亡指数和凋亡率明显低于其他组,而Bcl-2/Bax灰度比值却较其他组高(P<0.05),Bcl-2/Bax灰度比值与凋亡指数呈负相关(r=-0.757,P<0.01).结论:健骨颗粒对肿瘤坏死因子Q诱导的成骨细胞凋亡有一定的保护作用,可能通过提高Bcl-2的表达来实现.     

不同浓度氟对兔成骨细胞细胞周期及凋亡的影响

目的：建立成骨细胞体外培养模型，并观察不同浓度的氟对成骨细胞增殖行为的影响，为氟治疗骨质疏松的研究提供实验依据。方法：用幼兔肋骨培养成骨细胞，并纯化、鉴定。用不同浓度的氟化钠处理(20，160，240，400μmol／L)，MTT法测定氟对成骨细胞增殖活性的影响：流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡的改变。结果：低浓度的氟(20μmol／L)在体外可显著促进成骨细胞增殖(作用24h后A值为：0．089&;#177;0．012，P&;lt;0．01)，不引起成骨细胞的凋亡，可使S期和G2／M期的细胞明显增多；高浓度的氟(160，240，400μmol／L)则抑制成骨细胞的增殖。(作用24h后的A值分别为：0．055&;#177;0．010，0．054&;#177;0．006，0．023&;#177;0.010，P&;lt;0．01)，引起成骨细胞的凋亡(9．53&;#177;2．10，24．43&;#177;3．03，P&;lt;0．01和32．63&;#177;1．17，P&;lt;0．05)，G2／M期细胞明显减少。结论：低浓度的氟可以促进成骨细胞的增殖；高浓度的氟抑制成骨细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，抑制细胞由S期向G2／M期转化。低浓度的氟可用于对骨质疏松的治疗。     

肿瘤坏死因子α诱导人成骨细胞和人成骨细胞系HOS-8603凋亡的作用

目的：观察不同浓度重组肿瘤坏死因子α对于培养的人原代成骨细胞和人成骨细胞系HOS-8603的凋亡作用，并分析浓度效应。方法：实验于1998-04／2000—04在第二军医大学卫生毒理学教研室完成。在人成骨细胞和人成骨细胞系HOS-8603中，实验组加浓度为1，10，100，1000ng／L的肿瘤坏死因子α，对照组加等量的无肿瘤坏死因子培养基，培养后检测细胞活力应用噻唑兰法，检测细胞凋亡情况应用DNA梯形条带和透射电镜等方法。结果：①肿瘤坏死因子α对培养成骨细胞和HOS-8603细胞的作用（噻唑兰法）：肿瘤坏死因子α浓度为100和1000ng／L实验组均高于对照组[成骨细胞：（0．14&;#177;0．006），（0．10&;#177;0．010），（0．27&;#177;0．013）ng／L：HOS-8603细胞：（0．15&;#177;0．012），（0．09&;#177;0．015），（0．27&;#177;0．013）ng／L,P〈0．05]。②DNA梯形条带结果：凋亡细胞使DNA在核小体外降解。形成180～200bp或与之成倍的DNA片段。在琼脂糖凝胶电泳时呈现梯形结果。在肿瘤坏死因子α浓度为1000ng／L时，成骨细胞可检测到典型DNA梯形条带。③成骨细胞的凋亡情况：应用透射电镜检查。浓度为1000ng／L实验组较浓度为100ng／L实验组凋亡细胞多。肿瘤坏死因子α同样可以诱导HOS-8603的凋亡，未加肿瘤坏死因子α时，凋亡很少。加入100ng／L及1000ng／L肿瘤坏死因子α时，凋亡细胞数量明显增加。结论：肿瘤坏死因子α质量浓度达到100g／L时，可以引起体外培养的成骨细胞和成骨细胞系HOS-8603细胞凋亡，并随浓度加大出现凋亡细胞增多的剂量-效应关系，结果验证了肿瘤坏死因子能刺激成骨细胞凋亡的假说。     

肿瘤坏死因子α诱导人成骨细胞和人成骨细胞系HOS-8603凋亡的作用

目的:观察不同浓度重组肿瘤坏死因子α对于培养的人原代成骨细胞和人成骨细胞系HOS-8603的凋亡作用,并分析浓度效应。方法:实验于1998-04/2000-04在第二军医大学卫生毒理学教研室完成。在人成骨细胞和人成骨细胞系HOS-8603中,实验组加浓度为1,10,100,1000ng/L的肿瘤坏死因子α,对照组加等量的无肿瘤坏死因子培养基,培养后检测细胞活力应用噻唑兰法,检测细胞凋亡情况应用DNA梯形条带和透射电镜等方法。结果:①肿瘤坏死因子α对培养成骨细胞和HOS-8603细胞的作用(噻唑兰法):肿瘤坏死因子α浓度为100和1000ng/L实验组均高于对照组犤成骨细胞:(0.14±0.006),(0.10±0.010),(0.27±0.013)ng/L;HOS-8603细胞:(0.15±0.012),(0.09±0.015),(0.27±0.013)ng/L,P<0.05犦。②DNA梯形条带结果:凋亡细胞使DNA在核小体外降解,形成180～200bp或与之成倍的DNA片段。在琼脂糖凝胶电泳时呈现梯形结果。在肿瘤坏死因子α浓度为1000ng/L时,成骨细胞可检测到典型DNA梯形条带。③成骨细胞的凋亡情况:应用透射电镜检查,浓度为1000ng/L实验组较浓度为100ng/L实验组凋亡细胞多。肿瘤坏死因子α同样可以诱导HOS-8603的凋亡,未加肿瘤坏死因子α时,凋亡很少,加入100ng/L及1000ng/L肿瘤坏死因子α时,凋亡细胞数量明显增加。结论:肿瘤坏死因子α质量浓度达到100g/L时,可以引起体外培养的成骨细胞和成骨细胞系HOS-8603细胞凋亡,并随浓度加大出现凋亡细胞增多的剂量-效应关系,结果验证了肿瘤坏死因子能刺激成骨细胞凋亡的假说。     

不同浓度氟对兔成骨细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:建立成骨细胞体外培养模型,并观察不同浓度的氟对成骨细胞增殖行为的影响,为氟治疗骨质疏松的研究提供实验依据。方法:用幼兔肋骨培养成骨细胞,并纯化、鉴定。用不同浓度的氟化钠处理(20,160,240,400μmol/L),MTT法测定氟对成骨细胞增殖活性的影响;流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡的改变。结果:低浓度的氟(20μmol/L)在体外可显著促进成骨细胞增殖(作用24h后A值为:0.089±0.012,P<0.01),不引起成骨细胞的凋亡,可使S期和G2/M期的细胞明显增多;高浓度的氟(160,240,400μmol/L)则抑制成骨细胞的增殖,(作用24h后的A值分别为:0.055±0.010,0.054±0.006,0.023±0.010,P<0.01),引起成骨细胞的凋亡(9.53±2.10,24.43±3.03,P<0.01和32.63±1.17,P<0.05),G2/M期细胞明显减少。结论:低浓度的氟可以促进成骨细胞的增殖;高浓度的氟抑制成骨细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,抑制细胞由S期向G2/M期转化。低浓度的氟可用于对骨质疏松的治疗。     

雌激素饥饿增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡

目的：探讨雌激素饥饿对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及作用机制。方法：MCF-7细胞培养贴壁之后,用雌激素饥饿处理后加入TRAIL,用荧光染料Hoechst染色法检测细胞的凋亡,用细胞计数法检测细胞的存活。在雌激素饥饿处理MCF-7细胞后,收集对照和饥饿组蛋白用Westernblot法检测相关的蛋白表达。结果：单独使用雌激素饥饿处理或者单独使用TRAIL处理乳腺癌细胞MCF-7都能诱导细胞凋亡,但是它们诱导凋亡的活性较小,两种方法联合使用可以极大地增加诱导细胞凋亡的活性（P〈0.001）。雌激素饥饿处理后的乳腺癌细胞,死亡受体5（DR5）表达上调。结论：乳腺癌细胞MCF-7对TRAIL敏感度不高,雌激素饥饿可以增加TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡的活性,DR5与雌激素饥饿诱导TRAIL活性增加相关。     

雌激素相关受体α对脂多糖诱导的内皮细胞凋亡及连接蛋白降解的影响

目的:探讨雌激素相关受体α（ERRα）对脂多糖（LPS）诱导的内皮细胞凋亡及连接蛋白降解的影响。方法:体外培养ERRα敲低的稳转细胞株,并通过LPS处理,将细胞分为四组：正常对照组（Ctr组）;shERRα敲低组（shERRα组）;正常细胞+LPS处理组（LPS组）：六孔板中的细胞用无血清的培养基饥饿培养12 h后,用20 μg/mL LPS处理12 h;shERRα+LPS组：ERRα敲低的细胞按LPS组处理。使用ROS荧光试剂盒检测细胞内ROS的水平;利用TUNEL、AnnexinV-FITC和PI双染检测细胞凋亡情况;细胞荧光检测连接蛋白ZO-1在细胞膜表达情况,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Smac、细胞色素c和连接蛋白ZO-1,Occludin、JAM-A及E-Ca在分子水平的表达情况。结果:与Ctr组及shERRα组相比,LPS组ROS水平增加,细胞凋亡率增加（TUNEL检测为16.44±2.55,流式细胞术检测结果为23.56±2.22）,促凋亡蛋白Bax、Smac及细胞色素c表达量增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2和紧密连接蛋白表达量降低,细胞荧光结果显示连接蛋白ZO-1在包膜发生降解,网状结构断裂。而与LPS组相比,在shERRα+LPS组中,抑制ERRα的表达加剧上诉细胞损伤。结论:ERRα能够通过负性调节肺微血管内皮细胞内的细胞凋亡,影响肺微血管内皮的功能,从而调控脓毒症诱导的急性肺损伤。     

雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

背景:在众多的血管生长因子中,血管内皮生长因子是最有力的血管生成因子,它具有促进血管内皮细胞分裂、增殖,细胞质钙化聚集并能诱导血管生成等作用,且对于成骨细胞、破骨细胞的增殖、分化及功能活性具有重要调节作用.目的:观察雌激素对成骨细胞上血管内皮生长因子表达的影响.方法:取新生48 h大鼠颅盖骨,酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养.采用RT-PCR法测定10-10,10-8,10-6,10-4 mol/L17β-雌二醇作用成骨细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达.结果与结论:RT-PCR检测结果显示,血管内皮生长因子mRNA在原代成骨细胞内稳定表达;半定量分析证实,不同浓度17β-雌二醇组间血管内皮生长因子mRNA的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐增加,10-6mol/L左右时,血管内皮生长因子mRNA的表达量最高,超过此剂量,血管内皮生长因子的表达下降.提示雌激素促进成骨细胞上血管内皮生长因子的表达上调,并存在剂量依赖性.     

雌激素对去卵巢大鼠成骨细胞膜型基质金属蛋白酶-1基因表达的影响

目的：通过观察雌激素对去卵巢骨质疏松模型大鼠成骨细胞膜型基质金属蛋白酶(membrane-type matrix metaUoproteinase-1，MT1-MMP)基因的表达，探讨雌激素防治骨质疏松症的机制。方法：选用7个月龄雌性SD大鼠36只，对去卵巢大鼠、对照假手术大鼠与17β-雌二醇(E2)治疗组大鼠进行骨密度检测。股骨远端行原位杂交检测骨组织MT1-MMP mRNA表达，免疫组化检测骨组织MT1-MMP蛋白质表达。结果：与对照组[(L3=0．156&;#177;0．010)g／cm^2]相比，去卵巢大鼠骨密度[(L3=0．139&;#177;0．009)g／cm^2]减少，予E2治疗后骨密度[(L3=0．168&;#177;0．010)g／cm^2]增加(t=0．03～0．04，P&;lt;0．05)。与对照组相比，去卵巢大鼠成骨细胞MT1-MMP mRNA与蛋白质表达下调，而予E2治疗后成骨细胞MT1-MMP mRNA与蛋白质表达增加。结论：雌激素可促进成骨细胞MT1-MMP基因表达，此可能为雌激素防治骨质疏松症的重要机制之一。     

硼替佐米减弱小鼠骨髓瘤细胞所致成骨细胞凋亡的作用

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米在骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)病理状态下对成骨细胞的影响。以小鼠骨髓瘤细胞RPMI8226与小鼠成骨细胞MC-3T3E1共培养和上清干预培养的方式,模拟体内骨髓瘤骨病状态,采用改良四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测硼替佐米对MC-3T3E1细胞的增殖抑制,Annexin V/PI染色流式细胞术检测MC-3T3E1细胞的凋亡,RT-PCR及Western blot法比较加入硼替佐米后MC-3T3E1细胞成骨相关基因及蛋白Runx2/cbfa1、OSX(osterix)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的表达变化。结果表明:较高浓度的硼替佐米对成骨细胞MC-3T3E1的增殖抑制呈剂量依赖性,48小时IC50为38.1 nmol/L。低浓度(5 nmol/L)硼替佐米对单独培养的MC-3T3E1增殖无明显影响(p0.1),但可使与骨髓瘤细胞RPMI8226共培养及上清干预培养的MC-3T3E1凋亡比例分别降低24.6%和32.5%,并且促使成骨细胞相关基因osx、ocn的mRNA及蛋白表达增加(p0.05),而Runx2/cbfa1无明显变化(p0.05)。结论:低剂量硼替佐米可通过活化成骨细胞内部机制减弱骨髓瘤细胞引起的成骨细胞凋亡,增强Runx2/cbfa1通路中成骨细胞相关基因osx、ocn mRNA及蛋白的表达,可能在骨髓瘤骨病中保护成骨细胞,维持成骨细胞生存。     

柴胡皂甙D诱导的结肠癌细胞HCT116部分凋亡基因的表达

[目的]探讨柴胡皂甙D(SSD)对结肠癌细胞HCT116凋亡基因表达图谱的影响.[方法]通过MTT实验选择SSD的浓度(10 mg/L)及作用时间(24 h);利用微阵列和实时PCR定量技术,获得SSD组和对照组HCT116细胞在mRNA水平上的凋亡基因表达图谱,并进行比较分析.[结果]与对照组细胞相比,SSD组HCT...     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

青春期2型糖尿病大鼠血清雌激素和卵巢颗粒细胞凋亡的变化

目的 探讨2型糖尿病对青春期大鼠卵巢组织的影响及其可能的机理.方法 观察青春期2型糖尿病模型大鼠卵巢组织的形态结构的变化,并测定血清雌激素的含量.原位细胞凋亡标记检测卵巢颗粒细胞凋亡.结果 糖尿病组血清雌激素明显下降(P＜0.05),卵巢各级卵泡中颗粒细胞及卵泡膜细胞凋亡明显增加(P＜0.05).结论 糖尿病可导致青春期2型糖尿病模型大鼠血清雌激素水平降低,从而诱导卵巢中各级卵泡的颗粒细胞及卵泡膜细胞发生明显的凋亡.     

电针对去卵巢大鼠脑内雌激素受体mRNA的影响

目的探讨雌激素降低对脑内雌激素受体基因表达的影响以及电针刺激足三里穴对去卵巢大鼠脑内雌激素受体基因表达的调整作用。方法选用成年Wistar雌性大鼠，将动物分为正常对照组（INT）、去卵巢组（OVX）和去卵巢针刺组（OVX＋EA）。用放射免疫分析方法测定血中雌二醇和睾酮的含量，采用RT-PCR方法获得大鼠雌激素受体α（ERα）和雌激素受体β（ERβ）mRNA的逆转录表达产物cDNA，用琼脂糖凝胶电泳方法检测，计算机图像分析系统进行统计分析。结果与对照组比较，去卵巢组大鼠血中雌二醇水平明显降低（P〈0．01），同时伴有睾酮升高，脑内ERα mRNA的RT-PCR表达产物减少（P〈0．01），ERβ mRNA的RT—PCR表达产物增加（P〈0．01）；与去卵巢组相比，去卵巢针刺组大鼠血中雌激素水平明显升高（P〈0．01），睾酮水平下降（P〈0．01），脑内ERα mRNA的RT-PCR产物升高（P〈0．01），ERβ mRNA的RT—PCR产物降低（P〈0．01）。结论去卵巢大鼠血中雌激素水平降低，睾酮水平升高，脑内ERα和ERβ mRNA的表达发生了明显的变化；电针足三里穴对体内雌激素和睾酮水平及脑内雌激素受体基因表达有明显的调整作用，这可能是电针调节神经内分泌功能的机制之一。     

基因fas的表达对细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的影响

本研究观察fas基因表达的变化对细胞色素C诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响，并探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。将体外培养的HL-60细胞分成6组，细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9．375、18．75、37．5、75、150mg／L，用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡作用．用RT—PCR和Westernblot检测以凋亡为主的HL-60细胞中fas的表达水平。结果表明：细胞色素C终浓度分别为0、9．375、18．75及37。5mg／L时HL-60细胞是以凋亡效应为主，fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高，当细胞色素C浓度为75mg／L、150mg／L时，HL-60细胞是以坏死效应为主。结论：细胞色素C能够上调fasmRNA及其蛋白的表达，从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

三氧化二砷对淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响及其与Mcl-1基因表达关系的研究

本研究探讨不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡诱导的作用特点及其机制,并探讨其与mcl—1基因表达的关系。应用琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度As2O3作用于Raji细胞后的典型DNA—Ladder凋亡条带,激光共聚胶显微镜检测Raji细胞线粒体膜电位的变化,实时荧光定量PCR技术检测As2O3对mcl-1基因表达的影响。结果表明：1μmol／L As2O3作用于Raji细胞时其凋亡不明显,2—8μMol／L As2O3可以诱导Raji细胞凋亡。随着药物浓度的增加,Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位明显减低,同时mcl-1基因表达量明显下调。结论：As2O3降低Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位、下调mcl-1基因表达,而这些可能是导致细胞凋亡的机制。     

几种子同方式诱导Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19的表达

为探讨一个新的细胞凋亡相关基因－ＴＦＡＲ１９所参与的凋亡途径,我们研究了几种不同方式诱导白血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡过程中ＴＦＡＲ１９表达的变化。采用去除血清,ＶＰ－１６作用及Ｆａｓ单抗活化受体等方法诱导Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡后,以ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ水平ＴＦＡＲ１９的表达,用流式细胞术及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测蛋白水平ＴＦＡＲ１９的表达。实验结果显示,Ｊｕｒｋａｔ细胞在去除血清１２小时,