低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响

目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为(5.41±3.29)%,对照组为(8.35±2.59)%,差异有统计学意义(P＜0.05).加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.     

6—羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡及其可能分子机制

探讨神经毒素 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)诱导PC12细胞死亡本质及其可能分子机制。不同剂量 6 OHDA处理PC12细胞 2 4h后 ,分别用流式细胞仪、透射电镜、TUNEL染色和DNA电泳检测细胞凋亡 ;5 0 μmol/L 6 OH DA处理PC12细胞 2 0h后 ,用RT PCR检测caspase 3表达 ;用westernblot检测Caspase 3p32蛋白酶原的切割。结果如下 :①流式细胞仪检测PC12细胞凋亡百分率 ,对照组为 1.10 %± 1.14% ,30 ,4 0 ,5 0 μmol/L 6 OHDA处理组分别为 4 .73 %± 1.0 6% ,10 .15 %± 1.2 1%和 19.94 %± 2 .5 1% ,较对照组均有显著性差异 (P <0 .0 1)。 4 0 ,5 0 μmol/L 6 OHDA处理组透射电镜、TUNEL染色均证实存在大量凋亡细胞 ;5 0 μmol/L 6 OHDA处理组DNA电泳呈现一定间隔的“梯状”条带。② 5 0 μmol/L 6 OHDA处理组caspase 3mRNA水平增高约一倍 ,并且检测到Cas pase 3p2 0活性片段。本研究提示 6 OHDA能诱导PC12细胞凋亡 ,并呈剂量依赖性 ;激活Caspase 3蛋白酶可能参与 6 OHDA诱导PC12细胞凋亡过程     

黄芪提取物对β-淀粉样蛋白损伤PC12细胞的保护作用研究

目的 研究黄芪提取物(EA)对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤PC12细胞的保护作用,并初步探讨其作用机制. 方法 体外培养大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞克隆化的PC12细胞株,应用不同浓度(20、40、80 μg/mL)EA作用于10 μmol/L Aβ25-35损伤的PC12细胞,应用MTT法检测细胞存活率的变化.用荧光比色法和TUNEL染色分别检测PC12细胞胞内活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率的变化. 结果与模型组比较,3种浓度的EA均可使Aβ25-35诱导的PC12细胞MTT比色实验A570值增加,胞内ROS水平减少,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着浓度的增加,作用越明显. 结论 EA可能通过抗氧化损伤和抑制细胞凋亡对抗AB的神经毒性,发挥神经保护作用,且这种作用呈浓度依赖性.     

14-3-3蛋白过表达减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子对PC12细胞的毒性(英文)

目的研究14-3-3蛋白过表达对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP )诱导的PC12细胞死亡的影响作用及其可能的机制。方法构建pcDNA3.1( )-14-3-3 真核表达质粒,用脂质体2000转染PC12细胞;Western blot技术检测PC12细胞中14-3-3蛋白、Bcl-2 蛋白, 和BAD蛋白的表达;然后分别用MTT法、酶标仪及流式细胞仪检测PC12细胞的活力、caspase的活性及PC12细胞的凋亡率。结果(1)将pcDNA3.1( )-14-3-3质粒转染PC12细胞3周后,14-3-3蛋白的表达显著增加;(2)MPP 诱导PC12细胞存活率的下降是剂量依赖性的,当MPP 的浓度达100 μmol/L时,PC12细胞的存活率丧失约50%;(3)caspase 的活性随着MPP 浓度的增加而增高,当MPP 浓度到达100 μmol/L时caspase的活性也到达最大值,而当MPP 浓度超过100 μmol/L时,caspase的活性急剧下降;(4)用100 μmol/L 的MPP 处理PC12细胞24 h后,PC12细胞的凋亡率为26.5%,14-3-3蛋白的过表达使PC12细胞的凋亡率下降到8.6%;(5)用100 μmol/L MPP 处理PC12细胞后,Bcl-2蛋白的表达趋于下调而BAD蛋白的表达上调,14-3-3蛋白的过表达能显著的增加Bcl-2蛋白的表达而使BAD蛋白的表达下调。结论14-3-3蛋白过表达通过上调Bcl-2蛋白的表达并下调BAD蛋白的表达,减少了MPP 诱导的PC12细胞的凋亡,从而发挥对PC12细胞的保护作用。这些结果可能为PD的治疗提供新的药物靶点。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胶质瘤细胞凋亡机制研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导胶质瘤细胞凋亡的机制.方法 以人重组可溶性TRAIL蛋白(rsTRAIL)处理人胶质瘤细胞U87;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;DiOC6荧光染色流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(△ψm);比色法测定细胞caspase-3、8、9活性的变化;ELISA法检测胞浆cytC浓度;观察caspase-8阻断剂(Z-IETD-fmk)对U87细胞凋亡、△ψm和caspase-3、8、9活性变化的影响. 结果 rsTRAIL以时间依赖方式诱导U87细胞凋亡.同时导致U87细胞△ψm进行性下降,caspase-3、8、9活性及胞浆内cyt C浓度升高:caspase-8阻断剂可明显减弱rsTRAIL对U87细胞的上述生物学效应. 结论 TRAU通过激活caspase-8间接启动线粒体凋亡途径诱导恶性胶质瘤细胞U87凋亡.     

美满霉素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的在离体细胞培养中探讨美满霉素(Minocycline,MC)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )诱导的帕金森病细胞凋亡模型的保护作用.方法将MC或MPP 加入培养的PC12细胞中,建立多巴胺神经元凋亡模型,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞代谢活性,电泳法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果MPP 浓度为10μmol/L时建立多胺神经元凋亡模型;MC 100 μmol/L预处理可明显升高MPP 处理的PC12细胞活性;MC MPP 组细胞凋亡率显著低于MPP 组(P＜0.01),但仍明显高于阴性对照组(P＜0.05).结论MC对MPP 诱导的细胞凋亡有一定的保护作用.     

利福平抑制鱼藤酮诱导PC12细胞的凋亡：通过减轻线粒体氧化应激可能实现？

背景：研究已表明利福平能在体内、外实验起重要的神经保护作用。尽管介导这一效应的确切机制尚不清楚,但一些研究提示利福平可能是通过拮抗线粒体功能障碍和氧化应激作用。 目的：探讨利福平对鱼藤酮诱导的分化PC12细胞线粒体氧化应激的保护作用和分析其可能机制。 设计、时间和地点：本实验是从2007年12月至2008年11月在中山大学附属第二医院神经科进行的随机重复测量的细胞实验。 材料：PC12细胞由中山大学中山医学院生理实验室馈赠。MTT购自美国MB chem.公司。鱼藤酮,利福平,罗丹明123,DCFH-DA,Hoechst 33342及Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒购自美国Sigma公司。还原型和氧化型谷胱甘肽测定试剂盒和蛋白定量试剂盒购自中国江苏碧云天生物技术研究所。 方法：PC12细胞经100 ng/ml 7S神经生长因子处理九天成分化细胞后培养于含有10%胎牛血清的DMEM/F12中,并孵育在含5% CO2的37 ℃培养箱中。隔天更换培养基。根据不同的处理条件分成六组：对照组（常规加培养基）、利福平组（300μmol/L利福平作用26h）、鱼藤酮组（2.5μmol/L鱼藤酮作用24h）和三组利福平预处理组（先分别给予100, 200 and 300 μmol/L利福平预处理2h,然后2.5μmol/L鱼藤酮再作用24h）。 主要结果测量：（1）MTT检测细胞活性;（2）Hoechst 33342核染和流式细胞仪检测细胞凋亡;（3）荧光显微镜和流式细胞仪测量经罗丹明123标记的线粒体膜电位;（4）流式细胞仪分析DCFH-DA标记的细胞内活性氧生成和酶标仪检测细胞内还原型谷胱甘肽。 结果：鱼藤酮诱导分化PC12细胞凋亡增加同时伴有细胞线粒体膜电位丢失、活性氧生成及谷胱甘肽耗竭;当细胞经过100, 200 and 300 μmol/L利福平预处理后,鱼藤酮诱导的这一线粒体功能障碍能够被利福平以剂量依赖方式所阻断。 结论：利福平预处理的分化PC12细胞能够通过减轻线粒体功能异常和氧化应激阻断鱼藤酮诱导的细胞凋亡。     

丹参川芎嗪注射液对Aβ损伤的PC12细胞保护作用及机制研究

目的 探讨丹参川芎嗪注射液对Aβ损伤的PC12细胞可能的保护作用及机制。方法 将PC12细胞分为5组:空白对照组(未加任何处理药物)、Aβ诱导组(20 μmol/L Aβ处理组)和预处理组(分别加入浓度为5 ml/L、10 ml/L、20 ml/L的丹参川芎嗪注射液孵育24 h后加20 μmol/L Aβ),通过CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察PC12细胞核的改变,荧光分光光度计测定LDH、SOD、GSH及caspase-3活性水平,免疫组织化学方法观察细胞色素C(Cyt-C)蛋白释放水平,Western Blot检测Bcl-2的表达水平。结果 丹参川芎嗪注射液(5、10、20 ml/L)预处理对Aβ诱导的PC12细胞损伤有较好的保护作用,其保护作用随着药物浓度的增加而增强。它能增加Aβ损伤的PC12细胞增殖活力,减少Aβ诱导的PC12细胞凋亡,降低细胞核凝聚现象,抑制Aβ损伤的PC12细胞LDH释放,增强SOD和GSH活性,促进Cyt-C在细胞内表达,降低caspase-3活性,促进Bcl-2的表达。结论 丹参川芎嗪注射液对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有与线粒体通路相关的保护作用,其保护作用与它抑制细胞凋亡、抗氧化应激、维持线粒体正常功能、抑制caspase-3的激活、促进抗凋亡因子Bcl-2的表达有关。     

黄芪甲苷对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨黄芪甲苷对PC12细胞氧化应激损伤的作用。方法 体外培养PC12细胞，6-羟基多巴胺（6-OHDA）作用PC12细胞导致氧化应激损伤。根据细胞作用方法随机分为4组:①对照组，采用完全培养基正常培养；②6-OHDA组，给予终浓度为100 μmol/L的6-OHDA处理24 h；③低、中、高剂量黄芪甲苷组，分别给予终浓度为25、50、100 μmol/L的黄芪甲苷预处理24 h，然后给予终浓度为100 μmol/L 6-OHDA处理24 h；④AG490组，以20 μmol/L AG490（JAK2/STAT3信号通路抑制剂）预处理16 h，加入终浓度为100 μmol/L黄芪甲苷处理24 h，然后再给予终浓度为100 μmol/L 6-OHDA处理24 h。CCK8法检测细胞生存率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，酶联免疫吸附实验法检测细胞上清液超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平，免疫印迹法检测细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白表达。结果 6-OHDA作用后，PC12细胞存活率明显降低，细胞凋亡率明显升高，细胞培养液SOD水平明显降低、MDA水平明显升高，细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低；黄芪甲苷预处理明显逆转6-OHDA的作用，而且呈剂量依赖性；AG490预处理明显逆转黄芪甲苷的作用。结论 6-OHDA作用PC12细胞，可导致氧化应激损伤促使细胞凋亡；黄芪甲苷预处理能激活JAK2/STAT3信号通路，抑制6-OHDA对PC12细胞的损伤，对PC12细胞起保护作用。     

人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞分为对照组、谷氨酸损伤组和人参皂甙RD预处理组。对照组细胞正常培养;谷氨酸损伤组细胞置于含10 mmon/L谷氨酸的DMEM培养基中培养24 h;人参皂甙RD预处理组细胞经50μmol/L人参皂甙RD预处理30 min后,再加谷氨酸继续培养24 h。采用噻唑蓝比色法检测细胞活力;按试剂盒检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）释放量;流式细胞仪检测胞内活性氧（ROS）水平;按试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果人参皂甙RD预处理最佳浓度为50μmol/L。与谷氨酸损伤组相比,人参皂甙RD预处理PC12细胞活力明显增高（P〈0.05）,培养液LDH释放量明显降低（P〈0.05）,胞内ROS含量明显降低（P〈0.05）,胞内SOD含量明显增高（P〈0.05）。结论人参皂甙RD预处理可减轻谷氨酸引起的PC12细胞损伤。     

Rifampicin inhibits apoptosis in rotenone-induced differentiated PC12 cells by ameliorating mitochondrial oxidative stress

BACKGROUND: Previous studies have shown that rifampicin exhibits neuroprotective effects, but the precise mechanisms remain unclear. Rifampicin is thought to exert the neuroprotective effect as a hydroxyl free radical scavenger. OBJECTIVE: To investigate the protective effects of rifampicin pretreatment on rotenone-induced mitochondrial oxidative stress in differentiated PC12 cells. DESIGN, TIME AND SETTING: A repeated measure, cell-based study was performed at the Department of Neurology, Second Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, China between December 2007 and November 2008. MATERIALS: PC12 cells were a kind gift from the Physiology Laboratory of Zhongshan Medical School, Sun Yat-sen University, China. Rotenone and rifampicin were purchased from Sigma, USA. METHODS: PC12 cells were differentiated by culturing with 100 ng/mL 7S nerve growth factor for 9 days in Dulbecco's modified Eagle's medium/Nutrient Mix F12 (DMEM/F12) supplemented with 10% fetal bovine serum. The cells were assigned to six groups according to various treatment conditions: control, cultured with normal media; rifampicin group, treated with 300 μmol/L rotenone for 26 hours; rotenone group, treated with 2.5 μmol/L rotenone for 24 hours; rifampicin pretreatment groups, pretreated with 100,200, and 300 μmol/L rifampicin for 2 hours, respectively, followed by 2.5 μmol/L rotenone for 24 hours. MAIN OUTCOME MEASURES: Mitochondrial membrane potential was measured by fluorescence microscopy and flow cytometry, respectively, using rhodamine 123 staining. Intracellular reactive oxygen species formation was analyzed by flow cytometry using 2', 7'-dichlorofluorescin-diacetate staining, and intracellular reduced glutathione was measured with a microplate reader. Cell viability was determined by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide assay. Cell apoptosis was detected by Hoechst 33342 staining and flow cytometry. RESULTS: Increased apoptosis in rotenone-induced, differentiated, PC12 cells was accompanied by the loss of mitochondrial transmembrane potential, the formation of reactive oxygen species, and reduced glutathione depletion (P < 0.01). Rotenone-induced mitochondrial dysfunction was blocked in a dose-dependent manner by rifampicin (P< 0.05 or P< 0.01). CONCLUSION: Pretreatment of differentiated PC12 cells with rifampicin blocked rotenone-induced apoptosis by ameliorating mitochondrial dysfunction and oxidative stress.     

姜黄素通过IGF-1/Akt/FoxO3a通路保护鱼藤酮诱导PC12细胞的PD模型

目的探究姜黄素(Cur)对鱼藤酮(Ro)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法建立鱼藤酮诱导的PC12细胞的帕金森病模型,利用姜黄素进行干预。实验分组为空白对照组,鱼藤酮模型组(终浓度:0.1μmol/L),姜黄素干预组(终浓度:0.5μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L)。MTT比色法检测细胞活力,AO/EB荧光染色法观察细胞的凋亡情况,AnnexinⅤ-FITC/P双染检测细胞凋亡,Western-blot法检测细胞内IGF-1、Akt、FoxO3a的蛋白表达。结果 MTT结果显示:鱼藤酮组较对照组细胞活力明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),0.5μmol/L和1.0μmol/L姜黄素干预组可减轻0.1μmol/L鱼藤酮对PC12细胞增殖活力的影响,明显抑制了鱼藤酮对PC12细胞凋亡的诱导作用,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P<0.01)Western-blot结果示:鱼藤酮组较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),0.5μmol/L和1.0μmol/L姜黄素干预组IGF-1、磷酸化的Akt(p-Akt)、磷酸化的FoxO3a(p-FoxO3a)表达与鱼藤酮组比明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。以上结果均显示5.0μmol/L和10μmol/L姜黄素干预组与鱼藤酮组比较差异无统计学意义(P>0.05);结论适宜浓度的姜黄素对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的PD模型具有保护作用,其保护作用呈浓度依赖性,其保护作用的机制可能与激活IGF-1/Akt/FoxO3a通路有关。     

H_2O_2预处理抑制α-Synuclein的聚集并减轻Rotenone对PC12细胞的损伤

目的 探讨H_2O_2预处理(HPP)对Rotenone诱导PC12细胞损伤及α-Synuclein聚集的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTF法)、流式细胞仪、免疫印迹(western blot)技术及共聚焦显微镜分别检测细胞活力、细胞凋亡率、α-Synuclein的表达及聚集.结果 H_2O_2预处理能够减少α-Synuclein寡聚体的表达及聚集体的形成,增加PC12细胞活力(Rot组47%±3.67%,HPP+Rot组82%±6.69%),抑制细胞凋亡(Rot组49.68%±4.55%,HPP+Rot组18.73%±5.64%).结论 H_2O_2:预处理能减轻Rotenone对PC12细胞的毒性损伤作用,这种保护作用可能是通过抑制α-Synuclein寡聚体表达实现的.

Abstract：

Objective To explore the effect of hydrogen peroxide preconditioning on the aggregation of α-Synuclein and the injury of PC12 cells induced by rotenone. Methods MTT assay, flow cytometry analysis,western blotting and confocal microscopy were utilized to determine the cell viability, apoptotic ratio of PC12, the expression of α-Synuclein and the formation of α-Synuclein oligomers. Results Hydrogen peroxide preconditioning could down-regulate expression of α-Synuclein oligomers, inhibit the formation of α-Synuclein aggregation,increase cell viability (Rot group 47% ± 3.67% , HPP + Rot group 83.82%±6.69% ) ,and inhibit cell apoptosis ( Rot group 49.68%±4.55% ,HPP + Rot group 18.73%±5.64% ). Conclusion Hydrogen peroxide preconditioning can protect PC12 cells against Rotenone toxicity through downregulating the expression of α-Synuclein oligomers and inhibiting the formation of α-Synuelein aggregation.     

姜黄素对多巴胺能细胞的保护作用研究

目的探讨姜黄素对多巴胺能细胞的保护作用及机制。方法采用神经毒素鱼藤酮(1μmol/L)处理经神经生长因子(NGF)(50 ng/ml×7)诱导分化过的PC12细胞,并在处理前6 h加入1μmol/L的姜黄素进行干预,MTT法检测细胞活力,荧光分光光度法检测细胞内活性氧水平,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果 NGF诱导后的PC12细胞经1μmol/L鱼藤酮处理24 h后,细胞活力下降至对照组的57.1%,细胞内活性氧水平为对照组的189%,而GSH水平显著下降(P<0.05);姜黄素干预后,与鱼藤酮组相比,细胞活力和GSH含量显著提高,活性氧水平显著降低(P<0.05)。结论姜黄素对多巴胺细胞具有保护作用,其机制与抗氧化活性有关。     

Protective effects of edaravone against cobalt chloride-induced apoptosis in PC12 cells

Objective

To investigate the neuroprotective effects of edaravone (Eda) on cobalt chloride (CoCl₂)-induced oxidative stress and apoptosis in cultured PC12 cells as well as the underlying mechanisms.

Methods

PC12 cells impaired by CoCl₂ were used as the cell model of hypoxia. MTT (methyl thiazolyl tetrazolium) was used to assay the viability of the PC12 cells exposed to Eda with gradient concentrations; Hochest 33258 stain assay was used to analyze the apoptosis ratio of the PC12 cells; Bcl-2 and Bax protein levels in PC12 cells were examined by western blotting. ROS level, the mitochondrial transmembrane potential and caspase-3 activity in each group were detected by spectrofluorometer.

Results

CoCl₂ treatment caused the loss of cell viability in PC12 cells, which was associated with the elevation of apoptotic rate, the formation of ROS and the disruption of mitochondrial transmembrane potential. CoCl₂ also significantly induced the upregulation of Bax/Bcl-2 ratio and the activation of caspase-3. In contrast, Eda significantly reversed these phenotypes, with its maximum protective effect at 0.1 μmol/L.

Conclusion

These results indicated that Eda could protect PC12 cells from CoCl₂-induced cytotoxicity, and this protection might be ascribed to its anti-oxidative and anti-apoptotic activities.     

N-乙酰半胱氨酸对PC12细胞的保护作用研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用神经毒素1μmol/L鱼藤酮处理PC12细胞24h,并在处理前30min加入500μmol/L的NAC进行干预,流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率和活性氧水平,比色法检测还原型谷胱甘肽（GSH）水平。结果PC12细胞经1μmol/L鱼藤酮处理24h后,细胞凋亡率达41.9%,细胞内活性氧水平较对照组显著提高,而GSH水平显著下降（P〈0.05）;NAC干预后,能够明显抑制鱼藤酮的细胞毒性作用,与鱼藤酮组相比,细胞凋亡率和活性氧水平显著降低,GSH含量明显增加（P〈0.05）。结论在帕金森病（PD）的细胞模型中,通过NAC的干预,能够明显保护PC12细胞,其保护机制与抗氧化能力有关。     

脑源性神经生长因子通过调节Bax/Bcl表达抑制β-淀粉样蛋白诱导的细胞凋亡

目的 探讨BDNF对凝聚态β-淀粉样蛋白25-35片断(Aβ25-35)诱导细胞损伤特别是凋亡的影响.方法 MTT法观察细胞活力,Annexin V-PI双染色法观察细胞凋亡,Western blotting法检测Bax及Bcl-2表达,应用Trk B受体抑制剂K252a(200 nmol/L)观察50 ng/mL BDNF对20 μmol/L的Aβ25-35诱导细胞损伤的抑制作用机制.结果 MTT检测结果及Annexin V-PI双染色法发现50ng/mL的BDNF预处理可显著地抑制20μmol/L的Aβ25-35诱导的PC12细胞活力的下降及细胞凋亡;Western blotting检测发现50 ng/mL的BDNF对20μmol/L的Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax表达升高、Bcl-2表达降低及Bax/Bcl-2比值上调均有明显的抑制作用,该作用可被Trk B受体抑制剂K252a(200 nmol/L)抑制.结论 BDNF对Aβ25-35诱导的细胞损伤特别是细胞凋亡具有保护作用,该保护作用是通过与其特异性受体Trk B结合实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect of BDNF on cell injuries, cell apoptosis especially, induced by 25-35 segment of β-amyloid protein (Aβ25-35) at condensed state in PC12 cells.Methods The viability of PC12 cells, the apoptosis of PC12 cells and the expressions of Bax and Bcl-2 were detected by MTT, Annexin V-PI staining and Western blotting, respectively. Trk B receptor inhibitor K252a (200 nmol/l) was employed to observe the mechanism of 50 ng/ml BDNF on Aβ25-35 (20 μmol/L)-induced cell injury. Results BDNF (50 ng/ml) could significantly prevent the decrease of cell viability and cell apoptosis, and the increase of Bax expression and the decrease of Bcl-2 expression induced by 20 μmol/L Aβ25-35, and prevent the increase of up-regulation of Bax/Bcl-2 ratio; and these effects were blocked by K252a (200 nmol/1). Conclusion BDNF can prevent Aβ25-35-induced cell injury, cell apoptosis especially, by binding to its specific receptor Trk B.     

姜黄素通过诱导热休克蛋白70保护多巴胺能细胞

目的 探讨姜黄素通过诱导热休克蛋白70(Hsp70)高表达,抑制α-突触核蛋白的异常表达和聚集,促进蛋白酶体系统降解异常α-突触核蛋白对多巴胺能细胞的保护作用.方法 选用大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PCI2细胞),鱼藤酮诱导其损伤建立帕金森病细胞模型,利用姜黄素进行干预:采用MTT法检测细胞活力,荧光酶标仪检测蛋白酶体水解酶活性,Western blot检测Hsp70和α-突触核蛋白的表达,免疫荧光法检测细胞内Hsp70的表达和α-突触核蛋白的聚集.结果 鱼藤酮组PC12细胞活力及蛋白酶体水解酶活性明显降低,Hsp70的表达轻度增加,α-突触核蛋白表达和聚集明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).经不同浓度姜黄素预处理4h后与0.1 μmol/L鱼藤酮共同孵育PC12细胞24 h,与鱼藤酮组比较,0.5 μmol/L和1.0 μmol/L姜黄素使细胞活力以及蛋白酶体水解酶活性明显升高,Hsp70表达明显升高,α-突触核蛋白的表达和聚集明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);5.0 μmol/L和10 μmol/L姜黄素对鱼藤酮的拮抗作用明显减弱,细胞活力与鱼藤酮组比较差异均无统计学意义(P>0.05),胰蛋白酶、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性与鱼藤酮组比较差异均无统计学意义(P>0.05);10 μmol/L姜黄素组糜蛋白酶样水解酶活性进一步降低,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 低浓度姜黄素能够通过诱导PC12细胞表达Hsp70,诱导蛋白酶体水解酶活性表达,进而抑制α-突触核蛋白的表达和聚集,从而拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞的损伤.