细胞培养法在基因工程药物血药浓度测定中的应用进展

基因工程药物的血药浓度测定主要有 :免疫测定法 ( immunoassay ) [1] 、核素标记示踪法( radioiodination) [2 ] 、色谱法 ( chromatography)及生物鉴定法 ( bioassay)等[3 ] 。近年来 ,由于许多基因工程药物已建立了国际通用的标定单位的特定依赖细胞株和标准方法 ,使生物鉴定法中的细胞培养法在基因工程药物血药浓度测定中的应用有了新的进展。1　细胞培养法的特定依赖细胞株细胞培养法主要是以药物对特定依赖细胞的增殖或抑制细胞数目的增减为量效指标。促进特定依赖细胞株增殖的方法称为细胞增殖法 ( proliferationassays) ,抑制细胞增…     

实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果观察

目的分析研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应RT-PCR和细胞培养法两种检测方法在流感病毒检测中的应用、及适合的领域。方法采集2014年10月至2015年3月国家级流感检测哨点医院抚顺市中心医院内科和儿科门诊病例咽拭子样本500份,同时采用实时荧光RT-PCR检测流感病毒核酸,以及采用MDCK进行阳性标本培养,分离流感病毒,比较两种方法的灵敏度以及差异性。结果在500份样本中,通过荧光RT-PCR检测阳性84份;通过MDCK细胞培养法阳性35份。二者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论实施荧光RT-PCR在检测流感病毒时快速有效,更适合应急疫情的快速诊断。细胞培养法更适合核实疫情的实验室诊断,通过病毒抗原性和基因特性进行分析,是流感病原学检测的基础。     

喜炎平注射液治疗手足口病478例疗效观察

目的针对手足口病的治疗,探讨喜炎平注射液应用的临床疗效,为临床提供一种有效的治疗方法,造福患者。方法选取本组478例患儿,实验组应用喜炎平注射液治疗,对照纽应用利巴韦林注射液治疗。应用相同的评估标准,进行疗效结果评估。结果应用喜炎平注射液的实验组疗效评定结果显示,明显优于利巴韦林注射液对照组。结论喜炎平注射液治疗手足口病有良好的疗效,值得临床推广。     

微量升华法在中药材鉴别中的应用

目的：探讨某些中药材中有效成分在一定温度下能够升华的性质。根据升华物的结晶形状、颜色来鉴别中药材的真伪及品质的优劣。方法：利用微量升华法得到升华物，在显微镜下观察结晶形状、颜色。并滴加适当化学试剂，观察其反应，来确定某些中药材的鉴别特征。结果：对不同来源，不同药用部分的中药材，可根据其中升华物的特征来确定化学成分是否相同。结论：微量升华得到的结晶物。为确定中药材的真伪及质量的优劣提供了可靠的依据。     

微流控芯片及其在肿瘤研究中的应用进展

微流控芯片具有微型化、集成化、效率高、试剂消耗量小等特点,在细胞水平药物筛选及仿生器官方面的研究取得了一系列成果。本文着重介绍了微流控芯片的加工材料和制作技术,以及在肿瘤研究领域的应用和最新研究进展,并提出了微流控芯片领域存在的问题及解决问题的方法。     

3D细胞培养在药物研发中的研究进展

3D培养模型的引入是细胞培养技术的一个里程碑,随着新型支架、基质的发明与应用及细胞成像和分析系统的日新月异,三维细胞培养可模拟体内微环境而获得传统2D细胞培养所没有的优势,已在基础研究、干细胞及组织工程等领域崭露头角。本文通过回顾3D细胞培养在药敏实验、药物筛选、药物研发、临床应用中的贡献,从药物效应、药物代谢及药物敏感性着手,枚举3D细胞培养通过改变基因/蛋白质差异表达来进行药物研发,并对其应用趋势、潜在优势和不足作一综述,为基础研究和临床应用提供理论依据。     

基于微量合成的药物发现研究进展

现代创新药物研发中,化合物库的质量直接影响着整个研发的成功与否。因此,如何快速构建数目庞大、结构多样的高质量化合物库是药物发现中的关键环节。随着微量合成技术与生物活性筛选技术的快速发展,短时间内构建多个高质量化合物库的目标逐渐被实现,新的苗头化合物与先导化合物也随之不断被发现。综述近几年基于微量合成的药物研究最新进展,以期为基于微量合成的新药研发提供参考。     

微量升华法在中药材鉴别中的应用

介绍微量升华法在中药材鉴别中的应用,试图为充分运用这一方法鉴别中药材提供思路。     

EV71疫苗研究进展

肠道病毒71型(enterovims 71,EV71)是手足口病的主要病原体,由于尚无治疗手足口病的有效抗病毒药,因此,开发预防手足口病的有效EV71疫苗成为所有控制措施的首选.目前,EV71疫苗研究已取得一定的进展,正在研发的疫苗包括减毒或灭活疫苗、VP1亚单位疫苗和DNA疫苗.虽然各种疫苗均具有一定的免疫效果,但最适疫苗的确认还需对各种疫苗的安全性和保护效力进行评估.     

三维细胞培养技术在肿瘤研究领域的应用

传统二维细胞培养具有易操作、费用低、可大量应用的优点,在细胞培养领域广泛使用。但是由于细胞呈平面生长,无法构建出一个立体的微环境,且缺乏各种细胞因子的作用,因而与体内细胞状态存在差距;而三维细胞培养可以在细胞基因表达、基质分泌及细胞功能活动等方面更好地模拟体内细胞状态。该文着重论述三维细胞培养技术在肿瘤研究中的应用,包括构建肿瘤微环境、观察肿瘤生物学行为、肿瘤血管生成、研究肿瘤耐药性等,为肿瘤研究工作者提供参考。     

EV71疫苗研究进展

肠道病毒71型(enterovims 71,EV71)是手足口病的主要病原体,由于尚无治疗手足口病的有效抗病毒药,因此,开发预防手足口病的有效EV71疫苗成为所有控制措施的首选.目前,EV71疫苗研究已取得一定的进展,正在研发的疫苗包括减毒或灭活疫苗、VP1亚单位疫苗和DNA疫苗.虽然各种疫苗均具有一定的免疫效果,但最适疫苗的确认还需对各种疫苗的安全性和保护效力进行评估.     

The application of Poisson units to the determination of median lethal cell culture dose

The median lethal cell culture dose (CCLD₅₀) and its 95% confidence interval were determined using the Behrens and Kärber area method with subsequent regression analysis by the action of methylmercury iodide (CH₃HgI; MMI) on monolayer cultures of HeLa cells. The concentrations of MMI were 0.45, 0.9, 1.8, 3.65, 7.3 and 14.6 μm/l. The duration of MMI action was 24 h. All the calculations were performed with means of sample cell numbers derived from Poisson units. The basis for deriving the Poisson units is the Poisson distribution property on the equality mean to variance or, which is the same, on the equality standard deviation to the root square of mean. Because the size of Poisson unit is predetermined, it is a simple task to find the mean. The outcome of any single count of discrete random objects in the definite area or time interval is divided by the number of Poisson units. The Poisson unit for counting cultured cells was derived by us in relation to Gorjaev's net. In this case it is appropriate to count the cells on the square equal to two Gorjaev's nets. The corresponding Poisson unit is equal to 1/5 of Gorjaev's net (45 big squares). Near-coincidence of CCLD₅₀ as well as its 95% confidence intervals by use of logarithmic and linear models was observed. However, the former approach was better than the second. CCLD₅₀ and its 95% confidence interval values, obtained with the aid of the logarithmic model in three series of experiments, were 2.56±0.33, 2.09±0.37 and 2.31±0.37 μm/l.     

羊水细胞培养及染色体制备方法的探讨

目的:探讨羊水细胞培养及染色体制备方法。方法:孕15～29周具有产前指征的50例孕妇,抽取羊水细胞培养6～7天,换液第二天取出观察,见有许多大而亮圆的分裂期细胞时,加入秋水仙素继续培养1小时后收获、低渗、固定、制片、消化、染色。结果:50例羊水细胞培养全部成功,成功率100%。有49例获得满意的染色体分裂相。结论:该方法细胞培养成功率高、有效分裂相多、实验稳定、易于操作、成功率高。     

Unio sp. primary cell culture potential in ecotoxicology research

Primary tissue cultures from Unio pictorum were developed for utilization in ecotoxicology studies. Cytotoxic effects of selected plasticizers (BPA, DiNP, DiDP, DMP) were tested on digestive gland, gonad, gill and mantle cells. DiNP on gill and BPA on digestive gland were the highest and lowest cytotoxic compounds (IC50 0.111, 170.718 ppt). Mantle cells were the most suitable, reliable and easy to maintain cells; for toxicity assays. Unio primary cell culture provide valuable tool for testing/screening effects of xenobiotics in vitro, have potential for further development in terms of potential cryopreservation and stability comply with the 3?R principle.     

药用植物细胞悬浮培养体系生物转化的研究进展

细胞悬浮培养体系生物转化获得目标产物已成为获取天然活性产物的重要途径。利用不同药用植物的细胞悬浮培养体系及不同的反应类型对先导活性化合物进行生物转化,可以获得新的活性化合物或提高活性化合物的产率。本文综述了近年来药用植物细胞悬浮培养体系类型及生物转化的新进展,并对活性成分的结构修饰与资源利用进行探讨。     

人表皮干细胞体外分离和培养的研究

目的建立人表皮干细胞体外分离和培养的技术方法。方法用DispaseⅡ酶和胰蛋白酶两步法分离出角朊细胞和成纤维细胞,并以人成纤维细胞条件培养基为基础制备表皮干细胞培养液,用以人表皮干细胞(Ⅳ型胶原快速粘附法富集分离)的体外培养,通过检测β1整合素和角蛋白19的表达水平及其克隆形成率和克隆维持时间对其进行鉴定,角朊细胞作对照。结果表皮干细胞体外培养,可见细胞呈克隆样生长、β1整合素及角蛋白19免疫组织化学染色呈阳性,且其克隆形成率和克隆维持时间分别为(17.04±1.01%)和15～18d,明显高于对照组的(8.72±0.73%)和9～10d(P<0.01)。结论应用Ⅳ型胶原快速粘附法及人成纤维细胞条件培养基,对人表皮干细胞成功进行了体外分离和培养,为表皮干细胞体外的大量扩增奠定了基础。     

白花蛇舌草悬浮细胞分批培养规律的研究

目的利用白花蛇舌草茎尖的分生组织建立植物悬浮细胞培养系,确定白花蛇舌草悬浮细胞分批培养时的变化规律。方法通过接种不同量的细胞液确定最适接种量,以细胞干重、蔗糖、铵离子、硝酸盐氮和多糖含量作为检测指标,确定白花蛇舌草悬浮细胞分批培养时的变化规律。结果白花蛇舌草悬浮细胞分批培养的最适接种量为15%,此时细胞干重达到最大值。在此接种量下,当培养时间达到9 d时,pH很快降低到3左右,细胞干重不再增加。培养液中的主要营养成分碳源———蔗糖,在培养开始时,有比较大的降低,在培养后期,细胞干重不再增加时,也不再有大的改变。氮源[NO3-]优于[NH4+]先被利用,而且[NO3-]的利用速率要远高于[NH4+],达到7.14μg/(mL.d);细胞液中多糖的生成和细胞的生长属于非偶联型,在培养后期,逐渐大量生成。结论初步确定白花蛇舌草悬浮细胞分批培养时的变化规律,为以后的培养工艺优化打下了基础。