超声时间对提取变异链球菌蛋白质的实验研究

目的寻找高效提取变异链球菌蛋白质的最佳超声时间。方法采用不同的超声时间裂解细菌并提取蛋白质,观察细菌裂解程度、测定提取蛋白质浓度及蛋白质单向电泳图谱,分析比较不同超声时间的裂解效果。结果超声可以有效破碎细菌,当超声处理96圈时,提取细菌的蛋白质质量浓度达到最大值即0.919g/L;蛋白质单向电泳图谱表明不同超声时间提取的蛋白质条带分布基本一致,但超声处理96圈时(总时间16min),蛋白质丰度最高。结论提取变异链球菌蛋白质的最佳条件是在裂解液介质条件下,超声处理96圈。     

超声破碎变异链球菌后蛋白质提取条件的优化研究

目的寻找超声破碎后高效率提取致龋菌变异链球菌蛋白质的最佳放置时间。方法以裂解液为提取介质,采用超声法破碎细菌。对比破碎前、后菌形态并将菌提取液分别放置0、10、30、50、70min收集蛋白上清液,通过RC DC法测定蛋白质浓度及蛋白质SDS-PAGE电泳,比较放置不同时间后的蛋白质提取效果。结果超声破碎后,少部分细菌破碎不完全。RC DC法测定结果显示,超声破碎后放置30min时提取的蛋白质浓度高于其他各组(P<0.05),但SDS-PAGE电泳显示蛋白质的条带分布和丰度无明显差别,推测蛋白质的释放和溶解需要一定时间完成。结论超声法提取变异链球菌蛋白质后放置30min可显著提高蛋白质提取效率。     

维吾尔族和汉族不同龋敏感儿童变异链球菌和远缘链球菌的检测

目的研究维吾尔族和汉族不同龋敏感儿童牙菌斑中变异链球菌和远缘链球菌的检出量,分析变异链球菌及远缘链球菌与不同民族儿童乳牙龋齿发生的关系,为不同民族儿童乳牙龋的防治提供依据。方法采用T-A克隆技术制备变异链球菌ATCC25175、远缘链球菌ATCC6715、内参基因16S rRNA的质粒标准品,应用SYBR Green I荧光定量聚合酶链反应对变异链球菌和远缘链球菌进行定量检测。结果维吾尔族儿童高龋组远缘链球菌的检出量高于汉族儿童高龋组[(1.06×105±0.43×103)copies.μL-1vs(8.29×104±1.20×104)copies.μL-1],差异有统计学意义(P<0.05),而维吾尔族、汉族儿童高龋组变异链球菌检出量比较差异无统计学意义(P>0.05),同时维吾尔族和汉族儿童远缘链球菌和变异链球菌的检出量高龋组均高于无龋组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论远缘链球菌可能是维吾尔族儿童乳牙龋高发的危险因素。     

生物膜状态下变异链球菌生物学行为研究

龋病是细菌性疾病,变异链球菌是公认的主要致龋菌。现代龋病学研究认为,浮游变异链球难以在口腔中生存,只有形成牙菌斑生物膜才可能生存并致龋。大量研究表明,生物膜细菌与浮游细菌在生长代谢、致病性、对药物的敏感性以及对抗宿主防御系统等方面存在显著差异。本文就生物膜状态下变链菌的生物学行为予以综述。     

新型靶向多肽对变异链球菌作用的初步研究

目的：变异链球菌是主要致龋菌,本文主要研究靶向多肽对变异链球菌的杀菌作用及机制。方法：通过最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)以及杀菌动力学曲线的测定观察靶向抗菌肽对于变异链球菌的抗菌效果,以及通过部分抑菌浓度(FIC)、部分杀菌浓度(FBC)测定靶向抗菌肽和NaF(或CHX)有无协同抗菌作用,激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜状态下靶向抗菌肽的作用效果。结果：C8g3pm11、C8gpm11、C16pm11均具有抗菌活性,但抗菌活性差距较大,并且具有时间依赖性,对生物膜状态的变异链球菌也具有一定的抗菌活性。结论：C8g3pm11、C8gpm11、C16pm11对变异链球菌具有一定的抗菌活性,具有潜在的临床指导意义。     

烟酰胺抑制变异链球菌生长及生物膜形成的研究

目的 研究烟酰胺(nicotinamide, NAM)对变异链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)生长、形成生物膜及合成胞外多糖的影响。方法 通过药敏试验测定NAM对S.mutans的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。NAM处理组设置1/2 MIC、1/4 MIC和1/8 MIC三个质量浓度组;设置阴性对照组为不含NAM的培养基;设置阳性对照组为含0.1 mg/mL NaF的培养基(扫描电镜检测除外)。绘制S.mutans在不同浓度NAM作用下的生长曲线;结晶紫定量法和蒽酮-硫酸法分别探究NAM对S.mutans形成生物膜及合成水不溶性胞外多糖的影响;在扫描电镜下观察NAM对S.mutans浮游菌及生物膜的形态和结构的影响。结果 NAM对S.mutans的MIC值为32μg/μL。经过16μg/μL(1/2 MIC)、8μg/μL(1/4 MIC)、4μg/μL(1/8 MIC) NAM处理后,S.mutans的生长和生物膜的形成均受到抑制,其中16μg/μL NAM组的抑制效果最显著。16μg/μ...     

抗菌肽对高龋患者口内变异链球菌生长的影响

[目的] 研究人工合成抗菌肽KSL对高龋患者口内变异链球菌的生长抑制情况,为KSL的临床实用奠定实验基础.[方法]依据抗菌肽KSL的氨基酸序列人工合成抗菌肽KSL,采用标准培养法及生化鉴定法,分离鉴定高龋患者口内变异链球菌,测定KSL对该菌株的生长抑制情况.[结果]成功分离鉴定变异链球菌3株,KSL对临床分离变异链球菌的MIC为0.0625 mg/mL,MBC为1.0000 mg/mL,KSL对变异链球菌杀菌曲线表明应用30 min后其对变异链球菌有明显的杀菌效果.[结论]抗菌肽KSL对高龋患者口内变异链球菌有着明显的抑菌杀菌效果.     

唇香草提取物抑制变异链球菌实验的初步研究

目的研究维药唇香草提取物对变异链球菌(streptococcus mutans,Sm)生长的影响,为开展植物药防龋提供实验依据。方法采用水蒸气蒸馏法提取唇香草挥发油,采用系统溶剂萃取法从唇香草醇提物中得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取层,采用测定OD值和结晶紫显色的方法,测定唇香草提取物对变异链球菌的生长及其生物膜形成的影响。结果挥发油和胡薄荷酮能有效抑制变异链球菌的生长;正丁醇萃取层、蒙花苷和地奥司明对变异链球菌生长有一定影响。结论唇香草提取物的抑菌活性是多种成分的共同作用。     

A群链球菌耐药性变异情况调查

目的　探讨A群链球菌耐药性的变异情况 ,更好的指导临床用药 ;同时提醒临床医生 ,滥用抗生素类药物可能造成的不良后果。方法　收集郴州市第一人民医院 1994年度检出的 78株和2 0 0 0年度检出的 131株A群链球菌的药敏试验结果 ,使用 x2 检验分析A群链球菌耐药性的变异情况。结果　 1994年度和 2 0 0 0年度A群链球菌对青霉素G(x2 =6 .988)、氨苄西林 (x2 =5 .5 89)、头孢唑林 (x2 =6 .988)的耐药性增高明显 ,而对苯唑西林、头孢哌酮、环丙沙星、红霉素、四环素、庆大霉素、复方新诺明、氯林可霉素的耐药性无明显改变 (x2 <3.84 )。结论　六年中A群链球菌的耐药性发生了变异 ,对多种抗生素的耐药性均有增高。因此 ,临床上使用抗生素类药物时应慎重     

氟化物对变形链球菌生长和产酸影响的体外实验研究

目的:通过研究氟化物浓度对致龋菌生长和代谢的影响,以进一步阐明氟化物的防龋机制。方法:在含有不同浓度(0～1.0%)氟化钠的培养基内培养变形链球菌标准菌株,以分光光度法检测培养前后培养基光密度值(OD值),以反映变形链球菌的生长情况;以复合玻璃pH电极法检测培养前后培养基pH的变化(△pH),以反映变形链球菌的产酸代谢情况。结果:与对照组相比,各实验组变形链球菌的生长受到明显抑制,且随着培养基内氟化钠浓度的增加,变形链球菌的数量呈浓度依赖性减少;同时随着培养基内氟化钠浓度的增加,各组培养基的pH变化也逐渐减小,当氟化钠的浓度达0.5%～1.0%时,培养前、后培养基的pH几乎未发生明显的变化。各组培养基的OD值与△pH间无明显相关性。结论:氟化钠可显著抑制致龋菌的生长及产酸代谢活动,但氟化钠可能主要通过干扰牙菌斑内致龋菌的产酸代谢活动来发挥其局部防龋作用,而其对致龋菌生长的抑制或杀灭仅起次要作用。     

变形链球菌葡糖基转移酶基因在戈登链球菌中的表达

目的:通过探讨变形链球菌葡糖基转移酶基因在戈登链球菌中的表达,了解葡糖基转移酶对戈登链球菌生物学特性的影响。方法:携带的大肠杆菌链球菌穿梭质粒pZB1转化戈登链球菌,利用蛋白质免疫印迹技术确认葡糖基转移酶基因在转化株中表达,通过检测转化株菌落形态以及蔗糖依赖性粘附了解葡糖基转移酶对戈登链球菌生化特性的影响。结果:戈登链球菌的菌落形态由转化前的光滑型变为转化后的半粗糙型,转化菌株的蔗糖依赖性粘附较转化前明显降低。结论:变形链球菌的葡糖基转移酶在戈登链球菌中的表达增加了细菌之间的聚集,葡糖基转移酶与戈登链球菌的粘附因子相互作用,降低了细菌的蔗糖依赖性粘附。     

B型链球菌数量感应通路测定及LuxS缺失突变株的构建

目的对GBS中可能存在的AI-2数量感应通路进行测定，构建数量感应相关分子LuxS缺失突变株并对其基因型进行确认。方法培养GBS至不同D（λ）值．利用V．harveyi BB170作为报告菌株，对GBS诱导生物发光的能力进行测定，然后寻找GBS中LuxS同源基岗，通过同源重组法在GBS中构建LuxS缺失突变株，Southern杂交分析确证。结果GBS中的某种分泌成份可在报告菌株中诱导生物发光活性，提示GBS中存在AI-2数量感应通路，在GBS中发现了LuxS同源基因并成功地构建了LuxS缺失突变株。结论本研究为探索LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性及GBS毒力研究建立了细菌模型     

B型链球菌数量感应通路测定及LuxS缺失突变株的构建

目的 对GBS中可能存在的AI-2数量感应通路进行测定,构建数量感应相关分子LuxS缺失突变株并对其基因型进行确认。方法 培养GBS至不同D(λ)值,利用V.harveyi BB170作为报告菌株,对GBS诱导生物发光的能力进行测定,然后寻找GBS中LuxS同源基因,通过同源重组法在GBS中构建LuxS缺失突变株,Southern杂交分析确证。结果 GBS中的某种分泌成份可在报告菌株中诱导生物发光活性,提示GBS中存在AI-2数量感应通路,在GBS中发现了LuxS同源基因并成功地构建了LuxS缺失突变株。结论 本研究为探索LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性及GBS毒力研究建立了细菌模型。     

△LuxS的表型分析及其在GBS毒力调控机制研究中的应用

目的采用LuxS缺失突变株模型对B型链球菌中数量感应相关分子LuxS的功能及与其相关的自诱导因子-2数量感应通路进行研究，以探索其毒力调控机制。方法采用RT-PCR法、菌落印迹分析、生长曲线测定、cAMP因子测定等方法对该缺失突变菌株的表型特性进行了研究。最后应用哈氏弧菌作为报告菌株，通过生物发光测定法分析了突变株对B型链球菌诱导报告菌株中的生物发光活性的影响。结果发现此缺失突变可导致B型链球菌中scpB基因表达的上调；与野生株相比，突变株的生物发光诱导活性比野生株降低了大约两倍。结论本研究结果证实了LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性，并为GBS中毒力调控机制的进一步研究提供了新的线索。     

一起人感染猪链球菌病疫情的流行病学和病原学研究

目的查明我市一起人感染猪链球菌病的病原学、感染途径和流行特征,为制定预防控制措施提供依据。方法对2006年2月27日我市发生的一起人感染猪链球菌病疫情进行流行病学调查和病原学检测。结果患者生猪屠宰时手指有外伤史,临床上潜伏期短,病程进展迅速,有淤斑、出血点,呈中毒性休克综合征;患者血液中分离的细菌经微生物检测、生化检测、血清学检测和PCR检测结果为猪链球菌Ⅱ型。结论加强对养殖人员和屠宰人员的健康教育,提高个人防护意识;加强对医务人员培训,提高发现、诊断和治疗此病的能力。     

洗必泰涂料对正畸儿童口腔中致龋菌的影响

目的　观察和探讨洗必泰涂料对正畸儿童牙面菌斑中细菌总数和变形链球菌数的影响,以及唾液pH值的 改变。方法　选择40例正畸儿童,随机分为两组,试验组涂布40%洗必泰涂料,对照组不做处理。分别于戴用矫 治器前及戴入后1月采集上颌牙唇颊面菌斑,测定菌斑中细菌总数及变形链球菌数,同时测定唾液pH值。结果　 对照组戴用后1月,细菌总数及变形链球菌数较戴用前明显增加(P<0.01),唾液pH值较戴用前降低(P<0.01)。 试验组与对照组戴用后1月相比,试验组细菌总数及变形链球菌数明显少于对照组(P<0.01),唾液pH值高于对 照组(P<0.01)。结论　戴用固定矫治器后,牙面菌斑内细菌总数及变形链球菌数较戴用前增加,唾液pH值较戴 用前降低,应用洗必泰涂料可明显抑制正畸儿童口腔内变形链球菌数,减少龋坏发生。     

连续5年监测乙型溶血性链球菌的临床分布及耐药性分析

目的调查乙型溶血性链球菌的临床分布及耐药性.方法常规需氧细菌培养法;药敏试验采用琼脂纸片扩散法.结果 5年间共检出乙型溶血性链球菌58株,且以化脓性链球菌为主,其次是无乳链球菌、G群溶血性链球菌,而马链球菌、F群溶血性链球菌较少见;标本以脓汁检出率最高,占36.2%,其它依次为尿液、分泌物、血液及痰标本;未发现耐青霉素及耐万古霉素的乙型溶血性链球菌,该菌对氯霉素的耐药率较低,对红霉素、阿奇霉素则存在较高的耐药率.结论临床应注重对患者脓汁、分泌物等标本的细菌学检测,以便作出病原学诊断,由乙型溶血性链球菌所致感染治疗上要以青霉素族药物为首选,大环内酯类药物存在较高的耐药性.     

肺炎链球菌毒力因子ClpP蛋白酶的体外表达及纯化

目的构建ClpP原核表达载体,获取原核表达的ClpP蛋白分子。方法分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP读码框克隆到pET-32a原核表达载体,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍柱纯化并透析复性,真空冷冻干燥保存。结果测序结果证实克隆的基因与GenBank中的序列相符,Western blot证实获得了ClpP融合蛋白。结论获得了高表达的重组抗原蛋白,经镍柱纯化后纯度可达90％以上。     

两种浓度氟保护漆在体外对变形链球菌、远缘链球菌生长抑制作用的实验研究

目的 比较两种浓度氟保护漆对致龋链球菌生长抑制作用.为推广氟保护漆进行群体防龋提供可靠的理论依据.方法 将实验组:0.5%氟保护漆、0.1%氟保护漆;对照组:0.1%洗必泰、0.05%氟化钠、0.9%生理盐水分别加入含有变形链球菌、远缘链球菌菌悬液的BHI培养基中,采用厌氧连续培养技术,观测菌落计数变化.比较其对致龋链球菌生长抑制作用效果.结果 0.5%氟保护漆、0.1%氟保护漆对致龋链球菌具有一定的抑制作用,但是其作用明显小于0.1%洗必泰.二者之间抑制生长效果存在显著性差异.结论 两种浓度氟保护漆在体外能直接杀灭一定数量的致龋链球菌.