肺癌组织端粒酶表达与耐药,凋亡相关基因关系及其临床意义

目的 探讨肺癌冰冻组织端粒酶催化亚单位（ｃａｔａｌｙｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｕｂｕｎｉｔ，ｈＴＲＴ／ｈＥＳＴ２）编码基因ｍＲＮＡ表达与细胞凋亡，增殖，耐药及凋亡相关基因的关系及其预后意义方法 应用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ，原位杂交检测端粒酶活性（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＴＡ）及ｈＴＲＴ／ｈＥＳＴ２表达，ＲＴ－ＰＣＲ，免疫组化检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ及蛋白水平，原位杯端标记（ｉｎｓｉｔｕｅ     

联合应用bcr-abl融合基因反义寡核苷酸与c-myb基因反义寡核苷酸对K562细胞作用的研究

目的：研究联合应用ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸（Ａｓｐｏ）及ｃ－ｍｙｂ基因Ａｓｐｏ对Ｋ５２细胞作用效果。方法：Ａｓｐｏ与Ｋ５６２细胞共培养后,台盼蓝拒染法计死活细胞数;甲基纤维素半固体培养法培养ＣＦＵ－Ｋ５６２;流式细胞仪测定细胞Ｐ２１０蛋白表达及细胞凋亡率;ＲＴ－ＰＣＲ半定量检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ;电镜观察凋亡细胞形态学改变。结果：例置显微镜下观察到联合应用两种Ａｓｐｏ时,浓度各为５ｕｍｏｌ／Ｌ组Ｋ５６２细胞仍呈克隆状态生长,作用２４ｈ细胞Ｐ２１０蛋白表达明显受抑制,表达率〈２％;作用１２０ｈ细胞生长抑制率为６１．７％,Ｐ２１０恢复为２５．７％,凋亡率为２２．５％。两种浓度各为１０ｕｍｏｌ／Ｌ组Ｋ５６２细胞生长疏散,作用１２０ｈ细胞生长抑制率达９２．２％,Ｐ２１０仍未恢复,凋亡率为２２．     

端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法采用ＰＣＲ－ＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结论分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。     

肺腺癌细胞系耐药及凋亡相关基因的表达和逆转

目的 探讨顺铂耐药肺腺癌细胞系Ａ５４９＾ＤＤＰ的耐药,凋亡相关基因的表达及其与亲代细胞Ａ５４９的差异,观察差异表达基因的反义寡核苷酸的逆转作用。方法 将人工合成的反义,正义硫代脱氧寡核苷酸（Ｓ－ｏｌｉｇｏｄｌｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,Ｓ－ＯＤＮ）经脂质体包后转染Ａ５４９＾ＤＤＰ细胞,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ水平,免疫细胞化学及流式细胞－抗体检测相应蛋白及增殖抗原Ｋｉ－６７     

苦参碱对K562细胞株端粒酶活性和细胞周期的影响

目的为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂,探讨了苦参碱对Ｋ５６２细胞的诱导分化作用及其机制。方法采用ＰＣＲＥｌｉｓａ方法检测苦参碱作用前后端粒酶活性的改变,以流示细胞仪分析细胞周期的改变。结果苦参碱作用后的Ｋ５６２细胞,其端粒酶活性明显受抑,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著降低。结论苦参碱对Ｋ５６２细胞有诱导分化作用,其机制可能与抑制端粒酶活性、阻止细胞周期的进程有关。     

RT-PCR检测CEA分泌性肿瘤患者血中的CEAmRNA

建立一种外周血循环中肿瘤微转移检测的方法。方法：２０例ＣＥＡ分泌性肿瘤患者及８例健康对照,用逆转录ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｒｉｃｐｔｉｏｎ－Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ,简称为ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测血中的ＣＥＡｍＲＮＡ,同时用放免法检测血甭ＣＥＡ水平。     

反义核酸抑制人骨髓瘤细胞中的IL-6信号转导功能研究 *

目的：研究人骨髓瘤细胞的ＩＬ－６信号转导通路中哪一个环节可作为“ＩＬ－６功能拮抗剂”设计的目标靶位。方法：首先通过凝胶阻滞电泳（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ　ｓｈｉｆｔ　ａｓｓａｙ,ＥＭＳＡ）、免疫沉淀方法观察人骨髓瘤细胞Ｓｋｏ－００７中参与ＩＬ－６信号转导功能的转录因子－ＳＹＡＴ３,ＮＦ－ＩＬ－６和蛋白做酶ＥＲＫ的诱导活化情况,继而构建和设计了针对这些信号分子的反义表达质粒和反义寡核苷酸,用同样方法观察反义核酸对ＩＬ－６信号转导功能的影响。结果：这些反义核酸可以不同程度地抑制ＩＬ－６在Ｓｋｏ－００７细胞中的信号转导功能。结论：可通过进一步实验确定转录因子、蛋白激酶作为“胞内拮抗剂”作用目标靶位的可行性。     

Cx基因在胃癌细胞株中的表达及诱导分析

目的：探讨胃癌细胞株ＭＧＣ８０３在全反式维甲酸（ａｌｌ－ｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃ,ＲＡ）、佛波酯（ｐｈｏｒｂｌｏ ｅｓｔｅｒ,ＴＰＡ）及二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ,ＤＭＳＯ）３种诱导剂分别作用后,胃癌细胞中间隙连接蛋白（ｃｏｎｎｅｘｉｎ,Ｃｘ）基因表达变化。方法;采用比较多重ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测。结果：维甲酸、二甲基亚地胃癌细胞基因组中Ｃｘ４３基     

中国南方鼻咽鳞状细胞癌与EB病毒感染的关系

目的：探讨中国南方鼻咽癌高发区鼻咽鳞状细胞癌或称角化性鳞状细胞癌（Ｋｅｒａｔｉｎｉｚｉｎｇ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＫＳＣＣ）是否也如非角化性癌那样与ＥＢ病毒感染有密切的关系。方法：应用ＰＣＲ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ、原 位分子杂交和免疫组化法检测３８例鼻咽鳞状细胞癌细胞中有ＥＢ病毒ＤＮＡ及其产物ＥＢＮＡ－１,ＥＢＮＡ－２,ＥＢＥＲＳ,ＬＭＰ－１,ＺＥＢＲＡ,Ｅ     

荧光定量RT-PCR检测mdr-1基因表达

建立荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤细胞ｍｄｒ－１基因表达的方法,了解肺癌组织中ｍｄｒ的表达水平。方法：建立荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ方法,在ＰＥ７７００型检测仪上定量检测Ｋ５６２／ＡＤＭ耐药株和Ｋ５６２不耐药株细胞ｍｄｒ－１有达水平,同时检测４５例初治肺部肿瘤病人组织标本。     

Arsenic trioxide downregulates telomerase activity in HL-60 cells

Telomeres are the specialized nucleoproteincomplexes at the physical ends of eukaryoticchromosomes[1]. Telomere length decreases along with increasing cycles of cell divisions. Telomere shortening has therefore been proposed to play a role in cellular senescence. Telomerase is a protein-RNA enzyme complex that adds a six-base DNA sequence (TTAGGG) to the ends of chromosomes and thereby prevents their shortening. This enzyme is specifically activated in most malignant tumors but is usuall…     

三氧化二砷对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)处理HL－60细胞前后人类端粒酶逆转灵酶（hTERT)基因表达和端粒酶活性的改变。方法：采用姬姆萨染色及碘化丙锭染色置流式细胞仪检测来观察细胞的凋亡，以RT－PCR分析hTERT 基因的mRNA表达水平；应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量；利用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测As2O3处理HL－60前后端粒酶活性的改变。结果：2umol/L As2O3诱导HL－60细胞凋亡的过程中，hTERT mRNA表达水平显著下降，细胞内hTERT蛋白含量也相应降低，其端粒酶活性明显受到抑制，结论：As2O3可通过下调hTERT基因的表达而抑制HL－6细胞的端粒酶活性。     

反义hTERT对K562细胞端粒酶活性及细胞增生的影响

目的：观察反义hTERT表达质粒转染K562细胞后是否能够抑制端粒酶活性及K562细胞的增生。方法：质粒的构建与转染；将200bphTERTcDNA片段，反向连接于pLNCX-neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒，在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K562细胞中，以G418进行筛选得到阳性克隆；以MTT法和形态学法检测反义hTERT表达质粒对K562细胞增生的抑制作用；以TRAP-PCRELISA法来研究反义hTERT基因对K562细胞的端粒酶活性的抑制作用。结果：转染反义hTERT表达质粒细胞与对照组（空白对照及空质粒组）相比较。生长速率明显变慢。部分细胞出现凋亡等形态学改变。反义hTERT对K562细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用。结论：研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K562细胞中后，能够封闭K562细胞hTERT-mRNA的表达，在抑制端粒酶活性的同时，减慢了K562细胞的生长速度。