多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌分子分型的比较

目的 比较多位点序列分型技术和脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术在肠炎沙门菌菌株间分型的分辨率。方法 分别建立肠炎沙门菌的6个管家基因thrA、pure、sucA、aroC、hemD、dnaN和一个特异性的DNA标记Sdf Ⅰ的多位点序列分型技术，及以寡切点的XbaⅠ、SpeⅠ作为限制性内切酶的PFGE方法，并应用上述方法对食品中的分离株进行分型，比较两种方法的分辨率。结果 PFGE可以将50株肠炎沙门菌分为11个型。并且通过双酶系统的双重PFGE分型，还可以将PFGE型别再精细划分为亚型；MLST则揭示了在同一血清型内部，各菌株之间的管家基因碱基序列高度保守，而在沙门菌不同血清型的核苷酸序列之间，则分别存在不同数量的碱基差异。即MLST方法只能用于血清型之间，不能在血清型内部进行分型研究。结论 与MLST比较，PFGE方法在肠炎沙门菌的分型方面显示了比较高的分辨率。     

肠炎沙门菌多位点序列分型技术的研究

目的研究肠炎沙门菌菌株间的分子特征,建立了分子流行病学研究方法——多位点基因序列分型技术(MLST),并对食品中的肠炎沙门菌分离株进行分型研究。方法选择肠炎沙门菌的6个管家基因thrA、purE、sucA、aroC、hemD、dnaN及一个特异性的DNA标记SdfΙ作为目标基因。对上述基因分别进行PCR扩增及产物测序,用sequencer2.0软件对测序结果进行分析、比对核苷酸的差异。同时,将肠炎沙门菌株与GenBank中鼠伤寒沙门菌LT2相应的基因序列进行比较。结果在肠炎沙门菌标准菌株50041和18株食品分离株之间,6个基因PCR产物范围内的近60000个核苷酸序列完全相同,未观察到同一血清型内的基因突变。而与LT2相比,基因产物发生了1到6个点突变。在对SdfΙ的核苷酸序列比较研究中发现,肠炎沙门菌标准菌株与食品中分离株SdfΙ的核苷酸序列与GenBank中该序列的碱基对比,发生了C182T的点突变。即MLST技术揭示了在同一血清型内各菌株管家基因碱基序列的高度保守。结论MLST方法适用于不同血清型沙门菌株间的分型研究,而不适于同一血清型的菌株分型。     

Occurrence of Salmonella enterica serotype Enteritidis phage types in the Slovak Republic

Phage typing of 741 isolates of Salmonella enterica serotype Enteritidis from the slovak Republic in 1995 has been carried out using the scheme of Ward and colleagues (1987). 202 strains (51 isolated from food) were from 9 outbreaks, 536 isolates were from sporadic cases and 3 isolates were from nosocomial infections of new-born babies. 704 isolates (95%) from all sources were typeable and belonged to 7 different phage types (PTs). PT8 was the phage type most frequently identified (72.6%). Other epidemiologically relevant phage types were PT2 (8.5%), 4 (7.9%) and 1 (4.2%). With an incidence of 1.3--0.1% isolates of PTs 21, 6, 9 were found. 26 (3.5%) isolates were designated RDNC and 11 (1.5%) were untypeable.     

北京市40株肠炎沙门菌多重耐药和分子分型研究

目的分析2009-2010年北京市肠炎沙门菌多重耐药和脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electropho-resis,PFGE）分子分型。方法对2009-2010年北京市肠道门诊监测系统分离到的40株肠炎沙门菌进行生化鉴定、血清分型并运用纸片法进行药敏检测,并采用PFGE进行分子分型。结果发现40株肠炎沙门菌中,32株多重耐药菌株,其中4～5种抗生素耐药27株（84.38%）,10种抗生素耐药1株（3.13%）;可分为14个PFGE带型,其中4个PFGE型的菌株数超过1株。结论北京市肠炎沙门菌分离株多重耐药性比较严重,PFGE分子型别较多,且存在差异明显的多个克隆系,但同一PFGE型菌株的多重耐药谱较为接近。     

肠炎沙门菌PFGE分子分型及耐药性研究

目的：对本地区及相邻地区2004～2007年分离的肠炎沙门菌菌株的分子分型及耐药性进行分析。方法：采用PFGE进行分子分型,利用药敏卡通过仪器对分离菌株进行药敏检测。结果：5起肠炎沙门菌食物中毒分离的菌株分成3型,其中2型之间存在3条带的差异,菌株间有相近关系。结论：PFGE是一种非常有效的分子分型方法,建立细菌PFGE指纹图谱数据库及PulseNet,对于控制食源性疾病非常重要。     

肠炎沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的　为研究肠炎沙门氏菌菌株间的关系,特建立了分子流行病学研究方法脉冲场凝胶电泳分型方法,并对从食品中分离的肠炎沙门氏菌进行了分型研究。方法　1991～2 0 0 1年间,从河南、黑龙江等省份采集食品样品,分离出肠炎沙门氏菌,挑取单个菌落增菌,用溶菌酶、蛋白酶K和TE缓冲液依次提取菌体DNA后,用限制性内切酶XbaΙ消化胶块,然后在CHEFMapper仪上进行脉冲场凝胶电泳,电泳条件:0 . 5×TBE缓冲液、14℃、1%琼脂糖、脉冲时间5s～4 5s、2 6h、6V cm。应用λ噬菌体DNA作为脉冲场凝胶分子量标准。结果　从鸡肉、牛肉、熟肉及蔬菜中分离出30株肠炎沙门氏菌,其中18株来自河南省,绝大多数菌株(2 2株)分离于2 0 0 1年。对所得菌株进行脉冲场凝胶电泳后,结果显示30株肠炎沙门氏菌分为A、B两个型,两型图谱之间有8个条带的差异。A型菌株有19株,占全部菌株的6 3. 3% ,B型菌株有11株,占36 .7%。A型之内又可以分出2个亚型,其中A1型占78 .9% ,A2亚型与A1亚型相比的差别在于,A2型在5 0kb处有一条带缺失。在菌株分型与采集时间和采集地点之间没有相关性,但所有从鸡肉中分离到的菌株均为A1型,提示了某种有待进一步研究的流行病学趋势。结论　在研究肠炎沙门氏菌不同菌株之间的分子流行病学关系方面,脉冲场凝胶电泳是一种有     

一起沙门氏菌引起的自助餐食物中毒案例分析

目的 对一起食物中毒事件进行流行病学调查分析和病原菌检验以确定引起本次食物中毒的原因,为今后预防食物中毒事件的发生提供数据参考。方法 采用现场流行病学调查和实验室检验相结合的方法。结果 共同就餐者216人,发病者26人,发病率为9.96%,根据患者临床表现、潜伏期、现场卫生状况、流行病学特点及实验室检验结果,确定此次食物中毒病原体为沙门氏菌,中毒原因是食用了被沙门氏菌污染的食物。结论 引起本次食物中毒的原因是多方面的,今后应加强食品卫生管理和宣传教育,提高对食源性疾病的监控能力,广泛宣传食物中毒的危害和预防知识,避免类似事件再次发生。     

1起肠炎沙门菌引起学校食源性疾病暴发事件的流行病学调查

目的调查分析1起学校食源性肠炎沙门菌暴发事件的危险因素,提出控制及预防措施。方法采用描述性流行病学方法对该起事件的流行特征进行分析;采用病例对照研究方法进行可疑食物的调查;采集部分病例、厨工肛拭子和环境拭子样本进行病原菌的分离、血清学分型鉴定和脉冲场凝胶电泳分析。结果该起食源性疾病暴发首发病例发病时间为2009年6月9日,末例病例发病时间为6月12日,事件历时4 d,流行曲线提示该次事件符合点源暴发模式。共报告病例61例,均为寄宿生,走读生和教职工均无发病,其中男寄宿生发病12例,罹患率为3.9%（12/309）,女寄宿生发病49例,罹患率为10.7%（49/460）,女生的罹患率明显高于男生（P〈0.01）。病例对照研究结果提示,6月9日早餐的鸡蛋三文治为引起发病的危险食品（OR=21.70,95%CI为8.50～55.50）。采集患者肛拭子25份、食堂厨工肛拭子14份、食堂冰箱和环境拭子11份,分别有19、5、1份样本检出同一血清型的肠炎沙门菌;脉冲场凝胶电泳法分析结果表明该25株肠炎沙门菌分离株具有完全相同的PFGE图谱。结论该事件为1起肠炎沙门菌污染食物引起的食源性疾病暴发事件,可疑中毒食物为6月9日早餐的鸡蛋三文治,卫生监管部门应重视对各类以鸡蛋为原料的食品的卫生监督。     

肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型

目的对不同来源的12株肠炎沙门菌分离株进行分子分型。方法分别提取不同菌株基因组DNA,建立和优化随机扩增多态性DNA（RAPD）反应体系,试用22条随机引物对不同菌株进行RAPD扩增,筛选清晰稳定的扩增条带做统计分析。结果筛选到OPG-03、OPG-06、OPG-07和OPG-13共4条随机引物具有鉴别作用,每一菌株均可扩增出4~10条DNA片段,大多数片段在100~2000bp之间,共扩增出42条RAPD条带,其中共有条带7条,多态性条带35条,多态性为83.3%。不同来源的肠炎沙门菌分离株之间的遗传相似系数在42.6%~100%之间,在0.850的相似性水平上可将12株肠炎沙门菌分离株分为5个不同的亚型。结论应用RAPD技术在分子水平上对肠炎沙门菌进行鉴别和分型具有简便、快速和辨别能力高的优势,对肠炎沙门菌的分子流行病学研究具有较好的应用前景。     

基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌

目的建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测鼠伤寒沙门菌和(Salmonella typhimurium,ST)和肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)的方法。方法根据ST的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1)和SE特异序列(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,ST探针的5'端标记FAM、SE探针的5'端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。结果 ST和SE的引物和探针分别特异性地扩增出16株ST和15株SE,而28种不同血清型沙门菌和17株变形杆菌等扩增结果均为阴性。ST和SE的双重荧光PCR扩增效率均为94.2%,R2分别为0.998和0.995,最低检测浓度分别达到300 CFU/ml、260 CFU/ml。结论建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31h完成,是快速检测ST和SE的有效方法,可用于食品中ST和SE的特异性检测。     

Subdivision of Salmonella enteritidis phage types by plasmid profile typing

Differentiation of Salmonella enteritidis by plasmid profile typing has been compared to differentiation by phage typing. Examination of the type strains of the 27 S. enteritidis phage types showed that only 11 profile patterns could be identified. Moreover, two profile patterns were found in 15 of the type strains, including those of the two most common phage types in Britain, types 4 and 8. On this basis, plasmid profile typing is not as sensitive as phage typing for the primary subdivision of S. enteritidis. When differentiation of 534 strains of the 27 phage types was attempted using plasmid profiles, variation in pattern suitable for epidemiological subdivision was found in 13 phage types and there were 9 profile patterns in strains of phage type 4. Plasmid profile typing can, therefore, be regarded as an effective adjunct to phage typing for the subdivision of S. enteritidis.     

不同来源肠炎沙门菌的溯源研究

目的:应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对不同来源的肠炎沙门菌进行分子分型,为政府部门修订相关的卫生法规提供了重要科学依据。方法:采用限制性内切酶Xba I,对广州地区2009-2011年间从业人员健康体检和食物中毒中检出的36株肠炎沙门菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version 4.0软件(复选Dice相关系数和UPGMA方法)进行聚类分析。结果:36株肠炎沙门菌PFGE图谱显示菌株之间密切相关,相似度在88.8%～100%。结论:从业人员健康体检和食物中毒分离的肠炎沙门菌菌株之间存在较高分子水平的同源性,提示健康带菌从业人员是沙门菌食物中毒不可忽视的污染源。     

江苏省伤寒病原菌、耐药性及噬菌体分型研究

目的:开展对伤寒病原学和耐药性监测以及伤寒噬菌体的分型研究,摸清伤寒流行规律,为制定防治措施提供依据。方法:伤寒沙门菌分型用血清凝集法;药敏试验用WHO推荐的改良K—B法;噬菌体分型用96型伤寒Vi-II型噬菌体分型法。结果:血清学分型为:伤寒、副伤寒甲、副伤寒乙分别占75.1%、12.2%、0.9%,其他型占11.8%。561株伤寒杆菌噬菌体分型率为81.3%,分出25个噬菌体型,其中以D1型、M1型、D2、型J、1型、E1型为主要流行型,分别占18.6%、15.6%、15.4%、12.7%和11.0%。另外,E4、K3和32型在国内和省内为首次报道。不同年份、不同流行地区分型率以及强势噬菌体型分布不同。对磺胺甲基异噁唑、红霉素伤寒耐药菌株分别占96.5%、89.5%;而甲型副伤寒100.0%为耐药株。对复方新诺明伤寒、甲型副伤寒杆菌耐药株分别占79.4%、58.3%。M1型多重耐药现象依然严重。结论:疫情强度与强势流行株及强势株的耐药有关;伤寒沙门菌对多粘菌素B、丁胺卡那、庆大霉素、氯霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、头孢他定药物敏感,其结果可供临床治疗与现场防治用药参考。     

肠炎沙门菌不同检测方法比较

目的 探讨几种常用的肠炎沙门菌检测方法的优缺点,为以后工作提供借鉴。方法 查阅文献分析比较肠炎沙门菌检测常用的传统培养方法、免疫学方法以及分子生物学检测方法在特异性、灵敏度、准确率、操作实用性等方面的特点。结果 传统培养方法耗时长、特异性差、灵敏度低,免疫学和分子生物学方法的特异性和灵敏性较高,但是单一方法使用时存在一定的弊端,现有技术联合使用可以相互弥补不足。结论 多种检测方法的联用,可以快速、高效、准确检测肠炎沙门菌。     

广东省2009-2011年鼠伤寒沙门菌监测及菌株分子分型的研究

目的 了解广东省鼠伤寒沙门菌监测现况及菌株分子分型特点,并初步建立数据库,为食源性疾病暴发追踪污染源及传播途径提供基线数据。方法 参考国际PulseNet公布的沙门菌脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方案及 7 个位点的鼠伤寒沙门菌多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）方法,分析广东省2009-2011年10个市275株鼠伤寒沙门菌分型特点,利用BioNumerics软件建立分子分型数据库。结果 2009-2011年广东省沙门菌年均检出率为4.03%;鼠伤寒沙门菌年均检出率和构成比分别为1.38%和34.29%,均呈双峰形分布趋势,流行高峰为5和9月。275株鼠伤寒沙门菌经XbaⅠ酶切和PFGE分析,获得124种带型,其分型D值为 0.928 6,而MLVA分型获得143种型别,D值为0.966 5,分辨能力高于单酶切的 PFGE分型。对其中>3株的相同带型进一步采用PFGE-XbaⅠ- BlnⅠ双酶切分型,获得分型共174种,D值为0.989 1,与采用MLVA方法相同,即对同一菌株的分辨结果具有较高一致性。结论 广东省鼠伤寒沙门菌具有遗传多样性。初步建立的菌株分子分型数据库显示采用MLVA 分型方法可完成菌株聚集性分析,以确认鼠伤寒沙门菌引起的暴发。     

宁波地区甲型副伤寒沙门菌基因分型

目的 了解宁波地区甲型副伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳（PFGE）基因型和流行优势型，为探讨传播途径和追踪传染源等提供依据。方法 用全自动细菌鉴定仪（Vitek32）确定细菌的生物学特征；用诊断血清确定细菌的血清型；用PFGE方法对细菌的染色体进行基因分型。结果 102株甲型副伤寒沙门苗可分成9个PFGE型，其中X2型73株，占71．57％。X1型21株，占20，58％，X7型2株，占1．96％，其他6个型各1株，分别占0．98％。其中优势型为X2型，菌株的带型变化在1～3条范围内，表明宁波地区的甲型副伤寒沙门菌变异不大，有可能是同一克隆系的甲型副伤寒沙门菌。结论 PFGE分型对探讨伤寒、副伤寒疫情内在联系具有重要意义，该法特异性高、重复性好、结果容易判读，有实际应用价值。     

宝鸡市一起肠炎沙门氏菌食物中毒事件调查及溯源分析

目的 对宝鸡市一起由聚餐引起的食物中毒事件进行现场流行病学调查分析,并且通过对相关病原菌的分离鉴定和溯源分析,有效控制事件的发展。方法 采用描述性流行病学方法描述疾病分布,建立病因假设。采用分析性流行病学方法(病例对照研究),分析相关因素对疾病产生的影响,找出危险因素。对病例、留样食物、水源开展相关的病原菌分离培养,使用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)对可疑致病菌进行溯源分析。结果 此次事件共搜索到病例68人,罹患率28.33%(68/240),主要症状为发热、腹泻、腹痛、呕吐。期间无重症及死亡病例出现。流行病学调查分析发现鸡腿为引起此次事件的可疑食物。通过实验室检测,在留样食物、患者粪便中均分离出了肠炎沙门氏菌。并通过PFGE分子溯源分析得到鸡腿、患者均为同一株沙门氏菌感染。结论 这是一起由沙门氏菌污染而引起的食物中毒,应加强对食物储存、运输、销售的管理工作,防止类似食源性疾病的发生。     

Molecular and phage typing of Staphylococcus aureus harbouring cyrptic conjugative plasmids

The spread of antibiotic resistant -bacterial pathogens in a hospital could be due to the spread of a resistant strain or the spread of a resistance plasmid among unrelated strains. In this study the relatedness of Staphylococcus aureus isolates carrying identical cryptic conjugative plasmids was determined by a combination of resistance profiles, plasmid patterns, pulsed field gel electrophoresis of SmaI digested chromosomal DNA and phage typing. Results of the different typing techniques were in agreement to one another and demonstrated that the isolates were of three different types. The results suggested that a cryptic conjugative plasmid had spread to different S. aureus isolates in the hospital. This is an example of plasmid spread as opposed to strain spread.     

Separation of Salmonella Typhimurium DT2 and DT135: Molecular characterization of isolates of avian origin

In Denmark, 0.4 and 3.4% of the human Salmonella Typhimurium cases registered between 1988 and 1993 were caused by DT2 and DT135, respectively. Separation of these two phage types was, however, problematic as only minor differences in lysis pattern and lysis strength occurred. Molecular characterization of 23 Danish isolates, 10 German isolates and the two type strains have subsequently been performed. With only minor exceptions, strains examined could be separated by combination of 0:5 agglutination, ribotyping, and PFGE typing into two major groups in conformity with their phage types. The differences between the two groups were, however, very small and it has not been completely clarified whether this grouping is the result of two independent types or of two related lines developing in different environments. It is concluded that the classification of related phage types DT2 and DT135 has to be supported by molecular methods.