创伤合并内毒素攻击时小鼠肝组织锌指蛋白A20 mRNA表达的初步研究

目的　研究创伤合并内毒素攻击时小鼠肝组织中锌指蛋白A2 0mRNA的表达规律。方法　选用健康昆明种小白鼠 95只 ,雌雄不拘 ,体重 18～ 2 4 g ,制作双侧股骨闭合性骨折创伤及创伤合并内毒素血症模型。随机分为正常对照组、单纯创伤组、单纯内毒素组和创伤内毒素组。以逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)技术检测肝组织中锌指蛋白A2 0mRNA的表达 ,结果以A2 0mRNA与内参照GAPDHmRNA之总灰度比值表示。　结果　正常对照组A2 0mRNA呈现低量表达 ;单纯创伤组各时相点锌指蛋白A2 0mRNA均呈现低量表达 ,与正常对照组相比 ,差异无显著性意义 ;单纯注射内毒素后 0 .5h ,A2 0mRNA均较正常对照组升高明显 ,注射后 0 .5～ 2h为A2 0mRNA表达的高峰期 ,2h以后表达又有所下降 ,各时相点均高于单纯创伤组 ;而创伤内毒素组在注射内毒素后 0 .5h ,A2 0mRNA均较其他两组显著升高 ,注射后 0 .5～ 2h为A2 0mRNA表达的高峰期 ,注射后 2h显著高于单纯内毒素组 (P <0 .0 5 ) ,至 4 ,7,10h时表达逐渐下降 ,但仍高于单纯创伤组。　结论　锌指蛋白A2 0作为一种参与体内炎症反应调控的内源性蛋白 ,在创伤合并内毒素攻击的早期即可呈现出高表达。说明创伤合并内毒素攻击情况下 ,A2 0表达增加是机体的一种重要的内源性抗炎保护效应机制 ,     

锌指蛋白A20及其突变体质粒转染对小鼠内毒素血症的预防作用

目的 研究锌指蛋白A20（mA20）及其突变体mA20-ZnF4-7质粒转染对脂多糖（LPS）攻击所致小鼠内毒素血症的预防作用。方法用LPS攻击小白鼠制备内毒素血症动物模型。随机分为等渗盐水对照组（Ns组）、单纯LPS组（LPS组）、pCAGGS-flag组（质粒组）、pCAGGS-flag-mA20预防组（mA20组）和pCAGGS-flag-mA20-ZnF4-7预防组（mA20突变体组）。按10μg质粒：1．6ml等渗盐水比例溶于等渗盐水中，采用“基于流体动力学基因转染方法”对实验小鼠进行质粒预防性注射。以ELISA检测各组血浆和组织TNF-α、IL-1β表达并观察组织病理变化。结果 （1）mA20组和mA20-突变体组的TNF-α在各时相点表达分别为：6h：（211．942±9．133）pg／ml、（163．536±0．502）pg／ml，12h：（195．130±26．318）pg／ml、（206．446±34．797）pg／ml，24h：（182．963±14．527）pg／ml、（158．029±19．176）pg／ml，均显著低于LPS组和质粒组（P〈0．05）。（2）mA20组和mA20突变体组的IL-1β在各时间点表达分别为：6h：（137．908±4．487）Pg／ml、（138．598±8．733）pg／ml，12h：（137．678±3．539）pg／ml、（137．448±7．953）pg／ml，24h：（129．862±11．602）pg／ml、（126．873±6．942）pg／ml，均显著低于LPS组和质粒组（P〈0．05）。（3）mA20组和mA20突变体组内各时间点之间TNF-α及IL-1β表达比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）病理观察结果显示，mA20组和mA20突变体组的肝、肺损伤均较LPS组和质粒组轻。结论 基于流体动调控炎症反应力学的mA20及其突变体mA20-ZnF4-7质粒转染对实验性内毒素血症有相似的预防作用，mA20有功能丰余性，为临床应用及mA20突变体研究提供了一定的实验基础。     

P^16蛋白在胃癌组织中的表达及其临床病理关系

Ｐ16基因又称多重肿瘤抑制基因 (ＭＴＳ1 ) ,是新近发现的一个重要抑癌基因 ,并已受到越来越广泛的重视。目前 ,人们已从基础及临床诊治等多个角度对Ｐ16基因进行了研究 ,它与胃癌的关系目前国内外报告较少。本研究应用免疫组织化学法观察了Ｐ16蛋白在胃癌组织及胃良性疾病、胃正常组织中表达情况 ,以探讨Ｐ16蛋白在胃癌发生、发展中的作用及其临床意义。1　材料和方法1 1　试验组　收集解放军第四军医大学唐都医院 1 990年 1月～ 1 995年 1 2月手术切除胃癌蜡块标本 50例 ,均经1 0 %中性福尔马林液固定 ,常规石蜡包埋后存档 ,所有均做 5μ…     

S100A3在胃癌组织中表达及临床意义

目的：分析S100A3在胃癌中表达情况及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹和组织微阵列分析90例胃癌组织及正常胃组织标本和胃癌细胞系中S100A3基因、蛋白表达水平及组学定位。结果胃癌组织S100A3基因表达水平高于正常胃组织2.5倍,S100A3的上调表达与肿瘤分化程度、TNM分期相关,胃癌细胞S100A3基因呈上调表达。胃癌组织中S100A3蛋白表达水平强阳性表达（74.7%）。结论 S100A3上调表达与胃癌分化程度及TNM分期密切相关。     

MSCT在胃癌病理分期及诊断中的应用价值

目的：探讨胃癌的 CT 表现特征,评价其在分期诊断中的应用价值。方法：搜集有完整手术病理的胃癌患者500例,通过将 CT 检查结果与胃癌的大小、位置、形状、强化程度以及肿瘤侵犯范围进行对比,对 CT 的分期诊断准确度进行评价。结果：胃癌病灶长度、厚度与病理 T 分期均呈显著正相关（P ＜0．001）。胃癌病灶好发于胃窦及贲门部。500例胃癌患者中最常见的类型为蕈样型（79．0％,395／500）。胃癌病灶在静脉期及延迟期的 CT 值随着 T 分期逐级升高而增大,差异有统计学意义（P ＜0．05）。T3期中胃周脂肪模糊型所占比例为76．64％,T4期中浆膜高强化型所占比例为86．36％。MSCT 诊断胃癌 T1期的准确度为91．23％,T2期准确度为89．01％,T3期准确度为87．64％,T4期准确度为98．74％。结论：MSCT 有助于更准确地判断肿瘤的浸润程度,能够较准确地对胃癌的 T 分期进行判断。     

血管内皮生长因子表达与胃癌TNM分期的相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)水平与胃癌TNM分期的相关性。方法 ELISA法和免疫组化方法检测VEGF在158例胃癌患者中不同浸润深度(Tis～T4)、不同淋巴结转移程度(N0～N3)及不同远处转移程度(M0～M1)的表达水平,并进行相关性分析。结果血清VEGF水平由Tis～T4呈逐渐升高趋势,相关性显著(r=0.879,P<0.01);并随淋巴结转移程度增高而显著升高,两者显著相关(r=0.834,P<0.01);血清VEGF水平在M0显著低于M1,两者具有相关性(r=0.627,P<0.01)。同样,胃癌组织中VEGF水平与胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移均显著相关(P<0.01)。结论血清或胃癌组织中VEGF的表达随着胃癌浸润深度、淋巴结转移和远处转移程度的增加逐渐增高,检测VEGF可提示胃癌患者的TNM分期。     

胃癌胃壁侵犯CT征象与手术病理对照研究

目的:探讨MSCT在胃癌术前T分期中的作用。方法:搜集经胃镜诊断为胃癌的60例患者,均于术前1周行MSCT检查,术后将CT征象与病理对照分析。结果:早期胃癌病变范围小,半数呈肿块样增厚;结节型边界清楚,内表面光滑平整;溃疡限局型边界清楚,内表面凹凸不平,呈肿块样增厚,可见黏膜线中断;溃疡浸润型边界不清,呈广泛性增厚;弥漫浸润型边界不清,均呈广泛增厚,内表面可平整或凹凸不平,未见黏膜线中断。各型胃癌均见层状强化,内表面强化呈线状。胃癌侵犯浆膜层时浆膜面模糊,或呈颗粒状及局限性外突,脂肪间隙密度模糊增高,可见索条影或间隙消失。MSCT诊断浆膜侵犯符合率为83.33%。但T分期总体符合率为46.67%,区分T1与T2、T3与T4的符合率分别为53.85%、56.76%。结论:MSCT可以对胃癌进行分型诊断,能够准确区分T2、T3,但对区分T1与T2、T3与T4有一定难度。     

Livin和survivin在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白Livin和survivin表达情况及其与各临床病理因素的关系，以及两者在胃癌组织中表达的相关性。方法采用免疫组化S-P方法检测正常胃黏膜及胃癌组织中Livin和survivin的蛋白表达。结果胃癌组织中Livin和survivin的蛋白表达阳性率分别为48．3％、63．8％，分别与正常胃黏膜蛋白表达阳性率比较差异有统计学意义（P〈0．05）；在组织分化差、淋巴结转移者、临床分期高者Livin表达率增高，与对应组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；在胃癌组织中Livin表达和survivin表达呈正相关性（rs=0．530，P〈0．01）。结论Livin和survivin在胃癌组织中表达增高，提示参与胃癌的发生、发展，Livin可作为胃癌的生物学标志物，可能成为胃癌治疗的新分子靶点。     

胃癌螺旋CT与病理、nm23-H1蛋白表达的相关性研究

目的 探讨胃癌螺旋CT征象与手术病理及nm23-H1蛋白表达间的关系.资料与方法 对65例胃癌行低张力水充盈螺旋CT三期增强扫描,所有病例均行手术切除,术后标本采用免疫组织化学SP法检测肿瘤组织中nm23-H1蛋白表达.将螺旋CT诊断结果 与病理结果 、nm23-H1蛋白表达进行对照.结果 65例胃癌TNM分期CT的准确性为80.0%(52/65),nm23-H1蛋白阳性表达率为50.8%(33/65).CT像上的病灶大小、浆膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期与病理结果 一致性良好,与nm23-H1蛋白阳性表达率均密切相关(P＜0.05).结论 螺旋CT可较准确地反映胃癌增殖、浸润转移的病理学及生物学特性.     

胃癌16层螺旋CT术前分期与术后病理对比研究

目的:通过研究16层螺旋CT对胃癌述前TNM分期的诊断与手术病理比较,探索其在确定胃癌术前TNM分期中的应用价值。材料和方法:研究对象为72例不同年龄、临床症状及辅助检查疑诊胃癌患者,行常规16层CT平扫加增强三期薄层扫描,扫描后数据经过图形工作站进行二维、三维容积重建处理,多方位显示胃癌病变的部位、范围、大小、侵犯胃壁程度及侵犯周围组织器官的范围,周围各组淋巴结大小及范围,按照国际统一的TMN分期法进行TNM的CT术前分期,并与手术后病理TNM分期对照。结果:16层CT检查结果与手术后病理对照,T分期的准确性94.4%,能够显示黏膜和黏膜下层、肌层、浆膜层侵犯程度;N分期:N0准确性100%、N1准确性90.5%、N2准确性100%。CT多期增强可区别血管与淋巴结,可显示5mm直径的淋巴结影,特别是动脉期及门静脉期扫描特异性较高,有显著差异,淋巴结检出水平明显提高,但直径小于10mm淋巴结敏感性减低;M分期准确性达100%,清晰显示肺转移、肝转移、腹膜后及肠系膜淋巴结转移程度及大小。16层CT对胃癌诊断的敏感性95%,特异性80%,准确性92%,阳性预测值98%。结论:16层CT常规平扫加三期增强扫描合并图像后处理分析,可提高胃癌TNM分期的准确性,是胃癌术前准确分期的可靠方法,对合理制定手术前计划有较高价值。     

胃癌及肠上皮化生组织中P53、C-myc蛋白表达

目的:探讨P53、C-myc表达在胃癌发生、发展中的作用.方法:对60例胃癌、10例肠上皮化生组织和10例对照组,应用免疫组化检测P53和C-myc基因蛋白.结果:胃癌组的突变P53和C-myc基因表达均显著增高(P＞0.01),而肠上皮化生组中P53和C-myc的表达与正常组无显著差异(P＞0.05),肠上皮化生组的C-myc表达明显低于胃癌组(P＞0.01).结论:P53基因发生突变、失活以及C-myc基因激活,在胃癌的发生中可能起重要作用,检测C-myc基因蛋白表达有助于预测胃粘膜癌变.     

锌指蛋白A20基因沉默载体制备及初步应用

目的 设计并制备有效干扰细胞内锌指蛋白A20(简称A20)表达的基因沉默载体,初步用于观察A20基因沉默对细胞炎症应答的影响. 方法 人工设计并合成A20特异性RNA干扰寡核苷酸片段(ASRF),构建A20基因沉默载体pSUPER-EGFP-A20 siRNA.采用基因转染技术使人单核细胞株THP1感染pSUPER-EGFP-A20 siRNA,用适时荧光定量PCR技术鉴定转染细胞A20基因的沉默率;用ELISA测定细胞核内NF-κB活性及培养上清液中的TNF-α水平.结果 在设计的2条ASRF中,以M59465-385R/F对细胞A20表达的抑制效果最佳,基因沉默率达83.86%.初步应用表明,A20基因沉默后THP1内NF-κB活性水平增加了78.13%,释放的TNF-α增加了49.30%. 结论 成功得到了高效A20基因沉默载体,初步应用研究提示A20表达的意义在于下调细胞炎症应答程度.     

四川地区汉族人群A20基因启动子区SNP分布分析

目的 分析四川地区汉族人群A20基因启动子区SNP分布频率,为进一步研究A20基因地域、人种差异以及与疾病的关系调控奠定基础.方法 使用PCR-DNA测序法,对372例四川地区汉族人群A20基因启动子区所有SNP位点进行检测,计算各SNP的基因型频率及等位基因频率,并进行连锁不平衡分析.结果 在四川地区汉族人群中,发现rs59693083、rs5029924和rs139054966三个SNP位点,突变频率分别为12.81%、8.88%、0.67%,而且前两位点间存在明显的连锁不平衡,CA是最为常见的单体型模式.结论 四川地区汉族人群A20基因启动子区高度保守,SNP分布频率与北京汉族（CHB）人群相似,rs59693083和rs5029924可能是与疾病相关的位点.     

S100钙结合蛋白A6在胃癌组织中表达的意义

目的探讨S100钙结合蛋白A6(S100A6)在胃癌旁正常组织、慢性胃炎、肠上皮化生和胃癌的组织标本中的表达,以及其与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法收集中国医科大学附属盛京医院2005年6月至2015年6月胃组织标本,其中胃黏膜肠上皮化生组织(24例)、胃癌(42例)及癌旁正常组织标本(42例)。qRT-PCR法检测S100A6 mRNA在不同组织中表达;Western blot法检测S100A6蛋白的表达;采用Kaplan-Meier生存曲线用于区分和比较生存率;Cox比例风险模型用于多因素分析。结果 S100A6蛋白的表达按以下顺序逐渐增加:癌旁正常组织<慢性胃炎<肠上皮化生<胃癌。S100A6蛋白的表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度、淋巴管和静脉侵犯、淋巴结转移、肿瘤TNM分期呈正相关。Kaplan-Meier生存曲线提示,高中度S100A6基因表达的患者累积生存率明显低于不表达的患者。Cox比例风险模型提示肿瘤的浸润深度、淋巴管及静脉浸润、淋巴结转移、TNM分期以及S100A6高表达均为胃癌患者预后的独立因素。结论在胃炎、肠上皮化生、胃癌中S100A6蛋白的表达逐渐升高;S100A6高阳性表达是胃癌预后的独立影响因素。     

胃癌及癌前病变中P21,C-erbB-2和P53表达及其临床意义

应用SP免疫组织化学染色方法检测60例胃癌和20例癌前病变中C-erbB-2，P53和P21基因的过度表达，多基因阳性在胃癌中为35％，癌前病变中为0％，多基因表达明显提示胃癌预后差。C-erbB-2，P53和P21的多基因表达的检测对胃癌的预后判断明显优于其中某个单基因表达的检测。     

COL6A2基因在胃癌中的表达及临床意义

 目的 探讨胃癌组织中Ⅵ型胶原蛋白α2链(collagen type Ⅵ α2 chain ,COL6A2)的表达情况、临床意义及可能的作用机制。方法 采用免疫组化法检测62例胃癌组织及配对的癌旁组织中COL6A2蛋白的表达情况,统计分析COL6A2蛋白与患者临床病理特征之间的相关性。利用Kaplan-Meier法绘制生存曲线图,并用Kaplan-Meier Plotter 在线数据集进行生存验证。下载癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中的胃癌表达数据,分析COL6A2与上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关基因表达的相关性。并运用基因探针富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探究COL6A2在胃癌中的可能作用机制。结果 COL6A2在胃癌组织中的阳性表达率显著高于配对癌旁组织(43.5% vs. 25.8%,P=0.038),与淋巴结转移,远处转移及TNM分期显著相关,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析及Kaplan-Meier Plotter均提示高表达COL6A2的胃癌患者生存时间较短。COL6A2是影响胃癌患者的独立预后因素(HR=2.339,95%CI: 1.150~4.757,P=0.019)。相关性分析发现,COL6A2与EMT相关蛋白的表达密切相关;GSEA结果显示,高表达COL6A2样本主要富集的基因集中包括TGF-beta信号通路及MAPK信号通路等经典肿瘤信号通路。结论 COL6A2在胃癌组织中呈显著高表达,且与预后不良有关,可作为判断胃癌患者预后的潜在生物标志物。     

人假想镁离子转运蛋白在胃癌细胞耐药中的生物学作用

目的　制备人假想镁离子转运蛋白(HPT)抗血清并检测其在胃癌耐药细胞中的表达 ,以观察其在胃癌耐药发生中的作用。方法　克隆编码HPT蛋白的cDNA并测序鉴定 ;构建原核表达载体pRSETB HPT ,诱导表达 6×His与HPT的融合蛋白 ;用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫小鼠 ,以Westernblot检测小鼠血清的抗体活性 ;以所制备的抗血清检测HPT蛋白在胃癌各细胞系中的表达。结果　DNA测序结果证实所克隆的基因片段与预计相符 ;利用原核系统表达出 1条约 5 5kD的新生蛋白带 ,Westernblot证实其为与6×His融合的蛋白 ;该融合蛋白免疫血清仅结合SGC790 1细胞中约 5 0kD的单一蛋白带 ;利用该血清检测发现SGC790 1 /ADR中HPT蛋白表达水平高于SGC790 1。结论　成功地制备了鼠抗人HPT蛋白抗血清 ,并发现HPT可能与胃癌细胞的多药耐药性相关