枸杞子多糖与放化疗合用对脑荷G422瘤小鼠的治疗作用

本实验观察了枸杞子多糖与~(60)Co头部照射及卡氮介(BCNU)合用对脑荷G422瘤小鼠生存期和脾脏T淋巴细胞增殖的影响,结果显示:三者合用不仅能产生明显的协同抑瘤作用,而且可明显改善荷瘤鼠的细胞免疫功能.     

应用SLC和Survivin共表达基因瘤苗抗肿瘤作用的研究

探讨应用次级淋巴趋化因子(secondary lymphoid chemokine, SLC)和Sur vivin共表达基因瘤苗抗肿瘤作用。方法:将SLC基因及Survivin 基因导入沙门氏菌载体,增殖并经口将此菌免疫荷瘤小鼠,观察抗肿瘤作用。结果: SLC/Survivin瘤苗对荷瘤小鼠具有较强的抗肿瘤作用。致死量D121肺癌细胞经尾静脉注入小鼠, 4 周后有87 .5% (7/8)的小鼠被证实无肿瘤生长。此保护性免疫反应可能是刺激CD8+ 细胞功能的发挥和细胞因子如γ干扰素等调节的。结论:SLC/Survivin瘤苗可诱导有效抗肿瘤反应,为将此类瘤苗使用于临床提供了一定的理论基础。     

莪术醇修饰的肿瘤疫苗抗MFC效应的研究

目的:研究中药莪术提取的有效成分-莪术醇生物修饰构建的肿瘤细胞疫苗对荷瘤(MFC)小鼠的免疫功能变化及治疗效应。方法:用现代生物学技术修饰构建瘤苗,观察莪术醇-MFC细胞瘤苗体外激活脾淋巴细胞的能力,体内成瘤性变化及作为瘤苗对荷瘤胃癌的小鼠治疗作用。结果:莪术醇-MFC细胞瘤苗在体外能有效诱导免疫细胞活化增殖和特异性CTL活性的产生,体内的成瘤能力明显下降,免疫接种瘤苗后对荷瘤鼠胃癌小鼠有较好的治疗效果。结论:莪术醇修饰的肿瘤细胞瘤苗能明显增强其免疫原性、对荷瘤胃癌小鼠有较好的治疗效应。     

肿瘤疫苗与BCG合用的抗癌疗效及其程序性细胞死亡诱导的实验研究

用肿瘤疫苗进行肿瘤免疫治疗已有八十年历史,但由于肿瘤本身抗原性较弱不足以引起有效的抗肿瘤效应,疗效不够理想,随着免疫技术发展、免疫激活剂的应用,肿瘤疫苗制剂进行主动特异免疫治疗在动物及部分人类肿瘤获得良好的效果。本试验将S180 3×10~8/ml细胞经冻融及高渗KCl进行细胞膜提取,制肿瘤(疫)疫苗,观察肿瘤疫苗与BCG(简称瘤苗)合用对荷瘤小鼠肿瘤生长、存活期及瘤细胞程序性死亡的影响,结果发现经瘤苗50μl及BCG50μl(含100μg活苗)治疗后,荷瘤小鼠肿瘤生长缓慢,存活期延长,于荷瘤(S180 5×10~6/0.2ml腋下接种)后13天,测定肿瘤大小(长径×宽径),瘤苗治疗组与荷瘤对照组分别为110±30mm与250±70mm,差异显著P<0.01,瘤苗治疗组肿瘤生长明显受抑,于荷瘤前7天应用瘤苗其抑瘤更显著,肿瘤大小为90±10mm。于荷瘤后10天记录荷瘤小鼠死亡数直至60天,两组分别为34.6±7.3天,14.6±1.3天,瘤     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

肿瘤异构抗原的主动免疫效应的实验研究

目的 探讨小鼠肝癌异构抗原的主动免疫作用与抑瘤效果的关系。方法 应用小鼠肝癌(Hep—A—22)d 66℃/60min这一热剂量下制备成异构抗原(即瘤苗),用该抗原免疫BALB/C小鼠并测定相关免疫指标,结果 免疫鼠可抗同源H_(22) 1×10~7个瘤细胞攻击,总有效率为100％。同时免疫鼠脾细胞NK活性,IL—2活性及对ConA增殖反应性均较荷瘤对照鼠明显升高。结论 该异构抗原可明显提高小鼠免疫功能,显示出较强的抑瘤效果,有临床应用价值。     

不同免疫背景小鼠G422胶质瘤颅内移植瘤模型的建立

背景与目的：胶质瘤治疗效果差,是神经外科领域研究的难点。本研究建立正常免疫（Bal b／c小鼠）、T细胞免疫缺陷（裸小鼠）和补体功能缺陷（补体C3基因敲除小鼠）三种不同免疫背景的小鼠G422胶质瘤颅内移植瘤模型。并观察肿瘤的生长特点。方法：将小鼠源性G422胶质瘤细胞种植入Bat b／c小鼠、裸小鼠和补体C3基因敲除小鼠脑内．观察肿瘤种植后三种小鼠的生存期、成瘤率、肿瘤生长情况及病理学特性。结果：Bal b／c鼠、裸小鼠、补体C3基因敲除小鼠三种小鼠脑内种植G422胶质瘤细胞后,成瘤率分别为90％、100％、100％。Bal b／c荷瘤鼠平均生存期最长[（44．3±6．0）d],裸小鼠次之[（24．8±4．8）d],补体C3基因敲除小鼠最短[（18．6±5．2）d]．肿瘤体积增大至34．29mm^3需要的时间分别为35d、21d、14d;组织病理学观察显示G422胶质瘤细胞脑内种植后可保持胶质瘤的肿瘤特征。结论：采用G422小鼠胶质瘤细胞种植入Bal b／c小鼠、裸小鼠、补体C3基因敲除小鼠脑内．可建立具有不同免疫背景的胶质瘤动物模型。     

S180瘤苗和BCG抗癌作用及诱发肿瘤细胞凋亡

 用S180瘤苗(可溶性抗原)及BCG皮内注射治疗荷瘤小鼠, 显示肿瘤生长受抑, 脾脏CTL活性增强, 与对照组或单一治疗组(瘤苗组、BCG组)相比P<0.01, 而荷瘤前6天治疗更显著。 治疗组的瘤组织作超微形态观察, 有核质凝聚胞浆固缩等细胞凋亡的改变，作流式细胞术DNA直方图显示在G1期前具凋亡特征的AP峰较对照明显升高P<0.01。 实验显示, 瘤苗BCG可能通过CTL启动细胞凋亡途径抑制肿瘤生长。     

荷瘤小鼠瘤苗治疗疗效与红细胞天然免疫活性相关性及其意义

[目的]探讨瘤苗对荷瘤小鼠红细胞天然免疫活性影响的临床意义.[方法]采用直向红细胞天然免疫黏附肿瘤细胞试验(DRIAC)和促红细胞天然免疫黏附肿瘤细胞试验(IRIAC)测定30例荷瘤小鼠.[结果]死瘤苗治疗组DRIAC水平(26.25±9.85)明显高于未治疗对照组水平(14.38±3.18,P<0.01).溶瘤苗治疗组IRIAC水平(12.14±3.18)明显低于未治疗对照组水平(17.25±3.8,P<0.01).[结论]瘤苗作用与红细胞天然免疫活性之间相关性分析表明红细胞天然免疫黏附瘤苗制品应有使用价值.     

5-FC/CD 自杀基因疗法结合热休克蛋白-多肽复合物瘤苗治疗小鼠黑色素瘤的研究

 目的　研究 5 -氟尿嘧啶 /胞嘧啶脱氨酶 (5 FC/ CD)基因疗法与热休克蛋白 -多肽复合物 (HSP- PC)瘤苗免疫疗法联合抗肿瘤效果。方法　将携带 CD基因的重组腺病毒注射到小鼠黑色素瘤体内 ,腹腔注射 5 - FC,同时皮下接种 HSP70 - PC。结果　经联合治疗后 ,70 %荷瘤小鼠肿瘤体积缩小、消退 ,小鼠存活期延长 ,肿瘤组织明显坏死 ,炎症细胞、CD+4 及 CD+8T细胞浸润明显。结论5 - FC/ CD基因疗法结合 HSP- PC瘤苗免疫疗法抗小鼠黑色素瘤作用显著 ,具有临床应用前景。     

融合基因mGM-CSF/hIL-2在肝癌细胞瘤苗特异性免疫治疗中的作用

背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法。近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法。本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌瘤苗,观察其特异性抗肿瘤免疫作用。方法:用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体,在体外转染H22细胞,制成疫苗,皮下接种小鼠,同时建立荷瘤小鼠模型。用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、空载组、未转染组小鼠脾细胞对亲本H22细胞的杀伤活性。取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平,观察小鼠存活期。结果:成功制备了含有hIL-2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗。免疫小鼠脾细胞体外对H22细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对S180细胞的9.1%,以及空载组和未转染组的13.6%和7.5%(P<0.05)。转基因瘤苗免疫组血清IFN-γ为(12.83±0.75)pg/mL,较空载瘤苗组的(7.83±0.65)pg/mL明显升高(P<0.01),血清IL-10[(4.58±0.34)pg/mL]较空载瘤苗组的(8.15±0.28)pg/mL明显降低(P<0.01)。同时,转基因瘤苗免疫组小鼠存活期为(40±6)d,较对照组[空载瘤苗组(30±3)d,未转染组(19±4)d]明显延长。结论:转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠存活期。     

应用SLC和Survivin共表达基因瘤苗抗肿瘤作用的研究

目的：探讨应用次级淋巴趋化因子(secondary lymphoid chemokine，SLC)和Survivin共表达基因瘤苗抗肿瘤作用。方法：将SLC基因及Survivin基因导入沙门氏菌载体，增殖并经口将此菌免疫荷瘤小鼠，观察抗肿瘤作用。结果：SLC／Survivin瘤苗对荷瘤小鼠具有较强的抗肿瘤作用。致死量D121肺癌细胞经尾静脉注入小鼠，4周后有87．5％(7／8)的小鼠被证实无肿瘤生长。此保护性免疫反应可能是刺激CD8^ 细胞功能的发挥和细胞因子如γ干扰素等调节的。结论：SLC／Survivin瘤苗可诱导有效抗肿瘤反应，为将此类瘤苗使用于临床提供了一定的理论基础。     

GM—CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的研究GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的可行性.方法通过逆转录病毒载体,将小鼠GM-CSF基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/GM-CSF在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果.结果EL-4/GM-CSF细胞在小鼠中的成瘤性下降,50%小鼠无瘤生存.射线灭活的EL-4/GM-CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗,能延长荷瘤宿主的存活时间(33.1±1.8)与对照组EL-4/Wt(23.2±1.5天)比差异有显著性(P＜0.01).基因修饰的瘤苗作用明显增强.结论GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗可诱导较强的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,本实验为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提出了一定的实验依据.     

脐血树突状细胞介导的食管癌瘤苗体内抗癌效应

背景与目的:用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞的融合瘤苗,探讨其在体内诱导抗肿瘤效应.材料与方法:分离脐血CD34+干细胞诱导扩增为成熟DC,与EC109细胞经聚乙二醇(PEG)法融合;免疫磁珠法筛选EC109-DC,鉴定瘤苗表型和致瘤性;观察该瘤苗的体内成瘤性、保护性免疫反应和免疫治疗效果.结果:融合瘤苗可体外生长,并高表达CD80、CD83、CD86和叶酸受体(FR);瘤苗接种小鼠体内未见肿瘤形成;经瘤苗免疫的小鼠,肿瘤生长的潜伏期较对照组明显延长(P＜0.05),肿瘤的大小和肿瘤重量均明显小于对照组(P＜0.05).用融合瘤苗治疗的荷瘤小鼠,肿瘤的大小和重量也均明显小于对照组(P＜0.05).结论:融合瘤苗EC109-DC同时表达EC109和DC特异性抗原,无体内致瘤性,对EC109细胞的攻击有明显的抵抗作用,对治疗荷瘤小鼠有一定的作用.     

异源性CTL的诱导及细胞毒性测定

脑胶质瘤是目前难治的恶性肿瘤之一,寻找有效的效应细胞是目前研究的方向.我们根据文献报道的方法,用自己研制的瘤苗,给昆明种小鼠体内致敏,取其脾细胞,体外再次用胶质瘤细胞刺激,获得特异性异源性CTL.具体方法是用榄香烯和丝裂霉素共同处理等量G422胶质瘤培养18小时,可得胶质瘤特异性瘤苗(榄香烯/丝裂霉素瘤苗),配制成单细胞悬液2×10~6/ml.取上述瘤苗1ml给昆明鼠多点注射体内致敬,2周后重复一次.第二次致敏10天后,取其脾细胞.在RPMI1640培养液1ml中加入脾细胞2×10~6、G422瘤细胞4×10~5和rIL-2400U,共同培养10天,收获特异性源性CTL.分别做正常脾细胞、体外经rIL-2培养的正常脾细胞(LAK)、     

肝癌（H22）固化瘤苗对荷瘤小鼠的主动免疫作用

目的 观察肝癌(H_(22))固化瘤苗对荷瘤小鼠的主动免疫作用。方法 将小鼠原发性肝癌细胞(H_(22))经1000GYγ射线照射灭活,经65℃10min条件下制备成固化瘤苗,免疫荷瘤鼠,观察小鼠生存时间,瘤体直径、瘤重、脾及胸腺重要指标。结果 表明固化瘤苗对荷瘤鼠有主动特异性免疫治疗作用。结论 固化瘤苗可较好地诱发机体的免疫反应,其作为“癌疫苗”疗法可有潜在的应用价值。     

小鼠γ-干扰素基因修饰瘤苗的抗肿瘤研究

本实验用RT-PCR方法得到小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)全长cDNA,通过逆转录病毒载体将其导入小鼠肝癌细胞株,比较研究了该株细胞在mIFN-γ基因修饰前后致瘤性的变化,并制备了瘤苗,对其分泌干扰素的能力及对荷瘤小鼠的治疗作用作了进一步的研究,发现经过mIFN-γ基因修饰后,肿瘤细胞的致瘤性明显降低且瘤苗对荷瘤小鼠有明显的治疗作用,这为进一步开展细胞因子基因治疗工作打下一定基础。     

NDV联合热固化瘤苗的抗肿瘤作用

为了研究新城疫病毒（ＮＤＶ） 联合热固化瘤苗抑制肿瘤生长和免疫调节的作用，检测了荷瘤小鼠的抑瘤率和细胞免疫。结果显示，实验组Ⅰ与Ⅱ抑瘤率分别为２４．８％ 、４１．１％ ，２ 组的平均瘤重明显小于对照组，实验组Ⅱ在不同时间段的ＮＫ 细胞活性高于对照组（ Ｐ＜０ ．０１） 。提示ＮＤＶ联合热瘤苗对荷瘤小鼠的抑瘤作用和增强ＮＫ 细胞活性均比单独应用ＮＤＶ效果好。     

熊果酸抗小鼠H22肝癌移植瘤及对免疫功能的影响

[目的]研究熊果酸(UA)对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响。[方法]采用移植性H22肝癌小鼠模型,随机分为模型组(对照)、氟尿嘧啶(5-Fu)处理组、UA高、低剂量组,分别连续腹腔注射5-Fu(25mg/kg)、UA(50mg/kg、25mg/kg)14d后,处死小鼠,计算抑瘤率、外周血白细胞数、脾脏指数、胸腺指数、白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等指标,分析UA对小鼠H22肝癌移植瘤的生长抑制作用及免疫功能的影响。[结果]与模型组相比,UA高、低剂量组能显著减少移植瘤瘤重,其抑瘤率分别为51.03%、32.54%,差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。UA高剂量组与5-Fu组抑瘤率(71.33%)比较,差异没有显著性(P>0.05)。UA各组可不同程度地升高荷瘤小鼠的外周血白细胞数和脾脏指数、胸腺指数,同时还能提高荷瘤小鼠血清中TNF-α的水平(P<0.05)。[结论]熊果酸能明显抑制H22荷瘤小鼠的肿瘤生长,其作用可能与增强机体的免疫功能有关。     

米托蒽醌处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征及其诱导的抗肿瘤免疫反应初探

背景与目的:蒽环类药物处理可使肿瘤细胞免疫原性增加。本文旨在分析米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征,初步探讨该瘤苗诱导的抗肿瘤免疫反应。方法:MIT处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗后,用吖啶橙/嗅化乙啶(AO/EB)染色法观察瘤苗细胞形态,流式细胞仪(FCM)检测其粒度及凋亡比例,荧光显微镜观察瘤苗凋亡后细胞膜表面结核杆菌早期分泌靶抗原6KD(ESAT-6)的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测瘤苗经MIT处理后IL-21的表达。瘤苗免疫小鼠后,FCM检测了补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)及细胞毒T细胞(cytotoxicT lymphocyte,CTL)活性。结果:经MIT处理后,瘤苗停止分裂,细胞逐渐增大,数日内可保持生物活力,并表达IL-21。瘤苗细胞凋亡后,ESAT-6成点簇状分布于胞膜表面。MIT处理的瘤苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫应答,免疫鼠血清和CD8+T细胞可分别通过CDC和CTL杀伤野生型B16F10细胞。结论:MIT处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗失去增殖能力,但仍能表达IL-21且具有免疫原性,能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫反应。