肝细胞损伤时鸟嘌呤酶的释放与动态改变

［目的］探讨鸟嘌呤酶（ＧＵＡ）在肝细胞损伤过程中的动态改变及其临床价值。 ［方法］以２－ＦＡＡ喂饲ＳＤ大鼠,观察大鼠肝细胞从损伤到癌变过程中血清及肝组织中的ＧＵＡ的活性变化。［结果］在鼠肝细胞发生变性至肝组织全数癌变时,各实验组血清及肝组织中ＧＵＡ活性与正常对照组相比,ＧＵＡ第二周开始升高,以后酶活性持续升高,但肝癌鼠ＧＵＡ的动力学常数（Ｋｍ值）与正常鼠的ＧＵＡ相比,未见异常改变。［结论］胞浆酶ＧＵＡ为肝细胞损害的特异标志酶,血清该酶活性的升高幅度反映了肝病的严重程度。     

鼠肝脏癌变过程中GGT及其同工酶的表达与动态变化

本文对化学致癌剂２－ＦＡＡ诱发鼠肝癌过程中，膜结合γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）及其同工酶的表达与动态变化进行了研究，Ｗｉｓｔａｒ大鼠经２－ＦＡＡ喂饲后，经病理学及的组织化学证实，在肝脏由癌前病变到癌变过程中，肝细胞大量表达ＧＧＴ并分泌入血。肝组织ＧＧＴ，实验各组均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），接近胎鼠肝ＧＧＴ水平，血中ＧＧＴ呈持续住增加．早期升高速度慢于ＡＤＡ，ＧＳＴ和ＡＬＴ，正常鼠肝及血ＧＧＴ仅为单一区带，肝癌鼠肝与血清ＧＧＴ也呈动态改变，显示正常鼠和胎鼠肝ＧＧＴ的双重特征，研究结果提示鼠肝癌时ＧＧＴ大量表达，且有癌胚性质，且血中同工酶异常区带出现较早，检测其同工酶有助于对鼠肝癌的早期诊断。     

增殖细胞核抗原、胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在肝细胞癌及癌周组织中的表达

目的探讨增生结节与肝细胞癌发生的关系。方法应用免疫组织化学方法，分别检测７０例肝细胞癌及癌周组织中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达，以及７７例肝细胞癌和癌周组织中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）的表达。结果ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ在肝细胞癌中的阳性表达率显著高于癌周组织，且ＰＣＮＡ与肝细胞癌Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级密切相关；癌周组织中，增生结节ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ阳性表达显著高于肝硬变及正常组织。结论ＧＳＴπ可作为肝细胞癌前病变的标志酶；增生结节可能为肝细胞癌的癌前病变。     

增殖细胞核抗原,胎盘型谷胱甘肽S—转移酶在肝细胞癌及癌周组织中的…

目的 探讨增生结节与肝细胞癌发生的关系，方法 应用免疫组织化学方法，分别检测７０例肝细胞癌及癌周组织中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达，以及７７例肝细胞癌和癌周组织中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）的表达。结果 ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ在肝细胞癌中的阳性表达率显著高于癌周组织，且ＰＣＮＡ与肝细胞癌Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级密切相关；癌周组织中，增生结节ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ阳性表达显著高于肝硬变及正常组织，     

二甲基亚硝胺和部分肝切除术对肝脏DNA合成的影响

目的：探讨二甲基亚硝胺（Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ，ＮＤＭＡ）和部分肝切除术（ｐａｒｔｉａｌｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ，ＰＨ）对大鼠肝脏ＤＮＡ合成的影响。方法：用免疫组织化学双ＰＡＰ法检测大鼠肝组织５′－溴脱氧尿嘧啶（５′－ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ）标记细胞。结果：１次或４次ＮＤＭＡ作用后５小时至２周，明显可见ＢｒｄＵ标记的肝细胞和肝窦壁细胞，四次ＮＤＭＡ处理ＢｒｄＵ标记细胞数高于一次处理。ＰＨ加一次ＮＤＭＡ处理后５小时至１周内，两类细胞ＢｒｄＵ标记细胞数高于相应单纯ＮＤＭＡ处理。ＰＨ加四次ＮＤＭＡ处理后５小时，ＢｒｄＵ标记肝细胞数高于相应单纯ＮＤＭＡ处理。ＢｒｄＵ标记细胞主要分布在门管区周围。结论：ＮＤＭＡ可刺激肝细胞和肝窦壁细胞ＤＮＡ合成，ＰＨ和ＮＤＭＡ对肝细胞和肝窦壁细胞的ＤＮＡ合成有协同刺激作用。     

ＵＧＲＰ１在肺癌组织中的表达及其意义

目的：研究子宫球蛋白相关蛋白-１（ＵＧＲＰ１）在肺癌组织中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学（ＳＡＢＣ法）检测ＵＧＲＰ１在６２例肺癌组织及其相对应的癌旁正常肺组织中的表达,应用荧光实时定量ＰＣＲ检测２０例新鲜肺癌组织和相对应的癌旁正常肺组织中ＵＧＲＰ１ｍＲＮＡ的表达。结果：免疫组化结果显示ＵＧＲＰ１在正常支气管、细支气管上皮细胞浆中呈阳性表达;ＵＧＲＰ１在肺癌组织细胞核、胞浆中均有阳性表达,且以胞核阳性为主,ＵＧＲＰ１在肺癌中的表达显著低于其相对应的癌旁正常组织（Ｐ＜０.０５）;ＵＧＲＰ１在肺癌组织中的表达与年龄、性别无关,与组织分化程度、淋巴结转移、ＴＮＭ分期显著相关（Ｐ＜０.０５）。荧光实时定量ＰＣＲ分析表明,ＵＧＲＰ１ｍＲＮＡ在肺癌中的表达显著低于相对应的癌旁正常组织（Ｐ＜０.０５）。结论：ＵＧＲＰ１在肺癌中表达的下调可能促进了肿瘤的发生与发展,ＵＧＲＰ１可能是一种新的候选抑癌基因。     

人正常肝,新生儿肝,肝癌及癌旁肝组织内C／EBPmRNA丰度分析

ｃ／ＥＢＰ（ＣＣＡＡＴ／ＥｎｈａｎｃｅｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ）是一种热稳定蛋白，作为肝细胞核富含的转录调控因子，在促进和维持肝细胞分化状态中担负重要功能，本文通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测３例正常肝组织，１例新生儿肝组织，１０例肝癌及８例癌旁肝组织中Ｃ／ＥＢＰｍＲＮＡ丰度，结果显示在正常肝、新生儿肝及癌旁肝组织中均有表达，在多数癌组织中的表达明显减弱。瘤旁肝组织和肝癌组织中的表达相差显著（Ｐ＜０．０５）．以上结果进一步提示Ｃ／ＥＢＰ在维持肝细胞分化状态中起重要作用，并可能和肝癌的发生存在一定关系。     

刺五加抗癌作用的实验研究

目的：为进一步探讨刺五加对实验性肝癌发的干预作用及可能机理。方法：４３只雄性大鼠被随机分成３组（１）正常对照组：喂普通饲料（２）３－ＭｅＤＡＢ组：喂含０．０６％３－ＭｅＤＡＢ饲料１０周（３）刺五加组,除致癌剂外另加入刺五加,历时２０周。实验过程中所有动物均自由进食及饮水。结果：刺五加组较３－ＭｅＤＡＢ组：Ｆ（１）外周血液及肝组织中ＰＡＩ－１含量明显减少。（２）肝细胞周期时相Ｇ０／Ｇ１比率增加,Ｓ期     

黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变中JNK1的变化

目的 观察黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变过程中JNK的变化,进一步了解JNK1信号转导通路在肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生发展过程中的作用。方法 取雄性4周龄SD大鼠77只为研究对象,随机分为实验组66只,空白对照组11只。实验组应用黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）诱发大鼠肝细胞癌,空白对照组大鼠,按正常饲养方法饲养,两组大鼠分别于实验第12、20、36、46周进行肝组织活检,58周时处死取肝。所有标本均进行常规病理组织学检测,并应用RT-PCR、Western blot分别检测癌组织及肝组织JNK1 mRNA及JNK1活性蛋白质水平。结果 实验组大鼠46周时发现首例肝癌,存活至实验结束并发生肝癌的大鼠共24只,6只无任何肿瘤发生,空白对照组大鼠11例均未发生肿瘤。实验组及空白对照组大鼠均可检出不同程度的JNK1 mRNA表达,其中肝癌组织较癌旁组织及正常肝组织明显增强（P<0.05）。Western blot结果显示,实验组中无癌大鼠20周、出癌大鼠36周始即有不同程度p-JNK1活性表达,并随着AFB1作用时间延长阳性率明显增加,且无癌大鼠p-JNK1检出的时间较出癌大鼠早;半定量分析表明无癌大鼠肝组织p-JNK1活性较同期出癌大鼠肝组织及肝癌组织增强,在实验第46周及58周时尤其明显（P<0.01）。结论 在AFB1诱导肝细胞癌的过程中JNK信号通路处于激活状态,JNK信号通路的激活可能起到抑制HCC的作用,如JNK信号通路激活时间较早、强度较大可阻止HCC的发生。     

肝门部胆管癌组织中VEGF和血管生成相关性的研究

目的：探讨肝门部胆管癌组织中血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）和血管生成的相关性。方法：应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组化技术对２６例肝门部胆管癌、癌周组织及１２例正常组织中ＶＥＧＦｍＲＮＡ和蛋白及微血管密度（ＭＶＤ）进行了检测。结果：２６例肝门部胆管癌组织中ＶＥＧＦｍＲＮＡ阳性表达率为７６．９％（２０／２６）;癌周组织阳性表达率为２８．９％（７／２６）;正常组织表达率为８．３％（１／１２）,三者差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＶＥＧＦｍＲＮＡ阳性表达与ＶＥＧＦ蛋白表达具有一致性;ＶＥＧＦｍＲＮＡ阳性者ＭＶＤ值显著高于阴性者（Ｐ＜０．０１）;ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达和ＭＶＤ与肝门部胆管癌的分化程度、浸润转移密切相关（Ｐ＜０．０５）;而与发生部位、病理类型、肿瘤大小、临床分型无关（Ｐ＞０．０５）。结论：ＶＥＧＦ在肝门部胆管癌发生和浸润转移过程中发挥重要作用,肿瘤血管生成与肝门部胆管癌浸润转移密切相关。     

^125I—IudR—胰岛素在肝细胞癌变过程中特异性亲和力变化的？…

目的：大鼠诱发肝癌过程中，观察＾１２５Ｉ－ＩｕｄＲ－胰岛素与癌变过程中肝细胞的特异性亲和力的变化。方法：ＤＥＮＡ诱发大鼠肝癌分批处死。取肝组织进行免疫组化染色。结果：重度增生组及癌变组与对照组比较有显著性差异（Ｐ〈０．０５），对照组与轻度增生组比较无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。结论：＾１２５Ｉ－ＩｕｄＲ－胰岛素与肝细胞的亲和力在肝细胞癌变过程中具有密切的关系。     

大鼠实验性肝癌最早可测的分子标志

作者应用原位杂交技术对大鼠肝组织在二乙基亚硝胺（ＤＥＮＡ）诱癌过程中Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ的表达进行了研究。结果表明，在整个肝癌变过程中，Ｎ－ｒａｓＣ－ｍｙｃ表达增高，并且最早出现于小肝细胞及嗜碱性肝细胞灶，在晚期瘤样结节和肝癌中ｃ－ｍｙｃ的表达仍呈高表达，Ｎ－ｒａｓ在部分癌灶中不表达。结果提示它们的异常表达是大鼠肝癌变中较早出现的分子改变，可能与肝癌的启动有关，也是肝癌形态发生的分子基础之一。结果支持化学诱发肝癌的启动阶段致使肝细胞正常的分化途径阻断的假说。     

肝细胞癌中Hep Par 1、p53、HBsAg表达差异与细胞形态计量学变化的关系

目的 探讨原发性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中肝细胞抗原（Hep Par1)，p53，乙型肝炎表面抗原（HBsAg)的表达差异及与细胞形态学变化的相关性。方法 用免疫组织化学方法（两步法－EnVision System-HRP)检测10对肝癌和癌旁组织，3例正常肝组织中Hep Par1,p53,HBsAg等蛋白的表达差异；用HPIAS－1000图像分析系统测量实质细胞的总面积（以细胞直径代替）和核质比。结果 1）Hep Par 1:正常肝组织中肝细胞中度表达，癌旁肝组织中肝细胞为弥漫性高表达，肝癌细胞中阳性率为24．53％（13／53）；2）p53：正常肝组织和癌旁肝组织中均呈阴性；肝癌组织，在被检的10例样品中肝癌细胞均为阳性；3）HBsAg:正常肝组织中肝细胞呈阴性，癌旁肝组织中肝细胞为片状弥漫性或散在性高表达，肝癌组织，在被检的10例样品中肝癌细胞仅有1例呈阳性；4）各种组织中实质细胞的平均直径为癌旁肝细胞＞正常肝细胞＞肝细胞癌细胞；5）正常肝细胞和癌旁肝细胞的核质比无差别（P＞0．05），但均明显＜肝细胞癌细胞（P＜0．01和P＜0．01）。结论 肝细胞抗原（Hep Par 1)在分化较高的肝细胞癌细胞中有不同程度的表达，可作为鉴别原发性肝细胞癌细胞来源的标志；原发性肝细胞癌细胞核质比明显＞正常肝细胞和癌旁肝细胞（P＜0.01和P＜0.01)。     

STUDY ON CHANGES OF GLYCOPROTEINS IN PLASMA MEMBRANE FROM RAT LIVERS DURINGHEPATOCARCINOGENESIS INDUCED BY DAB

以二甲基氨基偶氮苯（ＤＡＢ）诱发大白鼠肝癌为模型，观察了在诱癌过程中和肝癌形成后，肝细胞质膜上糖蛋白的变化。用不连续蔗糖密度梯度离心法制备肝细胞质膜，用ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析法分离出肝细胞质膜糖蛋白，再进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析。结果表明诱癌４ｗｋ，ｌ６ｗｋ的肝细胞质膜搪蛋白成份和正常肝比较无显著差异。肝癌细胞质膜上糖蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱和正常肝比较，一些高分子量的糖蛋白缺失，而低分子量的糖蛋白含量增加．并显示了一条分子量为６．６１ＫＤ的新的糖蛋白带。     

c-erbB-2、ER及PR在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：了解c-erbB-2、ER及PR在肝细胞癌及正常肝组织中的表达及意义,探讨肝癌治疗中应用c-erbB-2单克隆抗体靶向治疗及内分泌治疗的可能性.方法：采用免疫组织化学SP法检测35例肝细胞癌组织及10例正常肝组织中c-erbB-2、ER及PR的表达,并对35例肝细胞癌患者的1年存活情况进行随访.结果：35例肝细胞癌患者中27例（27/35,77.14％）c-erbB-2阳性表达,ER与PR均为阴性表达.正常肝组织中1例（1/10,10％）c-erbB-2弱阳性表达,ER与PR均为阴性表达.c-erbB-2的表达在肝细胞癌组织和正常肝组织之间存在显著性差异（P ＜0.005）.c-erbB-2在年龄≤45岁的肝细胞癌患者中阳性表达率为100％ （14/14）,在年龄＞45岁的患者中阳性表达率为61.9％（13/21）,二者存在显著性差异（P=0.009）.c-erbB-2的表达与病理特征如性别、肿瘤大小、肿瘤部位、病理分级、临床分期、门脉侵犯、淋巴转移、血清AFP水平和HBV感染无关（P＞0.05）,与肝细胞癌患者1年生存率有关（P=0.049）.结论：c-erbB-2在肝细胞癌中的表达率明显升高,与肝细胞癌患者发病年龄小、预后差有关.提示c-erbB-2可作为判断肝细胞癌预后的指标及靶向治疗的新靶点.ER与PR在各种组织中表达均为阴性,提示内分泌治疗在肝癌治疗中的作用尚需进一步的研究.     

富马酸二甲酯慢性毒性与致癌性研究

给４４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠喂饲含０、１２５、２５０、５００及１０００ｐｐｍ富马酸二甲酯（ＤＩＭＥＦＵ）的饲料２４个月。实验结果，各实验组与对照组相比，食物利用率、掺入量、生长、一般表现、列亡率及平均寿命均无显著性差异。血液学检查仅个别指标出现差别，但波动在正常范围。１０００ｐｐｍ组动物血清ＧＰＴ、ＧＯＴ及肝、肾脏器系数呈现持续性改变。病理组织学检查表明各组非肿瘤性及肿瘤性病变发生率与饲料中ＤＩＭＥ     

抑凋谢基因bcl—2蛋白在大鼠实验性肝癌发病过程中的表达

目的动态观察大鼠实验性肝癌形成过程中抑凋谢基因ｂｃｌ－２蛋白表达与γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）活性和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活性改变的关系以及刺五加多糖的抑癌作用。方法用ｂｃｌ－２单抗进行免疫组化ＳＡＢＣ检测，用酶学动力学方法检测酶活性。结果饲喂致癌剂３－甲氨基偶氮苯（３′－ＭｅＤＡＢ）的早期（１５天），ｂｃｌ－２蛋白表达已明显增高，实验结束时３′－ＭｅＤＡＢ组阳性率为８９．５％（１７／１９），刺五加组为６４．７％（１１／１７）。ｂｃｌ－２的过量表达与肝组织中γ－ＧＴ活性升高和ＧＳＴ活性降低相一致。结论ｂｃｌ－２蛋白过度表达出现，对实验性肝癌的早期阶段，很可能在肿瘤的发生发展中起着促进作用。刺五加多糖对实验性肝癌的形成有一定抑制作用     

增殖细胞核抗原PCNA、bcl-2在肝细胞癌组织中的表达及意义

肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）的发生是多种癌基因激活，抑癌基因失活的复杂过程［１］，应用免疫组织化学方法检测肝细胞癌及正常肝组织中增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ...     

肺癌鲎凝集素受体的研究

应用胶体金标记鲎凝集素（Ｌｉｍｕｌｕｓｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ，ＬＰＡ）标记４例正常肺组织和５４例肺癌组织，各例还用生物素化蓖麻（ＲＣＡ）、菜豆（ＰＨＡ）、双花藕豆（ＤＢＡ）和麦胚凝集（ＷＧＡ）作为对照标记。结果表明：１．ＬＰＡ受体在正常肺组织中选择性分布在大支气管上皮杯状细胞和粘膜下浆液性细胞，在非小细胞癌中的阳性率为５７．１％（２０／３５），小细胞癌、类癌中的阳性率为６３．２％（１２／１９）；２．与ＲＣＡ、ＰＨＡ、ＤＢＡ和ＷＧＡ受体表达相比，ＬＰＡ受体表达可能与肺癌发生的关系更密切，ＬＰＡ受体在肺癌中的阳性率较ＲＣＡ、ＰＨＡ、ＤＢＡ和ＷＧＡ受体表达阳性率高，而且在小细胞癌和类癌中阳性率相差均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。     

HIF-1α和VEGF 的表达与肝细胞癌侵袭转移的关系

 目的 探讨HIF-1α、VEGF的蛋白表达与肝细胞癌血管新生及侵袭转移特性之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测肝细胞癌、癌旁肝组织和正常肝组织中HIF-1α、VEGF的表达，并计数MVD值。结果 HIF-1α在肝细胞癌中的阳性表达率为50．0％，显著高于癌旁（16．1％）和正常肝组织的（8．3％）（P=0．001）；VEGF在肝细胞癌中的阳性表达率为81）％，显著高于癌旁（59．4％）和正常肝组织（41．7％）（P=0．044）；肝细胞癌组织中MVD值显著高于癌旁和正常肝组织（P=0．001）。HIF-1α蛋白表达与有无门静脉或胆管癌栓及肿瘤分化程度有关（P〈0．05）；VEGF蛋白的表达与有无肝内或淋巴结转移及有无门静脉或胆管癌栓有关（P〈0．05）。HF-1α与VEGF表达有关（P=0．005）；HF-1α与VEGF共同表达阳性组的MVD值显著高于共同表达阴性组MVD值（P=0．001）。结论 HF-1α可能通过调节VEGF的表达促进肝细胞癌血管新生，从而促使肝细胞癌侵袭转移。